果糖二磷酸钠及其制剂质量标准修订建议及研究方案1.doc

果糖二磷酸钠及其制剂质量标准修订建议

及研究方案1

附件一：

果糖二磷酸钠及其制剂质量标准修订建议与研究方案

1. 名称：由于原称“无水物”的果糖二磷酸钠含有不确定的结晶水与吸湿水，所以称“无水物”不确切，将原“无水物”称为“果糖-1,6-二磷酸三钠盐”。本品项下分为“果糖-1,6-二磷酸三钠盐”及“果糖-1,6-二磷酸三钠盐（八水合物）”。相关项目修改为：【性状】本品为白色或类白色的结晶性粉末；微有特臭，味微咸；果糖-1,6-二磷酸三钠盐极具引湿性。

2. 红外光谱图：要求企业提供果糖二磷酸钠对照品及果糖二磷酸钠、注射用果糖二磷酸钠红外光吸收图谱并注明果糖-1,6-二磷酸三钠盐或果糖-1,6-二磷酸三钠盐八水合物。以比较含不同水分果糖二磷酸钠红外光谱图的差异。

3. 溶液的澄清度与颜色：建议企业采用以下两种测定方法进行考察、比较，并上报结果。

①建议企业扫描供试品在300～450nm吸收光谱，并测定在420nm、430nm及

350nm 波长处的吸光度。

②按下述方法进行试验：

如显色，能否统一为与黄色（橙黄色或黄绿色）2号或3号、

4号标准比色液比较（请注明供试品显色色调）。

果糖二磷酸钠：

溶液的澄清度与颜色取本品1.5g（以无水物计算），加水10ml 溶解后，溶液应澄清无色。如显色，与黄色、橙黄色或黄绿色2号标准比色液（中国药典2005年版二部附录ⅨA第一法）比较，不得更深。

注射用果糖二磷酸钠：（注明检测取样量一瓶为5.0g）

溶液的澄清度与颜色取本品一瓶（5.0g），加水50ml溶解后，溶液应澄清无色。如显色，与黄色、橙黄色或黄绿色3号标准比色液（中国药典2005年版二部附录ⅨA 第一法）比较，不得更深。

果糖二磷酸钠注射液：

颜色本品与黄色、橙黄色或黄绿色3号标准比色液（中国药典2005年版二部附录ⅨA第一法）比较，不得更深。

果糖二磷酸钠口服溶液：

原标准为“吸光度取本品，照紫外-可见分光光度法（中国药典2005年版二部附录ⅣA），在350nm波长处的吸光度不得大于0.5。”由于口服液性状规定为无色至微黄色的澄清液体，建议口服液的“吸光度”改为“颜色”，以4号标准比色液比较。具体为：

颜色本品与黄色、橙黄色或黄绿色4号标准比色液（中国药

典2005年版二部附录ⅨA第一法）比较，不得更深。

4. 有关物质：将酶法测定6－磷酸果糖（F6P）和6－磷酸葡萄糖（G6P）与薄层色谱法进行有关物质（6-磷酸果糖、果糖）检查比较。建议直接采用薄层色谱法控制相关杂质。以下为薄层色谱法的参考方法，请各企业在此基础上增加对6-磷酸葡萄糖杂质的检查，并在系统适用性试验中增加最低检出量的考察。

有关物质取本品，加水制成每1ml中含0.1g（以无水物计算）的溶液，作为供试品溶液；精密称取6-磷酸果糖对照品适量，加水制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为对照品溶液（1）；精密称取果糖对照品适量，加水制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为对照品溶液（2）；精密称取6－磷酸葡萄糖对照品适量，加水制成每1ml

中含0.5mg的溶液，作为对照品溶液（3）；另取6-磷酸果糖对照品、果糖对照品、6－磷酸葡萄糖及供试品适量，加水制成每1ml中含6-磷酸果糖0.25mg、果糖0.25mg、6－磷酸葡萄糖0.25mg与供试品1mg的混合对照溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版二部附录ⅤB）试验，吸取混合对照溶液5μl，点于微晶纤维素薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水-丙酮-10%氨溶液（35：20：22.5：15：7.5）为展开剂，展开后晾干，喷以间苯二酚乙醇盐酸溶液（取间苯二酚0.5g，加80%乙醇溶液100ml使溶解，加盐酸5ml，摇匀）。在105℃加热5分钟，使显色，在色谱图中，应显示三个清晰分离的斑点。再精密吸取供试品溶液、对照品溶液（1）、（2）与（3）各5μl，分别点于同一微晶纤维素薄层板上，照上述色谱条件试验。供试品溶液如显杂质斑点，不得多于3个，并分别应与对照品溶液（1）、（2）与（3）主斑点

的位置相同，其斑点颜色与相应的对照品溶液主斑点比较，均不得更深（各0.5％）。

附：6－磷酸果糖（F6P）和6－磷酸葡萄糖（G6P）酶法含量测定方法

6－磷酸果糖（F6P）和6－磷酸葡萄糖（G6P）6－磷酸葡萄糖（C6H12O6）和6－磷酸果糖（C6H12O6）含量总和不得过2.0％。

供试品溶液的制备取本品5g ，精密称定，置50ml 量瓶中，加随样双蒸水稀释至刻度，摇匀。取上述溶液5.0ml ，置25ml 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。

试剂的制备

（1）盐酸三乙醇胺缓冲液（0.4mol/L ，pH7.60）：取盐酸三乙醇胺18.6g，加水200ml 溶解，加3.7g 乙二胺四乙酸二钠，用2mol/L 氢氧化钠调节pH至7.60，加水稀释至250ml。4℃保存，可稳定保存一周。

（2） 3.2mol/L 硫酸铵溶液：取硫酸铵42.2g，加水使溶成100ml。

（3）0.5mol/L 氯化镁溶液：取氯化镁六水合物10.1g，加水使成100ml。

（4）烟酰胺腺嘌呤单磷酸二核苷酸（NADP）溶液：取NADP 二钠盐20mg，溶于1ml水中。4℃保存。

（5）6－磷酸葡萄糖脱氢酶混悬液（G6P-DH 0.25mg/ml）：将6－磷酸葡萄糖脱氢酶混悬液（1mg/ml）用3.2mol/L 硫酸铵溶液按1：4比例稀释。4℃保存，可稳定保存二周。

（6）磷酸葡萄糖异构酶混悬液（PGI 0.2mg/ml）：将磷酸葡萄糖异构酶混悬液（2mg/ml）用3.2mol/L硫酸铵溶液按1：10比例稀释。4℃保存，可稳定保存二周。

测定法按顺序向参比及样品1cm 比色池中分别加入下列试剂：

摇匀、静置5分钟，照紫外-可见分光光度法（中国药典2000年版二部附录IV A），在340nm 波长处测定样品池相对于参比池的吸收度（E1）。再分别向两池中加入6－磷酸葡萄糖脱氢酶混悬液（G6P-DH 0.25mg/ml）0.015ml ，摇匀，10分钟后，在相同波长下读取恒定吸收度（E2）。然后再向两池中加入磷酸葡萄糖异构酶混悬液（PGI 0.2mg/ml）0.015ml，摇匀，10分钟后，在相同波长下读取恒定吸收度（E3）。

计算由E1、E2、E3值，按下列公式计算：

ΔE G6P＝E2-E1

ΔE F6P＝E3-E2

%1001.063000049.11.260075.3%66⨯⨯⨯⨯⨯⨯⨯∆=

w

d E P G P G 式中，3.075＝样品池中溶液的最终体积（ml ）