加压毛细管电色谱仪的
毛细管电泳法
毛细管电泳法类型 —— 非胶毛细管电泳
指介质中以有机溶剂占主要部分，即表现为非水体
系的性质。能承受更高的操作电压产生的高电场， 有更高的分享效率，也可在不增大焦耳热的条件下
提高溶液中的离子浓度或增大毛细管的内径，从而
增大进样量。 优点：使用超大内径毛细管柱、快速分析、降低吸 附、提高分离选择性、有利于难溶于水及在水中不 稳定的化合物的分离、对中性物质的分离、对手性
.改变电渗最方便有用的方法 .可能会引起溶质组分电荷和结构的改变 .离子强度增加，电流和焦耳热增加 .低离子强度可能存在样品的吸附问题 .导电性与样品不同可能引起峰形畸变 .离子强度低，样品装载量小
缓冲溶 pH降低，电渗降低 液pH值 pH降低，电渗增加 离子强 度或缓 冲溶液 浓度 温度 有机改 性剂 离子强度增加， Zeta电位降低， 电渗降低
V=Vep+Veo=(μep + μeo ) ·E
毛细管电泳法仪器构造
毛细管电泳法仪器构造
毛细管柱是CE的核心部件，目前多为25~75μm之间， 材料为聚四氟乙烯、玻璃和弹性石英，以石英居多。 选择细内径毛细管柱有利于最大散热，但比表面积大， 会增加溶质的吸附作用。
高压电源：包括电源、电极和电极槽
温度改变1℃，黏度 .温度由仪器自动控制，常用方法 变化约2%--3% 改变Zeta电位和黏 度（降低电渗） .变化复杂，其影响宜通过实验测定 .可能改变选择性
毛细管电泳法基本原理
粒子在毛细管内电解质中的迁移速度等于电泳和电渗流（EOF） 两种速度的矢量和。正离子的运动方向和电渗流一致，故最先 流出；中性粒子的电泳流速度为“零”，故其迁移速度相当于 电渗流速度；负离子的运动方向和电渗流方向相反，但因电渗 流速度一般都大于电泳流速度，故它将在中性粒子之后流出， 从而因各种粒子迁移速度不同而实现分离。
使用FID检测器做毛细管分析的开机步骤
使用FID检测器做毛细管分析时的开机步骤一、先将毛细管柱接到仪器上，毛细管柱插入注样器的长度为2.5cm，插入检测器的长度为8.5cm，再分别用开槽螺帽拧紧（拧紧的程度为先用手拧紧，再用扳手拧1/4到1/2圈即可）。
二、 1.打开氮气钢瓶，调节减压阀使压力输出在0.3 Mpa左右。
2.打开氢气钢瓶，调节减压阀使压力输出在0.2 Mpa左右。
3.打开空气钢瓶，调节减压阀使压力输出在0.2 Mpa左右。
三、打开气体净化器的开关。
四、再打开仪器顶部的载气稳压阀，调节压力表到一定的压力。
五、开气相上的电源开关来开机和加热。
待仪器自检通过以后来设定柱箱、检测器、进样器2的温度。
六、开氢气I和空气来点火1.点火时将氢气I开到0.15~0.2Mpa，空气开到0.01Mpa，用电子点火枪对准第一路检测器离子头点火。
2.点火成功后将氢气I调节到0.1Mpa，空气调到0.1Mpa。
七、打开电脑及工作站，观察仪器的基线是否稳定，还有电平是否在零点附近，如有很大的偏离，就要通过仪器FID放大板上的调零旋钮来调制零点附近，最好调到正数值。
八、待仪器的基线走直稳定后即可进样分析，进样之前请先将仪器的基线调节到0-10mv之间，进样时进样量一般都控制在1µl以下。
使用FID检测器做毛细管分析时的关机步骤一、将刚才所设定的工作温度都设定为常温柱箱、检测器、进样器2的温度都设定为50℃，来进行降温。
二、关闭氢气I和空气的稳压阀来灭火，再关闭氢气钢瓶和空气的总输出。
三、等柱箱、检测器、进样器2的温度降到100℃以下时，关闭仪器上的电源开关。
四、关闭氮气钢瓶的总压输出。
使用FID检测器毛细管柱分析时的注意事项一、气相所使用的氮气和氢气一定要高纯度的气体，纯度要99.999%。
二、气相色谱仪和电脑所使用的电源都要进行良好的接地。
三、如使用的是空气发生器或者空气泵，那么根据使用次数的多少来放水，最少一周就要进行一次放水处理，如遇硅胶变色，则要及时进行更换新的硅胶。
高效毛细管电泳色谱仪电泳基本概念
高效毛细管电泳色谱仪电泳基本概念一、简介高效毛细管电泳色谱仪（Capillary Electrophoresis, CE）是一种利用电场对带电化合物进行分离的技术。
它可以用来分离带正电荷、负电荷或无电荷的化合物，且在分离过程中不需要添加外部成分，如胶体或分离介质，因此不会改变样品的组成。
CE具有分离速度快、样品消耗少、自动化程度高和分离精度高等特点，在生物、医药和环境等领域得到了广泛应用。
二、电泳原理在CE中，带电荷的样品离子在电场中移动，移动速度与带电离子的电荷数和电场力大小成正比。
由于样品分子的大小、形状和电荷都不相同，它们在电场中的移动速度也各不相同，因此分离出不同成分的样品提供了可能。
CE通过在一根毛细管内施加高电场，使带电离子向着管底方向移动，借此实现所有样品分子的分离。
三、电泳参数CE基本的电泳参数包括电场强度、毛细管内液体pH值、毛细管壁面涂层、电容耦合、温度等。
1.电场强度：CE中的电场强度通常在10-100 kV/m之间，由于呈现出非线性的行为，这个参数对电泳速度和分离能力有着重要的影响。
2.pH值：毛细管内液体pH值的选择和调整是CE中的一个重要环节。
通常选择分析物理化性质相似的缓冲液，以使质氢或氢氧离子浓度在毛细管内始终保持一定水平。
3.微粒衬底：在一些情况下，添加微粒衬底可以增加分离能力和电泳效率，但是同样也会使分辨率降低。
4.温度：温度对分离速度、分离度和电泳峰形都有影响，通常情况下，温度越高，电泳速度会越快。
四、毛细管电泳色谱仪毛细管电泳色谱仪（Capillary Electrophoresis Instrument, CEI）包括注射器、毛细管、高压电源、检测器和控制软件等部件。
其中，注射器和毛细管是CE中最关键的部件。
毛细管通常是由非活性材料制成的，如硅胶或石英玻璃。
常用的检测器包括荧光检测器、紫外-可见光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。
五、应用CE在分析各种样品中有着广泛的应用，包括各种生物分子、有机和无机化合物、药物、食品、环境和化妆品样品。
毛细管电色谱的研究进展及其在生物大分子中的应用
毛细管电色谱的研究进展及其在生物大分子中的应用摘要】目的研究毛细管电色谱在生物大分子中的应用。
方法结合国内外有关毛细管电色谱的文献资料，综述毛细管电色谱的研究进展及其在生物大分子中的应用。
结果毛细管电色谱在分离分析生物大分子方面应用较为广泛。
结论毛细管电色谱拥有较广阔的应用前景。
【关键词】毛细管电色谱研究进展生物大分子分离【中图分类号】R318 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）26-0059-02毛细管电色谱(capillary electrochromatography，CEC)是将毛细管柱内填充固定相颗粒、管壁键合固定相或者制成连续床形式,以电渗流或者电渗流、压力共同驱动下使样品根据它们在固定相和流动相中分配系数不同以及电泳速率不同实现分离。
CEC技术是1974年由Pretorius等[1]首先提出的。
他们首次将电场施加到高效液相色谱柱上,显示出以电渗流作为驱动力的优越性,但当时并没有引起足够的关注。
1981年Jorgenson和Lukacs[2]在170um内径的毛细管中填充了10umPartisilODS-2,在电场作用下成功分离了甲基蒽和芘,获得了31000N/m的柱效。
这篇文章被认为是毛细管电泳和电色谱发展史上的里程碑。
此后,人们给于CEC越来越多的关注,关于CEC的研究论文也是迅速攀升。
蛋白质和核酸等物质是生命科学中一类重要的复杂生物大分子，它不仅存在于体内，而且随着生物技术的迅速发展，越来越多的在体外通过各种途径被人工制造出来，造福于人类，特别是对肿瘤的预警、诊断和治疗有着重要的意义。
生物大分子的检测基于组成复杂、成分微量或痕量的体系中,要深入探索和了解生命领域中疾病的发病机理,许多常规的分析技术已不能胜任。
近年来,毛细管电色谱(CEC)技术被应用于分子生物学领域检测生物大分子[3],为更好地将CEC技术用于分子生物学领域,建立良好的分离生物大分子的CEC方法,本研究主要对毛细管电色谱技术的研究进展及其在生物大分子中的应用进行以下综述。
毛细管电泳仪使用说明书
毛细管电泳仪使用说明书尊敬的用户：感谢您选择购买我们的毛细管电泳仪。
为了帮助您更好地使用该仪器，我们特别提供了以下使用说明书，请您仔细阅读，并按照说明进行操作。
一、仪器介绍毛细管电泳仪是一种用于分离和分析化合物的高效液相色谱仪器。
它主要由电泳槽、高压电源、检测器和数据处理系统等部分组成。
1. 电泳槽：电泳槽由两个并列的金属板构成，中间通过绝缘材料隔开。
电泳槽用于保持电场稳定以及支撑毛细管。
2. 高压电源：高压电源为仪器提供电场，使溶液中的化合物在毛细管中移动。
3. 检测器：毛细管电泳仪配备了多种检测器，包括紫外-可见吸收检测器、荧光检测器和电导检测器等，您可以根据实际需要选择使用。
4. 数据处理系统：数据处理系统可以实时监测和记录电泳结果，并提供数据分析和报告功能，便于您的后续研究。
二、使用步骤1. 准备工作在操作前，请确保仪器已正确接通电源，并检查各部分连接是否紧固。
同时，根据实验需要，选择合适的电泳缓冲液，并通过滤器过滤以去除杂质。
最后，准备好待测样品，并稀释至适当的浓度。
2. 将毛细管装入电泳槽首先，将尾端截平的毛细管插入电泳槽的两个极板之间，确保毛细管的两端均能延伸到电泳槽外。
然后，通过调整槽中绝缘材料的位置，使毛细管保持在水平状态。
3. 调整高压电源参数根据实验需要，设置合适的电压和电流值，确保电泳能够正常进行。
注意，过高的电压可能会导致电泳带宽过宽或毛细管损坏，因此请务必谨慎调整参数。
4. 注射样品使用注射器将待测样品缓慢注入毛细管，避免产生气泡。
注射结束后，迅速切断样品进入毛细管的通路，以免影响分离效果。
5. 启动电泳在确认样品已经注入毛细管后，启动电泳，并开始记录数据。
您可以根据实际需要选择自动采集数据或手动记录数据。
6. 数据处理电泳结束后，您可以通过仪器提供的数据处理系统对结果进行处理和分析。
不同的检测器可能需要不同的数据处理方式，请根据实际检测器选择相应的处理方法。
三、注意事项1. 请在使用仪器前仔细阅读使用说明书，并根据说明书进行正确操作。
毛细管电泳仪原理
毛细管电泳仪原理
毛细管电泳仪是一种利用毛细管中的电泳现象进行物质分离的仪器。
其原理简述如下：
1. 毛细管: 毛细管是一种细长而细腻的玻璃管或石英管，内径通常为10-100微米。
毛细管的内壁具有一定的静电性质，可以吸附带电物质。
2. 缓冲液: 毛细管中填充有一种称为缓冲液的溶液。
缓冲液可以调节溶液的pH值，并提供离子，以保持毛细管内部电荷平衡。
3. 样品注入: 需要分离的样品溶液通过吸管或注射器被注入毛细管中。
4. 应用电场: 在毛细管的两端施加电压，产生电场。
由于毛细管内部具有一定的电导性，电场会导致带电物质在毛细管中移动。
5. 分离过程: 带电物质在电场的作用下，根据其电荷大小和分子大小的不同，会以不同的速度向毛细管两端移动。
带电物质移动的速度与其电荷量和分子大小成反比。
6. 检测: 分离过程中，可以通过光散射、荧光等方法对物质进行检测。
常见的检测方法包括紫外吸收检测和荧光检测。
通过调节电场强度、缓冲液pH值和样品注入量等参数，可以
实现对不同样品的有效分离和检测。
毛细管电泳仪因其高效、高灵敏度和快速的优点，在生化、制药、环境监测等领域有广泛的应用。
毛细管电泳的基本原理及应用
毛细管电泳的基本原理及应用摘要：毛细管电泳法是以弹性石英毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的电泳分离分析方法。
该技术可分析的成分小至有机离子、大至生物大分子如蛋白质、核酸等。
可用于分析多种体液样本如血清或血浆、尿、脑脊液及唾液等，比HPLC 分析高效、快速、微量。
关键词：毛细管电泳原理分离模式应用1概述毛细管电泳(Caillary Electrophoresis)简称CE，是一类以毛细管为分离通道，以高压直流场为驱动力的新型液相分离分析技术。
CE的历史可以追溯到1967年瑞典Hjerten最先提出在直径为3mm的毛细管中做自由溶液的区带电泳(Capillary Zone Electro-phoresis，CZE)。
但他没有完全克服传统电泳的弊端[1]。
现在所说的毛细管电泳(CE)是由Jorgenson和Lukacs在1981年首先提出，他们使用了75mm的毛细管柱，用荧光检测器对多种组分实现了分离。
1984年Terabe将胶束引入毛细管电泳，开创了毛细管电泳的重要分支: 胶束电动毛细管色谱(MEKC)。
1987年Hjerten等把传统的等电聚焦过程转移到毛细管内进行。
同年，Cohen 发表了毛细管凝胶电泳的工作。
近年来，将液相色谱的固定相引入毛细管电泳中，又发展了电色谱，扩大了电泳的应用范围。
毛细管电泳和高效液相色谱（HPLC）一样，同是液相分离技术，因此在很大程度上HPCE与HPLC可以互为补充，但是无论从效率、速度、样品用量和成本来说，毛细管电泳都显示了一定的优势毛细管电泳（C E）除了比其它色谱分离分析方法具有效率更高、速度更快、样品和试剂耗量更少、应用面同样广泛等优点外，其仪器结构也比高效液相色谱（HPLC）简单。
C E只需高压直流电源、进样装置、毛细管和检测器。
毛细管电泳具有分析速度快、分离效率高、试验成本低、消耗少、操作简便等特点，因此广泛应用于分子生物学、医学、药学、材料学以及与化学有关的化工、环保、食品、饮料等各个领域[2]。
色谱技术的最新发展
色谱技术的最新发展色谱技术作为一种基础分析技术，在化学、生物和环境等领域有着广泛的应用。
随着科学技术的不断进步，色谱技术也在不断地进行创新和发展，为各种领域的分析提供更为高效、灵敏、准确的方法。
一、毛细管电泳色谱技术的新进展毛细管电泳是一种在细直管道中利用电场对分离物的电荷进行分离的技术，是分子分离与分析的一种重要方法。
目前，毛细管电泳色谱技术已经成为分析生物分子的重要手段之一。
近年来，毛细管电泳色谱技术已经得到了一定的发展，在处理高增益的问题上有了极大的提升。
比如，灵敏的荧光检测器的引入，提供了更高的检测灵敏度和分子选择性，从而使得毛细管电泳色谱技术成为越来越适合生物领域的研究方法。
二、气相色谱质谱联用技术的新进展气相色谱质谱联用技术是通过将气相色谱和质谱联合使用，将两种技术的优点紧密结合在一起，以便实现高分辨率分离和分析化学分子。
最近，气相色谱质谱联用技术在分离和分析复杂物质方面得到了进一步的实践和发展。
利用气相色谱质谱联用技术，可以有效地分离和分析生物、化学和环境研究中的复杂混合物。
同时，由于气相色谱分离和分析具有高速分离和分析能力，因此在分析过程中不需要液相介质，也不易污染和重复分析。
三、液相色谱电喷雾质谱联用技术的新进展液相色谱电喷雾质谱联用技术是将高效液相色谱和电喷雾质谱联合使用，结合了二者的优点，使得它具有了很高的分离和分析能力。
近来，液相色谱电喷雾质谱联用技术得到了更为实际的研究和应用。
针对生物玻璃混合物和高分子化合物的分析，液相色谱电喷雾质谱联用技术已经成为现在最先进和最高效的分析方法之一。
四、离子色谱技术的新进展离子色谱是分析离子材料的一种特殊方法，在分析和检测离子性污染物等领域有广泛的应用。
在过去，离子色谱的使用限于离子物学科学的专家和学者使用，但现在它已经广泛应用于生物、环境和食品等领域。
近年来，离子色谱技术得到了很好的发展。
其新一代离子色谱仪器具有定量高、灵敏度高、速度快和准确性好等特点，从而提供了更广泛的应用前景。
固相微萃取-加压毛细管电色谱测定痕量丙烯酰胺
关键词 ：固相微 萃取 ； 加压 毛 细管 电 色谱 （ Ｃ Ｃ ； ｐ Ｅ ） 活性 炭 ； 丙烯 酰胺
中图分 类号 ： ６ ７ ８ ０ ５ ． 文献标 识码 ： Ａ 文章 编号 ：１０ ２ ９ （ ０ ７ ｌ ０ ６ ０ ０ ８— ７ ４ ２ ０ ）０— ０ ５— ５
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第 ２ 卷第 １ １ ０期
２０ ０ ７年 １ ０月
常熟理 工学院学报 （ 自然科 学版 ） Ｊｕｎ ｆＣ ａｇｈ ｓｔｔ ｏ ｅｈ ｏｏｙ Ｎ ｔｒｌ ｃｅｃｓ ｏｒａ ｏ ｈ ｎｓｕＩ ｔｕｅ ｆ ｃｎ１ｇ （ ａ ａ Ｓ ｉ ｅ） ｌ ｎｉ Ｔ ｕ ｎ
Ｔ ．８ ０ Ｃ， 京普析 通用 仪器有 限公 司． Ｕ １１Ｐ 北
接用 Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ测定 ， 没有 浓缩 、 富集 试样 ． 史箴 等 以毛 细管 气相 色谱 法 用 活性 炭 小 柱 富集 ， 甲醇分 次 洗脱 ， 再 将 洗脱 液合 并 ， 回收率 可达 ９ ％ ， 样 品体 积增 大 ， ２ 但 富集倍 数 降低 ， 检测 限相对 较 高．
收稿 日期 ： ０ ７— ８—１ ２０ ０ ３ 作者简介 ： 张 颖 （９ ９ ） 女 ， １６ 一 ， 江苏南京人 ， 苏州大学化学化工学院硕士研究生． ’ 通信联 系人 ： 屠一锋 （９３ ）男 ， 苏常熟 人 ， 州大学 化学 化工 学 院教授 ， 士生 导师 ， １６一 ， 江 苏 博 研究 方 向 ： 电分析化 学 ，
目前 ， 国际上丙烯酰胺测定主要采用气相色谱一质谱联用和高效液相色谱一质谱联用两种方法 ， 有报道 称 采用 Ｇ — ＣＭＳ联用 ， 出限 可达 ５—１ｎ／ ， 检 ０ ｇｇ而采 用 Ｌ — — ＣＭＳＭＳ联 用 ， 出 限为 ２ ５ ｎ／ ， 检 ０— ０ ｇｇ ］这些方 法对仪 器设备要求较高 ， 测试费用大． 刘红河 等采用 ｃ ６ 固相萃取小柱对食品样品进行纯化处理， 处理后样品直
毛细管进样技术
光学门进样
荧光标记后的样品在高 压的驱动下进入分离毛细管， 当样品到达毛细管的“前门” （entrance）时，用第一 束激光（gating beam） 来减灭大部分荧光标记的样 品，只允许很窄宽度的样品 塞通过，实现分离后用激光 致荧光检测器检测。
由于样品引入是采用光学形式而不是机械控制的，样 品塞宽度很小，同时可以在维持高压状态下进样。
3 扩散进样
扩散进样方式通过调整样品池高度,使其液面
与毛细管出口端的液面严格水平，利用进样端管口
处样品溶质与毛细管中电解质缓冲液存在浓度梯度
的原理使样品组分直接扩散进入管内。因为该进样
方法不采用电压，所以在一定程度上，克服了因淌
度不同产生的组分岐视。并且该方法具有较好的定
量特性，较强的抗样品基质干扰和一定的抗区带电
由于试样各组分具有不同的μep，淌度大的组分进入
毛细管内的质量要比淌度小的组分多，因此导致了电渗流
进样方式的最大一个不足之处――样品进样时存在组份歧
视。
电动力学进样的动力来自电泳介质本身，因此可用于
高粘度样品的分析，从而扩展了分析样品类型的范围。
场放大技术
在分析一些含量极小的组分时，为了提高分析的灵敏 度通常采用了场放大进样技术，这是电动力进样的扩展。 该方法是将样品溶于电导较小的缓冲液，当进样时，在 离子强度低的稀缓冲液中的组分，就处于电场强度较高 的状态，运动比在管内大部分高电导的缓冲液中要快多。 于是，样品中的阳离子(如果进样端为正极时) 就会迅速 迁移至样品液与缓冲液的边界上，随后速度开始下降， 阳离子便堆积在这一界面上形成一个被浓缩了的区带， 中性离子仍分布于整个样品液，而阴离子则浓缩在样品 液的尾部与后续缓冲液的界面附近。
毛细管电泳和毛细管电色谱(ppt)
度量电渗流大小是单位电场下的电渗流速率即电渗淌度
(eo)或电渗速率(ueo)，可用Smoluchowski 方程表示：
eo
o w
ueoeoEowE
u eo
Ld t0
eouE eoL t0d
1Ld E to
Lt U
3.1.3． 电渗流
以电场力驱动产生的溶液EOF，与高效液相色谱中由高压 泵产生的液体流型不同：
3.1.5. 分离原理
电泳和电渗流并存，在不考虑相互作用的前提下，粒子在 毛细管内电介质中的迁移速率是两种速率的矢量和：
uuep ueo (epe)oE
令µapp=µep + µeo，称之为表观淌度，即从毛细管电泳测量 中得到的淌度为粒子自身的电泳淌度和由电渗引起的淌度之
和，并有
ap pepeou/EL trdU Lt
目前有三种方法可以让样品直接进入毛细管：
电动法、压力法和浓差扩散法。
3.2.3. 电源及其回路
电流回路系统包括高压电源、电极、电极槽、导线和电 解质缓冲溶液等。CE和CEC一般采用0 ~ ±30 kV连续可 调的直流高压电源。理想的电源应具备： 1.能输出单极直流高压(一端接地)； 2.电压、电流、功率输出模式任意可选； 3.能控制电压、电流或电功率的梯度； 4.电压输出精度应高于1%。 CE的电极通常由直径0.5~l mm的铂丝制成。 电极槽，即缓冲液瓶，通常是带螺口的小玻璃瓶或塑料 瓶(1~5mL不等)，要便于密封。缓冲液内含电解质，充于 电极槽和毛细管中，通过电极、导线与电源连通，一同 构成整个电流回路。
毛细管电色谱由于引入了色谱机制，其保留机理包括两个 方面:
其一，如同HPLC，基于溶质在固定相和流动间分配过程； 其二，如同CE，基于溶质电迁移过程。CEC容量因子可 用下式表示：
GC-2014气相色谱(毛细柱)操作步骤
FID-2014检测器（毛细柱）基本操作步骤此基本操作步骤仅作参考使用，应以岛津说明书为准。
开机步骤1.根据要求配置好样品。
2.根据样品要求选择合适的柱子，并安装到SPL进样口及FID检测器上。
3.打开氮气源阀门，二次压力达到0.5 Mpa以上。
4.打开主机电源开关，在主机自检完后打开实时分析工作站。
5.点击“配置维护”（Configuration and Maintenance）图标，再点击“系统配置”（System Configuration）图标。
从中设置好分析流路（包括SPL进样口、色谱柱及FID检测器，如有其他配置还需选好）及相关参数。
6.点击菜单栏中的“视图”（View），选择“仪器监视器”（Instrument Monitor）。
在监视器窗口中确认a)载气（Carrier Gas）及吹扫流量（Purge Flow）为“打开”（ON）状态；b)FID检测器（Detector）及点火（Flame）为“关闭”（OFF）状态；7.点击“仪器参数”（Instrument Parameters）图标，a)将柱箱温度（Column）设置为30℃；b)将SPL进样口温度设置为40℃，并设置好SPL进样口中的柱流量（Column Flow）及分流比（Split Ratio）等参数；c)将FID检测器温度设置为40度，将FID检测器尾吹气（Make Up）压力表调整设置为75Kpa（30ml/min）d)点击“下载参数”（Download Parameters）图标。
8.点击“开启系统”（System ON）图标。
按仪器上的MONIT键。
9.设置FID温度、进样口温度为分析时的温度，点击“下载参数”（Download Parameters）图标，待FID检测器温度升至150℃以上时，在监视器窗口中打开FID检测器（Detector）开关为“打开”（ON）状态；10.打开氢气瓶阀门，二次压力达到0.3 Mpa；打开空气瓶阀门，二次压力达到0.3 Mpa；调整压力表，空气压力表为50KPa，氢气压力表为50KPa，再打开点火（Flame）开关，点燃火焰。
毛细管电色谱
毛细管电色谱1. 介绍毛细管电色谱（Capillary Electrophoresis，简称CE）是一种利用玻璃毛细管内的电流和电场力来实现物质分离和分析的方法。
它结合了毛细管电泳和色谱技术的优点，具有高分离效率、快速分析速度、小样本体积和无需柱填充物等优势。
2. 工作原理毛细管电色谱的工作原理基于溶液中离子的迁移速度差异，通过在毛细管内加上电场来引导有电荷的离子在电场中运动。
不同离子由于大小、电荷、空间结构和溶液pH等因素的影响，会以不同的速度游离迁移。
通过测量这些离子的迁移时间和峰面积，可以得到溶液中各组分的含量信息。
3. 仪器结构毛细管电色谱仪主要由电场供应器、样品注射器、分离柱和检测器等部分组成。
•电场供应器：提供所需的电压和电流，用于产生分析电场。
•样品注射器：用于在毛细管内引入待分析的样品，常使用自动进样器实现定量和连续进样。
•分离柱：通过对毛细管内壁表面进行涂覆或改性使其具有特定的分离能力，用于分离混合物中的组分。
•检测器：用于监测分离出的各组分的信号，常见的检测器有紫外吸收检测器和荧光检测器。
4. 分析步骤1.样品准备：将待分析的样品溶解在合适的缓冲液中，同时进行必要的前处理，如蛋白质的还原和糖类的酶解等。
2.样品进样：将样品注射到毛细管中，一般可以使用自动进样器来实现精确的样品进样。
3.分离：通过在毛细管内施加电场，使样品中的离子在电场力和溶液流动力的共同作用下，沿毛细管内壁迁移，实现样品分离。
4.检测：通过检测器监测样品分离过程中形成的信号，如紫外吸收和荧光等，获取样品分离和定量分析的结果。
5.数据分析：根据检测到的峰面积或峰高，结合标准曲线，计算样品中各组分的浓度或含量。
5. 应用领域毛细管电色谱在生物医药、环境监测、食品检测与安全等领域具有广泛的应用。
•生物医药：用于药物分析、蛋白质分析、核酸分析等。
•环境监测：可以分析水体中的微量重金属和有机污染物等。
•食品检测与安全：可以分析食品中的添加剂、农药残留和食品中的有害物质等。
加压毛细管电色谱法分离1-甲基-3-苯基丙胺对映体
之 间的色谱 行 为差 异扩 大 ， 离度增 大 。选 择性 系数 与分离 度均 在增 加 。但 当浓 度 ＞１ ／ 分 ０ｇＬ时 ， 离 度 分 不再增 加 ， 故本 文选 用 的 ＨＰｆＣ －—Ｄ浓度 为 ｌ ／ ， 时 １甲基 一一 基丙胺 得 到 了较 好 的分离 。 ｌ ０ｇＬ 此 ． ３苯 缓 冲溶 液 ｐ Ｈ值影 响待分 离物质 的电荷 和 电渗 流 ， 影 响手性 分离 的重 要参 数之 一 。实验考 察 了宽 是 范 围的 ｐ Ｈ值 （ ３～１ ） 分 离度 的影 响 ， 果表 明 ， 冲溶 液 在 接近 中性 条 件 下分 离 的较 好 。由 图 ２可 ０对 结 缓 知， 当流动相 ｐ Ｈ值从 ７逐 渐增 加 至 ７６时 ， 离度逐 渐增 大 ； ｐ ７ ６时 ， ． 分 当 Ｈ： ． 分离 度 达 到最 大 ， 随着 ｐ Ｈ
比： （ Ｖ 乙腈 ） Ｖ 磷 酸盐体系）＝ ０４ 液（ ｍｏ Ｌ 、 ：（ ６ ：０溶 ５ｍ ｌ ） 背景 电解 质 ｐ ７ ６ 柱温 １ ／ Ｈ＝ ． 、 ６℃和分离电压 ｌ Ｖ达 ０ｋ 到了基线分离 ， 该方法重现性好 、 简便 、 快捷 。 关键词 加压 毛细管 电色谱 ， 甲基苯基丙胺 ， 对映体拆 分 ， 羟丙基 一 环糊精 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ：０００ １ （０ ０ ０ －２ ６ ３ １０ －５８ ２ １ ）２ ４ － ０ ０ 中图分类号 ：６ ７ ０ ５
电解质溶液 ， 混合均匀 ， ０４ ｍ纤维素酯膜过滤 ， 经 ．５ 超声脱气 ３ ｉ， ０ｍｎ 置于冰箱中冷藏备用。 Ｃ Ｃ条 件 ： 测 波长 ２４ｎ 进样 条 件 ： Ｅ 检 ０ ｍ； 正极 进 样 ， Ｖ×５Ｓ流 动 相 ： 乙腈 ） （ ｏ Ｌ磷 酸 ５ｋ ； （ ： ５ｍｍ ｌ ／ 盐 ）＝ ０４ ， ６ ：０ 运行 电压 １ Ｖ， 温 ｌ Ｃ； ０ｋ 柱 ６ｏ 手性选 择 剂浓 度 １ ／ ， 毛 细 管两 端 同时施 加 １ Ｐ 气 ＯｇＬ 在 ０ ａ的
BECKMAN P ACE MDQ毛细管电泳仪操作说明书
操作说明毛细管电泳仪仪操作BECKMAN P/ACE MDQ 毛细管电泳说明说明一、开机1 接通电源→打开毛细管电泳仪开关→打开计算机→点击桌面32 Karat操作软件图标→点击PAD检测器图标→进入毛细管电泳仪控制界面。
2将分别装有0.1 mol／L 盐酸水溶液、l mol／L 氢氧化钠水溶液、运行缓冲液A、重蒸水依次放入左边缓冲液托盘（Inlet）并记录对应的位置。
3 将装有运行缓冲液A及空的缓冲液瓶放入右边缓冲液托盘（Outlet），记录对应的位置。
4 将装有待检测样品的缓冲液瓶放入左侧样品托盘，记录对应的位置。
5检查卡盘和样品托盘是否正确安装。
关好托盘盖，注意直接控制图象屏幕上是否显示卡盘和托盘该已安装好。
此时应能听到制冷剂开始循环的声音。
二、石英毛细管的处理1 在直接控制屏幕上点击压力区域，出现对话框。
2 设置Pressure、Duration、Direction、Pressure Type、Tray Positions等参数。
点击OK，瓶子移到指定的位置，开始冲洗。
按照以下表格的步骤依次进行冲洗。
冲洗完成后，毛细管已处理好，毛细管中充满运行缓冲液。
溶液 Inlet Outlet Pressure Time重蒸水 E1 B1 25 0.50.1 mol/L 盐酸 C1 B1 20 2重蒸水 E1 B1 20 0.5lmol／L 氢氧化钠水溶液 D1 B1 20 2重蒸水 E1 B1 20 0.5运行缓冲液A A1 B1 20 2三、方法编辑1 先进入32 Karat 主窗口，用鼠标右键单击所建立的仪器，选择Open Offline，几秒钟后会打开仪器离机窗口。
2 从文件菜单选择File Method New，在方法菜单选择 Method Instrument Setup 进入方法的仪器控制和数据采集模块。
选择其中一个为“Initial Condition”（初始条件）的选项卡，进入初始条件对话框。
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黑色代表普通HPLC的脾肽图谱. 蓝色代表加-5KV电压后脾肽图谱. 粉色代表加-10KV电压后脾肽图谱. 黄色代表加-15KV电压后脾肽图谱. 出峰时间从5.6分提前到了3.4分.效率几乎底稿50%. 而且各主要成分均完美再现.没有漏掉主要的峰.
1．2 输液方式
1．2．1 单泵恒比例送液：使用两个溶剂输送单元中的一 个，按比例配好流动相并超声脱气，设置流速，按PUMP 开始输液 1．2．2 双泵恒比例送液：一种方式是分别在两个溶剂输 送单元上分别设置流速，输送需要混合的A、B两种溶剂； 另一种方法是设置主泵和从泵：FUNC/BACK 滚动至SYS 项，将主泵设为2，（从泵此项为1），此时主泵面板上 的G.E.灯亮，在主泵面板上设置两种溶剂的比例CONC和 总流速FLOW后，按主泵PUMP开始送液（注意，辅泵的 流速是总流速乘梯度的比例后的值，此值最好不要小于 0.005mL/min, 否则辅泵流速不稳，影响梯度基线）
确认各溶剂系统互溶、缓冲溶液中 溶质不会析出结晶！
1．3 系统排气或快速更换溶剂系统
把泵的吸滤头放进已经过滤并除气后的流动相中， 加电时出口缓冲瓶中也装满相同的缓冲溶液。将 Drain阀向OPEN方向（逆时针）旋转180度，按 Purge键，约3分钟后自动停止， 也可自己调整 Purge 时间，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口） 无气泡为止。Close Drain阀。把流速调成 1ml/min，把四通处连接反压阀的peek螺丝松开， 十分钟后再把流速调成0.05ml/min, 把反压阀的 peek螺丝拧紧。
3．3 < CE >模式下，还需输入电动进样的电压和时间。 把进样条件和运行电泳的条件设好后，首先运行一下 RUN ，按RESET键断电后按INJECT ，系统执行进样设 置，完成后电压降至0。（每次改条件后都要先运行一下 RUN后才能进样） 3．4 RESET键：进样、升压时按下，电压降至0；分析 完成，按此键退至上级菜单。
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图形分析:
黑色代表普通HPLC的血清肽图谱. 粉色代表加-10KV电压后血清肽图谱. 黄色代表加+20KV电压后血清肽图谱.
说明分析:
加负电压后血清肽的出峰时间向后延迟,加正电压后出 峰时间向前平移.表明血清肽合流动相后显负电性.样本在淌 度和电压共同作用下谱图有变化.可以发现更多成分.同时提 高分离效率.因为同一成分在流动相相同的情况下只是淌度 不同.现在加了高电压.使以前需很长时间才能出现的峰现在 只需很短时间就可出现.
分析样品
1．确认各部分正确连接，开启电源，启动数据采集软件 UnimicroTriSep Workstation。设置参数及程序，平衡色谱柱 2．设置工作站信号采集时间等，工作站工具栏绿色示意灯状态，准 备采集信号 3．当进样控制面板的LOAD灯亮时，用微量进样器进样，此时，样品 被注入到进样阀的定量环中，定量环的体积是固定的2 l（本系统中 见入毛细管柱内的样品量通常是10 L或20 L），与实际进样量无关， 多余的样品会流到样品废液瓶中。但应注意，由于在进样孔与进样阀 之间存在一个连接管，其体积约10 L，因此，每当进一个新的样品时， 第一次进样的进样量要大于40 L，以确保样品置换了进样管路里所有 的溶液到达进样阀的定量环，以后每次进样，进样量只须5L即可。 要将样品注入色谱柱中时，按进样控制面板上的按键，经过约1 s后， INJECT灯亮，表示样品池已被连入流路系统，样品开始进入色谱柱。 当INJECT灯亮时系统自动开始采集数据。同时需按下主泵RUN键开始 梯度程序、高压电源RUN 启动高压电场。
TM-2100加压毛细管电色 TriSep
谱仪操作流程
准备工作： 样品：过滤（0.45或0.22μm滤膜） 流动相：过滤（0.45或0.22μm滤膜），脱 气, (注意：超声脱气时，水太热了要换)
仪器
主要包括四个模块：流体输送单元（Solvent Delivery Module）；微流控制单元（Micro Flow Control Module）； 高 压 电 源 （ High Voltage Module）；检测器（Detection Module）和数据 采集软件。各部分分别开关、设置工作参数和程 序。 使用温度10-35℃，相对湿度不大于75%。 可以进行毛细管微柱色谱、毛细管电色谱、加压 毛细管电色谱、毛细管电泳分析。
用途:
分析生物活性肽
中草药
多糖等的成分分析. 建立中草药的指纹图谱. 药品的质量监控. 结合高电压系统可提高分析效率.并使图谱更清晰明了.
mV Hw- 0 0 1( 0 0 1,2 0 05 0 7 27 1 5 ;5 5 ;3 2 ) 血 肽 清 Hw- 0 0 1( 0 0 2,2 0 05 0 7 27 1 6 ;2 3 ;1 9 ) 血 肽 1 0 k v 清 3 .2 Hw- 0 0 1( 0 0 3,2 0 05 0 7 27 1 6 ;4 8 ;1 5 ) 血 肽 0 k v 清 +1 Hw- 0 0 1( 0 0 4,2 0 05 0 7 27 1 6 ;5 9 ;2 1 ) 血 肽 0 k v 清 +2
2．紫外-可见检测器 开启电源后，经过短暂的时间，氘灯点亮，波长显示为 254 nm。(不一定是254nm，而是上次关机时使用的波 长)，按FUNC/BACK键到改波长处，输入实验需要的波 长值， ENTER确认，检测器一般30-60min的预热，然后 按ZERO基线调零后，基线稳定后，可以进样。
3．2 以上下左右箭头输入电压（最小单位100V）、升压 时间和电场方向<+>/<->，ENTER确认。确认检测器和 微流控制单元仓门关闭、背板电缆连接正确，按RUN 执 行 注意，改变电压输出极性时，还要改变后面板高压线的 插孔位置，设置输出为正电压时，后面板高压线插在 “HV+”孔，设置输出为负电压时，后面板高压线插在 “HV-”孔，地线始终接在“HV0”孔不变；设置好输出电 压极性，按ENTER键 确定
注意：开色谱软件前要把微流控单 元的开关打开。否则软件打不开。
3．高压电源 输出电压：0-30kV；电流：0-100μA；最大功率：1W 注意：当设置10kV以上电压时，应设置较长升压时间 （如10秒），突然升压可导致破坏性后果；当环境潮湿 时，不要设置超过10kV的电压。 3．1 开机后，按MENU ，以上下箭头选择分析模式：电 色谱< CEC >或电泳<CE>，ENTER确认
mV Hw-00 1 (0 0 2 ,2 00 5 0 72 0 1 5 ;4 6;14 ) 9 Hw-00 1 (0 0 5 ,2 00 5 0 72 0 1 6 ;3 8;22 )-5 k v Hw-00 1 (0 0 3 ,2 00 5 0 72 0 1 6 ;0 7;46 )-1 0 kv 8 .1 Hw-00 1 (0 0 4 ,2 00 5 0 72 0 1 6 ;1 6;36 )-1 5 kv
装柱：
1.装柱前首先把毛细管检测窗口和检测池装检测窗口的位置都用分析纯的乙醇 擦干净，等乙醇挥发完后，可以装柱。（注意不要用口吹干） 2.把柱子的检测窗口对准检测池的小球，对着光看，是透光的说明位置正好 3．固定柱子的PEEK螺丝的PEEK管要插到底部固定螺丝，否则毛细管装好后还 会移动。 4．然后盖上盖子，按对角顺序上四个螺丝并固定住。（注意不要一次性拧紧一 个螺丝） 5．螺丝固定后，把出口端的毛细管插到PEEK管里，把池子安装到检测器上， 6．打开检测器，自检结束后，按FUNC/BACK 滚动至看Sample和reference 值是 否正常，如果sample值太小，说明柱子没装好。 7．卸柱子时，一定要把柱子出口端的毛细管从PEEK管里拔出，是毛细管柱子 处于自由状态后才卸四个螺丝。否则容易把柱子折断。
4．分析结束，存储色谱数据，RESET停止 高压。 5．清洗色谱柱、仪器管路、进样针，进样 口；关闭各部分电源；填写使用记录。
mV H w - 00 1 (0 0 2 ,2 00 5 0 72 0 1 5 ;4 6;14 ) H w - 00 1 (0 0 5 ,2 00 5 0 72 0 1 6 ;3 8;22 ) -5 k v 8 .1 H w - 00 1 (0 0 3 ,2 00 5 0 72 0 1 6 ;0 7;46 ) -1 0 kv H w - 00 1 (0 0 4 ,2 00 5 0 72 0 1 6 ;1 6;36 ) -1 5 kv 7 .2
1．2．3 编辑梯度送液程序：在主泵上设置流速FLOW、 基本输液比例CONC，编辑时间程序： EDIT 进入编辑状 态，输入时间数值，滚动FUNC/BACK 到BCNC输入B相 的梯度比例数值，按ENTER确认。常用的参数如BCNC （A、B液比例）、FLOW（流速）、STOP（停止程 序）…等。程序编好后，反复按ENTER查看，按DEL清 除错误的程序步。按主泵RUN键运行时间程序, 关掉RUN 键，泵按梯度初始化条件走。
加压毛细管电色谱仪的 原理及应用 Capillary Electrochromatography Advances and Applications
分子生物研究中心 主讲人:李少伟
CEC基本原理