Double Antibody Sandwich ELISA
甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力检测方法的研究及应用
甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力检测方法的研究及应用发表时间：2017-06-12T10:03:18.517Z 来源：《中国误诊学杂志》2017年第6期作者：张龙丰张玲珠[导读] 建立甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力检测方法。
1.牡丹江市第一人民医院 157011；2.黑龙江省林业职业技术学校 157011 摘要：目的：建立甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力检测方法。
方法：用双抗体夹心ELISA法检测试剂对甲型肝炎灭活疫苗及效力试验参比进行检测，以检测OD值为反应指标，用生物检定双平行线法的基本原理进行统计分析，计算待检疫苗对应于效力参比品的相对效力（R 值）。
结果：样品HAAg含量与检测OD值之间具有高度的相关性，验证了4个指标全部通过了验证；用所建立的体外相对效力试验检测法对32批次甲肝灭活疫苗进行检测，结果与小鼠体内效力检测结果具有良好一致性，均能反映疫苗相对效力，两种方法检测相对效力（R值）之间无明显差别。
结论：所建立的甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力试验是一种灵敏、特异、方便、快捷的效力测定方法，可应用于甲型肝炎灭活疫苗效力检测。
关键词：甲型肝炎灭活疫苗效力；抗原检测；研究及应用Abstract：Objective：to establish a method to determine the relative potency of Inactivated Hepatitis A Vaccine in vitro. Methods：the method of double antibody sandwich ELISA kit to test Inactivated Hepatitis A Vaccine and the effect of reference for testing，to detect the OD value of reaction index，the basic principle of biological verification of parallel method for statistical analysis，the calculation to be detected corresponding to the relative effectiveness of vaccine effectiveness than ginseng the product（R）. Results：with a high degree of correlation between the HAAg content of the sample and detection OD，verified the 4 indicators all through the verification；with the established in vitro relative potency test detection method for 32 batches of inactivated hepatitis A vaccine was detected in mice results and potency testing results have good consistency，are can reflect the relative effectiveness of the vaccine，two methods for the detection of the relative potency（R）. conclusion：no obvious difference between Inactivated Hepatitis A Vaccine established in vitro The relative potency test is a sensitive，specific，convenient and rapid method for the determination of potency in Inactivated Hepatitis A VaccineKeywords：Inactivated Hepatitis A Vaccine effect；antigen detection；research and Application灭活疫苗动物体内效力检测周期一般均较长，且结果受多种因素的影响，所以WHO及国际生物制品标准化协会推荐尽量不用动物法进行生物制品质量检定。
双抗体夹心法原理
双抗体夹心法原理双抗体夹心法，也称为双特异性抗体结合（bispecific antibody sandwich method），是一种生物医学研究和临床应用中常用的技术手段。
它利用双特异性抗体能够同时结合两个不同抗原的特性，实现对细胞表面的目标分子的高效识别和定位。
本文将介绍双抗体夹心法的原理及其应用。
一、双抗体夹心法的原理概述双抗体夹心法原理基于单克隆抗体的特异性识别和结合，利用两个不同的单克隆抗体分别与两个不同的抗原结合，形成一个夹心结构，从而实现对目标分子的高效定位。
双抗体夹心法相较于传统的单克隆抗体法具有更强的特异性和高效性。
二、双抗体夹心法的工作原理双抗体夹心法的工作原理可以概括为以下几个步骤：1.制备双特异性抗体：首先，需要根据目标分子的特性和结构，设计并合成具有双特异性的抗体（例如，IgG1/2抗体）。
这种抗体一般由两个单克隆抗体的结合部分构成，通过基因工程技术将两个单克隆抗体的DNA片段融合，形成一个新的融合抗体。
2.融合抗体的表达和纯化：将融合抗体的DNA片段导入到特定的表达宿主细胞中，通过培养和表达，使融合抗体得以表达出来。
随后，通过一系列的纯化步骤，如离心、层析、过滤等，得到纯化的融合抗体。
3.双抗体的结合与识别：将纯化的融合抗体与目标分子进行混合，并保持一定的时间，使融合抗体与目标分子发生特异性结合。
由于融合抗体具有两个抗原结合部分，可同时与两个不同的目标分子结合，从而形成一个夹心结构。
4.检测体系的建立：为了定量检测目标分子的存在量，需要建立相应的检测体系。
一般常见的检测体系有酶联免疫吸附测定法（ELISA）、放射性测定法（RIA）等。
通过这些检测方法，可以快速、准确地测定融合抗体与目标分子的结合情况。
三、双抗体夹心法的应用双抗体夹心法由于其高效性和特异性，在生物医学研究和临床应用中得到广泛的应用。
以下是一些常见的应用领域：1.肿瘤治疗：利用双抗体夹心法的特点，可以设计并合成具有双靶向功能的抗体药物，如具有同时识别肿瘤细胞和免疫细胞的抗体。
免疫层析各种方法法原理
免疫层析各种方法法原理免疫层析（immunoassay）是一种通过对生物分子（一般是蛋白质）与抗体之间的特异性相互作用进行检测和定量分析的方法。
免疫层析常被用于生物医学研究、临床诊断和药物研发等领域。
根据原理和方法的不同，免疫层析可以分为几种类型：夹心免疫层析、双抗体免疫层析、竞争免疫层析和流动免疫层析等。
夹心免疫层析（sandwich immunoassay）是一种常见的免疫层析方法，也被称为“间接法”。
其基本原理是，在待测物（通常是蛋白质）的测定物质表面上固定一定的抗体（特异性抗体），然后再添加待测物和另外一种特异性抗体来夹持待测物。
通过特异性抗体和待测物的结合，形成“夹心复合物”，从而实现对待测物的检测和定量分析。
双抗体免疫层析（double antibody immunoassay）是另一种常见的免疫层析方法。
其原理是采用两种不同的抗体：一种抗体被固定在固相（如试纸、载体等）上，另一种抗体与待测物结合后与固相上的抗体形成“桥梁”，最终形成可视化的标记物。
这种方法广泛用于快速疾病诊断和生物分子检测。
流动免疫层析（flow immunoassay）是一种在毛细管或纸张状固支持介质上进行的免疫层析技术。
流动免疫层析常用于家庭自检、迅速检测和快速诊断等场景。
其原理是通过特异性抗体与待测物结合，形成可视化的标记物，该标记物会沿着固支持物的方向进行迁移。
根据标记物的颜色或信号强度来判定待测物的存在与浓度。
以上所述的免疫层析方法仅为常用的几种，还有其他的变种方法和技术。
免疫层析作为一种广泛使用的分析技术，具有快速、准确和灵敏度高的特点，被广泛应用于医疗诊断、临床检验、食品安全、环境污染、农业生产等领域。
随着技术的进步和创新，免疫层析在未来可能会有更多的应用发展和改进。
吸毒者血清IL—2和T淋巴细胞亚群的测定及临床意义
文献 报道 ：吸毒 对人体 的免疫 功能具 有广 泛的
【作 者 单 位 】江苏省连云枯 市公安局强锑戒毒所 医务驻．２２２￣０ 【作 者简 介】胡 可 橙 （１ｇ６３ ）．男 ．江 苏 连 云 港 市 人 一主 昔检 驰 师
太 专 ，研究 方 向 ：戒 毒 治 疗受 毒 品 检验 。
损 伤 ，且 极 易 患 感 染 性 疾 病 。本 文 通 过 ５８例 吸 毒 者 血 清 ｊｌ 一２水 平 和 Ｔ 淋 巴 细 胞 亚 群 的 含 量 检 测 ，旨 在 探 讨 其 临 床 诊 断 价 值 现 将 结 果 报 道 如 下 。 １ 对 象 与 方 法 １．１ 对 象 本 组 ８例 吸 毒 人 员 均 为 本 所 关 押 的 强
本组所 用 的钛镍合金 支架 生物相容性 好 ，Ｘ 线 下 可视 ，并具 有 自膨胀 性 和记 忆 能力 ，只要 能 准 确置 人 食 管 贲 门 狭 窄 段 ，均 能 获 得 良好 的 疗 效 。 由 于 这 种 支 架 弹 性 好 ，支 撑 力 强 ，故 应 注 意 狭 窄 段 上 下 缘 的 准 确 定 位 ，支 架 不 能 留 的 太 长 ，以 完 全 展 开 后 以 超 过 狭 窄
上 下 缘 各 ２ ｃｍ 为 宜 ，这 样 既 可 防 止 肿 瘤 向 上 向 下 生 长 而 致 管 腔 再 次 狭 窄 ，又 可 避 免 影 响 正 常 食 管 段 的 运 动 功 能 。
根 据 文献 报 道” 食 管 支架 置人 后 可 能 发 生再 狭 窄 ，这 主 要 是 由 于 肿 瘤 组 织 从 支 架 网 眼 中 向 管 腔 内 增 殖 延 伸 所 致 ，但 由 于 我 们 使 用 的 是 覆 膜 型 支 架 ，这 种 支 架 能 有 效 地 延 缓 肿 瘤 向腔 内 生 长 ，从 而 大 大 减 少 了 食 管 再 狭 窄 的 可 能 ，而 且 这 种 类 型 的支 架 置 人 后 能 迅 速 将 瘘 口封 闭 ，对 合 并 食 管 瘘 的 患 者 有 明 显 疗 效
双抗体夹心法原理
双抗体夹心法原理双抗体夹心法（Dual-Antibody Sandwich Assay）是一种常用于蛋白质检测的实验方法。
该方法通过同时使用两种特异性抗体，实现对目标蛋白的夹心检测，具有较高的灵敏度和特异性。
本文将介绍双抗体夹心法的原理及其应用。
一、原理双抗体夹心法原理基于酶联免疫吸附试验（ELISA）的基本原理发展而来。
其主要步骤包括涂覆、夹心、检测和信号检测等。
首先，实验者将一种特异性抗体沉积于固定载体（如微孔板）表面，形成抗原夹心层。
然后，待测物中的目标蛋白与夹心层中的特异性抗体结合。
接下来，实验者使用另一种与目标蛋白不同抗原冠名的特异性抗体，即“第二抗体”，来与目标蛋白结合。
第二抗体通常与酶标记有关，如辣根过氧化物酶（HRP）。
最后，通过添加特定底物，比如TMB（3,3', 5,5'-四甲基联苯胺）或BMP（2,2'-联氨苯胺），来观察信号的产生。
由于目标蛋白与第一、第二抗体同时结合，因此形成了一个夹心型结构。
这种双抗体夹心的结构能够在分析前富集目标蛋白，并增强信号的产生。
通过比较待测样品与已知浓度的标准曲线，可以确定待测物样品中目标蛋白的含量。
二、应用双抗体夹心法在生物医学及生命科学研究中得到了广泛的应用。
其主要应用领域包括药物研发、临床诊断和生物工程等。
在药物研发中，双抗体夹心法可用于药物候选分子的筛选和鉴定。
通过测定目标蛋白的含量，可以评估药物分子对目标蛋白的亲和力和选择性。
在临床诊断中，双抗体夹心法可用于检测体液中的生物标志物。
生物标志物是与疾病状态相关联的分子，如肿瘤标志物。
双抗体夹心法具有高灵敏度和特异性，可以准确、快速地检测这些生物标志物，为临床诊断提供重要依据。
另外，双抗体夹心法在生物工程领域也得到了广泛应用。
它可用于检测和定量表达蛋白。
通过测定特定蛋白的含量，可以评估蛋白表达系统的效率和纯度。
总结起来，双抗体夹心法是一种灵敏、特异、快速的蛋白质检测方法。
蓝氏贾第鞭毛虫感染的免疫学诊断方法
Abstract
Giardia lamblia infection causes diahrea in human beings and other mammalians, and it is attracting more and more attention in recent years. In this article, we reviewed immunological methods for the diagnosis of Giardia lamblia infection, compared the advantages and disadvantages of several diagnostic approaches, and briefly introduced some commercial kits, which would bring lots of conveniences to clinical diagnosis, therapy, and prognosis of Giardiasis.
关键词: 蓝氏贾第鞭毛虫; 免疫学诊断; 感染
卫茹, 田喜凤, 阎静波, 杨志宏. 蓝氏贾第鞭毛虫感染的免疫学 诊断方法. 世界华人消化杂志 2006;14(36):3487-3492
■背景资料
Immunological diagnosis of Giardia lamblia infection
Ru Wei, Xi-Feng Tian, Jing-Bo Yan, Zhi-Hong Yang Ru Wei, Xi-Feng Tian, Zhi-Hong Yang, Division of Pathogenic Biology, Department of Biological Science, North China Coal Medical College, Tangshan 063000, Hebei Province, China Jing-Bo Yan, Division of Pathology, Department of Basic Medicine, North China Coal Medical College, Tangshan 063000, Hebei Province, China Supported by National Natural Science Foundation of China, No. 30670224 Correspondence to: Xi-Feng Tian, Division of Pathogenic Biology, Department of Biological Science, North China Coal Medical College, Tangshan 063000, Hebei Province, China. jean1957@ Received: 2006-09-08 Accepted: 2006-09-28
加拿大进口大麦中小麦线条花叶病毒检疫鉴定
L I U J iq in 1, W A N G Lishan1'2 , W U X i1 , Q IA N Y u n k a i1 , G A O Fei1, W A N G H aiyang1
(1. Qinhuangdao Custom, Qinhuangdao 066004, China；2. Hebei Normal University o f Science and Technology, Qinhuangdao 066004, China)
(RT-PCR)和 双 抗 体 夹 心 酶 联 免 疫 吸 附 法 (D A S -E LIS A ),从 加 拿 大 进 口 的 大 麦 中 检 出 W SM V。 同 时 利 用 实 时 荧 光
定 量 PCR (Real tim eR T-qPC R )和 序 列 比 对 分 析 方 法 进 行 了 验 证 。这 是 我 国 首 次 在 进 境 加 拿 大 大 麦 中 截 获 W S M V 。
收 稿 日 期 ： 2018-09-20
修 订 日 期 ： 2018-11-01
* M 信 作 吉 E -m ail：why9601@163. com
加拿大进口的大麦中检出小麦线条花叶病毒。
1 材料与方法
l .i 主要试剂与仪器
小 麦 线 条 花 叶 病 毒 的 阳 性 标 准 物 质 和 W SMV 的 双 抗 体 夹 心 酶 联 （DAS-E L IS A ) 检 测 试 剂 盒 购 自 美 国 A gdia公 司 。荧 光 探 针 与 引 物 、0 « ；31印尺1'PCR K it (Perfect Real Tim e, RR064A)^O ne Step RT-PCR K it(RR055A )购自 TaKaRa 公 司 。实时荧 光 P C R 仪 为 ABI Steponeplus。普 通 P C R 仪为 AB I 9700。PCR产 物 送 至 北 京 擎科新业生物技术 公司进行测序。病 毒 R N A 提 取 试 剂 盒 （RN53)购 自 艾 德 莱 公 司 。Model 4001P 电 泳 仪 购 自 Life Technologies公 司 ，Nu Genius凝 胶 成 像 系 统 购 自 Syngene 公司。Multiskan Ascent 酶标仪购自 Thermo Scientific 公 司 。
双抗原夹心法原理
双抗原夹心法原理
双抗原夹心法（Sandwich ELISA）是一种常用的实验技术，
用于检测特定抗原的存在。
其原理是利用两个特异性抗体将待测抗原“夹心”在中间，形成一个“夹心结构”，然后通过检测系
统检测该结构的信号。
具体操作步骤如下：
1. 首先，在固定在表面上的底物（通常是微孔板）上涂覆一个捕获抗体。
这个捕获抗体能够特异性地结合待测抗原。
2. 接着，在涂覆有捕获抗体的表面上加入待测样品。
如果待测抗原存在，它将与捕获抗体发生特异性结合，并被固定在底物表面上。
3. 然后，加入第二个特异性的检测抗体。
这个检测抗体与不同的抗原表位结合。
检测抗体通常标记有一种可检测的信号，比如酶、荧光染料或放射性同位素。
4. 随后，加入一种能够与检测抗体标记物相互作用的底物。
如果待测抗原存在，它将同时与捕获抗体和检测抗体结合，形成一个“夹心结构”。
5. 最后，通过检测信号的发生情况来确定待测抗原的存在与否。
这可以通过测量酶反应的产物、荧光强度或放射性同位素的放射性来实现。
通过双抗原夹心法，可以提高检测的敏感性和特异性。
因为待测抗原必须与两个特异性抗体结合，所以该方法可以减少非特异性的背景信号。
另外，由于夹心结构形成后，在检测抗体的标记物与底物相互作用前，可与洗涤步骤尽量去除不结合的物质，从而进一步提高方法的灵敏度。
在实验室中，双抗原夹心法广泛应用于检测疾病标记物、细胞因子、抗体、蛋白质等生物大分子的含量和活性。
它的操作简单、具有较高的灵敏度和特异性，因此被广泛用于医学诊断、生物学研究和药物开发等领域。
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Double Antibody Sandwich ELISA
Procedure
1.Coat the well of a 96-well microliter plate with100ul capture antibody diluted in coating buffer at a concentration of5mg/ml (most common dilutions are1-10 mg/ml).Cover the plate with an adhesive plastic and incubate at 37°C for 2-4 h or, if more convenient, overnight at 4°C.
2.Wash the plate by filling the wells with300ul PBS-Tween, soak for a few minutes and remove the washing buffer. Repeat washing triple times. Blot plates by tapping upside down on tissue paper.
3.Block the remaining protein-binding sites in the coated wells by adding 200μl blocking buffer.Cover the plate with an adhesive plastic and incubate at 37°C for 2-4 h orovernight at 4°C
4.Wash three times as in step 2.
5. Add 100 ml aliquots of appropriately diluted sample to each well.For accurate quantitative results, always compare signal of unknown samples against those of a standard curve. Standards (duplicates or triplicates) and blank must be run with each plate to ensure accuracy. Cover the plate with an adhesive plastic and incubate for 30~90 min at 37°C or overnight at 4°C.
6. Wash three times as in step 2
7. Add 100ul of diluted detection antibody to each well and incubate at 37 °C for 2 hours.
8. Wash three times as in step 2.
9. Add 100μl of HRP conjugatedsecondary antibody diluted at the optimal concentration (according to the manufacturer) to each well.Cover the plate with an adhesive plastic and incubate for 20min at 37°C.
10.Wash three times as in step 2
11. Add 80ulsubstrate A, and then add 80ul substrate B to each well. Cover the plate with an adhesive plastic and incubate at 37o C for 15-60 min, or as long as necessary to obtain clear reactions.
12. Add 50ul stop solution to each well.
13. Measure absorbance at 450nm.。