H4N6亚型禽流感病毒分离与氨基酸序列测定
一株H5N2亚型鹦鹉源禽流感病毒的分离鉴定
３ ７℃孵化 ４ ８ｈ后 ， 收集鸡 胚尿囊 液 ， 测定 血凝价 ， 将 具 有血 凝价 的鸡胚 尿囊 液分 别 与 Ｎ ＤＶ、 蛋综 合 征 减
病毒 、 Ｈ５亚 型 禽 流 感 病 毒 的 标 准 阳 性 血 清 进 行 血 凝
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
抑制 （ ） ＨＩ试验 ， 体操 作 程 序按 照世 界 动 物卫 生 组 具 织 （ Ｅ 的标 准方 法 进行 ， 鉴 定过 的病 毒分 装 ， ＯＩ ） 将 保 存 于 一７ Ｃ备 用 ｊ ０。 。 １ ２ ２ 病 毒特 异性 片段 的 Ｐ Ｒ 扩增 以及序 列测 定 ．． Ｃ
２ ５。 ００
关 键词 ： 流感病毒 ；Ｈ５ 禽 Ｎ２亚 型 ； 定 ； 鹉 鉴 鹦
中 图分 类 号 ： ８ ２ ６ ９ ５ ￥ ５ ． ５ ． 文 献标 识 码 ： Ａ 文章 编 号 ： ０ ７５ ３ （ ０ ０ ０ — ０ ７０ １ ０ — ０ ８ ２ １ ） ４０ ５ — ３
禽 流 感 （ ｉｎｉｆ ｅ ｚ ， ）是 由 Ａ 型 流 感 病 Ａｖａ ｎｌ ｎ ａ ＡＩ ｕ
１ ２ １ 病毒 的分 离及 ＨＡ 亚 型鉴 定 将 采集 的鹦 ．．
鹉 源 拭 子 按 照 世 界 动 物 卫 生 组 织 的 国 际 标 准 方 法 处 理 ， 种 １ 日龄 Ｓ Ｆ 鸡 胚 尿 囊 腔 ， 胚 ０ １ｍＬ， 接 ０ Ｐ 每 ．
型禽 流感病 毒 暴 发 的报 道 ｌ ， 宿 主 源 多数 集 中在 ３ － 而 ］
禽 流 感 病 毒 流 行 情 况 的 复 杂 化 ， 内 时 有 Ｈ５ 国 Ｎ２亚
Ｈ５标准 阳性血 清 由 国家 动物流 感参 考 实验 室提 供 ； 鸡新城疫病 毒 （ Ｖ） ＮＤ 及减 蛋综 合征 病毒 的标 准 阳性 血清 由农业部 动物疫病 防控重点 开放实验室提供 。
一种H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒的检测方法[发明专利]
![一种H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒的检测方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/d9e570e34128915f804d2b160b4e767f5bcf8050.png)
专利名称：一种H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒的检测方法
专利类型：发明专利
发明人：蒋文明,刘华雷
申请号：CN201910057664.4
申请日：20190122
公开号：CN109554507B
公开日：
20220315
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供一种同时检测和区分H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒的快速检测方法，分别比对了近年来分离到的H5亚型高致病性禽流感病毒和H7N9亚型高致病性禽流感病毒HA基因核苷酸序列，在其保守区设计了引物和探针，建立了针对H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒实时荧光定量RT‑PCR核酸快速检测方法。
本发明所提供的H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒实时荧光
RT‑PCR方法具有灵敏度高、检测时间短，不需要电泳等开放环节，只需一台荧光PCR仪即可在一个密闭反应管中完成两种亚型禽流感病毒的检测，且在检测过程中可实时查看反应曲线，对结果作出快速判断。
申请人：中国动物卫生与流行病学中心
地址：266032 山东省青岛市市北区南京路369号
国籍：CN
代理机构：北京识然知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：曾庆国
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禽流感病毒分离鉴定及其NA基因克隆分析
中 图分 类 号 ： ３ ； ８ ２ ６ ９ ２ Ｑ９ ９ ￥ ５ ． ５ ． 文献标识码： Ａ 文章 编 号 ：０ ７５ ３ （ ０ ０ ０ —０ ６０ １ ０ ０ ８ ２ １ ） ４０ １ —４
２０ ０ ８年 ， 我 国南 方 某 地 多 家 养 鸡 场 发 生 鸡 群 在
１２３ 微 量血 凝 试验 （ ． ． ＨＡ） 微 量 血 凝 抑 制 试 验 及
急性 大批死亡 ， 鸡鸡 冠 出 『 或 发绀 ， 部水 肿 ， 病 ｆ 【 Ｌ 头 肌 肉和其 他组织 器 官广 泛性 严 晕 出 血 ， 其 产蛋 鸡 尤 群 出现 严重神 经症 状 ， 歪 向一 侧 。 头 站 小 稳 ， 巢 卵
（ 书 医 研 究 所 础 医 学 研究 审 ， 林 Ｋ弁 Ｉ Ｏ ６ ） 。 ０ ２ ３
摘 要 ： 疑似 禽流感病 死鸡病料组 织研磨 液接 种 Ｓ Ｆ鸡胚 分 离病毒 。 囊分 离毒经 电镜 观察后 ， 用 将 Ｐ 尿 应
特 异 性 Ｒ — Ｃ 方 法 和 血 凝 及 血 凝 抑 制 试 验 进 行 分 型 检 测 ， 时 对 核 蛋 白 全 长 基 因进 行 扩 增 测 序 分 析 通 ＴＰ Ｒ 同
过血凝 及血凝抑 制试验初 步证 实分 离的 禽 流 感病 毒 为 Ｈ５亚型 ， 后 对 分 离株 ＨＡ 基 因和 ＮＡ 基 因进 行 然 Ｒ — Ｃ 分析 ， 定该分 离株 禽流感 病毒为 Ｈ Ｎ１亚型 。通 过 ＮＡ 全基 因扩 增测 序 、 ｌｓ 分析 显 示该 分 离 ＴＰ Ｒ 确 Ｂ ａｔ 株 ＮＡ 基 因序 列与 已发表 的毒株 基 因序 列（ Ｕ ２ ７ ７ 同源性 为 ９ ， 基 因 ３端 发生 明显 变异 。 Ｅ ４ ９４ ） ７ 但
三株鸡源H4亚型禽流感病毒分离株HA基因的序列分析
高致病性 Ａ 在国内外频频暴发， Ｉ 不仅给养禽业造成
严 重 的损失 ， 同时也威 胁人 类 的健康 ， 而 引起 了人 从 们 的高度重 视 。低致病 性 ＡＩ 虽对 动物多 呈低致 Ｖ
收 稿 日期 ：０ １０ —２ ２ １—６０ ２ ０ ＤＫＡ２ ２ ５ ｌ ） １ ０ 一 Ｏ 基 金 项 目 ： 家 科技 资 源 平 台项 目（ ０ ５ 国 作者简介 ： 张 鹏 （ ９ ８ ） 女 ， 东 济 南人 ， 士 研 究 生 ， 要 从 事 动 物 传 染病 防制 工 作 。 ＊通 讯 作 者 １８一 ， 山 硕 主
（ ． ａ ｇ ｉ ｅ ｔｒｆ ｒ ｉ ｌ ｓａ ｅＣ ｎ ｒ ｌ ｎ ｅ ｅ ｔ ｎ １ Ｇｕ ｎ ｘ ｎ ｅ ｏ ｍａ ｅ ｓ ｏ ｔｏ ｄ Ｐｒ ｖ ｎ ｉ ，Ｎａ ｎ ｎ Ｇ ａ ｇ ｉ ５ ０ ０ ， ｈ ｎ ｌ Ｃ Ａｎ Ｄｉ ａ ｏ ｎ ｉｇ， ｕ ｎ ｘ ， ３ ０ １ Ｃ ｉａ ２ ｏｌｇ ｆＡｎ ｍａ ｃｅ ｃ ，Ｇ ａ ｇ ｉ ｎ ｖ ｒｉｙ， ｎ ｉ ｇ ｕ ｎ ｘ ５ ０ ０ ， ｈｎ ） ．Ｃ ｌｅ ｅ ｏ ｉ ｌ ｉｎ ｅ ｕ ｎ ｘ ｉ ｅ ｓ Ｓ Ｕ ｔ Ｎａ ｎ ｎ ，Ｇ ａ ｇ ｉ， ３ ０ １ Ｃ ｉａ
（ ． 岛农 业 大学 动 物 科技 学 院 ， １青 山东 青 岛 ２ ６ ０ ；． 国动 物 卫 生 与 流行 病 学 中心 ， 东 青 岛 ２ ６ ３ ） ６ １９ ２ 中 山 ６０ ２
摘 要 ： Ｔ Ｐ Ｒ扩增 出 ３株 鸡 源 Ｈ４亚 型 禽 流 感 病 毒 （ Ｖ） 离株 （ ｃ ｉｋ ｎ Ａｎ ｕ／ ２ ／ ０ ０ Ｒ －Ｃ ＡＩ 分 Ａ／ ｈｃ ｅ ／ ｈ ｉＡＢ ２ ２ １ ；
Ａ／ｈｃ ｅ ／ ｈ ｉＡＢ ９ ２ １ ； ｃ ｉ ｅ ／ ｈ ｉＡＢ ０ ２ ｉ ） 血 凝 素 （ ｃ ｉｋ ｎ Ａｎ ｕ／ ２ ／ ０ ０ Ａ／ｈｃ ｎ Ａｎ ｕ／ ３ ／ ０ ０ 的 ｋ ＨＡ） 因 ， 行 了 分 子 克 隆 与 测 基 进
一株H5N1亚型禽流感毒的分离鉴定与基因组序列分析
一株H5N1亚型禽流感毒的分离鉴定与基因组序列分析寇铮;李永东;雷富民;周艳红;陈绳亮;李天宪【期刊名称】《武汉大学学报：理学版》【年(卷),期】2007(53)6【摘要】对一株于2005年从浙江省分离获得的禽流感病毒株（A／Chicken／zhejiang／24／2005）进行了鉴定、全基因组序列测定、分析和致病性研究．经血凝抑制试验和神经氨酸酶抑制试验证实，此分离病毒株为H5NI亚型．对该毒株的全基因组序列测定和分析显示，HA蛋白在HA1和HA2连接处，含有连续多碱性氨基酸模体（-RRKKR-）．进化分析结果表明，A／Chicken／zhejiang／24／2005（H5N1）7个基因来源于2004～2005年湖南地区流行株，但PB1基因来源于未知野禽毒株．动物实验结果显示，Ck／ZJ／24／05对鸡和鸭均具有高致病性，对小鼠无致病性，与HA的序列特征相符合．【总页数】6页(P717-722)【关键词】禽流感病毒;H5N1亚型;基因组;致病性【作者】寇铮;李永东;雷富民;周艳红;陈绳亮;李天宪【作者单位】华中科技大学生命科学与技术学院/湖北生物信息与分子成像重点实验室;中国科学院武汉病毒研究所/病毒学国家重点实验室;中国科学院动物研究所【正文语种】中文【中图分类】R373.1【相关文献】1.一株天鹅源H5N1亚型禽流感病毒的分离鉴定 [J], 郑煦灿;廖明;罗开健;焦培荣;单芬;韦艳梅;乔立旺;李芳;韦良孟;辛朝安;任涛2.一株H9N2亚型禽流感病毒分离株的生物学特性研究及其全基因组序列分析 [J], 刘海玲;胡自立;罗开健3.一株虎源H5N1亚型禽流感病毒的分离鉴定及生物学特性研究 [J], 崔艳芳;王德丽;刘丽娜;赵璐;刘丽玲;田国彬;曾显营;李雁冰;陈化兰4.一株鸭源H8N4亚型禽流感病毒分离株的全基因组序列分析及致病性的研究 [J], 王晶;张芳;卢坤鹏;关立峥;肖丽;彭志;邓国华;陈化兰5.广东一株重组H9N2亚型禽流感病毒的鉴定及全基因组序列分析 [J], 申翰钦;曾凡桂;严专强;刘佳佳;覃健萍;毕英佐;李海燕;陈峰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
一株天鹅源H5N1亚型禽流感病毒的分离鉴定
病 毒 ， 照 国际流感病 毒 系统命 名 原 则将该 病毒 株 暂命名 为 Ａ／ ｗａ ／ ａ ｇ ｏ ｇ １ ７ ２ ０ 。 按 Ｓ ｎ Ｇｕ ｎ ｄ ｎ ／ ９ ／ ０ ４
关键 词 ： 流感 ；Ｈ５ 禽 Ｎ１亚型 ； 天鹅 ； 离鉴 定 分
中图 分 类 号 ： ８ ２ ６ ９ ５ ￥ ５ ． ５ ． 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ７５ ３ （ ０ ０ ０ — ０ ５ ０ １０ —０ ８ ２ １ ）５０ ０—４
动 物 医 学 进 展 。０ ０ ３ （ ） ５８ ２ １ ， １ ５ ：－
Ｐｒ ｒ ｓ ｎ Ｖｅ ｅ ｉ ａ ｙ Ｍ ｅ ｃｎｅ ｏｇ ｅ ｓ ｉ ｔ ｒｎ ｒ ｄｉｉ
一
株 天 鹅 源 Ｈ５ Ｎ１亚 型 禽 流 感 病 毒 的分 离 鉴 定
（ 南 农 业 大 学 兽 医 学 院 农 业 部 动 物 疫 病 防 控 重 点 开 放 实 验 室 华 广 东 省 动物 源性 人 兽 共 患 病 预 防与 控 制 重 点 实 验 室 ， 东 广 州 ５ ０ ４ ） 广 １６ ２
收 稿 日期 ： ０ ９ １ － ４ ２ ０ — １２ 基 金 项 目 ： 育部 新 世 纪 优 秀人 才 支持 计 划 项 目（ Ｅ － ６０ ５ ） 教 育部 创 新 团队 项 目（ Ｔ ７ ３ ； 家 肉鸡 产 业技 术 体 教 ＮＣ Ｔ ０ — ７ ２ ； Ｉ ｏ２）国 Ｒ 系项 目（ｙｙｘ４－ ３０ ） 广 东 省 自然 科 学基 金 项 目（４ １ ６２ １０ １２ ； 东省 科 技 计 划 项 目（Ｏ７ ＯＯ ｏ Ｏ Ｉ ｎｃｔ－２Ｇ —３ ； ８ ５０ ４０ ０ １３ ） 广 ２Ｏ Ａ ２ ３Ｏ １ ） 作 者 简 介 ： 煦灿 （９ ３ ） 男 ， 东 汕 头 人 ， 士 研 究 生 ， 要 从 事 动 物 病 毒 分 子 生 物 学 及 动 物 传 染病 防控 研 究 。 郑 １８一 ， 广 硕 主 ＊通 讯 作 者 ： ＃对 本 文 有 同 等 贡 献 作 者
一株鸭源H4N6亚型禽流感病毒毒株及其应用[发明专利]
![一株鸭源H4N6亚型禽流感病毒毒株及其应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/cccff055f121dd36a22d82d0.png)
专利名称：一株鸭源H4N6亚型禽流感病毒毒株及其应用专利类型：发明专利
发明人：杨德全,刘佩红,周锦萍,鞠厚斌,葛菲菲,刘健,王建,葛杰,邓波
申请号：CN201310461205.5
申请日：20130930
公开号：CN103571799A
公开日：
20140212
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一株鸭源H4N6亚型禽流感病毒毒株及其应用。
所述的病毒毒株的保藏号为CGMCC NO.7606。
该病毒株为鸭源H4N6亚型禽流感病毒，含有CDS序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.8所示的8个片段，分别对应于PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS。
本发明对该病毒株进行了全基因组序列测定，并将其信息用于研究禽流感病毒的检测、分布、流行规律以及控制禽流感的流行和蔓延。
本发明的病毒株补充了我国H4N6亚型禽流感病毒的极有价值的遗传信息，为
H4N6亚型禽流感病毒的分子进化和流行病学研究提供了宝贵资料，还能用于制备H4N6亚型禽流感病毒感染的快速诊断试剂和疫苗研究。
申请人：上海市动物疫病预防控制中心
地址：201103 上海市长宁区虹井路855弄30号
国籍：CN
代理机构：上海弼兴律师事务所
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6株鸡腺病毒的分离鉴定及序列分析
鸡的包涵体肝炎是由Ⅰ群禽腺病毒引起鸡的一种急性传染病，其特征性病变表现在鸡的肝脏及骨髓，肝脏组织学切片可见肝细胞内具有包涵体，细胞脂肪病变、外观上肝脏呈肿大、出血甚至坏死，骨髓有时候呈黄色或者灰白色，肾脏充血坏死，该病世界各个国家广泛存在，此病既可以水平传播又可以垂直传播，彻底净化很困难，在我国的发病呈逐年上升趋势。
特别是今年4月份始发于山东聊城莘县的禽腺病毒疫情在短短几个月的时间内传遍了山东、河南、安徽、河北、吉林、江苏等地，传播速度之快，涉及范围之广，给我国养鸡业造成了巨大的经济损失，通过对滨州博兴某鸡场病死鸡进行剖检，采集病料，SPF 鸡胚接种分离病毒，经PCR 鉴定测序分析表明，分离到的病毒主要为Ⅰ群4型禽腺病毒。
1材料与方法1.1材料来源山东滨州博兴某肉鸡场病死鸡肝脏、肾脏、脾脏等病变组织，SPF 鸡胚购自济南斯帕法斯，CEK 细胞培养基购自美国Gibco 公司，PMD18-T 载体，PCR 相关试剂，DNA Marker 、DNA 片段凝胶回收试剂盒购自宝生物大连有限公司，Axygen 体液病毒DNA/RNA 提取试剂盒购自爱思进生物技术（杭州）有限公司。
1.2病毒的分离1.2.1SPF 鸡胚接种分离及鸡胚病变观察采集疑似感染鸡包涵体肝炎的肉鸡肝脏、肾脏组织，用灭菌生理盐水按照1：10比例匀浆研磨、反复冻融3次后，4,000r/min 离心10min ，上清液经0.22μm 过滤除菌后，卵黄囊接种7日龄SPF 鸡胚10枚，每枚鸡胚接种0.2mL ，置于37℃下孵育，24h 后剔除死胚，收取48h 后死胚，并收取尿囊液，卵黄及胚体，18日龄后死亡的鸡胚，小心解剖观看病变。
并将收获的胚毒连续传3代，收获胚毒、卵黄、胚体后-80℃保存。
将第三代鸡胚尿囊液用无菌生理盐水做10倍系列稀释，取10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9、10-107个稀释度，每个梯度分别卵黄囊接种6枚7日龄的SPF 鸡胚0.2mL ，置于37℃下孵育，24h 后剔除死胚，记录48h 后每个梯度鸡胚死亡数，按照Reed-Muench 法计算半数致死量。
一株野禽源H4亚型禽流感病毒HA基因的序列测定及全球谱系演化分析
Ｉ ｈｓｐ ｐ ｒ ｎ ｔｉ ａ ｅ，Ｈｅ ｇ ｌｔ ｉ （ ） ｇｎ ｆＨ４ ａ ｉｎ ｉｆ ｅ ｚ Ｉ Ｓ ｉ ｌｔｄ ｆｏ ａ ｍａｌｒ ｈ ｍａ ｇｕｉ ｎ ＨＡ ｅ ｅ ｏ ｖａ ｎ ｌ ｎ ａ Ｖ Ｕ ｓ ａｅ ｒｍ ｌ ｄ ｉ ｔｅ ｎ ｕ Ｒ ｏ ａ ｎ
用具有重要参考价值。 关键 词： 禽流感； 野禽 ；４ Ｈ 亚型； 系分析 谱 中图分类号 ：８ ２ ６ ９５ ￥ ５ ． ５ ． 文献标识码 ： Ａ
． 文章编号 ：０５９４ （０９０—０６０ １０—４Ｘ ２０ ） ０２—３ ４
ｓ ￣ ｅｎ ｍ ｍ ｉｇ ＨＡ Ｇ锄 ｅ ｏ Ｖ ａ ｌｔ ｆ ｒ ａ 【ｌ ａ ｄ ｆＨ４ ＡＩ ｌｏｎ￣ ｌ ｍ ａ ａ ｘ １ ｎ Ｐ ｙｏ ｅ ｅｉ ｈ ｌｇ ｎ ｔ Ａ珊Ｉ ｓｓ ｏ ｏ ａ Ｖ ｃ ｌ ｉ Ｇｌｂ ｌＨ４ ＡＩ ｙ ｆ
Ｋｍ ｒｓ ｗａｄ ：Ａｖａ ｎ ｕ ｎ ａ ｉｎ Ｉｆ ｅｚ ；ｗｉｅ ｂｒｓ ｌ ｄ ｉ ；Ｈ４ ｈ ｌｇ ｎ ｔ ｎ ｌｓ ｄ ：Ｐ ｙｏ ｅ ｅｉ ａ ａｙ ｉ ｃ ｓ
禽流 感 （Ｉ 是 由 Ａ型流感 病毒 的危害也很大 ］ Ａ） Ｈ。 征 、 源和遗传 发 生关系 ， 来 探讨其 分 引起的一种禽类 （ 包括家禽和野禽） Ｈ ４亚型 Ａ Ｖ属于低致病性毒株， 子演化 规律 ， Ｉ 我们 从鄱 阳湖野 禽体 内 的感染和 ／ 或疾病综合征 ， 主要 引起 研究表 明， 它主要存在于野生水禽 体 新分离、 鉴定一 株 Ｈ ４亚型病 毒， 对其 禽类 的全身或呼吸系统疾病［ １ ］ 。根据 内。该亚型病毒除感染野生鸟类外 ， Ｈ Ａ基因进行 了全序列测定及分析， 并 其 致 病 力 可 分 为 高 致 病 性禽 流 感 还可 以感染各种 家禽 以及哺乳动物 ， 结合 目前 己发表的 Ｈ 序列进行 了全 ４ （Ｐ Ｉ 和低致病性禽流感 （Ｐ Ｉ ［ 如鸡 、 ＨＡ ） ＬＡ ） ３ ２ 。 火鸡、 家鸭、 海豹等 ， 引发 球谱系分析 ， 猪、 并 对于进一步研究野 生鸟 近 年 来 ，Ｐ Ｉ 国 内 外 频 频 暴 各种症状 ， ＨＡ 在 有一定的致死性 ［ ３ ３ 。 类 在禽流 感传播 中酌作 用具有 重要 发 ，不但对养 禽业造 成 了巨大 的损 自 ８ 年代起 ，国内虽不断有分 的参考价值。 ０ 失， 而且对人类健康 也带来 了严重的 离到 Ｈ 亚 型 ＡＶ的报道 ，但 是大多 １ 材料与方法 ４ Ｉ 威胁 ， 引起 了人们的高度关注 。 然而 ， 通过血清学进行亚型鉴定的 （ 。在 １１ 样 品 问 ． 对于 Ｌ Ａ Ｐ Ｉ的危害却没有给 予足够 的 Ｇ ｎ ａ ｋ ｅＢ ｎ 数据库 中，收录 的来 自中国 样 品来 源于鄱 阳湖 地 区野 禽 喉 重视 。ＬＡ 虽不是烈性传染病 ， ＰＩ 但因 的 Ｈ ４毒株 ， 除香港的几株序列 以外 ， 气管分泌液与泄殖腔分泌液拭子 ， 装 其分布广泛 ， 能造成宿主的免疫抑制 内 地 的 毒 株 只 有 Ａ Ｄ ｃ／ ａ — 入含有抗生素 的 Ｐ Ｓ甘油采样液 。 ／ｕ ｋ Ｎ ｎ Ｂ ｈ ｎ ／ — ６ ／ ０ ０和 Ａ ｍ ｌ ａ ｄ ／ ａ １ｒ ／ 以及可 以与其他致 病微生物 发生 协 ｃ ａ ｇ ４ １ ５ ２ ０ １ ２ Ｓ Ｆ鸡 胚 ． Ｐ 同作用 ， 而造 成继发感染 ， 对养 禽业 Ｙｎ ｈ ｎ ２０ ａ ｃ ｅ ／ ０５两株 。 为研究野 生水禽 购 自北 京梅 里 亚 公 司 。 中感染的 Ｈ ４亚 型 禽 流 感病 毒 的特 １ ３ 试 剂 ． 通 讯作 者 ： 保 续 黄
两株H6N2亚型鸡源禽流感病毒的分离鉴定
两株H6N2亚型鸡源禽流感病毒的分离鉴定贾宝琴;焦培荣;韦良孟;单芬;袁润余;徐成刚;廖明【摘要】本研究利用血凝抑制试验（HI）、反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）、基因测序等方法,对广东省某活禽交易市场进行流行病学调查时获得的两株非H5、H9亚型禽流感病毒65株和C7株进行了亚型鉴定。
结果表明这两株病毒均具有血凝活性,且能被抗H6亚型禽流感病毒标准阳性血清特异性抑制。
用针对禽流感病毒的M基因、H6亚型禽流感病毒HA基因、N2亚型禽流感病毒NA基因特异性鉴定引物对65株和C7株进行RT-PCR扩增,分别获得特异性目的片段。
测序及BLAST分析表明两株分离株与H6N2亚型禽流感广东分离株的HA基因和NA基因核苷酸序列相似性均高达95%以上。
将该两分离株鉴定为H6N2亚型禽流感病毒,并命名为A/Chicken/Guangdong/65/2009、A/Chicken/Guangdong/C7/2009。
%Two Avian influenza viruses 65 and C7 were isolated from chickens at a live bird market in Guangdong Province.Both strains were determined not to belong to H5 or H9 subtype.These two viruses had hemagglutination activity,which was inhibited by antiserum to Avian influenza virus H6 subtype.Then,special segments were amplified using primers specific for M gene of Influenza virus and HA and NA genes of H6N2 Avian influenza virus and blasted in GenBank of NCBI for genetic analysis.Both viruses shared more than 95% homology with H6N2 Avian influenza viruses.Therefore,the viruses 65 andC7 were classified as H6N2 subtype and designated asChicken/Guangdong/65/2009 andA/Chicken/Guangdong/C7/2009,respectively.【期刊名称】《中国动物传染病学报》【年(卷),期】2012(020)002【总页数】4页(P71-74)【关键词】禽流感病毒;H6N2亚型;鸡;分离鉴定【作者】贾宝琴;焦培荣;韦良孟;单芬;袁润余;徐成刚;廖明【作者单位】华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室,广州510642;华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室,广州510642;华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室,广州510642;华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室,广州510642;华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室,广州510642;华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室,广州510642;华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室,广州510642【正文语种】中文【中图分类】S852.659禽流感 (avian influenza, AI)是由A型流感病毒引起的禽类一类急性高度接触性传染病[1]，该病在世界各地均有发展，并且对养殖业和人类的健康造成威胁。
H4N6亚型禽流感病毒的进化和生物学特性分析
H4N6亚型禽流感病毒的进化和生物学特性分析庄艺超;孟飞;邓国华;施建忠;张亚萍;赵聪慧;陈化兰【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2022(44)2【摘要】H4N6亚型禽流感病毒(AIV)在全球多个地区的多种动物和鸟类中存在,为了解其对动物和人类健康的潜在威胁,本研究对H4N6亚型AIVA/chicken/Shanxi/S1452/2018(H4N6)(CK/SX/S1452/2018)株进行了病毒全基因组测序和遗传进化分析,结果显示该病毒具有明显的遗传多样性,其内部基因与鸭或水鸟体内分离的H2N8、H3N3、H3N8、H4N8或H7N3等亚型AIV的相关基因高度同源。
HA蛋白存在T^(160)A突变,并且碱性裂解位点基序仅有一个碱性氨基酸,符合低致病性AIV分子特征。
通过固相结合ELISA分析CK/SX/S1452/2018病毒株的受体结合特性,结果显示该病毒具有结合禽型α-2,3和人型α-2,6两种唾液酸受体的能力。
以10^(6) EID_(50)/50μL剂量经鼻腔感染小鼠进行小鼠感染性评估实验,结果显示该病毒株可未经预先适应即可直接感染小鼠,并在小鼠鼻甲和肺脏中有效复制。
以上研究结果对全面了解H4N6亚型AIV的生物学特性及其对公共卫生风险有重要意义,为对该亚型AIV流行病学的持续监测和对其感染防控措施的拟定提供了数据支持。
【总页数】6页(P113-118)【关键词】禽流感病毒;H4N6亚型;遗传进化;受体结合特性;小鼠【作者】庄艺超;孟飞;邓国华;施建忠;张亚萍;赵聪慧;陈化兰【作者单位】中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室【正文语种】中文【中图分类】S852.65【相关文献】1.1株鸭源H4N6亚型禽流感病毒的HA遗传进化分析及对动物的致病性分析2.一株低致病性H5N6亚型禽流感病毒(AIV)的生物学特性分析3.一株鸽源H10N8亚型禽流感病毒的遗传进化分析及小鼠感染特性的研究4.H9N2亚型禽流感病毒华东分离株的生物学特性及遗传进化分析5.六株H4N6亚型水禽禽流感病毒分离株NA基因的进化分析因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
六株H4N6亚型水禽禽流感病毒分离株NA基因的进化分析
六株H4N6亚型水禽禽流感病毒分离株NA基因的进化分析仇保丰;胡顺林;刘武杰;唐应华;彭大新;刘秀梵【期刊名称】《中国家禽》【年(卷),期】2009()15【摘要】为了丰富禽流感病毒(AIV)神经氨酸酶(NA)的分子流行病学资料,通过对2002～2007年分离自华东地区家鸭的6株稀有H4N6亚型低致病性AIV的NA 基因序列进行的分析,发现病毒NA基因全长约1464～1465bp,开放阅读框(ORF)都位于NA基因的19～1431位,长度均为1413bp。
6株病毒NA基因之间的同源性为90.8%～99.8%,其中5株病毒NA基因的同源性非常高,达到96.0%～99.8%,但另外1株与其他病毒NA基因的同源性相对较低,介于90.8%～92.2%,进一步分析表明该病毒可能来源于其他地区禽类。
对NA基因的推导氨基酸分析表明,ORF编码470个氨基酸,NA没有发生茎部缺失。
研究结果表明,水禽内的H4N6亚型禽流感病毒进化相对比较缓慢。
【总页数】4页(P13-15)【关键词】禽流感病毒;神经氨酸酶基因;序列分析【作者】仇保丰;胡顺林;刘武杰;唐应华;彭大新;刘秀梵【作者单位】扬州大学兽医学院,农业部畜禽传染病学重点开放实验室【正文语种】中文【中图分类】S858.3;S855.3【相关文献】1.一株鸭源H4N6亚型禽流感病毒A/duck/Shanghai/Y20/2006的全基因组序列测定及遗传演化分析 [J], 杨德全;葛菲菲;刘健;鞠厚斌;王建;刘佩红;周锦萍2.水禽流感病毒分离株A/Duck/Yangzhou/233/02(H6N2)膜蛋白基因遗传进化分析 [J], 张评浒;刘晓文;钱忠明;唐应华;刘秀梵;薛峰;郝贵杰3.H4亚型家养水禽流感病毒分离株的表面膜蛋白基因的序列测定和遗传进化分析[J], 薛峰;顾敏;彭宜;姚春峰;张评浒;钱忠明;刘秀梵4.1株鸭源H4N6亚型禽流感病毒的HA遗传进化分析及对动物的致病性分析 [J], 许芬芬; 仇微红; 叶贺佳; 万红; 胡秀梅; 钟文婷; 梁昭平5.1株H1亚型水禽流感病毒分离株的致病特性和表面膜蛋白基因的序列分析 [J], 薛峰;刘慧谋;彭宜;张评浒;钱忠明;刘秀梵因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
H5亚型禽流感病毒NASBA检测方法
ICS 11.220B41前言高致病性禽流感由正粘病毒科流感病毒属中A型流感病毒引起，世界动物卫生组织（OIE）列为A类疾病，我国将其列为一类动物疫病。
依赖核酸序列的扩增技术（NASBA）检测禽流感病毒的敏感性与经典的鸡胚病原分离方法相当，并具有检测速度快、特异性强、与鸡胚病原分离方法符合率高、易于操作的特点。
本标准是在综合我国科研成果的基础上，参考OIE《诊断试验和疫苗标准手册》（2000年版），并结合我国现有动物卫生法规及农业部对禽流感的相关政策和措施制定的。
本标准附录A、附录B为规范性附录，附录C为资料性附录。
本标准由上海市质量技术监督局和上海出入境检验检疫局提出。
本标准由国家质量监督检验检疫总局归口。
本标准起草单位：上海出入境检验检疫局、上海市质量技术监督局、香港基因晶片开发有限公司。
本标准起草人：单松华、陈家华、谢燕、杨锡全、倪旦红、刘乐庭、刘俊平本标准系首次发布的国家标准。
H5亚型禽流感病毒NASBA检测方法1 范围本标准规定了NASBA快速检测H5亚型禽流感病毒技术规范的材料准备、操作方法和结果判定。
本标准适用于禽类、禽肉产品中H5亚型禽流感病毒的快速检测、诊断。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 18936－2003 高致病性禽流感诊断技术3 原理NASBA（Nucleic acid sequence-based amplification ,NASBA，依赖核酸序列的扩增技术）是一项连续、等温、基于酶反应的核酸扩增技术。
该技术使用三种酶（反转录酶、核糖核酸酶H、噬菌体T7核糖核酸聚合酶）和两条寡核苷酸引物。
上游引物5’末端含有噬菌体T7的依赖于DNA的RNA聚合酶的启动子序列，下游引物的5’末端含有和钌标电化学发光检测探针互补的序列。
H6N2亚型禽流感病毒全基因组的序列分析及其致病性研究
H6N2亚型禽流感病毒全基因组的序列分析及其致病性研究刘丽玲;胡守萍;段振华;李雁冰;施建忠;田国彬;曾显营;陈化兰【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2013(035)011【摘要】2008年对我国南方活禽市场进行流行病学监测时从鸭体内分离鉴定出1株H6N2亚型禽流感病毒(AIV).为了解该病毒DK/GD/S6/08(H6N2)的生物学特征,本研究对其全基因序列进行分析并对SPF鸡和SPF鸭进行致病性试验.结果表明DK/GD/S6/08(H6N2)的HA裂解位点附近的氨基酸序列为340QIETR ↓ GLF347,符合低致病力AIV的特征.其HA基因与A/duck/Shantou/8365/2005 (H6N6)同源性最高;NA基因在颈部无缺失;除M基因外,其他5个内部基因均来源于H6亚型AIV.鸭致病性试验表明DK/GD/S6/08(H6N2)可以感染SPF鸭,并通过泄殖腔排毒,法氏囊等脏器中可以检测到病毒,肺脏、肾脏、法氏囊和脑组织中可见病理变化.鸡致病性试验显示鸡的脑、肺脏、脾脏、法氏囊、肾脏、十二指肠和胰腺均未检测到病毒,咽喉拭子和泄殖腔拭子中未检测到病毒,表明该病毒不能感染SPF鸡.【总页数】4页(P870-873)【作者】刘丽玲;胡守萍;段振华;李雁冰;施建忠;田国彬;曾显营;陈化兰【作者单位】中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001【正文语种】中文【中图分类】S852.65【相关文献】1.一株野鸟源H9N2亚型禽流感病毒的全基因组序列分析及致病性研究 [J], 张芳;王晶;卢昆鹏;肖丽;彭志;崔鹏飞;关立峥;邓国华;陈化兰2.一株鸭源H8N4亚型禽流感病毒分离株的全基因组序列分析及致病性的研究 [J], 王晶;张芳;卢坤鹏;关立峥;肖丽;彭志;邓国华;陈化兰3.两株鹅源H6N2亚型禽流感广东分离株的全序列分析及致病性研究 [J], 罗维玉;胡永浩;邓国华;施建忠;丁晴微;王明芳;张文亮;陈化兰4.两株鸭源H6N2亚型禽流感病毒的序列分析及对鸡的致病性研究 [J], 丁晴微;陈化兰;邓国华;施建忠;李印;崔鹏飞;齐瑛琳;于杨;崔佳莹;邱伯根5.两株H9N2亚型禽流感病毒的基因组序列分析及其对小鼠的致病性研究 [J], 侯玉杰;尹馨;房敬真;邓国华;崔鹏飞;王冬雪;施建忠;陈化兰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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Ｅ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｇ ｅ ｎ Ｂｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ．２ ０ １ ５ Ｍａ ｙ ；１ ０ （ ５ ） ： ３ ８ ５ —３ ８ ８ ． ］
中 国 病 原 生 物 学 杂 志 ２ ０ １ ５ 年 ５月 第 １ Ｏ卷 第 ５期 ２ ０ １ ５，Ｖｏ １ ． １ ０，Ｎｏ ． ５ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｇ ｅ ｎ Ｂｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ Ｍ ａｙ
ＤＯＩ ： １ ０ ． １ ３ ３ ５ ０ ／ ｊ ． ｃ ｊ ｐ ｂ ． １ ５ ０ ５ ０ １
系较 远 。 结论 分离 自上 海 自然保 护 区 候 鸟 粪 便 的 ２株 Ｈ４ Ｎ６亚 型 流 感 病 毒 均 属 于 低 致 病 性 禽 流 感 病 毒 ， 奥 司他 韦 类 Ｎ Ａ 抑 制 剂 存 在 一 定 耐药 性 ， 对 其 传 播 风 险 应 予 以关 注 。 【 关 键 词 】 候 鸟 ；Ｈ４ Ｎ６ ；』 ｆ 『 Ｌ 凝抑制 ； 禽 流 感 病 毒
ＧＡＯ Ｙｕ ｗｅ ｉ ，ＸＩ Ａ Ｘｉ ａ ｎ — ｚ ｈｕ ，Ｗ ＡＮ Ｇ Ｔｉ ｅ — ｃ ｈｅ ｎ ｇ （ １ ．Ｇｅ ｎ ｅ ｒ ａ ｌ Ｍｏ ｎ ｉ ｔ ｏ ｒ ｉ ｎ ｇ Ｓｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｆ ｏ ｒ Ｗｉ ｌ ｄ ｌ ｉ ｆ ｅ — ｂ ｏ ｒ ｎ ｅ Ｉ ｎ —
鉴定 为 Ｈ４ Ｎ６亚 型 ， ＨＡ 裂解 位 点 序 列 为 ＮＩ Ｐ Ｅ ＫＡ Ｓ Ｒ ／ Ｇ， 且 均 未 发 生 Ｑ２ ２ ６ Ｌ 、 Ｇ２ ２ ８ Ｓ变 异 ； ＮＡ 序 列 存 在 １ ｌ ７ Ｔ、 １ ９ ８ Ｎ、
３ １ ４ Ｓ等 氨 基 酸 变 异 。遗 传 进 化 分 析 显 示 ２株 Ｈ４ Ｎ ６亚 型 分 离 株 ＨＡ 和 ＮＡ 基 因属 于欧 亚 谱 系 的不 同 进 化 分 支 ， 亲 缘 关
Ｈ ４ Ｎ ６亚 型 禽 流 感 病 毒 分 离 与 氨 基 ． 诊荽 Ｕ ｝ ＝ ｊ ・ 酸 序 列 测 定 ＊
解 林红 ，高晓龙 ～， 耿 成
（ １ ． 国 家林 业 局 野 生 动 物 疫 源 疫 病 监 测 总 站 ， 辽宁沈阳 １ １ ０ ０ ３ ４ ；
区采 集候 鸟粪 便标 本 ３ ３ ７ 份， 采用 Ｐ Ｃ Ｒ 检 测 Ｈ４ Ｎ６核 酸 ； 同 时将 粪 便 标 本 接 种 Ｓ Ｐ Ｆ鸡 胚 分 离 病 毒 ； 收集 ７ ２ ｈ尿 囊 液 做 血凝 试 验 ， 阳性 标 本 进 行 全 基 因测 序 ， 并做 主要 氨 基 酸 位 点 和 遗 传 进 化 分 析 。 结 果 共 分 离 出 ２株 流 感 病 毒 ， 经 测 序
Ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ，Ｍ ｉ ｌ ｉ ｔ ａ ｒ ｙ Ｖｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎ ａ ｒ ｙ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ，Ａｃ ａ ｄ ｅ ｍｙ ｏ ｆ Ｍｉ ｌ ｉ ｔ ａ ｒ ｙ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ，Ｃ ｈ ａ ｎ ｇｃ ｈ ｕ ｎ １ ３ ０ １ ２ ２，Ｃｈ ｉ ｎ ａ；３ ．Ｂｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ Ａｎ ｉ ｒ ｎ ａ ｌ Ｄｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ Ｃｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ Ｃｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ，Ｄａ ｚ ｉ ｎ ｇ，Ｂｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ，１ ０ ２ ６ ０ ０ ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ）
［ Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ］ Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｓ Ｔｏ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｚ ｅ ｍａ ｊ ｏ ｒ ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｅ ｓ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ａ ｍｉ ｎ ｏ ａ ｃ ｉ ｄ ｓ ｉ ｔ ｅ ｓ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ＨＡ ａ ｎ ｄ ＮＡ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｓ ａ ｎ ｄ ｔ ｏ ｃ ｏ ｎ ｓ ｔ ｒ ｕ ｃ ｔ ａ
２ ． 中围 人 民 解 放 军 军 事 医 学 科 学 院 军 事 兽 医 研 究 所 ， 吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室 ， 吉林 长 春 １ ３ ０ １ ２ ２ ３ ．北 京 市 动 物 疫 病 预 防 控 制 中心 ， 北京 １ ０ ２ ６ ０ ０ ）
【 摘要】 目的 对 候 鸟类 流感 病 毒进 行 主 要 氨 基 酸 位 点 变 化 分 析 和 ＨＡ、 ＮＡ 遗 传 进 化 分 析 。 方 法 在 上 海 自然 保 护
Ｊ ） ｃ ｔ ｉ ｏ ｕ ｓ Ｄｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｓ ，ＳＦＡ ，Ｓ ｈ ｅ ｎ ｙ ａ ｎ ｌ １ ０ ０ ３ ４，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ；２ ． Ｋｅ ｙ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ ｏ ｆ Ｊ ｉ ｌ ｉ ｎ Ｐｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｅ ｆ ｏ ｒ Ｚｏ ｏ ｎ ｏ ｓ ｉ ｓ Ｐｒ ｅ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ
Ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎｄ ａ ｍｉ ｎ ｏ ａ ｃ ｉ ｄ ｓ ｅ ｑ ｕ ｅ ｎ ｃ ｉ ｎ ｇ ｏ ｆ ａ ｖ ｉ ａ ｎ ｉ ｎ ｆ ｌ ｕ ｅ ｎ ｚ ａ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ｓ ｕ ｂ ｔ ｙ ｐｅ Ｈ４Ｎ６
ＸＩ Ｅ Ｌｉ ｎ — ｈ ｕ ｎ ｇ ，ＧＡＯ Ｘｉ ａ ｏ — ｌ ｏ ｎ ｇ 。 ，ＧＥＮＧ Ｈａ ｉ — ｄ ｕ ｎ ｇ ，ＬＩ Ｙｕ ａ ｎ — ｇ ｕ ｏ 。 ，ＸＵ Ｙｕ ，Ｗ Ｕ Ｃ ｈ ａ ｎ ｇ — ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ，