连翘药材含量测定验证
YL-20430连翘原料检验操作规程
（W1-W0）×V0
浸出物% =×100%
W样×（1－水分）×V1
式中：
W0------- 蒸发皿的重量（g）。
W1-------- 浸出物与蒸发皿的重量（g）。
W样------- 样品的重量（g）。
V0-------加溶媒体积（ml）。
V1-------取续滤液的体积（ml）。
【含量测定】
计算公式:
V0
挥发油=×100%
式中: W样
W样------- 样品的重量（g）。
V0-------读取挥发油体积（ml）。
6.1.2
6.1.3
6.2.1
6.2.2
5.3
5.3.1
5.3.2
5.3.3
标准依据：《中国药典》2020年版一部及四部
【性状】
仪器：直尺。
方法：取本品,置日光下观察,并用直尺测量:本品呈长卵形至卵形，稍扁，长1.5～2.5cm，直径0.5～1.3cm。表面有不规则的纵皱纹和多数突起的小斑点，两面各有1条明显的纵沟。顶端锐尖，基部有小果梗或已脱落。青翘多不开裂，表面绿褐色，突起的灰白色小斑点较少；质硬；种子多数，黄绿色，细长，一侧有翅。老翘自顶端开裂或裂成两瓣，表面黄棕色或红棕色，内表面多为浅黄棕色，平滑，具一纵隔；质脆；种子棕色，多已脱落。气微香，味苦。
检验操作规程
题目：连翘原药材检验操作规程
编号：TS-GC-YL-20432-00
制定人：
制定日期2020 年 月 日
版本：2
页数：1/5
审核人：
审核日期2020 年 月 日
颁发部门：质 量 部
批准人：
批准日期2020年 月 日
生效日期2020 年 月 日
HPLC-ESI／MS法测定不同连翘有效成分的含量
HPLC-ESI／MS法测定不同连翘有效成分的含量曹冉冉;李海平;黄艳杰;尹卫平【摘要】利用高效液相色谱－电喷雾／质谱（HPLC-ESI／MS）分析鉴定不同产地的连翘，包括青翘和老翘中主要有效成分连翘苷、连翘酯苷 A和连翘酯素的含量，以此探讨各产地连翘品种主要成分之间的变化及差异程度，为建立野生连翘中药资源综合评价提供科学依据。
通过采集中国3个主产地野生连翘6个样品，选用Hypersil Gold C18色谱柱（100．0 mm ×2．1 mm，5μm），柱温30℃，以甲醇－水溶液（含体积分数为0．01％甲酸）为流动相进行梯度洗脱，流速为0．55 mL／min，进样量10μL；加热式电喷雾电离源为正、负离子模式监测，源喷雾电压为3．0 kV，鞘气流速为8．0 L／min ，离子传输毛细管温度为320℃。
研究结果表明：连翘酯苷A和连翘苷两种化学成分的峰面积和浓度在测定浓度范围内均具有良好的线性关系，加样平均回收率分别为113．4％和90．5％，相对标准偏差分别为8．20％和8．30％。
【期刊名称】《河南科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2015(000)001【总页数】4页(P101-104)【关键词】连翘苷;连翘酯苷A;连翘酯素;液相色谱-电喷雾/质谱;品质资源【作者】曹冉冉;李海平;黄艳杰;尹卫平【作者单位】河南科技大学化工与制药学院，河南洛阳 471023;黎明化工研究设计院有限责任公司分析测试中心，河南洛阳471001;河南科技大学化工与制药学院，河南洛阳 471023;河南科技大学化工与制药学院，河南洛阳 471023【正文语种】中文【中图分类】R286.0连翘Forsythiasuspensa (Thunb.) Vahl是中国的传统中药。
作为清热解毒的主药材，连翘果被分为“青翘”和“老翘”直接进入流通环节,这是造成该中药材质量参差不齐、药用成分不稳定的主要原因[1]。
HPLC法测定连翘中连翘苷含量的不确定度评价
HPLC法测定连翘中连翘苷含量的不确定度评价【摘要】目的：使用HPLC方法来针对连翘中连翘苷含量的不确定性进行分析，总结导致不确定因素产生的成因。
方法：结合我国官修药典相应的连翘含量测定法来规范测定过程，并且针对测量过程进行分析来找出不确定度产生的成因；结果：使用HPLC这种方法来测定连翘苷含量的不确定度大约为1%，最终确定其含量不确定度的主要源为对照品称量。
【关键词】连翘；连翘苷；含量测定；不确定度；高效液相色谱法实验室质量控制可以在很大程度上决定实验结果和测量不确定度。
通过一系列不确定因素的控制就可以找到一个测量数值的合理区间，进而让一个数值变为一个阈值范围，不免将检验结果错判，保证检测结果的有效性。
连翘花是木犀科植物的一种，在民间多作为茶类饮品，对于风热感冒、咽喉肿痛等症状的治疗有奇效。
但是目前对于连翘花中的连翘苷测定的相关文献还仍然较少，本文对连翘苷含量的测定方法进行了简要介绍，并且总结了不确定度的影响要素，希望可以给相关工作的开闸能提供一些参考。
1仪器与材料戴安Ultimate3000高效液相色谱仪(CHROMELEON工作站，紫外检测器)；METrLERAX205DR电子天平(瑞士)；RQ一300VDE型双频数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
连翘苷对照品购自中国药品生物制品检定所(批号为110821—200508)，甲醇(色谱纯，MERCK)，水为高纯水。
连翘花药材2007年4月采自河南省林州市石板岩乡王相岩桃花谷，经李振国主任药师鉴定为木犀科植物连翘Forsythiasuspense(Thunb．)VaIll的干燥花。
二、连翘花中连翘苷的含量测定（一）色谱条件色谱柱为DIONEXC18色谱柱(DIONEXAcclaim，5Ixm，150x4．6am)，乙腈一水(25：75)为流动相，流速1．0ml／min，柱温30℃，检测波长277nm。
（二）对照品溶液制备精密称取连翘苷对照品5．14mg置25ml容量瓶中，加甲醇使溶解并定容至刻度，摇匀，，备用。
UPLC-QAMS法同时测定连翘花中5种成分的含量
UPLC-QAMS法同时测定连翘花中5种成分的含量Δ倪素丽1＊，董岳峰2[1.山西省药品审评中心（山西省医药与生命科学研究院），太原 030006；2.山西省药品检查中心，太原 030006]中图分类号 R917文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2023）15-1826-04DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2023.15.07摘要目的建立同时测定连翘花中芦丁、连翘酯苷A、（+）-松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、连翘苷、连翘脂素5种成分的方法。
方法采用超高效液相色谱（UPLC）法进行检测。
色谱柱为ACQUITY UPLC HSS T3 C18；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（梯度洗脱）；流速为0.3 mL/min ；检测波长为275 nm（0～8 min）、330 nm（8～10.5 min）、275 nm（10.5～32 min）；柱温为25 ℃；进样量为1μL。
以芦丁为参照物，采用一测多评（QAMS）法计算各成分含量，并与外标法进行比较。
结果QAMS法所得连翘花中连翘酯苷A、（+）-松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、连翘苷、连翘脂素的含量分别为7.472～7.671、2.919～2.986、1.439～1.486、1.523～1.566mg/g，外标法测定结果为7.454～7.664、2.913～2.996、1.444～1.484、1.519～1.562 mg/g，两种方法测定结果无明显差异，相对偏差＜1.0%。
结论本研究成功建立了UPLC-QAMS法同时测定连翘花中5种成分的含量，且该方法与外标法所得结果无明显差异，可用于连翘花的质量控制。
关键词超高效液相色谱；一测多评法；连翘花；芦丁；连翘酯苷A；连翘苷；连翘脂素；（+）-松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷Simultaneous determination of five components in Forsythia suspensa flower with UPLC-QAMSNI Suli1，DONG Yuefeng2[1. Shanxi Provincial Center for Drug Evaluation （Shanxi Academy of Medicine and Life Sciences），Taiyuan 030006，China；2. Shanxi Provincial Center for Drug Inspection，Taiyuan 030006，China]ABSTRACT OBJECTIVE To establish the methods for simultaneous determination of rutin，forsythiaside A，（+）-pinoresinol-4-O-β-D-glucopyranoside，forsythin and forsythigenin in Forsythia suspensa flower.METHODS UPLC method was adopted. The determination was performed on ACQUITY UPLC HSS T3C18column with mobile phase consisted of acetonitrile-0.1%phosphoric acid solution （gradient elution）at the flow rate of 0.3mL/min. The detection wavelengths were set at 275nm （0-8min），330nm （8-10.5 min），275 nm （10.5-32 min）， respectively. The column temperature was 25 ℃， and sample size was 1μL. Taking rutin as reference，the content of each component was determined by quantitative analysis of multi-components by single-marker （QAMS）method，and then compared with external standard method.RESULTS The contents of forsythiaside A，（+）-pinoresinol-4-O-β-D-glucopyranoside，forsythin and forsythigenin by QAMS were 7.472-7.671，2.919-2.986，1.439-1.486，1.523-1.566mg/g；the results obtained by the external standard method were 7.454-7.664，2.913-2.996，1.444-1.484，1.519-1.562mg/g，respectively. There was no significant difference in the measurement results between the two methods，with a relative deviation less than 1.0%. CONCLUSIONS This study successfully establishes the UPLC-QAMS method for simultaneous determination of five components in F. suspensa flower，and the results obtained by this method are not significantly different from those obtained by the external standard method. It can be used for quality control of F. suspensa flower.KEYWORDS UPLC；quantitative analysis of multi-components by single-marker method；Forsythia suspensa flower；rutin；forsythiaside A； forsythin； forsythigenin；（+）-pinoresinol-4-O-β-D-glucopyranoside连翘花为木犀科植物连翘Forsythia suspensa （Thunb.）Vahl的干燥花[1]，具有清热解毒、消肿止痛的功效。
连翘质量标准
本品按干燥品计算，含连翘苷（C29H36O15）不得少于0.15%。
[贮藏]置干燥处。
供试品溶液的制备取本品粉末约1g〔同时另取本品测定水分（《中国药典》2000年版一部附录 H第一法）〕精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇15ml，密塞，称定重量，浸渍过夜，超声处理25分钟，放冷，密塞，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml,蒸至近干，加中性氧化铝0.5g拌匀，加于中性氧化铝柱（100～120目，1g，内径1～1.5cm）上，用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣用50%甲醇溶解后转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45µm）滤过，即得。
文件名：连翘质量标准
制定人：
制定日期：
分发份数：7
审核人：
审核日期：
颁发门：GMP办
批准人：
批准日期：
生效日期：
分发至：质量保证部、质监科、质量检验中心、生产部、仓管部
[品名]连翘
[拼音]Lianqiao
[拉丁文]FRUCTUS FORSYTHIAE
[代号]Y73
【性状】 本品呈长卵形至卵形，稍扁，长1.5～2.5cm，直径0.5～1.3cm。表面有不规则的纵皱纹及多数凸起的小斑点，两面各有1条明显的纵沟。顶端锐尖，基部有小果梗或已脱落。青翘多不开裂，表面绿褐色，凸起的灰白色小斑点较少；质硬；种子多数，黄绿色，细长，一侧有翅。老翘自顶端开裂或裂成两瓣，表面黄棕色或红棕色，内表面多为浅黄棕色，平滑，具一纵隔；质脆；种子棕色，多已脱落。气微香，味苦。
【含量测定】 照高效液相色谱法（《中国药典》2000年版一部附录Ⅵ D）测定。
连翘药材及其配方颗粒中连翘酯苷A和连翘苷含量比较
连翘药材及其配方颗粒中连翘酯苷A和连翘苷含量比较目的比较连翘药材及其配方颗粒中连翘酯苷A和连翘苷的含量。
方法采用高效液相色谱梯度洗脱法。
色谱柱：SunFire C18（4.6 mm×250 mm，5 ? m）；流动相A为乙腈，流动相B为0.4%冰醋酸溶液；流速：1.0 mL/min；检测波长：277 nm；柱温：30 ℃。
对连翘药材及其配方颗粒中连翘酯苷A和连翘苷的含量进行测定，比较二者含量的差异。
结果连翘配方颗粒中连翘酯苷A的含量低于原药材中的含量，与所标示的浓缩倍数不符；配方颗粒中连翘苷的含量与原药材一致。
结论原配方颗粒的生产工艺需要改进，配方颗粒需要建立完善的质量控制方法和合理的质量标准。
标签：连翘；配方颗粒；连翘酯苷A；连翘苷；含量测定连翘为木犀科植物连翘Forsythia suspensa （Thunb.）Vahl的干燥果实，具有清热解毒、消肿散结、疏散风热之功效，用于痈疽、瘰疬、乳痛、丹毒、风热感冒、温病初起、温热入营、高热烦渴、神昏发斑、热淋涩痛等[1]。
连翘属植物化学成分多样，目前已从连翘属植物中分离出150个化合物，其中苯乙醇苷类20个、木脂素类32个、黄酮类12个、萜类20个、C6～C2天然醇类17个，还有生物碱类、甾醇类、苯甲醇类、苯丙烯苷类、神经酰胺类、挥发油及其他成分。
其中，以连翘酯苷A和连翘苷2种活性成分的含量最高。
连翘酯苷A对认知障碍及短暂性脑缺血有神经保护作用，具有改善学习记忆障碍、舒张血管、抗氧化、抗菌、抗感染、解热、抗DNA损伤、防护耳毒性等广泛的药理作用[2-4]。
连翘配方颗粒以连翘药材为原料，经水提取、浓缩、喷雾干燥而制成的颗粒，临床供配方用。
目前，对于连翘配方颗粒是否具有与连翘药材等同的药效以及能否取代药材用于配方，具有较大的争议。
本研究以连翘酯苷A和连翘苷为指标成分，采用高效液相色谱（HPLC）梯度洗脱方法，测定连翘药材及其配方颗粒中连翘酯苷A和连翘苷的含量，比较二者含量的差异，为连翘配方颗粒的生产和使用提供试验依据。
连翘提取物质量标准及检验操作规程
XXXXXXXXXXX有限公司成品质量标准及检验操作规程1 品名：1.1 中文名：连翘提取物1.2 汉语拼音：LianqiaoTiquwu2 代码：3 取样文件编号：4 检验方法文件编号：5 依据：中国药典（2020年版一部）。
6 质量标准：检查水分不得过5.0%（通则0832第二法）。
重金属取本品1g，依法检查（通则0821第二法），不得过20mg/kg。
砷盐取本品5g，置坩埚中，取氧化镁1g覆盖其上，加入硝酸镁溶液（取硝酸镁15g，溶于100ml水中）10ml，浸泡4小时，置水浴上蒸干，缓缓炽灼至完全炭化，逐渐升高温度至500-600℃，使完全灰化，放冷，加水5ml使湿润，加6mol/l盐酸溶液10ml，转移至50 ml量瓶中，坩埚用6mol/l盐酸溶液洗涤3次，每次5ml，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，取10ml，加盐酸3.5ml与水12.5 ml，依法检查（通则0822第一法），不得过2mg/kg同法定标准特征图谱照高效液相色谱（通则0512）测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇为流动相A,以水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱;检测波长为235nm。
理论板数按连翘酯苷A峰计算应不低于4000。
时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）0～1010～4040～6010～2525～4040～6090～7575～6060～40参照物溶液的制备取连翘苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含连翘苷30µg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品25mg，精密称定，至5ml量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。
供试品特征图中应有4个特征峰，与参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5%之内。
中药连翘色谱法检测
中药连翘色谱法检测连翘，临床常用中药。
来源于木犀科植物连翘Forsythia suspensa（Thunb.）Vahl的干燥果实。
功能与主治：清热解毒，消肿散结，疏散风热。
用于痈疽，瘰疬，乳痈，丹毒，风热感冒，温病初起，温热入营，高热烦渴，神昏发斑，热淋涩痛。
单位购进两个产地连翘，标号为1号连翘、2号连翘，见下图。
用薄层色谱法、高效液相色谱法鉴别其真伪优劣。
薄层色谱法检测分别取1号连翘、2号连翘粉末1g，各加石油醚（30～60℃）20ml，密塞，超声处理15分钟，滤过，弃去石油醚液，残渣挥干石油醚，加甲醇20ml，密塞，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。
另取连翘对照药材1g，同法制成对照药材溶液。
再取连翘苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。
吸取上述四种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（8：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
见下图。
结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
1号连翘、2号连翘均为真品。
高效液相色谱法检测色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（25：75）为流动相；检测波长为277nm。
对照品溶液的制备取连翘苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml 含0.27mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备分别取1号连翘、2号连翘细粉约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇15ml，称定重量，浸渍过夜，超声处理（功率250W，频率40kHz）25分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，蒸至近干，加中性氧化铝0.5g拌匀，加在中性氧化铝柱（100～120目，1g，内径为1～1.5cm）上，用70%乙醇80ml冼脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣用50%甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
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连翘检验方法确认方案
起草人：年月日审核人：年月日批准人：年月日颁发部门：年月日执行部门：
实施日期：年月日
目录
1 概述 (3)
2 目的 (3)
3 确认内容 (3)
3.1 确认项目 (3)
3.2检验仪器、试药试剂及对照品的确认 (3)
3.3 试验方法 (3)
4 附件 (4)
附件1检验仪器、试药试剂及对照品的确认记录 (5)
附件2含量测定确认记录 (6)
附件3 实验人员信息 (8)
1 概述
依据《中国药典》2010年版一部，对连翘含量测定方法进行认。
2.目的
确认所采用的方法适合于连翘含量的检测，以保证检验结果的准确、可靠及测定方法的完整性。
3 确认内容
3.1 确认项目
检验项目确认项目
含量测定精密度
3.2检验仪器、试药试剂及对照品的确认
对试验中使用的计量器具、设备、试药试剂及对照品进行确认，要求相关的量具、仪器已经过校验并在效期内；试药试剂符合要求且在效期内；对照品为从中检所购买。
确认结果记录于附件1。
3.3 试验方法
3.3.1要求
由两名检验人员，分别按以下方法采用不同检验仪器测定同一批次的供试品，对两人的检验结果进行比较确认，要求两人测试结果的相对偏差的绝对值应≤2.0%。
3.3.2操作方法
⑴色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（25：75）为流动相；检测波长为277nm。
理论板数按连翘苷峰计算应不低于3000。
⑵对照品溶液的制备：取连翘苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。
⑶供试品溶液的制备：取本品粉末（过五号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇15ml，称定重量，浸渍过夜，超声处理（功率250W，频率40kHz）25分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，蒸至近干，加中性氧化铝0.5g拌匀，加在中性氧化柱（100～120目，1g，内径1～1.5cm ）上，用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣用50%甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
⑷测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。
⑸ 标准要求：本品按干燥品计算，含连翘苷（C 27H 34O 11）不得少于0.15%。
⑹ 计算：
含量（%） = ）
水分（%-115Ar Ax
×Cr ⨯⨯m × 100%
式中：Cr ——对照品的浓度； Ax ——供试品的峰面积或峰高； Ar ——对照品的峰面积或峰高； m ——供试品的重量。
⑺ 确认结果记录于附件2 4 附件
附件1 仪器和试液的确认
检验仪器的确认
仪器名称型号/规格是否在效期内移液管
电子天平
高效液相色谱仪
备注：
确认结果：□符合□不符合
确认人/日期复核人/日期：
试药试剂及对照品的确认
名称配制人配制批号配制日期有效期至连翘苷对照品溶液
备注：
确认结果：□符合□不符合
确认人/日期复核人/日期：
附件2
含量测定确认记录
对照品溶液的制备：精密量取连翘苷对照品（批号：含量：） mg 置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
（Cr= mg/ml）。
供试品溶液的制备：取本品粉末（过五号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密
加入甲醇15ml，称定重量，浸渍过夜，超声处理（功率250W，频率40kHz）25分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，蒸至近干，加中性
氧化铝0.5g拌匀，加在中性氧化柱（100～120目，1g，内径1～1.5cm ）上，用70%乙醇80ml
洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣用50%甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，
摇匀，滤过，取续滤液，即得。
两人分别平行处理同一批样品，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl注入液相色谱仪，记录色谱图。
按外标法以峰面积计算，即得。
两人测试结果的相对偏差的绝对值应≤2.0%。
含量测定计算：
检验人员A：
= %
1、
= %
2、
检验人员B：
= %
1、
= %
2、
含量测定确认记录
结果评定：
检验人： 复核人：
检验日期： 复核日期：
检验人员 样品编号 样品称量（g) 含量（%） 测定结果（%） 相对偏差（%） 标准要求
A
1#
本品按干燥品计算，含连翘苷不得少于
0.15%，两人间的相对偏差的绝对值应≤2.0%。
2# B
1#
2#
附件3
实验人员信息
编号姓名学历。