实验六 石蜡切片法1
石蜡切片步骤
⽯蜡切⽚步骤⽯蜡切⽚基本步骤（⼀）取材和固定根据实验⽬的选择材料。
将整个⾍体或⾍体的内部器官（如肠道、马⽒管、唾液腺等）取出后，⽴即投⼊固定液。
取材⼤⼩：0.5cm×0.5 cm×0.2或者1.0 cm×1.0 cm×0.2，厚度不宜超过3mm。
固定液：2.5%的戊⼆醛固定液，Bouin⽒液，10%甲醛等。
固定时间：4oC固定24⼩时。
注意事项：取材：1．勿使组织块受挤压切取组织块所⽤⼑、剪要锋利，切割时不可来回切割。
夹取组织时，镊⼦要轻，切勿挤压，以免损伤组织。
取材时，组织块可稍⼤⼀点，以便在固定后，将组织块的不平整部分修去。
2.选好组织块的切⾯应熟悉器官组织的组成，并根据观察⽬的来确定纵切或横切。
3．保持材料的清洁组织块上如有⾎液、污物、粘液、⾷物等，先⽤⽣理盐⽔冲洗⼲净，再⼊固定液。
4．切除（清除）不需要的部分特别是组织周围的脂肪等，应尽可能清除掉，以免影响以后的程序和观察。
固定：1．材料新鲜取出组织后须⽴即固定。
否则时间相隔过久，体积就要收缩变形或发⽣⾃溶现象。
2．抽⽓⽣物组织常有⽓体的存在，使材料不能沉⼊固定液中，抽⽓使得固定液有效渗⼊。
真空泵抽⽓或者⽤空针管抽⽓。
昆⾍整体固定，固定前⽤解剖针刺数个⼩孔，以利⽤固定液渗透。
3．固定剂⽤量⼀般为组织体积的10~20倍。
勿使组织贴于瓶底或瓶壁，以免影响固定剂的渗⼊。
4．避免阳光尽可能避免接触阳光以免失去固定作⽤。
5．加速固定轻轻摇动盛器使组织移动有利于固定液渗⼊，对长期固定的标本可经常更换固定液。
（⼆）洗涤2.5%戊⼆醛固定液固定的组织：0.2M, pH7.2磷酸缓冲液漂洗三次，每次10minBouin⽒固定液固定的组织：直接⼊70%酒精更换数次即可脱⽔，注意苦味酸。
甲醛固定的组织：直接投⼊50%或70%酒精脱⽔，不经⽔洗。
但如果在甲醛中时间过长，则仍应当⽤流⽔冲洗。
陈旧性标本和混合性固定液应及时洗涤，有利于脱⽔、切⽚和染⾊。
石蜡切片法
包埋过程中易出现的问题及解决办法
问题：包埋后的石蜡块应为均匀半透明状，有时出现白色浑浊 结晶（像雪花一样）部分，这样在切片时就有妨碍，不易切出 薄的切片。 原因：①组织内部或石蜡中混有透明剂；②脱水不干净；③石 蜡本身品质不良；④组织块移入纸盒时动作太慢，周围的石蜡 已成凝固状态；⑤冷却用水温度不够低，石蜡凝固太慢。 解决办法：属于前三个原因者应在包埋之前就须注意；属于后 二个原因者，可将包埋块再投入Ⅲ蜡中熔化后重新包埋，但必 须注意熔化包埋过的石蜡块的时间不宜过久。
脱水（常用脱水剂：乙醇；脱水原则：低浓度到高浓度）（目的？） 脱水时间：视材料的性质、大小而定 小鼠肝脏：在各级AL中停留0.5-1h； 植物叶片：在各级AL中停留2-4h； 注意：脱水应彻底，否则与二甲苯混合后混浊，必须倒回重脱水；如需过夜， 则停留在70%酒精中。
二、实验步骤（2）
透明（置换） 常用透明剂：二甲苯； 透明原则：低浓度到高浓度 （½ 二甲苯+ ½ 100%酒精 二甲苯 二甲苯） 透明时间：小鼠肝脏每级停留0.5-1h；植物叶片每级停留1-3h。
染色原理－－化学作用
化学作用的主要理论根据是染色剂的性质可分为酸性、碱性和 中性染色剂，而动、植物的细胞内—般也可区分为酸性(阴离子) 和碱性(阳离子)部分。当碱性染色剂溶液中的有色部分成为阳 离子时，就能与细胞的阴离子(酸件部分)较牢固地结合，当酸 性染色剂溶液中的有色部分成为阴离子时，就能与细胞内的阳 离子(碱性部分)较牢固地结合。 例如，细胞核，尤其是核内的染色质，主要由核酸组成，是酸 性的组成成分．故和碱性染色剂(苏木精)的亲和力很强，易于 着色。细胞质含碱性物质，故和酸性染色剂(伊红、曙红)的亲 和力很大，易于着色。
甲醛－醋酸－酒精液(FAA) 50%或70％酒精 90ml 冰醋酸 5ml 甲醛 5ml 特点：过去称”标准固定液“或”万能固定液“；是 组织形态中常用的固定液；同时兼作保存液。是植物 制片技术中较为良好的固定液和保存液。除单细胞和 丝状藻类外，均可用此液固定．也通用于昆虫和甲壳 类的固定。
实验时间石蜡切片及染色过程
实验时间石蜡切片及染色过程
石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。
苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。
这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。
经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。
实验步骤及注意事项
一、石蜡切片
1. 取材: 刀片要求锋利而薄,组织厚度约2—3mm, 大小1.5×1.5×0.2～0.3cm 为宜. 取材时间越快越好.
2. 固定: 组织取下后应立即放入 10%福尔马林(相当于 4%甲醛)固定.
注意：
(1) 固定液量应为组织块体积的 40 倍.
(2) 固定时间固定时间与使用的固定液种类和组织块大小, 温度等
有关. 一般为 3—24h.
(3) 固定温度大多可在室温固定, 在低温(4℃)时间应延长.
(4) 固定容器应大些.
3. 漂洗: 流水冲洗 2—10h.。
实验时间石蜡切片免疫组化实验（含详细步骤）
实验时间石蜡切片免疫组化实验（含详细步骤）
免疫组化是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究。
根据标记物的不同分为：免疫酶法、免疫荧光法、亲和组织化学法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自影法等。
其中前三种最常用。
实验原理
根据聚合酶技术把辣根过氧化物酶抗鼠或/和抗兔 IgG 分子结合在多聚酶上形成多聚物分子，其与待检的抗原特异性的结合后，加入底物显色。
实验步骤
1. 石蜡切片置于67 ℃ 烘箱中，烘片 2 小时，脱蜡至水，用 pH 7.4 的 PBS 冲洗三次，每次 3 分钟（3 × 3'）。
2. 取一定量 pH = 6.0 柠檬酸盐缓冲液，加入微波盒中，微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档微波处理 10 分钟，取出微波盒流水自然泠却，从缓冲液中取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用 PBS 冲洗2 × 3'（注：不是所有的抗体都需要微波修复的，视具体情况而定）。
石蜡切片实验报告
石蜡切片实验报告石蜡切片实验报告石蜡切片是一种常见的实验技术，广泛应用于生物学、医学和材料科学等领域。
本实验旨在探索石蜡切片的制备方法、切片技术以及应用领域。
一、石蜡切片的制备方法石蜡切片的制备方法主要包括固定、脱水、浸渗和包埋四个步骤。
首先，需要将待切割的样本进行固定处理，常用的方法有福尔马林固定和乙醛固定等。
固定处理的目的是保持样本的形态结构和化学组成，以便后续的处理。
接下来，进行脱水处理，将固定的样本逐渐置于浓度递增的酒精溶液中，以去除样本中的水分。
然后，进行浸渗处理，将脱水后的样本逐渐浸渗于石蜡中，以增加样本的硬度和刚性。
最后，进行包埋处理，将浸渗后的样本置于石蜡中，使其完全包裹。
制备好的石蜡块可以进行切片处理。
二、石蜡切片的切片技术石蜡切片的切片技术主要包括石蜡块修整、切片机操作和切片收集三个步骤。
首先，需要对石蜡块进行修整，将其切割成适当大小的块，以便放置于切片机中。
修整过程需要注意保持切片块的平整和规整，以确保切片的质量。
接下来，进行切片机操作，将石蜡块固定在切片机上，并设置好切片机的切割参数，如切片厚度和切割速度等。
切片机通常使用旋转刀片进行切割，通过旋转刀片与石蜡块的接触，将石蜡块切割成薄片。
最后，进行切片收集，将切割好的石蜡切片收集起来，可以用于后续的染色、观察和分析。
三、石蜡切片的应用领域石蜡切片在生物学、医学和材料科学等领域有着广泛的应用。
在生物学研究中，石蜡切片可以用于组织学研究，通过切割和染色石蜡切片，可以观察和分析生物组织的形态结构和细胞组织的分布情况，从而揭示生物组织的功能和病理变化。
在医学诊断中，石蜡切片可以用于病理学检查，通过切割和染色石蜡切片，可以观察和分析患者组织样本中的异常变化，为医生提供诊断依据。
在材料科学研究中，石蜡切片可以用于材料分析，通过切割和染色石蜡切片，可以观察和分析材料的微观结构和组分分布，从而揭示材料的性质和特性。
总结起来，石蜡切片是一种重要的实验技术，具有广泛的应用领域。
石蜡切片制作实验报告(一)
石蜡切片制作实验报告(一)石蜡切片制作实验报告概述本次实验是制备组织学切片中使用的石蜡切片。
石蜡切片是组织学研究中常用的一种切片制备方法，通过将组织固定、脱水、浸蜡以及切片等一系列步骤使组织固定在切片上，以供观察。
实验流程本次实验按照以下流程进行：1.取出组织标本，进行固定处理；2.固定后的组织在不断升级的酒精浓度溶液中脱水处理；3.使用排除气泡的炉子将组织浸泡至石蜡中，使其渐渐浸润；4.开始制作切片，将浸润的石蜡切片头制作成适当的角度，再使用切片机器进行切割即可。
具体步骤如下：固定处理1.取出标本，大小适中，保证可以在容器中完全浸润。
2.采用福尔马林-10%缓冲液进行固定，时间不宜过久。
3.在80%乙醇、95%乙醇、100%乙醇各中脱水15min，最后再脱水30min。
石蜡浸渗1.将组织标本放入去离子水中洗涤；2.放入甲醇2小时，2次更换甲醇；3.放入Pure-Lab99嵌入剂：甲醇(2:1、1:1、1:2)中渗透2小时，每次更换的比例变化，最后放在纯浸润剂中浸润15h以上。
4.上蜡，10min90℃，2h60℃接着重复2次10min90℃，最后重复最后一次的操作3次。
制作石蜡切片1.根据需要顺序排布组织标本，并将其固定在切片支架上。
2.制作切片头，可用吹软机将石蜡制软。
3.使用切片机器对浸润好的石蜡进行切割，厚度一般为5-8μm。
实验结果经过以上步骤，我们制得的石蜡切片呈现出清晰、平整、稳定的状态，对组织结构的观察达到了预期目的。
总结本次实验是比较基础的组织学实验，对于相关领域的学习和研究有很大的帮助。
在实验过程中，需要注意每一个步骤的顺序和时间，并根据实际情况做出适当的调整。
同时，在实验结束后需要及时清理相关设备和处理化学废品，保持实验室的安全和整洁。
参考文献•Junqueira, L. C., Bignolas, G., & Brentani, R. R. (1979).Picrosirius staining plus polarization microscopy, aspecific method for collagen detection in tissuesections. The Histochemical Journal, 11(4), 447-455. •Kohno, Y., & Ohtani, S. (1996). Aging of the adrenal glands: microarchitectural changes and cellproliferation in the rat adrenal cortex underadrenocorticotropic hormone stimulation. Archives ofHistology and Cytology, 59(4), 411-422.•Stearns, M. E. (1989). Histology and histochemistry of human prostate. The Prostate, 14(4), 303-317.致谢在实验过程中，我们受到了教师和同学们的悉心指导和帮助，在此谨向他们致以最诚挚的感谢。
石蜡切片实验室方法
材料准备：（50ml小烧杯若干，50ml量筒，10ml试管20个）将KH、LS归为一组，RS、WS归为一组。
事先将固定液中的材料取出，分别剪出一定数量的花梗（一般为10个），并分别放置于装有固定液的10ml离心管中。
脱水：30%乙醇30min（此步可略去），50%乙醇60min（在烧杯中将材料挤出气泡），70%乙醇30%（亦可较长时间），85%乙醇30min，95%乙醇30min，100%乙醇30min，100%乙醇30min 透明：50%乙醇+50%二甲苯60min，二甲苯60min，二甲苯40min浸蜡：烘箱65℃，50%石蜡+50%二甲苯1-2h，石蜡2h，石蜡若干天包埋：烘箱65℃，用新鲜石蜡包埋（方形纸盒），要将正反面放置好，缓慢移动至凉水中，然后标记好材料，冷水中放至十分钟后拆除纸盒，将蜡块放至阴凉处2-3天后切成小蜡块，切好的蜡块放入自封袋。
切片：将削好的蜡块固定在切片台上，调整切片厚度为3um，匀速转动切片机，切好的蜡片用刀片转移至温水中（水温不烫手）展片。
在干净的载玻片上滴一滴粘片剂，用手涂匀，然后将水中的蜡片捞至载玻片烤片：将上述切片放至烘箱，温度调到42℃，烘烤3h，若不立即染色，则将切片放在阴凉处脱蜡：将烘烤好的切片放至二甲苯5min——1/2二甲苯+1/2乙醇5min——100%乙醇5min——95%乙醇5min——85%乙醇5min——70%乙醇5min——50%乙醇5min——蒸馏水5min染色：1%番红（用胶头滴管滴）染色30min——蒸馏水2min——50%乙醇2min——70%乙醇2min ——85%乙醇2min——0.5%固绿（用胶头滴管，不超过1min）——100%乙醇30s-60s——100%乙醇5min——1/2二甲苯+1/2乙醇5min——二甲苯5min封片：趁二甲苯还未干，滴加适量中性树胶，用盖玻片盖好，自然风干。
实验十二、石蜡切片法(一)取材、固定、洗涤、脱水
• 洗 涤:是洗去渗入细胞内部的固定液。因材料中的固 定液有的会妨碍染色；有的会发生沉淀或结晶，影响观 察；有的会继续作用，使材料变坏等。 • 脱 水：材料经洗涤后含有大量的水分，必须用脱水 剂脱尽里面的水分，以利于材料的透明和制片的保存。 因为水分会使材料分解，而且透明剂与水是不相混合的， 只有在完全无水的情况下，透明剂才能完全透入。
二、试剂与器材 1. 试 剂：10%中性福尔马林固定液、各级乙醇（50% 70%、 50%、70% 50% 70% 85%、95%、100%） 2.器 材：解剖刀、解剖针、剪刀、镊子、解剖盘、 单面刀片、培养皿、吸管、指形管、 橡皮圈、软木塞、胶布、塑刀片切取材料。 2．固定：将已切好的材料放入10%的福尔马林溶液中 固定12-24小时。固定剂一般为组织块体积的10-15倍。 3．洗涤：材料自固定液中取出，放入指形管，加入 半管水，用纱布将管口扎紧，置于水槽内，进行流水 冲洗。流水冲洗时间一般需要12-24小时。 4．脱水：材料自低浓度至高浓度的酒精进行脱水。 一般经50%、70%、85%、95%直至纯酒精。每级停留 约30分钟至1小时。如需过夜，应停留在70%酒精中。
四、注意事项 取材的注意事项： • 材料应新鲜； • 动作要迅速； • 取病理材料时，应加对照。 固定的注意事项 • 固定液以新配为好 ； • 固定的时间依材料的种类、性质、大小等而定； • 材料固定完毕，保存于加盖的容器，贴上标签。
洗涤的注意事项 • 洗涤的时间、方法视固定液的种类等而定； • 水洗时，水流不宜太急。 脱水的注意事项 • 脱水必须在有盖的玻璃器皿中进行，防止吸收空气中的水分；
实验十二石蜡切片法一取材固定洗涤脱水一实验原理用于制片的动植物材料应选择新鲜的用陈腐材料制片往往不能反映材料的真正情况
中学生物实验技能实验报告——石蜡切片的制作
东北师范大学生命科学学院中学生物实验技能实验报告
名称：石蜡切片的制作
姓名：路路
学院：生命科学学院
专业：生物科学（师范）
年级：10级
学号：1241410044
【实验名称】石蜡切片的制作
【实验目的】了解石蜡切片的用途，并掌握其制作过程和方法。
石蜡切片（paraffin section），组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。
石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。
例如在医学上，常常用石蜡切片做病例分析和诊断。
【实验步骤及原理】石蜡切片法包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。
一般的组织从取材固定到封片制成玻片标本需要数日，但标本可以长期保存使用，为永久性显微玻片标本。
以下即为石蜡标本制作的流程图：。
石蜡切片实验报告
石蜡切片实验报告石蜡切片实验报告实验目的：熟悉石蜡切片技术的操作方法，了解石蜡切片制备的过程，并观察切片的结构。
实验原理：石蜡切片是一种常用的组织学检查方法，常用于生物组织的切片制备。
石蜡可以通过渗透，浸渍和固化来固定生物组织，并使其变硬，便于切割。
切片制备过程中，石蜡会填充生物组织的间隙，使组织保持形状和结构，便于显微镜下的观察。
实验材料：1. 组织样本：动物组织片或植物组织片2. 10% 罗丹明B 染液3. 显微镜玻片和盖玻片4. 切片刀、切片夹、玻璃棒5. 石蜡实验步骤：1. 取出石蜡块并加热至熔化状态。
注意，石蜡的熔点通常在60-65°C。
2. 取出组织样本，并用10% 罗丹明B 染液浸泡片段10-15分钟，以染色组织。
3. 将熔化的石蜡倒入切片模具中，随后将组织样本放入石蜡中，确保完全浸没。
4. 将切片模具放入冷却器中，降温至室温，使石蜡凝固。
5. 取出切片模具，用切片刀将切片切下。
切割时，角度和刀的质量对切片质量都有影响，所以操作要尽量快速、准确。
6. 将切片用切片夹固定在显微镜玻片上。
7. 用玻璃棒平均地将切片摊开，以避免切片叠合。
8. 将切片放入加热板上烘干至石蜡融化。
9. 取出加热板，用盖玻片覆盖在切片上。
实验结果：通过显微镜观察切片，可以清晰地看到组织的细胞结构和细胞器，以及组织之间的关系。
切片的质量和染色效果会受到操作技术和实验条件的影响。
实验总结：本实验通过熟悉石蜡切片技术的操作方法，使我了解了石蜡切片制备的过程，并通过观察切片的结构，加深了对生物组织的了解。
同时，实验也提示了切片制备中的一些注意事项，例如切割角度和切片刀的质量对切片质量的影响等，这将为今后的实验操作提供有益的参考。
石蜡切片免疫组化实验方法
石蜡切片免疫组化实验方法预处理：1.收集组织样品：选择实验需要的组织样品，如病变组织或动物组织，固定在4%的中性缓冲福尔马林溶液中，通常时间为24小时。
2.脱水：将固定的组织样品进行脱水处理，使用升级的乙醇浓度，如70%乙醇、85%乙醇和95%乙醇各浸泡5-10分钟，然后在无水乙醇中浸泡2-3次，每次浸泡时间为10分钟。
3.渗透剂处理：将组织样品置于染料渗透剂（如苯酚甲醛、苯酚）中进行渗透处理。
渗透剂的选择根据实验需要的类型来确定。
4.包埋：将已经渗透处理的组织样品放入合适大小的模具中，加入石蜡进行包埋，通常使用两次石蜡浸渍15-20分钟，然后定位标本，放入包埋模具中。
切片：1.切片机调节：根据具体的切片机和刀片的不同，调节适当的角度和切片速度。
2. 切片：将包埋好的组织块放入切片机的切片盘中，以适当的角度切出厚度约为4-6um的石蜡切片，切片时需要保持刀片的清洁，避免刮伤组织。
3.切片回收：使用刀片回收装置将切下的切片轻轻回收至水中，再将切片转移到预处理盒中。
染色：1. 去蜡：将石蜡切片放入脱蜡溶液（如xylene）中进行脱蜡处理，每个浸泡站点持续3-5分钟。
2.脱水：将石蜡切片从脱蜡溶液中取出，放入浓度递减的乙醇溶液中，分别浸泡5分钟，如95%乙醇、70%乙醇和纯水。
3.抗原修复：为恢复组织切片的抗原表位，可以选择酶消化、高压加热或微波处理等方法来进行抗原修复，常用的抗原修复方法包括热处理和酶切法。
4.屏障消除：为了阻止非特异性结合，需要进行屏障消除，使用5%非脂干奶粉或血清进行预阻断，通常需要在37°C孵育1小时。
5.一抗处理：将相应的一抗加入切片上，覆盖玻璃片，通常需要在4°C下孵育过夜。
6.洗涤：用洗涤缓冲液对切片进行洗涤，通常重复3次，每次5分钟。
7.二抗处理：将荧光标记的二抗加入切片上，覆盖玻璃片，通常需要在室温下孵育1小时。
8.洗涤：用洗涤缓冲液对切片进行洗涤，通常重复3次，每次5分钟。
石蜡切片实验报告(一)
石蜡切片实验报告(一)石蜡切片实验报告摘要•石蜡切片实验是一种常用的组织学技术，用于研究生物组织的结构和功能。
•本报告通过对石蜡切片实验的描述和结果分析，总结了该实验的步骤和注意事项。
引言•石蜡切片实验是一种常用的技术，被广泛应用于医学、生物学等领域。
•本报告旨在总结石蜡切片实验的基本原理、步骤和注意事项，并分析实验结果。
实验原理•石蜡切片实验是一种将生物组织固定、浸泡、包埋和切割的方法。
•通过该实验可以获取生物组织的切片，用于观察细胞结构和功能。
实验步骤1.生物组织固定：将待实验组织固定在适当的固定液中，以保持细胞的形态。
2.组织浸泡：将固定后的组织浸泡在逐渐浓度上升的酒精溶液中，以去除水分。
3.组织包埋：将浸泡后的组织置于熔化的石蜡中，使其逐渐渗透和包埋。
4.组织切割：将包埋好的组织用切片机切割成薄片，通常为5-10微米厚。
5.切片染色：将切割好的组织片进行染色，以突显细胞结构和功能。
6.切片封装：将染色好的组织片放置在玻璃载板上，并用封片剂封装，以保护切片。
实验注意事项•实验过程中需注意个人安全，避免与切割仪器和刀片直接接触。
•切片时需控制切片机的速度和厚度，以获得理想的切片质量。
•染色时需掌握适当的染色时间和浓度，避免染色过度或不足。
实验结果与讨论•通过石蜡切片实验，我们成功获取了生物组织的切片。
•切片经过染色后，细胞核、细胞质和细胞器可以清晰地观察到，有助于进一步研究组织的结构和功能。
•实验结果表明，石蜡切片实验是一种可靠、高效的技术，适用于各种生物组织的研究。
结论•本报告总结了石蜡切片实验的步骤和注意事项，并分析了实验结果。
•通过石蜡切片实验，我们可以观察和研究生物组织的结构和功能，为相关领域的研究提供重要数据支持。
石蜡切片实验报告
石蜡切片实验报告实验目的，通过石蜡切片实验，观察细胞的形态结构和组织构成，掌握石蜡切片技术的操作方法，提高细胞学实验操作技能。
实验仪器与试剂，显微镜、石蜡切片、染色剂、玻璃片、显微镜载玻片、酒精、甘油、显微镜盖玻片。
实验步骤：1. 取一块石蜡切片，将其放置在玻璃片上，用酒精浸泡片切片5分钟，使其软化。
2. 用刮刀将石蜡切片刮至薄如纸张。
3. 将切好的石蜡切片浸泡在染色剂中，染色10分钟，使细胞染色。
4. 将染色后的石蜡切片放入酒精中脱水，然后放入甘油中固定。
5. 取一个显微镜载玻片，将固定好的石蜡切片放在载玻片上，盖上显微镜盖玻片。
6. 将载玻片放置在显微镜上，调节倍率，观察石蜡切片下的细胞结构。
实验结果与分析：经过显微镜观察，我们发现石蜡切片下的细胞结构清晰可见，细胞核、细胞质、细胞壁等结构清晰可辨。
通过不同染色剂的染色，我们可以清晰地观察到不同细胞器的形态和分布，比如细胞核的形态、染色颜色的深浅等。
此外，我们还可以观察到细胞在不同发育阶段的变化，对于研究细胞生物学和组织学具有重要意义。
实验总结：通过本次石蜡切片实验，我们掌握了石蜡切片技术的操作方法，提高了细胞学实验操作技能。
在实验中，我们需要注意石蜡切片的切割技巧和染色方法，以保证观察到的细胞结构清晰、准确。
在未来的实验中，我们将继续加强对细胞结构和组织构成的观察，不断提高实验操作技能，为细胞生物学和组织学的研究工作做出更多的贡献。
参考文献：1. 高等学校生物学实验教学指导委员会. 生物学实验指导[M]. 北京，高等教育出版社，2003.2. 张三等. 细胞生物学实验指导[M]. 上海，上海科学技术出版社，2005.。
石蜡切片方法
试验三、石蜡切片制作方法一、取材1．方法：取材应根据需要，用锋利的刀片从所需部位上切取一小块放在固定液中固定。
植物组织应根据实际情况，细的根茎和窄的叶片，可取3-5mm长一小段；粗的根、茎和宽的叶片，也可以切取一部分进行固定。
2．注意：所选材料要具有典型性、代表性。
材料要新鲜，保持生活状态，防止失水。
取材动作要迅速，不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化。
二、固定1．方法：切取新鲜的材料，应按材料的种类，大小，性质和制作要求，立即将材料投入固定液中加以固定，使其形态结构和成分被化学试剂固定下来，与生活时保持相仿。
固定的时间，视材料的种类，大小，性质，固定液的种类与性质，渗透力的强弱等而定，可以从1-2小时到十几小时或二十几小时，甚至可以长到几天。
一些小的材料，仅需几十分钟。
例如把洋葱根尖固定与FAA固定液里，固定时间为12-24小时。
FAA固定液：50-70%酒精90ml，福尔马林（37-40%甲醛水溶液）5ml，冰醋酸5ml。
固定时间2-24小时，可作为保存剂长期保存，中间需换固定液。
固定液需放室温阴凉处储藏，也可放0-4℃下储藏。
2．注意：固定材料时固定液必须充足，一般为样品的20-30倍。
一般固定液都以新配为好，配好后应储存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化学变化，失去固定作用。
三、冲洗1．方法：将材料放入指管或广口瓶，并加入半管水，用纱布将管口扎住，然后倒置于水槽中，这样可以使指管半沉半浮于水中。
打开水龙头，让材料按冲洗的时间在流水中冲洗。
注意水流不宜太急，以免冲坏材料。
流水时间可根据材料和固定液的情况而定，一般需要12-24小时。
2．注意：固定液为酒精或酒精混合液，一般不冲洗。
若需冲洗则必须用与固定的酒精相近浓度的酒精冲洗。
含有铬酸、重铬酸钾的，必须用流水冲洗。
冲洗时间应与固定时间相同或更长。
四、脱水1．方法：脱水一般多使用酒精，为了不使材料急剧收缩，应用不同浓度的酒精，自低浓度到高浓度逐级脱水。
石蜡切片实验计划1
转基因实生苗石蜡切片的制作与染色1.固定组织固定即杀死并保存组织内细胞的形态、结构及组成，使其与生活时相似。
本实验采用FAA固定液（70％乙醇：冰醋酸：福尔马林＝90：5：5）分别固定若干野生型和转基因实生苗的叶片、幼茎和老茎3~4d，中间换一次固定液。
2.冲洗冲洗目的是除去材料中的固定液。
本实验采用70%酒精洗涤法，材料取出后直接投入适度酒精的小瓶中，材料与酒精体积比为1:10左右。
开始换洗两次，分别30min和60min，最后在70%酒精中过夜。
3.脱水脱水是因为植物组织中含有大量的水分，不能直接浸入石蜡，所以必须脱去组织中的所有水分。
本实验以乙醇为脱水剂，各级浓度为70%、83%、95%和100%。
开始每级停留时间为30min，脱水至纯酒精时，需要脱水2~3次，每次30~60min，注意此时瓶盖必须干燥。
4.透明组织经非石蜡溶剂脱水后，一定要经过透明剂（石蜡溶剂）透明，才能浸石蜡。
这一方面可增强组织的折光系数，并能使石蜡顺利进入组织，还可与最后的滴加的封藏剂混合进行切片的封藏。
最常用的透明剂为二甲苯，它透明力强，可与乙醇互溶，又是石蜡的溶剂，但不溶于水。
本实验采用二甲苯作为透明剂，中间经过两个级度为1/2二甲苯和二甲苯，每次时间为60~120min，纯二甲苯中更换2~3次。
5.浸蜡与包埋所谓石蜡切片法，即用石蜡包埋组织块，再进行切片和染色的制片法。
因此，脱水透明之后，接下来就是浸蜡、冷却将组织块包埋在石蜡中。
植物材料用的石蜡熔点为54～58℃之间。
5.1 熔腊取旧蜡、新蜡和蜂蜡（比例约为20：4:1）盛于大烧杯中，放入65℃烘箱中融化，然后放置室温中凝固，反复三次后过滤备用。
注意摇晃溶解。
5.2 浸蜡和换蜡植物组织的透蜡过程必须缓慢进行，所需的时间比较长，约需1～2d。
其方法如下：①将组织连同1/3二甲苯一起倒入小青霉素瓶中；②轻轻倒入熔解的石蜡（熔点52～54℃）。
这样，石蜡就在二甲苯的上层凝固起来；③将小青霉素瓶放入37℃左右的温箱中，使石蜡徐徐熔解到饱和为止，约需2d；④将小青霉素移入56～60℃的恒温箱内，待石蜡熔解后，倒去含有二甲苯的石蜡，以后每隔1h左右换已熔化的纯蜡一次，共换纯蜡3次即可进行包埋。
石蜡切片实验报告
石蜡切片实验报告一、实验目的本次实验旨在研究石蜡切片的制备方法及其在显微镜下的观察。
二、实验原理石蜡是一种固体烷基烃化合物，常用于组织学中的切片制备。
在制备石蜡切片时，需将所需组织样本固定于载玻片上，并使用石蜡作为嵌塑剂进行与样本的包埋。
待到石蜡固化后，便可使用石蜡切片机或手动微调器进行切片。
切片后，可对切片进行染色及显微镜观察。
三、实验步骤1、取一张干净的载玻片，涂上少量的胶水并晾干。
2、取所需组织样本进行处理。
如为植物组织，可直接在生长期较长的表皮或叶片上进行取样；如为动物组织，可通过手术操作或解剖等方法获取所需组织。
取出组织样本后，清洗干净并切成合适大小。
3、将固定好的组织样本倒入石蜡中，将组织样本包埋于石蜡内。
4、等待石蜡凝固，调整切片机或手动微调器，进行切片。
5、将石蜡切片玻片用甲苯或二甲苯进行脱蜡。
6、选择所需颜色及染料进行染色。
7、将染色后的玻片用苏木精固定，晾干后进行显微镜观察和取像。
四、实验结果通过本次实验，成功制备出石蜡切片，并选择了适合的颜色进行染色。
显微镜观察后，能够清楚地看到组织细胞、细胞核等结构，对于组织学研究具有很大的帮助。
五、实验结论本次石蜡切片实验证明了石蜡作为组织学研究中的嵌塑剂是非常重要的。
选择合适的嵌塑剂与染料，在切片之后可以得到良好的显微镜照片，有助于对细胞和组织的进一步分析和研究。
总之，石蜡切片制备是组织学研究的一个重要方法，这个实验的成功进行，不仅让我们深入理解了组织切片的制备过程，也提高了我们对组织细胞结构的深入认识。
石蜡切片实验报告
石蜡切片实验报告石蜡切片是一种常用的组织学实验技术，已经被广泛应用于医学、生物学等领域。
本实验报告将详细介绍石蜡切片实验的步骤、原理以及实验中可能遇到的问题和解决方案。
第一部分：实验步骤石蜡切片实验的步骤主要包括标本制备、石蜡浸渍、切片和染色几个关键环节。
首先，我们需要收集适当的组织标本，如动物器官或植物组织。
这些标本需要经过固定处理，通常使用福尔马林进行固定，然后进行脱水和透明化处理，最终被浸渍进入石蜡中。
在石蜡浸渍的过程中，我们需要将标本逐渐浸入温度逐渐升高的石蜡中，以使其充分浸渍并软化。
这个过程中需要注意温度的控制，同时还要避免气泡的产生。
一旦标本被完全浸渍在石蜡中，我们可以使用石蜡切片机进行切片。
在切片过程中，我们需要调整切片机的切片厚度，通常为4-6微米。
此外，为了得到较好的切片质量，我们还需要确保刀片的锋利度和切片机的切片速度适当。
切片完成后，我们需要将切片置于载玻片上，并进行染色处理。
染色可以提高组织的对比度，使细胞和组织结构更加清晰可见。
常用的染色方法包括血液学染色、核染色和生物标记染色等。
第二部分：实验原理石蜡切片实验的原理是基于石蜡的高渗透性和易于切割的特点。
通过浸渍和固化过程，标本会充分浸泡在石蜡中，使其变得坚硬而易于切割。
切片机通过旋转刀片来切割标本，形成薄而均匀的切片。
石蜡切片实验的目的是为了观察和研究细胞和组织的结构。
通过切片和染色，我们可以清晰地看到细胞的形态、组织的排列以及细胞内的细胞器结构。
这对于研究疾病的发生机制、药物治疗的效果评估以及生物学基础研究等方面都具有重要意义。
第三部分：实验问题与解决方案在石蜡切片实验中，可能会遇到一些常见的问题，如切片不均匀、切片断裂或组织变形等。
这些问题可能会影响实验的结果和观察效果。
为了解决这些问题，我们可以在实验过程中采取一些措施。
首先，在标本制备过程中，我们可以控制好固定时间，避免过长或过短的固定时间导致的组织变形。
其次，在切片机操作过程中，我们需要确保刀片的锋利度和切片机的切片速度适当，以避免切片不均匀或切片断裂的问题。
石蜡切片实验报告
石蜡切片实验报告
实验目的：
1. 掌握石蜡切片的制备方法；
2. 观察石蜡切片下细胞结构的形态变化。
实验器材：
1. 细胞样品（如植物组织或动物组织）；
2. 甲苯；
3. 石蜡；
4. 切片机；
5. 切片夹；
6. 显微镜。
实验步骤：
1. 准备样品：取一块大小适中的组织样品，将其固定在甲醛中。
2. 组织脱水：将固定的组织样品放入不同浓度的醇中，逐渐提高浓度，直至浓度达到100%的醇。
3. 渗透：将脱水后的组织样品浸泡在甲苯中，使其充分渗透。
4. 包埋：将渗透后的组织样品放入熔化的石蜡中，使其完全包埋，并将其固化。
5. 制备切片：将固化的组织样品放入切片机中，用切片夹固定，并使用切片刀将其切割成薄片。
6. 切片上染：将切片浸泡在甲醛中进行染色处理，使细胞结构更加鲜明可见。
7. 盖玻片：将染色后的切片移至玻片上，并在上方加一两滴甲醛。
8. 干燥：将盖玻片放入带有热盖玻片机中，将其加热至切片周
围甲醛完全蒸发。
9. 观察：将干燥后的切片放置在显微镜下，利用透明光源进行观察。
实验结果与讨论：
经过石蜡切片制备方法处理后的样品，能够更加清晰地观察到细胞的形态和结构。
石蜡切片使细胞得到了固定和保护，使细胞结构更加稳定，方便观察和研究。
同时，切片上染的染色处理也增强了细胞结构的对比度，使其更加明显可见。
结论：
石蜡切片制备方法可以有效地固定和保护细胞结构，使其在显微镜下观察得更为清晰和明确。
通过石蜡切片制备方法，可以进一步探究细胞结构和功能，为细胞学研究提供基础。
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四、实验结果
包埋后的石蜡快应为均匀的半透明状，蜡块中没有 气泡。
包埋材料摆放的位置是否符合要求？
修块效果：每个蜡边与材料平行，蜡边的上下左右摇 平行。
切片效果：得到厚薄均匀的蜡带，蜡带无破损。 展片效果：展片后蜡带或蜡片平整，无气泡、粘附牢 固，蜡带略呈透明状，后续制片不易脱落。
五、作业
实验完毕，每人交包埋块一个，在纸盒上写
上材料名称及自己的姓名和日期；
实验完毕，每人交玻片两张，用铅笔在载玻
片上写上材料名称及自己的姓名和日期；
实验报告（姓名和日期）。
苦味酸液（波茵氏液）
甲液： 1％铬酸 10％醋酸 乙液： 甲醛 苦味酸饱和水溶液 50ml 20ml 25ml 75ml
包埋过程中易出现的问题及解决办法
问题：包埋后的石蜡块应为均匀半透明状，有时出现白色浑浊 结晶（像雪花一样）部分，这样在切片时就有妨碍，不易切出 薄的切片。 原因：①组织内部或石蜡中混有透明剂；②脱水不干净；③石 蜡本身品质不良；④组织块移入纸盒时动作太慢，周围的石蜡 已成凝固状态；⑤冷却用水温度不够低，石蜡凝固太慢。 解决办法：属于前三个原因者应在包埋之前就须注意；属于后 二个原因者，可将包埋块再投入Ⅲ蜡中熔化后重新包埋，但必 须注意熔化包埋过的石蜡块的时间不宜过久。
实验六 石蜡切片法
—— 包埋、切片和贴片
石蜡切片法
石蜡切片法是显微制片技术中最常用的一种方法，除了
藻类、菌类、木材和骨骼外一般的材料均可以使用，既 可制成较薄的切片，使材料各部分都清晰可见，同时也
可制成连续切片，观察材料的动态发生及层次，所以，
它在显微制片技术中占有非常重要的地位，必须掌握， 同时也是进行透射电镜观察超薄切片的基础。
脱水（常用脱水剂：乙醇；脱水原则：低浓度到高浓度）（目的？） 脱水时间：视材料的性质、大小而定 小鼠肝脏：在各级AL中停留0.5-1h； 植物叶片：在各级AL中停留2-4h； 注意：脱水应彻底，否则与二甲苯混合后混浊，必须倒回重脱水；如需过夜， 则停留在70%酒精中。
三、实验步骤（2）
透明（置换，作用？） 常用透明剂：二甲苯； 透明原则：低浓度到高浓度 （½ 二甲苯+ ½ 100%酒精 二甲苯 二甲苯） 透明时间：小鼠肝脏每级停留0.5-1h；植物叶片每级停留1-3h。
是常用的良好固定液，广泛应用于一般动物组织、昆虫组织、无脊 椎动物的卵和幼虫，以及胚胎学材料的固定。也适用于裸子植物的 雌配子体和被子植物的胚囊的固定。
此液穿透迅速而均匀，使组织收缩少，不使组织变硬变脆，着色良 好。一般动物组织固定12—24h，小块组织数小时即可。固定后直接 入70％酒精中洗去黄色，但留一点黄色对染色并无妨碍。植物材料 的固定时间为12—48h。
2）将已经涂好蛋白黏贴剂的载玻片放在纸面上，并滴加数滴蒸馏水；
3）用刀片将蜡带切成许多小段，每段的长度应依照盖玻片的长度为准， 一般应比盖玻片短约1/5-2/5，因蜡片加温后要伸长1/5-2/5，在分段时应 从蜡片的交界处分开； 4）用毛笔将蜡片轻轻移到载玻片上（必须注意蜡片的光面朝下）； 5）将载玻片平行地放置在酒精灯的上方，微热，使切片伸展摊平，如 发现散开，请重新用镊子排列整齐； 6）晾干待用。
切片过程中出现问题的一般原因和补救办法 ：
一、蜡带弯曲不直 原因：1.蜡块上下两边不平行，或与刀口不平行；2.刀口锋利不一，局 部产生差异；3. 材料未居蜡块正中央。
补救办法： 1.取下台木，将蜡块两边修平，调节夹物部，使两者平行。 2.移动刀片，改用新刀口。3. 用刀片切去部分石蜡，使材料居中。
浸蜡： 要点：使石蜡完全浸入细胞的每个部分，同时要使石蜡紧密地贴在细胞 壁的内外，成为不可分离的状态； 原则：低温 高温、低浓度 高浓度
三、实验步骤（3）
包埋：就是将已经浸好蜡的材料连用熔化的石蜡一起倒入定形的纸 盒中，使之凝固。
包埋前折纸盒 包埋时将纸盒放在已经加热的温台上，从温箱中取出盛放纯石蜡的蜡杯， 倒入包埋用的纸盒中，取出存放材料的蜡杯，迅速且轻轻地用温镊子夹 取材料平放于纸盒底部（注意切面朝下放置），再用温镊子轻轻拨动材 料，使之排列整齐。然后轻轻将纸盒两侧的把手提起，慢慢平放于水盆 的水面上，待蜡盒内的石蜡表面凝固，即可将纸盒向一侧倾斜，使冷水 从一边浸入纸盒，并立即使它沉如水中，使盒中包埋块迅速凝固，待石 蜡完全凝固（约30min）后即可取出备用。
石蜡切片的主要过程
取材——固定保存——冲洗——脱水—— ——透明——石蜡透入——包埋——修 块——切片——贴片——复水——染色— —脱水——封藏——观察保存
（一）包埋
（二）修块、切片、贴片
（三）染色、封藏
一、实验目的
掌握动植物材料石蜡切片的方法及要求；
熟练掌握石蜡切片的关键步骤——包埋。
甲醛－醋酸－酒精液(FAA) 50%或70％酒精 90ml 冰醋酸 5ml 甲醛 5ml 特点：过去称”标准固定液“或”万能固定液“；是 组织形态中常用的固定液；同时兼作保存液。是植物 制片技术中较为良好的固定液和保存液。除单细胞和 丝状藻类外，均可用此液固定．也通用于昆虫和甲壳 类的固定。
三、实验步骤（4）
修块：削去表面的包埋剂，露出组织，然后在组织的四周以和水平 面成45度的角度削去包埋剂，修成金字塔形，顶面修成梯形或长方 形，每边的长度为0.2mm～0.3mm ；
修块的目的： 1）使切成的蜡带成一直线，不发生弯曲； 2）每个切片组织的距离接近，便于镜检或作连续切片。
要求：组织块必须 ①上下平行，② 但左右的蜡、上下的蜡不要
学习旋转切片机的使用方法，熟练掌握石蜡 切片的关键步骤——切片。
二、实验材料及用品
实验材料：植物叶片、小鼠肝脏
实验用具：载、盖玻片；温箱、包埋盒、水盆 等、切片机、毛笔等。 实验药品：石蜡、蛋白黏贴剂。
三、实验步骤（1）
取材（根据制片目的和要求而定，代表性）； 杀死和固定： 冲洗 小鼠肝脏经苦味酸固定液固定后必须使用70%或50%AL进行冲洗； 植物叶片经FAA固定液后使用流水进行冲洗 50% 70% 80% 95% 100%AL 100%AL 小鼠利用引颈致死法迅速杀死，取其肝脏，用生理盐水冲洗干净后分割成 0.5~1cm×0.5~1cm×0.3cm 小块投入Bouin’s固定液中进行固定； 植物叶片采集后分割成1~1.5c㎡小块后投入FAA固定液中进行固定；
太多或太少；③正方形或长方形，可各切去一角，以便识别。
三、实验步骤（5）
切片：用锋利的刀片，将包埋好的材料切成所需要的厚度的薄片， 一般用专门的切片机和切片刀。 切片机的结构： 控制切片厚薄的微动装置； 供装切片刀的夹刀部分；
供装置组织块的夹物部分。 切片机的类型根据结构分为： 滑行式切片机：夹刀部分是滑动的，而夹物部分是固定的，可上 下升降； 旋转式切片机：夹物部分式上下移动，前后推进，而夹刀部分则 固定不变。
五、材料出现裂隙、破碎或脱落。
原因：1.脱水不干净；2.透明剂残留；3.石蜡透入时温度过高； 4.材料太硬或太粗。
补救办法： 1.无法补救；2.重新包埋；3.无法补救；如由于脱 水剂，透明剂引起的可改用正丁醇，松油醇等进行脱水和透明； 4.软化组织。
三、实验步骤（7）
贴片：
要求：1）贴附牢固，在染色时不易脱落；2）使皱褶的蜡片伸展平整 步骤： 1）在载玻片上涂上蛋白黏贴剂；
切片注意事项：
操作时一定要小心，随时注意关好停刀轧，以防刀夹突然下降伤 及手指，在换蜡块时，必须先关停刀轧，才能取下蜡块；
切片时不要对着蜡带讲话，要防风，以免将蜡带吹散； 根据材料要求，注意调节合适的切片厚度； 切片完毕后，将刀取下擦净，放入盒内保存，同时用毛笔清洁切 片机各部分，将刀架、夹物器等退回原处固定。
脱水不净，用二甲苯透明后，将发生下列不良后果：
（1）材料：材料内仍留有微量水分，二甲苯就进不去，因此石蜡也不能透 入，切片后将在蜡片上出现空洞，影响结果。 （2）切片：切片内留有微量水分，在封片以后，就会发生乳白色的云雾状 ，在显微镜下观察时，可见许多密集水珠把组织掩盖，切片就作废了。
二、切片分离，不能连成带状或卷起成圆筒状。
三、切ห้องสมุดไป่ตู้粘附于刀片上，皱褶在一起。
切片过程中出现问题的一般原因和补救办法 ： 四、切片纵裂横波。厚薄不均匀。
原因：1.刀口有缺口；2.石蜡块中有颗粒及杂质；3.刀口有细纤 丝或碎屑；4.刀和台木未夹紧；5.组织块太硬。 补救办 法： 1.可移动刀片；2.将颗粒挑去；3.清洁刀口；4.旋 紧螺旋；5.在水中浸泡。
三、实验步骤（6）
切片的步骤：
将已经修整好的蜡块装在样品固定器上，并固定好； 将切片刀安装在切片机的刀架上，调节切片刀的角度为15°左右，并固 定好； 调节切片的厚度：棉花叶片：8-10um；小鼠肝脏：6-9um； 调节蜡块与刀口的距离：打开刀架固定钮，推动刀架，使切片刀刃贴近 蜡块表面（从侧面观察），再固定刀架； 切片：打开停刀轧，开始切片，右手握住手轮柄，顺时针方向摇动，每 摇动一圈就切下一片，切下的蜡片粘在刀口上，待第二片切下时就连在 一起，连续摇转手轮就可以讲切下的蜡片练成一条蜡带。待蜡带有一定 长度，左手执毛笔，将蜡带抬起，边摇边移动蜡带。待蜡带长至2030cm，停止摇动，用右手执另一支毛笔顺刀口方向拔下蜡带，平放于 白纸上，靠刀面较光滑面向下，较皱褶的一面向上。
原因：1.室温过低。2.石蜡过硬。3.材料边缘留蜡太少。4. 刀的角度不 合适。 补救办法： 1.在切片机上安一盏电灯加温。2.用手指在蜡块面上磨擦。 3.重新包埋。4.矫正刀的角度。 原因：1.室温过高。2.石蜡过软。3.刀口上留有一层石蜡。4.刀口钝。 补救办法： 1.在早晚凉爽时切。2.将蜡块投入凉水中稍浸。3.用二甲苯 拭去石蜡。4.磨刀或移动刀口。