白介素8(IL8)检测试剂盒 SEA080Hu使用说明书
白介素1β(IL1b)检测试剂盒 SEA563Hu使用说明书
SEA563Hu96T
白介素1β(IL1b)检测试剂盒
(酶联免疫吸附试验法)
适用生物:人
使用说明书
仅供体外研究使用,不用于临床诊断!
第12版(2016年05月修订)
[预期应用]
本试剂盒运用双抗体夹心ELISA法定量测定人血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清或其它相关生物液体中IL1b含量。
[试剂盒内容]
试剂名称数量试剂名称数量
96孔板(预包被)196孔板覆膜4
标准品2标准品稀释液1×20mL
检测溶液A1×120μL检测溶液A稀释液1×12mL
检测溶液B1×120μL检测溶液B稀释液1×12mL
TMB底物1×9mL终止液1×6mL
洗涤液(30×)1×20mL使用说明书1
[需自备的设备及试剂]
1、450±10nm滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)
2、单道或多道微量移液器及吸头
3、稀释样品的EP管
4、蒸馏水或去离子水
5、吸水纸
6、盛放洗液的容器
7、0.01mol/L(或1×)磷酸缓冲盐(PBS),pH=7.0-7.2
[试剂盒的储存及有效期]
1、未开封的试剂盒:所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意,收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶
液A、检测溶液B以及96孔板保存于-20o C,其余试剂请置于4o C保存备用。
2、使用后的试剂盒:剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存,此外,请将未使用酶标条用包含干燥剂的铝
箔袋装好,并拉紧密封铝箔袋,置于-20o C保存。
注意:
试剂盒内酶标条可拆卸,按实验需求可分多次使用;使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后1个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准,保质期内所有组分都确保是稳定的。
人白介素6(IL-6)试剂盒的操作说明书
人白介素6(IL-6)试剂盒的操作说明书
人白介素6(IL-6)试剂盒的操作说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:96T
0-8ng/L
使用目的:
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中白介素6(IL-6)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白介素6(IL-6)水平。用纯化的人白介素6(IL-6)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白介素6(IL-6),再与HRP标记的白介素6(IL-6)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素6(IL-6)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人白介素6(IL-6)浓度。
试剂盒组成
130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶
2酶标试剂6ml×1瓶8标准品(16ng/L)0.5ml×1瓶
3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶
4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份
5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张
6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
人白细胞介素酶联免疫分析使用说明书
人白细胞介素酶联免疫分析使用说明书
使用目的:
本试剂盒用于测定人血清、唾液及相关液体样本中白细胞介素1β(IL-1β)含量。
人白细胞介素酶联免疫分析实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素1β(IL-1β)水平。用纯化的人
白细胞介素1β(IL-1β)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素1β(IL-1β),再与HRP标记的白细胞介素1β(IL-1β)抗体结合,形成抗体
-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化
成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素1β(IL-1 β)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人白细胞介素1β(IL-1β)浓度。
人白细胞介素酶联免疫分析试剂盒组成
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
3.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。
4.加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
5.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
6.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
白介素—6(IL—6)测定试剂盒(荧光免疫层析法)产品技术要求瑞辉
医疗器械产品技术要求编号:
白介素-6(IL-6)测定试剂盒(荧光免疫层析法)
2.性能指标
2.1.物理性状
2.1.1.外观
试剂卡外观平整,材料附着牢固;
样本稀释液为无色透明液体,无悬浮物及沉淀物;
2.1.2.净含量
样本稀释液净含量应在标示值的 90%-110%之间;
稀释液标示值:300μl。
2.1.
3.膜条宽度
膜条宽度应不小于 3.9mm。
2.1.4.液体移行速度
液体移行速度应不低于 25mm/min。
2.2.最低检出限
最低检出限≤3pg/ml。
2.3 .线性范围
试剂的线性范围为(3-1000)pg/ml,在此线性范围内,线性相关系数 r 应不小于 0.990。
2.4.测量精密度
2.4.1.重复性
用质控品重复测试,所得结果的变异系数(CV)≤15%;
2.4.2.批间差
用质控品重复测试 3 个批号的试剂盒,所得结果的变异系数(CV)≤15%。
2.5.准确度
回收率在 85%-115%之间。
第 1 页共1 页
白介素8的正常参考值
白介素8的正常参考值
白细胞介素 8 (IL-8) 是一种由多种细胞产生的细胞因子,主要参与炎症反应和免疫调节。它在炎症、感染、创伤和肿瘤等情况下发挥重要作用。
IL-8 的正常参考值因检测方法、样本类型和实验室而异。一般来说,血清或血浆中的IL-8 浓度在正常情况下非常低,通常低于 10 pg/ml。然而,一些研究报道的正常参考范围可能略有不同,一般在 5-20 pg/ml 之间。
需要注意的是,IL-8 的水平可能受到多种因素的影响,包括生理状态、炎症性疾病、感染、肿瘤、药物等。因此,解读 IL-8 的结果时应考虑个体的临床背景和其他相关指标。
如果您对特定实验室或检测方法的正常参考值有疑问,建议您参考该实验室提供的参考范围或咨询医生。医生会根据您的具体情况和临床表现来综合评估 IL-8 的水平是否正常。
il8简介
童及非感染性疾病患儿的血清和脑脊液(CSF)IL-8水平。结果病 毒性脑炎患儿血清及CSF中IL-8水平均明显高于对照组(P<0, 001),表明IL-8参与了病毒性脑炎的过程,但具体机理未明。
6.3 IL-8与肿瘤发生的关系
现已证实,IL-1,TNF 和 PMA 能诱导多种细胞表达IL-8 mRNA,而IL-4 和 糖皮质激素对IL-8的表达有抑制作用。
进一步的研究表明,糖皮质激素对IL-8基因转录的抑制是 通过激素受体复合物与IL-8基因5′末端的糖皮质激素反应 成份(GRE)相互作用实现的。
Bp=3159
图为IL-8 cDNA的核苷酸序列和由此推导出的IL-8的氨基酸序列
4 白细胞介素-8的生物学作用
IL-8的主要生物学功能是在炎症反应中趋化中性粒细胞 (Neutrophils,Neu) 、T淋巴细胞以及嗜碱粒细胞( Basophils ) 至病灶部位,并且它的趋化性对不同细胞有差异。
中性粒细胞与IL-8接触后发生形态变化,定向游走到反应部 位并释放一系列活性产物。这些作用可导致机体局部的炎症 反应,达到杀菌和细胞损伤的目的。
1988年,该因子在一次国际会议上被确定命名为白细胞介素8(Interleukin-8 ,IL-8) /NAP-1 。
2.白细胞介素-8的产生与分子特性
白介素6(IL—6)测定试剂盒(荧光免疫层析法)产品技术要求广州赛哲生物
白介素6(IL-6)测定试剂盒(荧光免疫层析法)
2.性能指标
2.1物理性状
2.1.1外观
试剂盒组分齐全,内外包装完整,标签清晰,试剂卡外观平整,材料附着牢固;样本稀释液为无色透明液体,无悬浮物及沉淀物。
2.1.2样本稀释液净含量
样本稀释液净含量偏差不大于标示量的±10%。
2.1.3膜条宽度
膜条宽度为4.00±0.40mm。
2.1.4液体移行速度
液体移行速度应不低于20mm/min。
2.2线性范围
试剂的线性范围为5pg/mL~3000pg/mL,在此线性范围内:线性相关系数r 应不小于0.9900。
2.3空白限
空白限(X+2SD)应<5pg/mL。
2.4重复性
变异系数(CV)应≤15%。
2.5批间差
变异系数(CV)应≤15%。
2.6准确度
相对偏差(B)应在±15%范围内。
1
人白细胞介素-8IL-8试剂盒使用方法
人白细胞介素-8(IL-8)试剂盒使用方法
检测范围:96T
40 ng/L -1200 ng/L
使用目的:
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素-8(IL-8)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素-8(IL-8)水平。用纯化的人白细胞介素-8(IL-8)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素-8(IL-8),再与HRP标记的白细胞介素-8(IL-8)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素-8(IL-8)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人白细胞介素-8(IL-8)浓度。
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
白细胞介素-8
白细胞介素-8
【基本信息】
[简要描述]
白细胞介素-8(interleukin-8, IL-8)主要是由单核-巨噬细胞、T细胞亚群、部分B细胞产生,能够吸引并激活中性粒细胞,使之定向游走到机体炎症反应部位并释放一系列活性物质,起到杀菌的作用。
[其他名称]
IL-8
【测定方法及参考值范围】
·ELISA:<50pg/ml(敏感度为50pg/ml的试剂盒正常人血清或尿液测不出)。
·还可通过中性粒细胞趋化试验、多形核白细胞酶释放法、原位免疫细胞化学测定法测定。【结果及临床意义】
[升高]
◇疾病因素
·银屑病
注释:鳞屑中。
·类风湿关节炎
注释:滑液中。
·麻风病
注释:滑液中。
·自发性肺纤维化
注释:支气管灌洗液中。
·急性呼吸窘迫综合征
注释:支气管灌洗液中。
·痛风
·败血症休克
·内毒素血症
·重症胰腺炎
·银屑病性关节炎
◇其他因素
·输血溶血反应
【样本准备与采集】
[样本类型]
血液、浆膜腔积液、关节腔积液等
【注意事项】
·白细胞介素-8对嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞、淋巴细胞也有一定作用。
血清白介素8固相放射免疫法的建立及应用
0 2 9 6 n / .Th o s e e t n v le a d n r lv l eo L 8 we e0 1 g mL a d . ~ . g mL e lwe td t ci au n o ma au fI 一 r . 6 n / n o O 3 ±O 0 n / . 0 . 5 g mL,r s e tv l .Th n e- s a e p ciey e it ra s y CV s6 8 ,a d t ei taa s y CV s wa . n h n r— s a wa
线 相 关 (一 09 4 P< O 0 1y一 0 9 4 。 表 明 本 文 建 立 的 固相 R A 法 可 以代 替 液 相 R A 法 测 定 血 清 I - r .5 , .0 , . 9 X) I I L 8浓
度 , 适 用 于 大 批 样 品 和 自动 化 检 测 。 并
关键词 : 白介 素 8 固相 RI 法 ; 液 相 R A 法 ; A I
中 图分 类 号 : 4 6 6 R 4 、 文 献标 识 码 : A 文 章 编 号 :0 6 1 0 ( 0 8 0 - 1 10 1 0 - 7 3 2 0 ) 30 7 - 3
Es a ih e n plc to fA t bls m nta d Ap i a i n o S ld Pha e Ra i i m u o s a o e u nt re ki 一 o i s dom n a s y f r S r m I e lu n 8
人白介素6(IL-6)试剂盒的操作说明书
人白介素6(IL-6)试剂盒的操作说明书
人白介素6(IL-6)试剂盒的操作说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:96T
0-8ng/L
使用目的:
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中白介素6(IL-6)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白介素6(IL-6)水平。用纯化的人白介素6(IL-6)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白介素6(IL-6),再与HRP标记的白介素6(IL-6)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化
成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素6(IL-6)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人白介素6(IL-6)浓度。
试剂盒组成
130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶
2酶标试剂6ml×1瓶8标准品(16ng/L)0.5ml×1瓶
3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶
4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份
5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张
6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
白介素8分子量
白介素8分子量
白介素8分子量是一个非常重要的生物学指标。在医学、生物学
等多个领域中,白介素8分子量都具有重要意义。本文将分步骤阐述
白介素8分子量的相关内容。
第一步:介绍白介素8分子量是什么
白介素8分子量是指白介素8(IL-8)这种蛋白质的分子量。白
介素8是一种由人体产生的细胞因子,是一种介导炎症反应的重要信
号分子。白介素8主要由巨噬细胞、内皮细胞和某些其他细胞合成,
能够刺激中性粒细胞和嗜酸性粒细胞在炎症区域集聚,参与炎症反应
和免疫调节。
第二步:白介素8分子量的检测方法
白介素8分子量检测方法主要有酶联免疫吸附实验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)和生物标志物芯片技术。其中,ELISA是一种非常成熟的检测方法,可以快速、准确地检测样本中的白介素8水平。而生物标志物芯片技术则可以同时检测多种生物标志物,包括白介素8分子量。
第三步:白介素8分子量的临床应用
白介素8分子量在临床上具有广泛应用。例如在感染性疾病诊断中,白介素8分子量可作为判断感染程度严重程度以及预测预后的一
个指标。此外,在肿瘤治疗中,白介素8分子量也被用作肿瘤治疗效
果的监测指标。另外,白介素8分子量还可以作为心脏病、糖尿病、
类风湿性关节炎等多种疾病的诊断和治疗的辅助指标。
总之,白介素8分子量作为一个重要的生物学指标,在医学和生
物学等多个领域中具有广泛的应用价值。通过检测白介素8分子量的
水平,可以更好地判断疾病的严重程度,预测预后,选择更加合理的
治疗方案。
国赛生物白介素6(IL—6)测定试剂盒(化学发光免疫分析法) 产品技术要求
医疗器械产品技术要求编号:
白介素6(IL-6)测定试剂盒
(化学发光免疫分析法)
2. 性能指标
2.1 试剂条性能指标
2.1.1外观
试剂条中第7孔内组分为棕色含固体微粒的液体或含棕色固体沉淀的透明液体;第12孔内化学发光底物为透明液体;其余皆为无色透明液体,无悬浮物、无沉淀、无絮状物。
2.1.2 装量
溶液装量不少于标示值。
2.1.3 空白限
<1.5 pg/mL。
2.1.4 准确度
检测结果与标定浓度的相对偏差应在±10%以内。
2.1.5 线性范围
试剂盒在 3 pg/mL~5000 pg/mL区间内,其线性相关系数(r)应不小于0.9900。
2.1.6精密度
2.1.6.1 批内精密度
用同一批次的试剂盒,质控品测定结果的变异系数(CV)应不大于10.0%。
2.1.6.2批间精密度
在多个不同批次的试剂盒之间,质控品测定结果的变异系数(CV)应不大于15.0%。
2.2校准品性能指标
2.2.1外观
校准品为米白色粉状冻干块。
1
2.2.2准确性和溯源赋值程序检测
白介素6(IL-6)校准品,测试结果偏差应在±15%之内。校准品的溯源及赋值程序文件见附录1。
2.2.3批内精密度
对同一批次10瓶校准品进行检测,检测批内精密度CV应≤15%。
2
大鼠白介素IL-8英文说明书上海彩佑生物科技
大鼠白介素IL-8英文说明书上海彩佑生物科技
Rat IL-8
FOR RESEARCH USE ONLY
Assay range:15ng/L-480ng/L96determinations Purpose
This kit allows for the determination of IL-8concentrations in Rat serum,cell culture supernates and other biological fluids Principle of the assay
T he kit assay Rat IL-8level in the sample,use Purified Rat IL-8antibody to coat microtiter plate wells,make solid-phase antibody,then add IL-8to wells,Combined IL-8 antibody which With HRP labeled goat anti-Rat become antibody-antigen-enzyme-antibody complex,after washing Completely,Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed,reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of450nm. The concentration of Rat IL-8in the samples is then determined by comparing the O.D.of the samples to the standard curve.
ImmunoChemistry丨ICT白细胞介素-8说明书
ImmunoChemistry丨ICT白细胞介素-8说明书
白细胞介素-8(IL-8),也称为CXCL8,是一种由巨噬细胞和其他细胞类型如上皮细胞产生的ELR阳性CXC家族成员趋化因子。ELR 阳性的CXC趋化因子(如IL-8)特异性地诱导中性粒细胞迁移,并与趋化因子受体CXCR1和CXCR2相互作用。人IL-8重组蛋白是酵母中产生的纯化白介素-8。
ImmunoChemistry Technologies简称"ICT",研究工具众多,包含细胞蛋白酶、细胞凋亡与细胞毒性检测试剂盒,同时还有高灵敏度的 ELISA开发试剂,包括包被液、封闭液、冲洗液、底物、终止液、板子等等。
ImmunoChemistry 白细胞介素-8背景:
白细胞介素-8(IL-8),也称为CXCL8,是一种由巨噬细胞和其他细胞类型如上皮细胞产生的ELR阳性CXC家族成员趋化因子。哺乳动物中有17种不同的CXC趋化因子,分为两类:在CXC基序的第一个半胱氨酸之前具有谷氨酸-亮氨酸-精氨酸(简称ELR)的特定氨基酸序列(或基序)的趋化因子(ELR阳性),以及没有ELR基序的趋化素(ELR阴性)。ELR阳性的CXC趋化因子如IL-8特异性地诱导中性粒细胞迁移,并与趋化因子受体CXCR1和CXCR2相互作用。
ImmunoChemistry 白细胞介素-8协议:
人IL-8蛋白可用于细胞培养、作为IL-8 ELISA标准品和作为Western印迹对照。
ImmunoChemistry 白细胞介素-8相关研究:
重组小鼠CCL3
重组人IL-17A
人白细胞介素说明书
人白细胞介素2(IL-2)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围: 96T
40pg/ml-1200pg/ml
使用目:
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素2(IL-2)含量。
试验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素2(IL-2)水平。用纯化人白细胞介素2(IL-2)抗体包被微孔板, 制成固相抗体, 往包被单抗微孔中依次加入白细胞介素2(IL-2), 再与HRP标识白细胞介素2(IL-2)抗体结合, 形成抗体-抗原-酶标抗体复合物, 经过根本洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶催化下转化成蓝色, 并在酸作用下转化成最终黄色。颜色深浅和样品中白细胞介素2(IL-2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值), 经过标准曲线计算样品中人白细胞介素2(IL-2)浓度。
试剂盒组成
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取, 提取按相关文件进行, 提取后应立刻进行试验。若不能立即进行试验, 可将标本放于-20℃保留, 但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3样品, 因NaN3抑制辣根过氧化物酶(HRP)活性。
操作步骤
1.标准品稀释: 本试剂盒提供原倍标准品一支, 用户可根据下列图表在小试管中进行稀
释。
2.加样: 分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂, 其它各步操作相同)、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品正确加样50μl, 待测样品孔中先加样品稀释液40μl, 然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部, 尽可能不触及孔壁, 轻轻晃动混匀。
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SEA080Hu96T
白介素8(IL8)检测试剂盒
(酶联免疫吸附试验法)
适用生物:人
使用说明书
仅供体外研究使用,不用于临床诊断!
第12版(2016年05月修订)
[预期应用]
本试剂盒运用双抗体夹心ELISA法定量测定人血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清或其它相关生物液体中IL8含量。
[试剂盒内容]
试剂名称数量试剂名称数量
96孔板(预包被)196孔板覆膜4
标准品2标准品稀释液1×20mL
检测溶液A1×120μL检测溶液A稀释液1×12mL
检测溶液B1×120μL检测溶液B稀释液1×12mL
TMB底物1×9mL终止液1×6mL
洗涤液(30×)1×20mL使用说明书1
[需自备的设备及试剂]
1、450±10nm滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)
2、单道或多道微量移液器及吸头
3、稀释样品的EP管
4、蒸馏水或去离子水
5、吸水纸
6、盛放洗液的容器
7、0.01mol/L(或1×)磷酸缓冲盐(PBS),pH=7.0-7.2
[试剂盒的储存及有效期]
1、未开封的试剂盒:所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意,收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶
液A、检测溶液B以及96孔板保存于-20o C,其余试剂请置于4o C保存备用。
2、使用后的试剂盒:剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存,此外,请将未使用酶标条用包含干燥剂的铝
箔袋装好,并拉紧密封铝箔袋,置于-20o C保存。
注意:
试剂盒内酶标条可拆卸,按实验需求可分多次使用;使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后1个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准,保质期内所有组分都确保是稳定的。
[标本的采集与保存]
1、血清:将收集于血清分离管中的全血标本在室温放置2小时或4o C过夜,然后1,000×g离心20分钟,取上
清即可,将上清置于-20o C或-80o C保存,避免反复冻融。
2、血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8o C1,000×g离心15分钟,
取上清即可检测,或将上清置于-20o C或-80o C保存,避免反复冻融。
3、组织匀浆:不同类型的组织制备匀浆的方法会有所不同
1)取适量组织块,在预冷PBS(0.01mol/L,pH=7.0-7.2)中清洗去除血液,匀浆前先称重。
2)将组织切成小块,均匀的放入放置在冰上的装有新鲜裂解缓冲液(货号IS007,应依据目标蛋白的亚细胞定位选择不同类型的缓冲液)的玻璃均质器中(微小的组织也要如此)。(质量体积比=1:20-1:50,例如:1mL裂解缓冲液中加入20-50mg组织样本。)
3)将得到的悬浊液经过超声处理至澄清。
4)将制备好的匀浆液10,000×g离心5分钟,弃沉淀,上清即可用于检测或置于-20o C下保存。
4、细胞裂解液:在分析试验之前,细胞需利用以下方法处理:
1)贴壁细胞应该用冷PBS轻轻清洗,然后用胰蛋白酶消化,于1,000×g离心5分钟后收集。(悬浮细胞可通过离心直接收集)。
2)将收集到的细胞用冷PBS洗3次;
3)将浓度为107个细胞/毫升的悬浮细胞加入新鲜裂解缓冲液中,如果需要,细胞可以进行超声波处理至溶液澄
清。
4)将标本于2-8o C1,500×g离心10分钟,弃沉淀,上清即可用于检测或置于-20o C下保存。
5、细胞培养上清或其它生物标本:请1,000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20o C或-80o C保
存,避免反复冻融。
注意:
1、以上标本均需密封保存,4o C保存小于1周,-20o C不超过1个月,-80o C不超过2个月。
2、标本出现溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
3、标本使用前应缓慢均衡至室温,不应加热使之融解。
4、基于大量检测数据,我们推荐使用血清而不是血浆作为样本进行检测。
[试剂准备]
1、使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25o C),如果该试剂盒在一段时间内不能使用,请仅取出本
次试验所需的酶标条和试剂,并将剩余的酶标条及试剂按指定条件保存。
2、标准品(冻干品):每瓶标准品加入标准品稀释液1mL,盖好后室温静置大约10分钟,同时轻轻摇动(避免
起泡),其浓度为10,000pg/mL(贮液)。先将其稀释为1,000pg/mL(标准曲线最高浓度)后,再准备7个稀释标准品的EP管,每个EP管中加入500μL的标准品稀释液,如图所示依次倍比稀释成1,000pg/mL,500pg/mL, 250pg/mL,125pg/mL,62.5pg/mL,31.2pg/mL,15.6pg/mL,标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
Tube123456789 pg/mL10,0001,00050025012562.531.215.60
3、检测溶液A及检测溶液B:Detection A及Detection B在使用前请用手甩几下或短暂离心处理,以使黏附
在管壁或瓶盖的液体沉积到管底。临用前分别以检测稀释液A或B1:100稀释(如:10μL检测溶液A/990μL
检测稀释液A),充分混匀,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100μL/孔),实际配制时应多配制0.1-0.2mL。
4、浓洗涤液:580mL蒸馏水或去离子水加入20mL洗涤液(30×)稀释至600mL至工作液浓度。
5、底物溶液:请用灭菌的移液器和吸头吸取所需体积的TMB至另一干净容器中使用,容器中剩余的底物应予丢
弃,不要倒回TMB瓶中。
注意:
1、标准品的稀释不能直接在板中进行。
2、标准品请于临用前15分钟内配制。该标准品只能使用一次。
3、标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请使用相应的稀释液配制,稀释液不能混用。用移液枪轻轻
吹打充分混匀,避免起泡。为保证实验结果的准确性请使用微量吸管,并校准微量移液器。请依据所需的量精确配制,尽量不要使用微量配制的方法(如吸取检测溶液A时,一次不要小于10μL),以避免造成浓度误差。
4、请勿重复使用已经稀释过的标准品、检测溶液A工作液和检测溶液B工作液。
5、洗涤液(30x)中如有结晶析出,请先温育至室温,轻轻混匀,至到结晶完全溶解再进行配制。
6、试剂盒中部分试剂为储存液,客户需配置成工作液后使用,在配置过程中可能因为纯净水质量差或水质污染,
以及实验中所用耗材洁净度差,造成实验结果不准确,甚至完全错误。请使用双蒸水配置。
[标本处理]
1、本公司只对试剂盒本身负责,不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责,请使用者使用前充分考虑到样本
的可能使用量,预留充足的样本。
2、实验前应预测标本含量,如果标本浓度过高,应对标本进行稀释,使稀释后的标本符合试剂盒的检测范围,
计算时再乘以相应的稀释倍数。
3、血清或血浆标本推荐稀释大约10倍,如:稀释10倍,取20μL血清或血浆加入180μL PBS。标本使用
0.01mol/L的PBS稀释(PH=7.0-7.2)。
4、若所检样本不包含在说明书所列样本之中,建议进行预实验验证其有效性,并注意留存样本。
5、使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。
6、若样本为细胞培养上清,因该类样本干扰因素较多,如:细胞状态、细胞数量、采样时间等,所以可能存
在检测不出的情况。
7、某些天然蛋白或重组蛋白,包括原核及真核重组蛋白,可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹
配,而不被检测出。
8、建议使用新鲜样本,保存时间过长可能会存在蛋白降解或变性导致实验结果偏差。
[操作步骤]
1、加样:分别设标准孔、待测样品孔、空白孔。设标准孔7孔,依次加入100μL不同浓度的标准品(见试剂
准备2)。空白孔加100μL标准品稀释液(见试剂准备第二步最后一管),余孔加待测样品100μL,酶标板加上覆膜,37o C温育1小时。
2、弃去液体,甩干,不用洗涤。
3、每孔加检测溶液A工作液100μL(临用前配制),酶标板覆膜,37o C温育1小时。
4、弃去孔内液体,每孔用350μL的洗涤液洗涤,浸泡1-2分钟,在吸水纸上轻拍酶标板来移除孔内所有液体。
重复洗板3次。最后一次洗涤后,吸取或倒出剩余的洗涤缓冲液,将酶标板倒扣在吸水纸上,将残留在孔内的液体全部吸干。此过程也可采用喷射瓶,多道移液器或自动洗板机来完成。