18维生素的测定
维生素的测定方法
维生素的测定方法
维生素的测定方法包括生物学方法、化学方法和仪器方法等。
1. 生物学方法：生物学方法是通过生物试验，如细胞培养、动物实验等来测定维生素的活性。
例如，利用酵母菌培养来测定维生素B2（核黄素）的含量，利用小鼠实验来测定维生素D的活性。
2. 化学方法：化学方法是通过化学反应来测定维生素的含量。
常用的化学方法包括滴定法、分光光度法和高效液相色谱法等。
例如，利用碘量法测定维生素C （抗坏血酸）的含量，利用氧化还原反应测定维生素A（视黄醇）的含量。
3. 仪器方法：仪器方法是通过利用特定仪器进行测定。
例如，利用高效液相色谱仪（HPLC）测定多种维生素的含量，利用气相色谱仪（GC）测定维生素E（α-生育酚）的含量。
需要注意的是，不同的维生素具有不同的化学性质和测定原理，因此选择适当的测定方法需要结合维生素的特性和要求进行决定。
同时，测定方法的准确性、灵敏度和重复性等因素也需要考虑。
维生素的检测方法
《维生素的检测》一、维生素E取样品0.18g，置于100mL的量瓶中，加无水乙醇稀释到刻度，摇30s，用干滤纸滤过，弃取初滤液，吸取50mL，置于回流瓶中，加硫酸3mL，摇匀，加热回流3小时放冷，移至于100mL量瓶中，用无水乙醇洗条容器，洗液并加入量瓶中，再加入无水乙醇稀释至刻度，摇匀，吸取25mL/L，加乙醇(95%)20mL，水10mL/L，二苯胺硫酸溶液2滴(10g/L)，用0.01mol/L 硫酸铈标准液滴定结果用空白试验校正。
计算公式：(试样滴定数—空白滴定数)×标准液浓度×0.002364×8÷质量÷维生素E的标示量<如:50/100 33/100 25/100 20/100 等>×100二、维生素K3(亚硫酸氢钠甲苯酯含量测定)标准溶液配制：取甲萘醌对照品约0.05g，置于250mL的量瓶中，用三氯甲烷溶解，并稀释到刻度，摇匀。
吸取2mL置于100mL量瓶中，用无水乙醇稀释到刻度，摇匀。
样品溶液的配制：取样品1.3g，置于250mL量瓶中，用水稀释到刻度，摇匀。
吸取25mL 至于分液漏斗中，加三氯甲烷40mL/L，碳酸钠溶液5mL(1/100)，剧烈振摇30s，静止分层，分出的三氯甲烷层通过预先用三氯甲烷湿润的棉花过滤到250mL的量瓶中，再加三氯甲烷40mL迅速洗条滤器，洗液并加入量瓶中，水层用三氯甲烷萃取2次，每次约20mL，萃取液过滤，并用三氯甲烷20mL洗条滤器，洗液和全部滤并到量瓶中，用三氯甲烷稀释到刻度,摇匀.吸取2mL至于100mL量瓶中,用无水乙醇稀释到刻度,摇匀.(用分光光度计在250nm波长处平行测定吸收度,用2%三氯甲烷的无水乙醇溶液做空白).计算公式：样品溶液的吸光度×标准溶液的吸光度÷标准溶液的吸光度÷样品溶液的浓度×191.82三、维生素B1 (硝酸硫胺含量的测定)取样0.1g,加水50mL溶解后,加盐酸2mL,煮沸,立即滴加硅钨酸溶液10mL,继续煮沸2nim,用在80℃干燥至恒重有4号垂溶坩埚滤过,沉淀先用煮沸的盐酸溶液洗条2次,每次10mL,再用水10mL洗条一次,最后用丙酮洗条2次,每次5mL,沉淀物在80℃干燥至恒重.计算公式：干燥后沉淀的重量×0.1882÷样品重量÷(1－样品干燥失重,重量百分数)×100四、烟酸取样0.3g,加新沸过的冷水50mL溶解,加酚酞指示剂3滴(1g/L),用0.1monl/L氢氧化钠标准液滴定至粉红色.计算公式：滴定数×标准液的浓度×0.01231÷质量×100五、维生素B6取样0.15g,加冰乙酸20mL与乙酸贡溶液(5g乙酸贡研细加温热的冰乙酸溶解为100mL)5mL,温热溶解,放冷,加(5g/L)结晶紫指示剂1滴,用0.1monl/L高氯酸标准液滴定,至溶液显蓝紫色,并将滴定结果用空白实验校正.计算公式：(样品滴定数－空白滴定数)×高氯酸标准液的浓度×0.02056÷质量×100六、维生素B12(氰钴胺)粉剂外观及颜色：浅红色至棕色细微粒粉末状,具有吸潮性.取样品维生素B12 0.002克,置于100毫升的量瓶中.加水80毫升,充分振摇混合后稀释至刻度,摇匀,用干滤纸过滤(必要时离心),弃去初滤液作为样品测量溶液.取维生素B12(氰钴胺)对照品(干燥品)0.2克,置于1000毫升的量瓶中用水稀释至刻度,摇匀,作为对照品测定液,用水做空白对照,于1cm比色皿内,用分光光度计于361nm波长处测定样品溶液和标准液的吸收度。
食品中维生素的测定
浓缩：将醚层液经过无水硫酸钠滤入三角瓶中，再用约25mL乙醚冲洗分液漏斗和硫酸钠2次，洗液并入三角瓶内。置水浴上蒸馏，收回乙醚。直到瓶中剩5mL时取下，用减压抽气法至干，立即加入一定量的三氯甲烷使溶液中维生素A含量在适宜浓度范围内。
洗涤：用约30mL水加入第一个分液漏斗中，轻摇，静置片刻，放去水层，加15~20mL0.5mol/L氢氧化钾液于分液漏斗中，轻摇后，弃去下层碱液，除去醚溶性酸皂。再用水洗涤，每次用水约30mL，直至洗涤液与酚酞指示剂呈无色为止。醚层液静置10~20min，小心放出析出的水。
标准曲线的制备： 取上述“标准”溶液（抗坏血酸含量10μg/mL）0.5、1.0、1.5和2.0mL标准系列，取双份分别置于10mL带盖试管中，再用水补充至2.0mL。 取中“标准空白”溶液，“样品空白”溶液及中“样品”溶液各2mL，分别置于10mL带盖试管中。在暗室迅速向各客中加入5mL邻苯二胺溶液，振摇混合，在室温下反应35min，于激发光波长338nm、发射光波长420nm处测定荧光强度。标准系列荧光强度分别减去标准空白荧光强度为纵坐标，对应的抗坏血酸含量为横坐标，绘制标准曲线或进行相关计算，其直线回归方程供计算时使用。
结果计算： 式中 X-----试样中抗坏血酸及脱氢抗坏血酸总含量，mg/100g； c------由标准曲线查得或由回归方程算得试样溶液浓度， μ g/mL m------试样的质量，g； V-------荧光反应所用试样体积，mL； F-------试样溶液的稀释倍数。
测定原理
总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸，样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与2，4 – 二硝基苯肼作用生成红色脎，根据脎在硫酸溶液中的含量与总抗坏血酸含量成正比，进行比色定量。 2，4-二硝基苯肼光度法
维生素五项分型及测定
维生素五项分型及测定维生素五项分型是指对五种维生素进行测定和分类，这五种维生素包括维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素C和维生素D。
测定维生素 A 的方法包括生物测定法、化学测定法和光谱测定法。
生物测定法是通过动物实验来测定维生素 A 的含量，化学测定法是通过化学反应来测定维生素 A 的浓度，光谱测定法是利用维生素A 在特定波长下的吸光特性来测定其浓度。
测定维生素 B1 的方法常用的有蒽醌法、显色滴定法和高效液相色谱法。
蒽醌法是将维生素 B1 与蒽醌发生氧化反应，然后用显色试剂测定氧化产物的浓度。
显色滴定法是将试样中的维生素 B1 与碘溶液反应生成显色产物，并用含碘滴定液滴定至颜色变淡为终点。
高效液相色谱法是使用高效液相色谱仪来分离和测定维生素 B1。
测定维生素 B2 的方法常用的有显色滴定法、荧光法和高效液相色谱法。
显色滴定法是将试样中的维生素 B2 与试剂发生氧化反应，并用含重铬酸钾滴定至颜色褪去为终点。
荧光法是利用维生素 B2 在紫外光激发下发出荧光的特性来测定其浓度。
高效液相色谱法是使用高效液相色谱仪来分离和测定维生素B2。
测定维生素 C 的方法常用的有差减分光光度法、显色滴定法和高效液相色谱法。
差减分光光度法是根据维生素 C 与二碘化汞反应生成差减色谱，然后用光度计测定差减色谱的吸光度。
显色滴定法是将试样中的维生素 C 与碘溶液反应生成显色产物，并用含碘滴定液滴定至颜色变淡为终点。
高效液相色谱法是使用高效液相色谱仪来分离和测定维生素 C。
测定维生素 D 的方法主要采用高效液相色谱法和光化学发光法。
高效液相色谱法是使用高效液相色谱仪来分离和测定维生素 D。
光化学发光法是通过测定维生素 D 在特定条件下的光发光强度来测定其浓度。
维生素c测定实验报告
维生素c测定实验报告维生素 C 测定实验报告一、实验目的本次实验旨在准确测定样品中维生素 C 的含量，了解和掌握维生素C 测定的基本原理和实验方法。
二、实验原理维生素 C 又称抗坏血酸，具有较强的还原性。
本实验采用 2,6 二氯靛酚滴定法进行测定。
2,6 二氯靛酚是一种染料，在酸性溶液中呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。
其氧化型在酸性溶液中呈红色，可与维生素 C 发生氧化还原反应。
当维生素 C 全部被氧化后，稍过量的 2,6二氯靛酚会使溶液呈现红色，此时即为滴定终点。
通过滴定消耗的 2,6 二氯靛酚溶液的量，可以计算出样品中维生素 C 的含量。
三、实验材料与设备1、材料新鲜水果（如橙子、草莓等）、标准维生素 C 溶液。
2、试剂2%草酸溶液、0001mol/L 2,6 二氯靛酚溶液。
3、仪器电子天平、容量瓶、移液管、锥形瓶、酸式滴定管、玻璃棒、漏斗、滤纸。
四、实验步骤1、样品处理准确称取适量的新鲜水果，放入研钵中研磨成匀浆。
将匀浆转移至容量瓶中，用 2%草酸溶液定容至刻度，摇匀。
用漏斗过滤，收集滤液备用。
2、标准溶液的配制准确称取一定量的标准维生素 C 晶体，用 2%草酸溶液溶解并定容至一定体积，得到标准维生素 C 溶液。
3、滴定吸取一定量的样品滤液于锥形瓶中，加入2%草酸溶液至一定体积。
用 0001mol/L 2,6 二氯靛酚溶液进行滴定，边滴边摇动锥形瓶，直至溶液呈现淡红色，并保持 15 秒不褪色，即为滴定终点。
记录消耗的2,6 二氯靛酚溶液的体积。
同时进行空白实验，除不加样品滤液外，其他操作与样品滴定相同，记录空白实验消耗的 2,6 二氯靛酚溶液的体积。
五、实验数据处理1、计算 2,6 二氯靛酚溶液的实际浓度吸取标准维生素 C 溶液 1000mL 于锥形瓶中，加入 2%草酸溶液至50mL。
用 2,6 二氯靛酚溶液进行滴定，记录消耗的体积 V1（mL）。
2,6 二氯靛酚溶液的实际浓度（mol/L）＝标准维生素 C 的浓度×1000÷V12、计算样品中维生素 C 的含量样品中维生素 C 的含量（mg/100g）＝（V V0）×C×T×100÷W其中，V 为样品滴定消耗 2,6 二氯靛酚溶液的体积（mL）；V0 为空白滴定消耗 2,6 二氯靛酚溶液的体积（mL）；C 为 2,6 二氯靛酚溶液的实际浓度（mol/L）；T 为 1mL 2,6 二氯靛酚溶液相当于维生素 C 的毫克数；W 为样品质量（g）。
第八章 维生素的测定
(3) 浓缩与定容
石油醚提取液→经无水硫酸钠(约5g)（脱 水） →与旋转蒸发器蒸发瓶； 用约l0ml石油醚冲洗分液漏斗及无水硫酸 钠3次，洗液→旋转蒸发器蒸发瓶；
于55℃水浴中减压蒸馏回收石油醚→待瓶 中剩下约2ml石油醚时→取下蒸发瓶，用氮气 冲干→加入2.00ml石油醚定容。
(4) 纸层析
第三节
水溶性维生索的测定
一、水溶性维生素的性质 1. 易溶于水，而不溶于苯、乙醚、氯仿等大多 数有机溶剂； 2. 在酸性介质中很稳定； 3. 在碱性介质中不稳定，易于分解；
4. 易受空气、光、热、酶、金属离子等的影响， 维生素B2 对光，特别是紫外线敏感，易被光 线破坏；维生素C对氧、铜离子敏感，易被氧 化。
将醚液经过无水硫酸钠滤入三角瓶中→用 约25m1乙醚冲洗分液漏斗和硫酸钠两次，洗 液并入三角瓶内→水浴蒸馏，回收乙醚→减 压抽干，立即准确加入一定量三氯甲烷(约 5m1左右)，使溶液中维生素A含量在适宜浓度 范围内(3—5ug／m1)。
(2)标准曲线的绘制
以维生素A含量为横坐标，以吸光度为纵坐标 绘制曲线。 准确吸取维生素A标准溶液0，0.1，0.2，0.3，0.4， 0.5mL于6个10mL容量瓶中，用三氯甲烷定容 制备标准系列使用液→制成标准比色系列→调节 光度法零点→将标准比色系列按顺序移到光路前，迅 速加入9mL三氯化锑一三氯甲烷溶液，于6s内测定吸 光度(每支比色杯都在临测前加入显色剂)。 取6个3cm比色杯顺次移入标准系列使用液各1m1， 每个杯中加乙酸酐 l滴，在620nm波长处，以 l0mL三氯甲烷加1滴乙酸酐。
(8)维生素C标准使用液：准确吸取适量标准维 生素C贮备液，于100mL容量瓶中，用10g/L草酸 溶液稀释定容，使1.0mL含0.02mg维生素C。 (9)2,6－二氯靛酚溶液：称取52mg碳酸氢钠， 溶解于200ml沸水中，然后称取50mg2，6一二氯 靛酚，溶解于上述碳酸氢钠溶液中，冷却后， 于250mL容量瓶中，用蒸馏水稀释定容，过滤于 棕色瓶内，贮存冰箱，每周至少标定1次。
食品中维生素的测定
色谱分析法
总结词
分离效果好、灵敏度高
详细描述
色谱分析法是一种分离和测定相结合的方法，通过特定的色谱柱将维生素与其他物质分离，再通过检 测器测定维生素的含量。该方法分离效果好，灵敏度高，适用于复杂基质中维生素的测定。
电化学分析法
总结词
灵敏度高、仪器简单
详细描述
电化学分析法是利用电化学反应来测定维生素的含量。该方 法灵敏度高，仪器简单，但需要特定的电化学电极和较高的 技术要求。
2013《食品中维生素C的测定》
ISO 9926
2017《食品中维生素B1、B2、B6、烟酸和泛 酸的测定》
行业规范
《食品安全国家标准婴幼 儿食品》
《食品安全国家标准饮料》
《食品安全国家标准乳制 品》
《食品安全国家标准肉制 品》
检测方法
01
高效液相色谱法（HPLC）
02
分光光度法（Spectrophotometry）
实验设备与试剂准备
实验设备
准备实验所需的仪器设备，如天平、 离心机、分光光度计等。
试剂准备
根据实验需要，准备各种维生素测定 所需的试剂，确保试剂的质量和纯度。
实验操作步骤
01
02
03
04
样品提取
将处理后的样品加入适量的溶 剂中，进行充分搅拌和提取。
分离纯化
将提取液进行离心或过滤，去 除杂质，得到纯化的维生素溶
03
食品中维生素测定的标准与规范
国家标准
GB 5009.86-2016《食品中叶 酸的测定》
GB 5009.154-2016《食品 中维生素B12的测定》
GB 5009.85-2016《食品中维 生素B2的测定》
《中国药典》维生素c的含量测定
《中国药典》维生素c的含量测定
《中国药典》中关于维生素C的含量测定的方法是使用二氧化碳挥发法。
具体步骤如下：
1. 取一定量的样品（通常为维生素C片剂或粉剂）。
2. 将样品溶解于水中，加入适量的稀盐酸。
3. 在含有样品溶液的烧瓶或烧杯中，设置双皮套装置，并通过瓶口通入氮气，以去除溶液中的氧气。
4. 在维持适当氮气流速的条件下，加入适量的氧化剂（例如碘化钾溶液）。
5. 用玻璃杆搅拌溶液，使溶液中的氧化剂与维生素C发生反应。
6. 经过一定时间的反应后，使用氨溴酚绿指示剂滴定剩余的氧化剂，直至颜色由蓝变黄绿。
7. 根据滴定所需的氨溴酚绿溶液的体积，计算出样品中维生素C的含量。
这种方法是基于维生素C在酸性条件下容易被氧化为脱氢抗坏
血酸的特性进行的。
通过控制反应条件和溶液中氧化剂的用量，可以准确测定维生素C的含量。
维生素“换算因子”表
维生素“换算因子”表换算因子为了方便使用，在配方和测定中的计算，下面摘录了一些维生素的换算因子，供大家参考：维生素A 将表示为：视黄醇当量（RE）1mg 全反式视黄醇（维生素A醇） = 3,333 IU维生素A 活性1 IU 维生素A 活性= 0.3μg 全反式维生素A醇1 IU 维生素A 活性= 0.344μg全反式维生素A醋酸酯1 IU 维生素A 活性= 0.550μg全反式维生素A棕榈酸酯1mg 全反式维生素A醇 = 1.147mg全反式维生素A醋酸酯1mg 全反式维生素A醇 = 1.832mg全反式维生素A棕榈酸酯1μg 视黄醇当量（RE）= 1μg 全反式维生素A醇1μg 视黄醇当量（RE）= 1.147μg全反式维生素A醋酸酯1μg 视黄醇当量（RE）= 1.832μg全反式维生素A棕榈酸酯1μg 视黄醇当量（RE）= 6μg 全反式β-胡萝卜素1IU 维生素A活性= 1.8μg 全反式β-胡萝卜素1μg全反式β-胡萝卜素= 0.167μg全反式维生素A醇1μg 全反式维生素A醇= 6μg 全反式β-胡萝卜素1μg 视黄醇当量（RE） = 3.33IU 维生素A活性1IU 维生素A活性= 0.30μg 视黄醇当量（RE）维生素D3将表示为：胆钙化醇1IU 维生素D = 0.025μg胆钙化醇1mg 胆钙化醇 = 40,000IU维生素D维生素E将表示为：生育酚当量（TE）1IU 维生素E= 1mg dl-α-维生素E醋酸酯 1mg d-α-维生素E醋酸酯 = 1.36IU 维生素E1mg dl-α-生育酚 = 1.1IU 维生素E1mg d-α-生育酚 = 1.49IU 维生素E1mg 生育酚当量（TE） = 1mg d-α-生育酚1mg 生育酚当量（TE） = 1.49mg dl-α-维生素E醋酸酯1mg α-维生素E醋酸酯= 0.91mg α-生育酚维生素B1（硫胺素）1mg硫胺素 = 1.3379mg维生素B1盐酸盐1mg硫胺素 = 1.2336mg维生素B1硝酸盐1mg硫胺素 = 1.2710mg无水维生素B1盐酸盐 1mg维生素B1盐酸盐 = 0.7474mg硫胺素1mg维生素B1硝酸盐 = 0.8106mg硫胺素1mg无水维生素B1盐酸盐 = 0.7867mg硫胺素维生素B2（核黄素）1mg核黄素 = 1.333mg核黄素－5’－磷酸钠 1mg核黄素－5’－磷酸钠 = 0.75mg核黄素维生素PP（烟酸）将表示为：烟酸当量1mg烟酸/烟酰胺 = 1mg烟酸当量D-泛酸钙/泛醇将表示为：泛酸1mg泛酸 = 1.1204mg泛酸钙1mg泛酸 = 0.936mg 泛醇1mg泛酸钙 = 0.8354mg泛醇1mg泛酸钙 = 0.8925mg泛酸1mg泛醇 = 1.0684mg泛酸1mg泛醇 = 1.1970mg泛酸钙吡哆醇将表示为：维生素B61mg吡哆醇 = 1.2155mg盐酸吡哆醇1mg盐酸吡哆醇 = 0.8227mg吡哆醇抗坏血酸1mg抗坏血酸 = 1.124mg 抗坏血酸钠1mg抗坏血酸 = 1.210mg 抗坏血酸钙1mg抗坏血酸 = 2.360mg 抗坏血酸棕榈酸酯 1mg抗坏血酸钙 = 0.826mg 抗坏血酸1mg抗坏血酸钠 = 0.889mg 抗坏血酸1mg抗坏血酸棕榈酸酯 = 0.425mg 抗坏血酸叶酸1mg叶酸 = 0.905mg无水叶酸1mg无水叶酸 = 1.1045mg叶酸。
现代农业分析与测试18维生素cB1B2的测定农产品分析
• 滴定终点的红色是刚过量的未被还原的(氧化型)染料溶 液在酸性介质中的颜色。
注释
（1）偏磷酸是Vc的最佳稳定剂，且具有沉淀蛋白质的作 用。但其价格较贵，在室温下放置易转化为正磷酸，降 低对Vc的稳定性。草酸廉价易得,有与磷酸相近的稳定 性。而醋酸适于浸提含有Fe2+的样品。 根据Vc在酸性溶液中相对较稳定这一特性，历来采用 的提取剂都是各种各样的酸性溶液,现在一般采用的主 要是2%偏磷酸、2%草酸溶液，其次是8%醋酸、10% 三氯乙酸及偏磷酸-醋酸混合液。
• (4)KIO3与还原Vc的主要反应如下：
从上述反应式可知1mol(1/6 KIO3)与 1mol(1/2C6H8O6)完全反应，故1/2 C6H8O6的摩 尔质量为88g·mol-1。
• (5)2，6-二氯靛酚固体试剂有时含有分解产物，染 料溶液长久贮存时也会生成分解主物，从而使滴定 终点不敏锐，因此应在使用前检查。检查方法：取 15mL染料溶液加入过量的Vc溶液，若还原后的溶 液带有颜色，表示此溶液已不能使用。
• (13)滴定时，可同时吸二个样品。一个滴定，另 一个作为观察颜色变化的参考。
• (14)在处理各种样品时，如遇有泡沫产生，可加 入数滴辛醇消除。
• （15）还原型Vc含量（mg.kg-1）<100 允许误 差（ mg.kg-1 ）5.0，100 -1000 允许10.0
（二）维生素C总量的测定
• (9) 所有试剂最好用重蒸馏水配制。 • (10) 标定靛酚滴定液时与滴定样品液时，滴定终点
的掌握应严格一致，否则将引对照，样液滴定体积扣 除空白体积。
维生素的测定方法
维生素的测定方法
维生素的测定方法可以分为生物学法和物理化学法两种。
生物学法：
1.生物促进法：利用维生素对生物体生长和发育的促进作用，通过观察生物体的生长情况来判断维生素含量。
2.营养缺乏试验法：将生物体置于缺乏特定维生素的培养基中，观察生物体的表现，从而测定维生素的含量。
物理化学法：
1.比色法：利用维生素与某些试剂发生特定反应后形成彩色产物，通过测定产生的光吸收来定量测定维生素含量。
2.荧光法：维生素具有发荧光的性质，通过测定维生素发出的荧光强度来定量测定维生素含量。
3.高效液相色谱法（HPLC）：利用高效液相色谱技术对维生素进行分离和定量分析。
4.气相色谱法（GC）：通过气相色谱对维生素进行分离和定量分析。
5.质谱法：利用质谱仪对维生素进行分析，可以通过质谱图谱来鉴定和定量维生素。
维生素的具体测定方法要根据维生素的性质和要求选择合适的方法进行测定。
液相色谱仪检测(维生素)试题
液相色谱仪检测（维生素）试题一、填空（67*1=67分）1.色谱法是一种分离的方法，具有两相，一是固定相，一是流动相，两相作相向运动，其分离的原理是待测组分与两相的相互作用力不同而进行分离的。
2.液相色谱是根据待测组分的保留时间进行定性分析；根据待测组分的浓度与其峰面积或峰高呈正比进行定量测定，定量的方法主要有内标法、外标法和归一化法三种。
3.高效液相色谱法测定婴幼儿食品中及乳制品中维生素A和E的检出限分别为1.0 μg/100g和10 μg/100g。
4.根据维生素A、E的化学性质，维生素A、E的标准溶液需在-10℃以下避光条件下储存，其标准储备液使用前需校正。
5.维生素测定A、E时，样品先皂化，然后经无水乙醚或石油醚萃取，维生素A、E采用反相色谱法分离测定。
6.维生素A又称视黄醇，室温时，1%的维生素A乙醇溶液的最大吸收波长为325 nm.。
维生素E又称生育酚，1%的维生素A乙醇溶液的最大吸收波长为294 nm.。
7. 1 μg视黄醇当量= 3.33IU维生素A= 1.147μg维生素A醋酸酯，0.74 mg α-TE= 1 mg dl-α-生育酚（合成）= 1.1 IU维生素E。
8.食品中维生素A测定过程中，样品先要皂化，皂化的目的是维生素A在食品中常以视黄醇或混合视黄醇酯的形式存在，皂化是为了使酯转化成游离醇，同时分解大量的如三酸甘油酯之类的组分，使维生素A从食品混合物中游离出来。
9.维生素AE皂化和浓缩过程中，加入焦性没食子酸或维生素C的作用是防止维生素氧化分解；加入乙醇的作用是皂化反应中的乳化剂，保证酯类和氢氧化钾有充分的接触面积，推进反应的进行。
10.现有一牛奶样品需测定其中维生素A 的含量，称取25- 30 g样品，分2—3次加入20-30 g KOH 固体颗粒，然后沿壁加入50 mL含有1g焦性没食子酸的无水乙醇溶液，边摇边加，然后在80 ℃水浴上回流30min，立即冷却至室温。
2.1-4 维生素的测定
国际单位： 国际单位： IU （International Unit) 1 IU = 0.3g VA = 0.025 VD = 1.79 gβ-胡萝 胡萝 卜素 = 1.1mg α- VE = 3 g VB
第九章 维生素的测定
一、维生素A 维生素A 目前维生素A都是合成的，来源： 目前维生素A都是合成的，来源：
从动物肝脏中得到； （1）从动物肝脏中得到；（2）从维生素前体而 得到（维生素前体：主要指类胡萝卜素， 得到（维生素前体：主要指类胡萝卜素，主要 胡萝卜素） 是β-胡萝卜素） 维生素A 维生素 A 的测定常用的方法有三氯化锑比 色法、紫外分光光度法、荧光分析法、 色法、紫外分光光度法、荧光分析法、液相色 谱法。 谱法。
增强抵抗力。 增强抵抗力。
维生素D 调节体内矿物盐的平衡， 维生素D：调节体内矿物盐的平衡， 特别是对
人体内钙、磷的代谢，并能防止软骨病。 人体内钙、磷的代谢，并能防止软骨病。
也就是说，这类化合物的化学结构各 O 不总是相同。比如：
C
维生素C：六碳的多 羟基内酯
HO HO
C C
O
H C HO C H
维生素是一类维持动物机体健康必不可少的 低分子有机化合物，是食物的构成成分，是 天然有机化合物。 维生素包括很多不同种类的化合物。 针对于今天的题目，我们先明确一点，这些 不同种类的化合物之所以被归为维生素，并 不是根据他们的化学特性，而是根据他们的 生物学功能。
第一节 概 述
在这二类中与我们最密切， 而且了解最多的有： 在这二类中与我们最密切 ， 而且了解最多的有 ： 维生素A：是人体必需营养素，能促进人体发育， 维生素A 是人体必需营养素，能促进人体发育， 防止眼膜炎、夜盲症等疾病。 防止眼膜炎、夜盲症等疾病。
维生素c含量测定方法注意事项
维生素c含量测定方法注意事项
宝子们，今天咱们来唠唠维生素C含量测定方法的那些注意事儿。
咱先说直接碘量法测定维生素C吧。
在做这个测定的时候呢，溶液的酸度可得控制好啦。
要是酸度不合适，那测定结果可就像调皮的小孩，完全不按你想的来。
一般来说，要让溶液保持在弱酸性的环境中哦。
而且，碘液的浓度要准确标定，这就像你做菜放盐一样，多一点少一点味道就不对啦。
要是碘液浓度标错了，那测出来的维生素C含量肯定也是错得离谱。
还有啊，这个测定过程中要避免阳光直射，维生素C可是个怕晒的小宝贝，一晒可能就发生变化，那结果就不准喽。
再讲讲2,6 - 二氯靛酚滴定法。
这种方法呢，滴定的速度要适当哦。
不能像个急性子一样，滴得太快。
滴太快了，很容易就滴过量啦，那结果就偏高喽。
而且，这个2,6 - 二氯靛酚溶液也要现配现用呢。
就像新鲜的水果才好吃一样，现配的溶液才能准确地测定维生素C的含量。
在整个测定过程中，要保证样品溶液的均匀性。
如果溶液不均匀，就好比一碗粥里有米有汤没搅匀，测出来的结果肯定也是乱七八糟的。
另外，不管用哪种方法，样品的处理也很关键。
如果是从食物里提取维生素C，那提取的方法要合适。
可不能把维生素C都破坏掉了还去测，那不是白忙活嘛。
在提取的时候，要尽量减少维生素C和氧气的接触，因为维生素C特别容易被氧化。
这就像你要保护好自己的小秘密一样，得把维生素C保护好，不让氧气这个“小坏蛋”得逞。
宝子们，这些注意事项可一定要记住呀，这样咱们才能准确地测定维生素C的含量呢。
维生素五项分型及测定
维生素五项分型及测定（原创实用版）目录1.维生素五项的定义与内容2.维生素五项分型的意义3.维生素五项测定的方法与临床应用4.维生素五项缺乏的症状及注意事项正文维生素五项分型及测定是指对维生素 A、维生素 D、维生素 E、维生素 K1 和维生素 K2 这五种维生素在体内的含量进行检测和分析。
维生素是人体中不可缺少的营养物质，对人体的生长、代谢、发育过程起着重要作用。
下面我们将详细介绍维生素五项分型及测定的相关知识。
1.维生素五项的定义与内容维生素五项通常包括维生素 A、维生素 D、维生素 E、维生素 K1 和维生素 K2。
维生素 A 具有调节表皮和皮质层新陈代谢的作用，对视网膜功能、上皮细胞生长和分化、骨骼生长、生殖和胚胎发育等方面起重要作用。
维生素 D 则主要参与钙和磷的代谢过程，对骨骼生长发育和免疫系统具有重要作用。
维生素 E 具有抗氧化作用，保护细胞膜免受氧化损伤。
维生素 K1 和维生素 K2 则对凝血和骨代谢等过程具有关键作用。
2.维生素五项分型的意义维生素五项分型是为了更好地了解人体中维生素的种类和含量，以便进行疾病诊断和治疗。
分型可以帮助医生判断患者是否存在维生素缺乏症，以及缺乏哪种维生素。
维生素缺乏症可能导致消化系统功能失调、神经系统功能失调、循环系统功能失调等一系列症状，如胸闷、气短、心悸、失眠等。
因此，维生素五项分型对于诊断和治疗维生素缺乏症具有重要意义。
3.维生素五项测定的方法与临床应用维生素五项测定通常采用实验室检测方法，如高效液相色谱法、荧光法等。
医生会根据患者的症状和体征，结合实验室检测结果，制定合适的治疗方案。
维生素五项测定在临床应用中具有很高的价值，可以帮助医生及时发现和纠正维生素缺乏症，提高治疗效果。
4.维生素五项缺乏的症状及注意事项维生素五项缺乏可能导致多种症状，如皮肤干燥、脱屑、夜盲症、骨质疏松等。
在日常生活中，我们应该注意保持饮食均衡，摄入足够的维生素。
如有疑虑，可以到医院进行维生素五项检测，及时发现并纠正维生素缺乏症。
维生素测定
维生素测定维生素A有两种。
一种为维生素A醇；另一种是β-胡萝卜素，在人体的小肠和肝脏中可以转变为具有活性的维生素A。
[检测方法]高效液相色谱法。
[参考值]0.5～2.1μmol/L。
[临床意义]①维生素A能促进生长发育，维持上皮组织的正常结构与功能，参与视觉作用，增强皮肤黏膜屏障作用，从而抵御表皮的角化等生理作用，以眼、消化道、呼吸道等上皮组织尤为明显。
②增高见于婴儿自发性高钙血症、维生素A中毒症、慢性肾小球。
肾炎、肾病综合征、糖尿病、黏液性水肿等。
③降低见于夜盲症、干眼病、肝炎、肝硬化、胰腺功能低下、吸收不良综合征等。
二、维生素B1(Vit B1)测定[检测方法]速率法。
[参考值]94～271μmol/L。
[临床意义]①维生素B1在肝脏与焦磷酸反应生成硫酸焦磷酸酯(TPP)，TPP是α-酮酸氧化脱羧酶系的辅酶，参与α-酮酸氧化脱羧作用，对维持正常糖代谢和神经、肌肉功能具有重要意义。
②维生素Bl缺乏时糖代谢中间产物丙酮酸因氧化受阻而聚集，从而产生机体神经组织的能量来源障碍，发生脚气病，表现为肢端麻木、肌肉萎缩、下肢水肿等。
此外，可发生胆碱酯酶的活性增高，影响神经传导，引起胃肠道蠕动减慢、消化液分泌降低，出现食欲不振、消化不良等症状。
③维生素B1缺乏症患者主要发生在以精米为主食的地区。
维生素B1降低常见于脚气病、多发性神经炎、心力衰竭、甲状腺功能亢进症、腹泻等。
三、维生素B2(Vit B2)测定[检测方法]荧光法。
[参考值]70～100μmol/L。
[临床意义]①维生素B2在体内的活性形式有两种，即黄素单核苷酸和黄素腺嘌呤二核苷酸。
均为体内氧化一还原酶的辅酶，在生物氧化过程中起着递氢体的作用。
能促进蛋白质、糖、脂肪的代谢，也能降低心脑血管的发病率，尚有利尿消肿，预防癌症的作用。
②维生素B2降低常见于角膜血管化、脂溢性皮炎、阴囊炎、口角炎、舌炎、唇炎、口腔黏膜溃疡等。
四、泛酸(Vit B3)测定[检测方法]比色法。
食品中维生素ade的测定
食品中维生素ade的测定食品中维生素ADE的测定是食品质量检验中的重要一环。
维生素ADE是人体所必需的脂溶性维生素，对于身体的生长和发育、免疫系统的健康、视力的保护等起着重要的作用。
因此，准确测定食品中的维生素ADE含量，对于保障人体健康具有重要意义。
在食品中测定维生素ADE的方法有很多，其中常用的方法有高效液相色谱法、气相色谱法、荧光光谱法和分光光度法等。
下面将就这几种方法分别进行介绍。
高效液相色谱法是一种常用的测定食品中维生素ADE的方法。
该方法通过色谱柱对维生素ADE进行分离，再利用紫外检测器对各个分离的维生素ADE进行检测。
这种方法具有操作简便、准确度高、重复性好等优点，因此在食品中的应用较为广泛。
气相色谱法也是一种常用的测定食品中维生素ADE的方法。
该方法利用气相色谱仪对食品中的维生素ADE进行分离和检测。
相比于高效液相色谱法，气相色谱法更适用于测定食品中微量的维生素ADE含量，但操作相对复杂一些。
荧光光谱法是利用维生素ADE在特定条件下的荧光特性进行测定的方法。
该方法通常将维生素ADE与荧光物质反应，生成具有特定荧光的产物，然后利用荧光光谱仪对产物进行检测。
荧光光谱法的优点是敏感度高、选择性好，能够快速准确地测定食品中的维生素ADE含量。
分光光度法是一种经典的测定维生素ADE的方法。
该方法通过测量维生素ADE在特定波长下的吸光度来确定其含量。
利用分光光度计进行测量，该方法具有操作简单、成本低廉等特点。
但是相比于其他方法，分光光度法的准确度和重复性稍差一些。
总结来说，测定食品中维生素ADE的方法有高效液相色谱法、气相色谱法、荧光光谱法和分光光度法等。
这些方法各有优缺点，选择合适的方法取决于特定的实验要求和食品样品的特性。
无论采用哪种方法，准确测定食品中的维生素ADE含量是保障食品安全和健康的重要一环，对于提高食品检验的准确性和科学性具有重要意义。
混合型饲料添加剂 维生素企业标准2020版
Q/01XY BB46企业标准Q/01XY08—2020混合型饲料添加剂维生素2020-06-17发布2020-06-25实施混合型饲料添加剂维生素1范围本标准规定了混合型饲料添加剂维生素的产品分类、代号、技术要求，试验方法，检验规则，标志、包装、运输、贮存。
本标准适用于饲料添加剂维生素为主要原料，以葡萄糖、玉米淀粉等为载体均匀混合制成的混合型饲料添加剂微生物制剂。
2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB10648饲料标签GB13078饲料卫生标准GB/T13079饲料中总砷的测定GB/T13080饲料中铅的测定原子吸收光谱法GB/T13091饲料中沙门氏菌的检验方法GB/T5917.1饲料粉碎粒度测定两层筛筛分法GB/T5918饲料产品混合均匀度的测定GB/T6435饲料中水分的测定GB/T14699.1饲料采样GB/T18823饲料检测结果判定的允许误差GB/T14700饲料中维生素B1的测定GB/T14702饲料中维生素B6的测定高效液相色谱法GB/T17812饲料中维生素E的测定高效液相色谱法GB/T17813复合预混料中烟酸、叶酸的测定高效液相色谱法GB/T17817饲料中维生素A的测定高效液相色谱法GB/T17778复合预混料中d-生物素的测定高效液相色谱法GB/T18397复合预混料中泛酸的测定高效液相色谱法GB/T18872饲料中维生素K3的测定高效液相色谱法GB/T17818饲料中维生素D3的测定高效液相色谱法GB/T7303-2006饲用添加剂维生素C（L-抗坏血酸）GB/T14701-2002饲料中维生素B2的测定GB/T17819-2017添加剂预混合饲料中维生素B12的测定高效液相色谱法JJF1070定量包装商品净含量计量检验规则国家质检总局令（2005）第75号定量《包装计量监督管理办法》农业部公告第2134号《饲料添加剂品种目录》农业部公告第2133号《饲料原料目录》农业部公告第2625号《饲料添加剂安全使用规范》3产品分类产品根据主成分含量不同分为以下8类，见表1。
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（三）液相色谱分析 色谱推荐条件： 预柱：ODS 10μm,4mm×4.5cm 分析柱：ODS 5μm,4.6mm×25cm 流动相：甲醇：水＝98：2，混匀，临用
前脱气。
紫外检测器波长：300nm,量程0.02 进样量：20μL 流速：1.65～1.70mL/min
生物鉴定法：费时、费力、需要动物饲养场地 微生物法：仅限于水溶性维生素的测定 荧光法：用于硫胺素的测定 仪器法：快速、灵敏、有较好的选择性 HPLC：用于大多数维生素的测定，费用高
二、脂溶性维生素的测定
脂溶性维生素的理化性质
溶解性：脂溶性维生素不溶于水，易溶于苯、 乙 醚、 丙酮、三氯甲烷、乙醇等有机溶剂。
做空白试验
重复上述操作，将20ml维生素B1标准使用液加入 盐基交换管以代替试样提取液，即得到标准净化液。
4.氧化
将5ml试样 净化液分别加 入A、B两个 反应瓶；
同时将5ml 标准净化液分 别加入A1、B 1两个反应瓶 中。
Maizel-Gerson 反应瓶
氧化流程
A、A1瓶 15%NaO H (3 ml)溶液振摇
（一）原理
样品中维生素A 及维生素E 经皂化提取 处理后，将其从不可皂化部分提取至有 机溶剂中。用高效液相色谱法C18 反相 柱将维生素A 和维生素E 分离，经紫外 检测器，用内标法定量测定
（二）样品处理
1.皂化称取适量样品（含维生素A 约3μg， 维生素E 各异构体约40μg）于三角瓶中， 加30mL 无水乙醇，振摇使样品分散。加 入5mL100g/L 抗坏血酸溶液和2.00mL 苯 并[e]芘溶液（5μg/L，内标用），混匀， 加10mL 氢氧化钾溶液（50％浓度），混 匀，于沸水浴上回流30min，使皂化完全， 皂化后立即放入冰水中冷却。
2、 都易溶于水，而不溶于苯、乙醚、氯仿等大多数 有机溶剂。
3、 在酸性介质中很稳定，即使加热也不破坏；但在 碱性介质中不稳定，如果同时加热，更易于破坏或分 解。
4 它们易受空气、光、热、酶、金属离子等的影响(如 维生素B2对光，特别是紫外线敏感，易被光线破坏； 维生素C对氧、铜离子敏感，易被氧化)。
维生素的测定
一、概述
定义
维生素既不是构成机体组织的基本原料，也不 是机体的供能物质，它是一类需求量极少、人体不 能合成（或合成量很少）、主要以辅酶的形式参与 代谢调节，是维持人体正常生命活动所必需的天然 有机化合物。目前已确认的有30余种，其中被认为 至关重要的有20余种。
维生素的命名
1、 多根据发现的时间顺序以英文字母排序，如维 生素A、维生素B1、B2，维生素C， 维生素E等。
（如按国际单位，1IU＝0.3ug 维生素A）； ρ－由标准曲线上查得维生素 A 的含量，ug/m
L； m－样品质量，g； v－抽取后加三氯甲烷定量的体积，mL；
（四）讨论
1．本法摘自GB12388－90，适用于食品 中维生素A 的测定。
2．三氯化锑有腐蚀性，不能粘在手上， 三氯化锑与水能生成白色沉淀，所以不能 碰到水。
1、 在评价食品的营养价值， 2、 寻找富含维生素的食品资源， 3 指导人们合理调整膳食结构，防止维生素缺乏症
或维生素中毒， 4、 研究维生素在食品加工、贮存等过程中的稳定性，
指导人们制定合理的工艺及贮存条件， 5、 监督维生素强化食品的强化剂量，防止因摄入过
多而引起维生素中毒
维生素的分析方法
测定水溶性维生素的一般方法
样品处理：
一般多在酸性溶液中进行前处理，再经淀粉酶、木 瓜蛋白酶等酶解作用，使结合态维生素游离出来， 再进行提取。为进一步去除杂质，还可用活性人造 沸石、硅镁吸附剂等进行纯化处理。
测定水溶性维生素的方法常有高效液相色谱 法、荧光比色法、比色法和微生物法等。
水溶性维生素的测定举例
(四)计算 X=ρ/m×V×100/1000 式中 X - 某种维生素的含量，mg/100g; ρ- 由标准曲线上查到某种维生素含量，μg/mL； V – 样品浓缩定容体积，mL； m – 样品质量，g。
二、比色法测定维生素A 的含量
（一）原理 维生素A 在三氯甲烷中与三氯化锑相互
荧光法和高效液相色谱法灵敏度很高，是目前常用的方法。
荧光法
这里我们主要介绍荧光法
参考GB/T 5009.84-2003 食品中硫胺素(维生 素B1)的测定
方法原理
试样在酸性溶液中加热，提取维生素B1，经蛋白 分解酶处理，使维生素B1成为游离型。再经层析 柱纯化，去除荧光淬灭物质，同时浓缩，用碱性 铁氰化钾溶液将其氧化成硫色素，在紫外线下， 硫色素发出荧光，再给定的条件下以及没有其他 物质干扰时，此荧光之强度与硫色素量成正比即 与溶液中维生素B1量成正比。
2.提取 将皂化后的样品移入分液漏斗中， 用50mL 水分2－3 次洗皂化瓶，洗液并入 分液漏斗中。用100mL 无水乙醚分2 次洗 皂化瓶及残渣，乙醚液并入分液漏斗中。 轻轻振摇分液漏斗2min，静置分层，弃去 水层。然后每次用约100mL 水将乙醚液洗 至中性，约4－5 次
3.浓缩
将乙醚提取液经无水硫酸钠（约5g）滤入150mL 旋转蒸发瓶内，用约15mL 乙醚冲洗分液漏斗及无 水硫酸钠2 次，并入蒸发瓶内，于55℃水浴中减压 蒸馏并回收乙醚，待瓶中乙醚剩下约2mL 时，取下 蒸发瓶，用氮气吹干乙醚，随即加入2mL 乙醇，充 分混合、溶解提取物。将乙醇液移入塑料离心管中， 于离心机上离心5min（3000r/min），上清液供色 谱分析用。
B、B1瓶 3ml碱性K3Fe（C N）6 振摇约15s 硫色素 正丁醇（10ml）蓝色荧光
反应瓶要同时振摇，准确计时90s.
5、测定
荧光测定条件： 激发波长365nm；发射波长435nm；激 发波狭缝5nm；发射波狭缝5nm。 依次测定下列荧光强度： a. 样品空白荧光强度（样品反应瓶A）； b. 标准空白荧光强度（标准反应瓶A1）； c. 样品荧光强度（样品反应瓶B）； d. 标准荧光强度（标准反应瓶B1）；
维生素B1的测定 (THIAMINE)
维生素B1又称抗神经炎素，因其分子中既含有氮（N）， 又含有硫（S），故又称硫胺(素)。特别是在酸性介质中相当 稳定。但在碱性介质中对热极不稳定。
硫胺素在碱性介质中可被铁氰化钾氧化产生硫色素，在紫 外光照射下产生蓝色荧光，可借此以荧光比色法定量。
硫胺素能与多种重氮盐偶合呈现各种不同颜色，借此可用 比色法测定。比色法灵敏度较低，准确度也稍差，适用于含 硫胺素高的样品。
3.净化
a.脱脂棉铺于盐基交换管的交换 柱底部，再加约1g活性人造浮 石使之达到交换柱的1/3高度。
b.用移液管加入提取液20~60ml。
c.加入约10ml热蒸馏水冲洗交换 柱，弃去洗液，重复三次。
d.加入20ml50g/L酸性Kcl,收集此 液于25ml刻度试管内。凉至室 温，用250g/L酸性Kcl定容至25 ml，即为净化液。
操作步骤
1.样品处理
样品采集后用匀浆机打成匀浆于低温冰箱 中冷冻保存，用时将其解冻后使用。
2.样品提取
样品（2.00 ~ 10.00g试样）0.1或0.3mol/L盐酸加热 样品水解2mol/ L乙酸钠 调节PH为4.（5 以溴甲酚绿为外指示剂） 按比例加入淀粉酶和 蛋白酶 定容至100ml 混匀过滤提取液
注意事项：
1、 在皂化和浓缩时，为防止维生素的 氧化分解，加入抗氧化剂
2、 对于某些含脂肪量低、脂溶性维生 素含量较高的样品，可以先用有机溶剂 抽提，然后皂化，再提取。
3、 对于那些对光敏感的维生素，分析 操作一般需要在避光条件下进行。
一. 高效液相色谱法（HPLC）测定食物中维生素 A、E 的含量
2、 也有根据特定生理功能，如抗干眼病因子、抗 坏血酸、生育酚等，
3、 按照其化学结构如视黄醇、硫胺素、烟酸、叶 酸等。
维生素的分类
1、脂溶性维生素： 能溶于脂肪或脂溶剂，在食物中与 脂类共存的一类维生素，包括A、D、E、K各小类， 其共同特点是摄入后存在于脂肪组织中，不能从尿中 排除，大剂量摄入时可能引起中毒。由于可储藏在脂 肪中，故不需每天供给。
2、水溶性维生素：能溶于水，包括B、C各小类，其共 同特点是一般只存在于植物性食品中，满足组织需要 后都能从机体排出，需要每天供给。
CH2
CH3
CH3
CH3
VA1
CH3 CH 2OH
CH3
CH3
CH3
CHC3 H3
CH3
β －胡萝卜素
H3C
CH3
CH3
CH3
CH3 H3C
VA2
CH3 CH2OH
CH3
CH3
R3
R2
HO3C
HO
CH3
CH3
生育酚
C H3
H3C C H3
HO C H3 C H3
HO
7－脱氢胆固醇
CH3 CH3
R3
R2
HO3C
HO
CH3
CH3
R1 生育三烯酚
CH3 CH3
H3C
H3C H3C
麦角固醇
CH3 CH3
H3C
H3C H3C
CH3 CH3
HO
维生素D3(胆钙化醇)
测定食品中维生素的含量的意义
2．标准曲线制备
准确取一定量维生素 A 标准溶液于4～5 个容 量瓶内，用三氯甲烷配置标准系列。再取
相同数量比色管顺次取1mL 三氯甲烷和标准系 列使用液1mL，各管加入乙酸酐1 滴，制成
标准系列，于620nm 波长处，以三氯甲烷调节 零点，将标准比色系列按顺序移入光路前，
迅速加入9ml 三氯化锑－三氯甲烷溶液，于6s 内测定吸光度，绘制标准曲线。