脂肪干细胞在体外特定培养液中向软骨细胞表型的分化
MSC
为什么MSC的免疫下调作用只能存在一段时间呢，会不会 的免疫下调作用只能存在一段时间呢， 可能和MSC在体内保留的数量有关，MSC在异基因受体 在体内保留的数量有关， 的体内能持续存在吗？ 的体内能持续存在吗？
AML AML来源的 来源的MSC不表达 不表达CD105，在体外增殖能力差，丧失多向分化能 来源的 不表达 ，在体外增殖能力差， 支持造血功能也存在缺陷。研究者们推测AML骨髓中的白血病细 力，支持造血功能也存在缺陷。研究者们推测 骨髓中的白血病细 胞克隆、异常的细胞因子等与MSC之间存在相互作用，这可能影响了 之间存在相互作用， 胞克隆、异常的细胞因子等与 之间存在相互作用 MSC的生物学特性 的生物学特性
MSCs不能激活T细胞，也不是CD8+细胞毒T细胞的靶 目标。CD8+T淋巴细胞能杀伤供者铬标记的单个核细胞 却不能杀伤同一供者来源的MSCs。此外杀伤细胞抑制 性受体(KIR)不相合时，自然杀伤细胞也不能杀伤 MSC。
MSC的免疫调节性 的免疫调节性
成熟DC启动免疫排斥及 反应， 成熟 启动免疫排斥及GVHD反应，未成熟（iDC）及淋巴样 诱导免 启动免疫排斥及 反应 未成熟（ ）及淋巴样DC诱导免 疫耐受。 疫耐受。 体外实验证明MSC抑制了 抑制了CD4+单核细胞向 的分化；Msc在Dc成熟的 单核细胞向DC的分化 体外实验证明 抑制了 单核细胞向 的分化； 在 成熟的 过程中下调APC相关分子，如CD1a、CD40、CD80、CD83、CD86和 相关分子， 过程中下调 相关分子 、 、 、 、 和 HLA-DR的表达，体系去除 的表达， 并加入DC的诱导剂后可逆反这种抑制作 的表达 体系去除MSC并加入 的诱导剂后可逆反这种抑制作 并加入 这说明此作用是可逆的； 共培养后的DC与单纯 相比， 用，这说明此作用是可逆的；与Msc共培养后的 与单纯 相比，其 共培养后的 与单纯DC相比 刺激CD4+增殖的能力有所减弱，炎性因子如 增殖的能力有所减弱， 刺激 增殖的能力有所减弱 炎性因子如IFN-γ、IL-12、TNF-α分泌 、 、 分泌 减少，炎性银子如IL-10分泌增加。 分泌增加。 减少，炎性银子如 分泌增加 最近研究报道MSC不仅对单核细胞来源 不仅对单核细胞来源DC,并且对 并且对CD34+细胞来源的 细胞来源的DC 最近研究报道 不仅对单核细胞来源 并且对 细胞来源的 的分化和功能也有抑制作用。虽然在MSC抑制 抑制CD3和CD28抗体刺激的 抗体刺激的T 的分化和功能也有抑制作用。虽然在 抑制 和 抗体刺激的 细胞的增殖体系中无APC的存在，但结果提示，MSC抑制 的发育和成 的存在， 抑制DC的发育和成 细胞的增殖体系中无 的存在 但结果提示， 抑制 熟时其免疫调节功能的机制之一。 熟时其免疫调节功能的机制之一。
cAMP_PKA信号通路介导人脂肪干细胞成骨分化的体外试验_张磊
cAMP/PKAregulatesosteogenicdifferentiationofhumanadipose-derivedstem cellsinvitro ZHANGLei, XIAOYang, WUZhen-dong, CHENLei, YINGZhi-hao, CHENZi-gao (DeptofOrthopaedics, the118 thHospitalofPLA, Wenzhou, Zhejiang 325000 , China)
临床骨科杂志 JournalofClinicalOrthopaedics 2010 Oct;13(5)
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L-谷氨酰胺 , 1 mg/L成纤维生长因子 , 105 U/L青霉 素 , 105 U/L链霉素 )终止消化 。 100 目筛网过滤后 1 200 r/min离心 10 min, 去除漂浮的脂肪细胞及上 清液 , 用含 10% FBSDMEM重悬 , 以 1 ×105 个有核 细胞 /cm2 密度接种 。 置 37℃、5% CO2 培养箱中孵 育 , 48 h后首次换液 , 弃去未贴壁细胞 。 细胞生长 至 75% ～ 90%汇合时传代 , 每 2 ～ 3 d更换 1次培养 液。 1.3 ADSCs成骨诱 导分化 以 5 ×104 个 细胞 / cm2 密度在基础培养基条件下培养 10 ～ 15 h, 然后 分别加入 10 nmol/LDex, 或 1 mmol/Ldb-cAMP, 或 同时加入 10 nmol/LDex和 1 mmol/Ldb-cAMP培养 诱导成骨分化 , 为验证 cAMP/PKA信号通路对成骨 分化诱导的影响 , 在诱导培养基中加入 10 μmol/L cAMP/PKA抑制剂 H-89。细胞在 37℃、5% CO2 培 养箱中培养 , 每 2 ～ 3 d更换 1次培养液 。未加入激 动剂或抑制剂的 ADSCs为对照组 。 1.4 细胞成骨分化分析 通过计算 ALP阳性细胞 的比例分析细胞的成骨分化 。 具体方法 :细胞培养 5 d后用胰蛋白酶进行消化 , 在含 5%牛血清白蛋白 的 PBS中孵育 30 min, 然后与抗 ALP一抗孵育 30 min, 洗涤缓冲液清洗 3次后与二抗孵育 30 min, 流 式细胞仪分析 ALP阳性细胞率 。 1.5 PKA催化活性分析 细胞在更换成骨诱导培 养基后 , 分别 加入 cAMP/PKA信 号激 动剂和 抑制 剂 , 作用 2 h后用 Promega公司 PepTagAssay分析试 剂盒进行 PKA活性检测 , 具体 操作参考 说明书进 行 。 同 时 采 用 Western blot法 检 测 相 同 条 件 下 cAMP应答元件结合蛋白 (CREB)和磷 酸化 CREB 表达情况 。 为了解 db-cAMP对 PKA的活化作用 , 在 基础培养基中分别加入 db-cAMP和 PKA抑制剂 H89后 , 检测 PKA的催化活性和下游 CREB的磷酸化 程度 。 1.6 成骨分化相关基因的 RT-PCR分析 细胞培 养 5 d后 , 用 Tripure抽提总 RNA, 用逆转录试剂盒 进行成骨分化相关基因的 RT-PCR检测 , 检测的成 骨分化相关基因 Runx2、骨桥蛋白 (osteopontin)和破 骨细胞相关基因细胞核因子 κB受体活化因子配基 (RANKL)、骨保护素 (OPG)的表达情况 , 以 β-actin 为内参基因 , 所用引物参照文献 [ 4] , 引物由上海生 工生物工程技术服务有限公司合成 (见表 1)。 细胞 培养 5 d后 , 分别检测成骨细胞的标记基因 Runx2、 osteopontin和破骨细胞相关基因 RANKL、OPG的表 达情况 。
脂肪组织干细胞的研究进展
脂肪组织干细胞的研究进展杨立业;黄天华【摘要】脂肪组织中存在多能的干细胞,在体外可以长期增殖,在一定的条件下能够分化为脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞、成肌细胞、内皮细胞、神经细胞、心肌细胞和平滑肌细胞,是一种新的组织工程和细胞移植的干细胞来源.本文综述了脂肪组织干细胞的培养、向多种方向分化和动物实验的研究进展.【期刊名称】《癌变·畸变·突变》【年(卷),期】2007(019)002【总页数】3页(P162-164)【关键词】干细胞;脂肪;分化【作者】杨立业;黄天华【作者单位】汕头大学医学院生物学教研室,广东,汕头,515041;汕头大学医学院生物学教研室,广东,汕头,515041【正文语种】中文【中图分类】R338.1组织工程的一个研究重点是种子细胞的来源问题，自体的多能干细胞应用到临床能够治疗疾病，造血干细胞是最早应用到临床的干细胞。
组织工程的一种细胞来源是骨髓基质，骨髓腔中含有几种细胞成分，包括间充质干细胞（mesenchyml stem cells，MSCs），它能分化为脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞和成肌细胞，是目前骨和软骨组织工程的主要细胞来源[1]。
然而它的自体获得也受到一些条件的限制，并且一次骨穿获得的细胞数量有限。
另外一种潜在的自体干细胞来源是脂肪组织，它的获取可在局麻下进行，对病人的损伤较小。
脂肪来源的干细胞目前可称为脂肪来源的基质细胞（adipose tissue-derived stromal cells，ADSCs），能分化为脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞、成肌细胞、内皮细胞、神经细胞和平滑肌细胞[2-6]。
人类、大鼠和小鼠的ADSCs细胞培养方法相同[1，4，6]。
首先，获取的脂肪组织用缓冲液反复冲洗，剪刀剪碎，0.075%的胶原酶37℃消化30～50 min，800 g离心10 min，沉淀成分为基质血管层（stromal vascular fraction，SVF），DMEM培养基重悬细胞，筛网过滤离心，弃上清。
骨组织工程研究的新进展:修复骨缺损的完美技术
骨组织工程研究的新进展：修复骨缺损的完美技术李凯【摘要】骨组织工程自20世纪80年代诞生以来,取得了飞速的发展,为临床上骨缺损的治疗带来新的希望.纵观骨组织工程研究的二十多年里,其构成的三大要素:种子细胞方面、支架材料方面和组织构建方面都取得了一定的进展.但是距离组织工程骨在临床中正式使用尚有一定距离,有待进一步的研究.本文就目前骨组织工程研究的现状及最新进展作一综述.%Bone tissue engineering has developed rapidly since the 1980s and brought new hope for the treatment of bone defects. Throughout twenty years, the three major elements of bone tissue engineering: seed cells, scaffolds and organizations to build have made great progress. However, there is still certain distance for tissue engineered bone to be used officially in clinic. In this paper, the current status of bone tissue engineering research and the latest developments are reviewed.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2012(009)018【总页数】3页(P15-17)【关键词】骨组织工程;骨缺损;研究进展【作者】李凯【作者单位】哈尔滨医科大学附属第三医院骨科,黑龙江哈尔滨150081【正文语种】中文【中图分类】R681.2临床上由于各种原因导致的骨缺损很常见，然而修复骨缺损的惟一方法是通过骨移植来实现。
脂肪干细胞的体外培养PPT讲稿
脂肪干细胞成脂分化
ASC在特定促进因素下可分化为脂肪细胞，长期培养仍可维持此种分化能力。 脂肪细胞分化过程大致如下：
（1）脂肪干细胞向脂肪细胞定向分化，形成脂肪母细胞（一种尚未出现脂滴的 梭形细胞）；（2）脂肪母细胞经过生长抑制、克隆性增殖，形成前体脂肪细胞 （此时细胞刚开始出现脂滴）；（3）前体脂肪细胞经过生长抑制、克隆性增殖 和一系列基因表达的变化，形成不成熟脂肪细胞或多室脂肪细胞（内含大量小脂 滴）；（4）多室脂肪细胞随着脂肪在细胞中的沉积，小脂滴逐渐汇集成一个大 脂滴充满脂肪细胞的大部分，形成成熟脂肪细胞或单室脂肪细胞，成为成熟的脂 肪细胞。
Zuk等认为，ASC可能由多种异源性细胞构成，其中包括内皮细胞、成纤维细
胞、平滑肌细胞以及前体脂肪细胞等。现有ASC主要由成纤维细胞以及来自间 叶组织的细胞构成，仅伴有少量内皮细胞与平滑肌细胞。上述细胞在ASC中的 含量甚低，不可能定向培养分化为其他组织细胞，但进一步确认和识别真正的 ASC的表面蛋白及其基因仍是必要的。
间充质干细胞没有特异的表面标志已得到公认。免疫组化染色和流式细胞仪检
测等免疫表型的结果对确认脂肪干细胞有辅助作用，但鉴定脂肪干细胞的最好 方法是进行多系定向诱导，并进行相应检测以确定诱导成功。
脂肪干细胞的表面标记
a)粘附分子：ADAS细胞始终表达tetraspan蛋白(CD9)、整合素β1(CD29)和 α4(CD49 d)；细胞间粘附分子1(ICAM 1，CD54)、endoglin(cd102)、血管细胞 粘附分子(VCAM，CD106)及活化的淋巴细胞粘附分子(ALCAM，CD166)。但不表 达神经细胞粘附分子(NCAM，CD56)、细胞间粘附分子3(ICAM-3，CD50)、整合 素αb(CD11b)和β2(CD18)及内皮选择蛋白(E selectin，CD62)； b)分子受体：可表达透明质酸盐(CD44)和转铁蛋白(CD71)的受体； c)细胞外基质蛋白和糖蛋白：ADAS细胞能生成Ⅰ和型胶原、骨桥蛋白、ostenectin、 Thy-1(CD90)和MUC-18(CD146)； d)肌蛋白：能表达平滑肌细胞内的肌动蛋白和波形蛋白；e)造血细胞标记：不表达 造血细胞标志物CD14、CD31或CD45； f)补体调节蛋白：确定能表达衰变加速因子(CD55)和补体蛋白； g)组织相容性抗原：表达类组织相容性蛋白HLA-ABC，而不表达类蛋白HLA-DR。
激活的富血小板血浆促进Pellet培养的脂肪间充质干细胞成软骨样分化
激活的富血小板血浆促进Pellet培养的脂肪间充质干细胞成软骨样分化舒雄;杰永生;郑蕊;陈磊;靳少锋;綦惠;孙磊【摘要】目的探讨激活的富血小板血浆(PRP)对Pellet培养的人脂肪来源间充质干细胞向软骨样细胞分化及相关信号通路的影响.方法添加不同比例(5％、10％和15％)的激活PRP,检测不同培养时间(1、3、5、7、9、11 d)脂肪干细胞的增殖能力.将采用Pellet培养的P3代的hADSCs分为3组,对照组、激活PRP组和含TGF-β3的软骨诱导组,持续培养21 d后,阿利新蓝和苏木精-伊红染色进行软骨分化鉴定,real-time PCR测定Sox-9、Aggrecan和Ⅱ型胶原的基因表达,DMMB 法测定胞外基质中GAG含量,Western blot进一步检测对照组和激活PRP组中Sox-9、Gli-1和BMP-2蛋白的表达.结果 MTT实验结果显示,在10％激活PRP培养条件下,11 d的生长时间内hADSCs的增殖率最适宜.阿利新蓝和苏木精-伊红染色显示,激活PRP组和软骨诱导组中软骨表达呈阳性.Real-time PCR结果表明软骨诱导组其Sox-9、Aggrecan和Ⅱ型胶原mRNA表达的能力高于激活PRP组(P<0.05).GAG实验结果显示,软骨诱导组促GAG分泌的能力优于激活PRP组(P<0.05).Western blot结果显示,相比对照组,激活PRP组中伴随Gli-1和BMP-2的蛋白表达升高,而Sox-9蛋白表达随之升高.结论激活PRP刺激hADSCs的最适增殖能力的浓度比例为10％.激活PRP和软骨诱导剂对脂肪干细胞成软骨分化中的诱导表达具有相似的能力,激活PRP对hADSCs诱导成软骨作用与Hedgehog 和BMP信号通路有关.【期刊名称】《中国医药生物技术》【年(卷),期】2018(013)004【总页数】7页(P328-334)【关键词】富血小板血浆;脂肪干细胞;Pellet培养;软骨分化【作者】舒雄;杰永生;郑蕊;陈磊;靳少锋;綦惠;孙磊【作者单位】100035 北京积水潭医院/北京市创伤骨科研究所;100035 北京积水潭医院/北京市创伤骨科研究所;100035 北京积水潭医院/北京市创伤骨科研究所;100035 北京积水潭医院/北京市创伤骨科研究所;100035 北京积水潭医院/北京市创伤骨科研究所;100035 北京积水潭医院/北京市创伤骨科研究所;100035 北京积水潭医院/北京市创伤骨科研究所【正文语种】中文关节软骨损伤是临床上的常见病，由于缺乏血供、淋巴和可迁移、增殖的未分化细胞，因而其自身修复与再生能力极为有限。
脂肪来源干细胞ADSC 之生物学特性、分离、应用前景
调节淋巴细胞反应
研究发现 1、ADSC可明显抑制PHA刺激的淋巴细胞增殖，IL-2可逆转 ADSC的抑制作用。 2、ADSC可明显抑制双相混合淋巴细胞反应，抑制作用成脂 肪干细胞细胞数量依赖性；经IFN-γ 作用后抑制作用未见 明显减弱。 结果表明，ADSC可在体外抑制淋巴细胞增殖反应，具有一 定的调节淋巴细胞反应的能力。
应用脂肪干细胞研究的优点
1、来源充足，取材量大，能反复取材，脂肪细胞中干细胞 含量远远高于骨髓中的干细胞含量。 2、属自体移植，无免疫排斥反应。 3、不涉及医学伦理问题。 4、取材简便，分离容易，避免抽取骨髓，损伤较小，患者 易于接受。 5、细胞增殖快速。
第二部分 大鼠脂肪干细胞的分离培养
1.大鼠腹腔注射10%水合氯醛350mg/kg达到麻醉效果，用 体积分数75%的乙醇逆毛方向消毒。 2.无菌条件下切取双侧腹股沟脂肪，置入含有1000U/ml青 霉素和链霉素PBS液中浸泡10min，然后用不含抗生素的 PBS液反复冲洗，仔细去除大体可见的血管和其他组织。 3.将脂肪组织剪成约1mm×1mm×1mm小块，置于10ml的 0.1%的I型胶原酶中，37℃中摇床120r/min消化30min， 待悬液成糊状，加入3倍体积PBS液终止消化，以1200g 离心10min，弃上清，沉淀用含体积分数10%胎牛血清 (FBS)的L-DMEM制成单细胞悬液。 4.以2×105/cm2密度接种于培养瓶中，置37℃、体积分数 5%CO2培养箱中培养。48h首次换液后每3d换液，每天 显微下观察、记录。
体外扩增
体外培养条件下，ADSC不像骨髓间充质干细胞对培养基中 胎牛血清的来源和质量有严格要求。DMEM，α MEM， RPMI1640是ADSC的常用培养基。一般只添加10%胎牛血 清，并且血清无生产批号限制。在传代培养中，ADSC平均 倍增时间为60h，细胞在3-4d即可增殖一倍，培养的细胞可 以稳定增殖和传代，体外培养10代以后，细胞的增殖速度亦 没有明显减速。ADSC并表现低水平衰老，1代时细胞没有出 现衰老现象，10代时少于5%细胞出现衰老，15代时仍低于 15%，这表明ADSC体外扩增能力很强，传代培养易于获得 大量有分化能力的细胞。
脂肪来源的间充质干细胞及外囊泡促成骨分化的研究进展
1672V ol.40 No.12 Dec. 2020上海交通大学学报（医学版）JOURNAL OF SHANGHAI JIAO TONG UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCE )综述近年来，我国骨质疏松症患病率逐渐攀升。
一项最新研究[1]显示，我国骨质疏松症的总患病率为13%，总人数已超过1.78亿。
老年人是骨质疏松症的重点人群，自1982年起，我国65岁以上老年人占人口比重不断升高，2019年我国65岁以上老年人占人口比重已达到12.6%[2]。
预计到2050年，我国骨质疏松症或骨密度低的患者将达到2.12亿[1]。
骨质疏松症使得骨质脆性增加、易于骨折，导致患者的生活水平急剧下降。
利用脂肪来源的间充质干细胞（adipose-derived mesenchymal stem cells ，ADMSCs ）诱导成为成骨细胞治疗骨质疏松症是医学研究的新方向[1]。
ADMSCs 可以通过旁分泌功能，分泌一些生物活性分子，为组织修复建立良好的微环境，促进新生血管的形成和伤口愈合，并且减少组织的炎症反应。
ADMSCs 也可分泌促进血管生成和抗凋亡潜能的生长因子，如转化生长因子（transforming growth factor ，TGF ）、胰岛素样生长因子（insulin growth factor ，IGF ）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor ，VEGF ）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor ，HGF ）[3]和骨形态发生蛋白（bone morphogenetic protein ，BMP ）家族BMP-2、BMP-7等[4]。
ADMSCs 来源丰富，通过脂肪抽吸术易于获得，无免疫排斥。
平均每300 mL 脂肪组织可获得108个 细胞，每克动物脂肪可获得5 000个成纤维集落形成单位（colony forming unit-fibroblast ，CFU-F ）[5]。
人脂肪间充质干细胞的原代培养及体外成骨成脂诱导分化
人脂肪间充质干细胞的原代培养及体外成骨成脂诱导分化闵敏;张雪静;马红;许辉;李遇梅【摘要】目的:建立体外分离培养获得人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADSCs)的方法,并观察其形态、免疫表型、生物学特性.初步探讨其体外成骨过程中出现成脂现象的原因及机制.方法:剖宫产手术获得腹部皮下脂肪,0.15％Ⅰ型胶原酶消化法获得人脂肪间充质干细胞并进行体外培养.行MTT细胞增殖实验绘制增殖曲线,使用流式细胞及细胞免疫荧光技术检测细胞表面抗原,行成骨成脂分化鉴定其分化潜能.通过RT-PCR技术检测成骨成脂过程中过氧化物酶体增殖物激活受体γ-2 (peroxisome proliferator activated receptorγ-2,PPARγ-2)和骨桥蛋白mRNA表达情况.结果:通过分离培养,获得了大量旋涡状生长的人脂肪间充质干细胞.MTT法显示细胞增殖能力强.流式细胞鉴定结果显示,CD29、CD73、CD105、CD166高表达,CD31、CD34、CD45、HLA-DR 低表达.细胞免疫荧光结果与之相符.hADSCs在特定诱导条件下,具有成骨成脂分化潜能.在成骨分化过程中同时伴有成脂发生.RT-PCR结果显示,与对照组相比,成脂诱导组PPARγ-2 mRNA有时间依赖性递增表达,差异具有统计学意义(P＜0.01).与对照组相比,成骨诱导组骨桥蛋白,PPARγ-2 mRNA均有时间依赖性递增表达,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:建立了一种分离培养hADSCs简单可靠的方法.获得的细胞具有贴壁生长、增殖活性强、干细胞表型以及多向分化等特征.hADSCs体外成骨过程中,三酰甘油的形成对成骨具有一定的促进作用.%Objective:To establish the isolation and culture method of human adipose-derived mesenchymal stem cells (hADSCs) derived from human adipose in vitro,so as to explore their morphology,identify cell surface markers,observe biological properties,and discuss the possible causes and mechanism ofthe phenomenon of hADSCs' osteogenic differentiation accompanying with synthesis of triglycerides.Methods:Human adipose tissue were obtained from abdominal operation.The hADSCs were isolated from human adipose tissue by 0.15％ collagenase digesting.The cells were applied to do the experiments:MTT method,flowcytometry,immunofluorescence.Its differentiation potential was proved by osteogenic and adipogenic differentiation.The osteogenic and adipogenic related genes:PPARγ-2,osteopontin expression were detected by real-time fluorescent quantitative PCR technique.Results:After isolation and culture,we obtained a large amount of hADSCs,which grew like swirls.MTT revealed high capability for and proliferation.The flow cytometry showed CD29 +,CD31-,CD34-,CD45-,CD73 +,CD105 +,CD166 +,HLA-DR-,which fit the results of immuno fluorescence.Moreover,these cells could be functionally induced into adipocytes and osteoblasts in the presence of appropriate conditioned media.During osteogenic differentiation,we found it accompanying with the synthesis of triglycerides.RT-PCR results proved that during the differention process,osteogenic and adipogenic related genes began to be expressed gradually,which had statistically significant(P ＜0.01).Conclusion:Highly efficient isolation and cultivation methods for hADSCs have been developed.They are a kind of mesenchymal cells with great application prospect,which characterized with adherent growth,high proliferation,stem cell phenotype and multipotent differentiation.During vitro osteogenic differentiation,the triglyceride formation has a certain role in promoting osteogenesis.【期刊名称】《江苏大学学报（医学版）》【年(卷),期】2013(023)003【总页数】6页(P185-190)【关键词】人脂肪间充质干细胞;鉴定;成骨分化;成脂分化【作者】闵敏;张雪静;马红;许辉;李遇梅【作者单位】江苏大学附属医院皮肤科,江苏镇江212001;镇江市第二人民医院皮肤科,江苏镇江212002;江苏大学附属医院皮肤科,江苏镇江212001;江苏大学附属医院皮肤科,江苏镇江212001;江苏大学附属医院皮肤科,江苏镇江212001【正文语种】中文【中图分类】R329.2对于间充质干细胞的研究，最初的对象是骨髓间充质干细胞，并且已经形成了成熟的分离培养方法［1］。
诱导脂肪干细胞成软骨分化的研究进展
诱导脂肪干细胞成软骨分化的研究进展作者：赖仲宏钟佳宁徐房添来源：《右江医学》2020年第10期【关键词】脂肪干细胞;生长因子;成软骨分化;软骨缺损;组织工程中图分类号：R68 ; 文献标志码：A ; DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2020.10.012由于创伤、肿瘤、骨关节炎等原因常导致软骨组织缺损，软骨组织缺损是骨科领域最具挑战性的难题之一[1]。
软骨组织由于缺乏营养血管、神经和淋巴回流，常导致软骨自我修复能力差、增殖活性和再生能力低[2]。
近年来，软骨组织工程的发展为软骨组织缺损修复提供了新的思路，软骨组织工程主要包括三方面：种子细胞、生长因子、生物支架[3]。
脂肪干细胞（Adipose-derived stem cells，ADSCs）作为理想的种子细胞具有组织来源丰富、取材容易、免疫原性低、增殖速度快和具有多向分化潜能等优点，已成为软骨组织工程研究的热点。
ADSCs在不同的诱导条件下可向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞等方向分化[4]。
基于ADSCs 具有成软骨分化特性，软骨组织工程为软骨缺损修复提供了新的治疗方法。
本文将从脂肪干细胞的特性、ADSCs成软骨分化的主要影响因素和当前现状及展望等方面进行综述。
1 脂肪干细胞的起源和特点ADSCs起源于细胞的中胚层，是一种具有多向分化潜能的间充质干细胞。
2001年，ZUK 等[5]从脂肪组织中分离出成纤维母样细胞，并发现在不同的诱导条件下可向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞等方向分化。
在后续的研究中，通过对 PLA的克隆形成能力研究和多谱系分化能力的鉴定，发现PLA具有干细胞的特性，并首次将分离的细胞命名为ADSCs。
ADSCs与骨髓间充质干细胞（bone marrow stem cells，BMSCs）同属于间充质干细胞，生物学特性基本相似，在分子表型上，都能够阳性表达CD29、CD44、CD90及CD105，阴性表达CD31、CD45、HLA-DR，同时2种细胞都能阳性表达Nanog、Oct-4、SOX-2等干细胞相关转录因子[6]。
脂肪分泌组学的研究进展
脂肪分泌组学的研究进展闫晓红 王 宁△（农业农村部鸡遗传育种重点实验室东北农业大学动物科学技术学院，哈尔滨１５００３０）摘要 分泌蛋白是由细胞主动运输到细胞外的一大类具有重要生物学功能的蛋白，主要参与细胞信号转导、细胞的增殖、分化及凋亡等多种生物学过程。
细胞、组织、器官及个体分泌的所有蛋白称为分泌组。
脂肪组织曾被认为只是机体内能量储藏的地方，但现在发现它还是体内最大的内分泌器官。
近年来，由于蛋白质组学技术的快速发展，脂肪分泌组研究已成为脂肪生物学、肥胖症及其相关疾病研究的热点之一。
本文概述了脂肪分泌组学研究的主要策略和方法，重点介绍了脂肪组织间充质干细胞、前脂肪细胞、脂肪细胞以及三类脂肪组织的分泌组研究进展，分析了目前脂肪分泌组学研究中存在的问题，并提出了未来脂肪分泌组学的研究方向。
关键词 脂肪组织；分泌组学；蛋白质组；生物信息学；脂肪细胞因子中图分类号 Ｑ４３３ＡｄｖａｎｃｅｓｉｎＡｄｉｐｏｓｅＳｅｃｒｅｔｏｍｉｃｓ ＹＡＮＸｉａｏ Ｈｏｎｇ，ＷＡＮＧＮｉｎｇ△（ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣｈｉｃｋｅｎＧｅｎｅｔ ｉｃｓａｎｄＢｒｅｅｄｉｎｇ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＲｕｒａｌＡｆｆａｉｒｓ；ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＮｏｒｔｈｅａｓｔＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ１５００３０，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｓｅｃｒｅｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓａｒｅａｌａｒｇｅｃｌａｓｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓｓｅｃｒｅｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｃｅｌｌｓａｎｄｉｎｖｏｌｖｅｖａｒｉｏｕｓｉｍ ｐｏｒｔａｎｔｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓｅｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｓ，ｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ａｎｄａｐｏｐｔｏ ｓｉｓ．Ｔｈｅｔｏｔａｌｐｒｏｔｅｉｎｓｓｅｃｒｅｔｅｄｆｒｏｍｃｅｌｌｓ，ｔｉｓｓｕｅｓ，ｏｒｇａｎｓｏｒｏｒｇａｎｉｓｍｓａｒｅｒｅｆｅｒｒｅｄｔｏａｓｓｅｃｒｅｔｏｍｅ．Ａｄｉ ｐｏｓｅｔｉｓｓｕｅ，ｗｈｉｃｈｗａｓｏｎｃｅｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄａｓａｓｉｍｐｌｅｅｎｅｒｇｙｓｔｏｒａｇｅｄｅｐｏｔ，ｎｏｗｉｓｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄａｓｔｈｅｌａｒｇｅｓｔｅｎｄｏｃｒｉｎｅｏｒｇａｎ，ｗｈｉｃｈｓｅｃｒｅｔｅｓａｎｕｍｂｅｒｏｆｈｏｒｍｏｎｅｓ，ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ，ｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｓ，ｃｏｌｌｅｃｔｉｖｅｌｙｃａｌｌｅｄａｄ ｉｐｏｋｉｎｅｓ．Ａｄｉｐｏｋｉｎｅｓｅｘｅｒｔｃｒｕｃｉａｌｒｏｌｅｓｉｎｖａｒｉｏｕｓｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓｅｓ．Ｗｉｔｈｔｈｅｄｅ ｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ，ａｄｉｐｏｓｅｓｅｃｒｅｔｏｍｅｈａｓｂｅｅｎｏｎｅｏｆｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｈｏｔｓｐｏｔｓｉｎｔｈｅｆｉｅｌｄｏｆａｄｉｐｏｓｅｂｉｏｌｏｇｙ，ｏｂｅｓｉｔｙ，ａｎｄｉｔｓｃｏｍｏｒｂｉｄｉｔｉｅｓ．Ｉｎｔｈｉｓｒｅｖｉｅｗ，ｗｅｂｒｉｅｆｌｙｄｅｓｃｒｉｂｅｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓａｎｄｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓｓｔｒａｔｅｇｉｅｓｔｏｄｅｃｉｐｈｅｒｔｈｅｓｅｃｒｅｔｏｍｅ，ｓｕｍｍａｒｉｚｅｔｈｅｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎｔｈｅｓｅｃｒｅ ｔｏｍｉｃｓｏｆａｄｉｐｏｓｅ ｄｅｒｉｖｅｄｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ｐｒｅａｄｉｐｏｃｙｔｅｓ，ａｄｉｐｏｃｙｔｅｓ，ａｎｄｔｈｒｅｅｔｙｐｅｓｏｆａｄｉｐｏｓｅｔｉｓｓｕｅｓ（ｗｈｉｔｅ，ｂｒｏｗｎａｎｄｂｅｉｇｅａｄｉｐｏｓｅｔｉｓｓｕｅｓ），ａｎｄｌａｓｔｌｙｄｉｓｃｕｓｓｔｈｅｃｈａｌｌｅｎｇｅｓａｎｄｆｕｔｕｒｅｔｒｅｎｄｓｉｎａｄｉｐｏｓｅｓｅｃｒｅｔｏｍｉｃｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ ａｄｉｐｏｓｅｔｉｓｓｕｅ；ｓｅｃｒｅｔｏｍｉｃｓ；ｐｒｏｔｅｏｍｅ；ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ；ａｄｉｐｏｋｉｎｅ 细胞蛋白分为分泌蛋白（ｓｅｃｒｅｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ）、膜蛋白（ｍｅｍｂｒａｎｅｐｒｏｔｅｉｎ）和胞内蛋白（ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｐｒｏ ｔｅｉｎ）三类。
雷洛昔芬通过促进一氧化氮释放诱导脂肪干细胞向成骨细胞分化
２ ４・
中国药理 学通报
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雷洛昔芬通过促进一氧化氮释放 诱导脂肪干细胞 向成骨细胞分化
卢 翔， 陈江 宁 ， 张峻 峰
外分光光度计 （ 深圳爱克分析仪器有 限公 司） Ｃ 。 ； Ｏ 恒 温培 养箱 （ 上海 华 明医化器 械厂 ）２３ ；９４型倒 置 相
差 显微 镜 （ ＯＣ公 司 ） Ｍｏｅ ０酶 联 免 疫 检 测 仪 ＣＩ ； ｄＢ５ （日本 ＢＯ—Ａ Ｉ Ｒ Ｄ公 司 ） Ｐ Ｒ 仪 （日本 ＢＯＲ Ｄ公 ；Ｃ Ｉ —Ａ 司 ）ＨＮ 一．Ｆ垂 直 流 形 超 净 工 作 台 （ 通 沪 南 科 ， Ｚ１１ 南
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的 １ ％ Ｆ Ｓ的高糖 Ｄ Ｅ ０ Ｂ Ｍ Ｍ培养基继续培养 ２ｄ 之 ； 后换 成 完 全 培 养 基 （ 糖 Ｄ Ｍ ＋１％ Ｆ Ｓ 继 续 高 ＭＥ ０ Ｂ）
培养 １ 。油 红染 色鉴 定脂 肪 分化 。 周
成骨诱导分化步骤 ： 用成骨分化诱导培养基含 ： １ ｏ ・ — Ｂ甘 油 磷 酸钠 、０ ｐ ｏ ・Ｌ 的维 生 ０ｍｍ ｌ Ｌ ． ５ ￣ ｌ ｍ
和 Ｃ ｌ 的合 成 ｏ— Ｉ
将 脂 肪 干细 胞 以 １ ｃｌ Ｌ 的 ０ ｅ ｓ・ ｌ
密度 接种 于 ６孔 板 中 ， 每孔 ２ｍｌ 全 培 养 基 ， 细 完 待
胞达 ８ ％汇合 时 ， ０ 换成成骨诱导培养基 ， 进行成骨 诱导 。实 验分 组 ： ａ组 （ ． ￣ｏ Ｌ。） Ｒ ｌ０ １ Ｒ ｌ ０ １ｐ ｌ・ ｍ 、 ａ（．
体外共培养诱导脂肪干细胞向软骨表型细胞分化及鉴定的实验研究
【参 考 文 献 】
Ｓ Ｃ， Ｃ ｈ ｅ ｎ Ｃ Ｈ， Ｃｈ ａ ｎ ｇ Ｊ Ｋ， ｅ ｔ ａ １ ． Ｈｙ ａ ｌ ｕ ｒ ｏ ｎ ａ ｎ ｉ ｎ ｉ ｔ ｉ ａ ｔ ｅ ｓ ｅ ｈ ｏ ｎ ｄ ｒ ｏ — ［ １ ］ Ｗｕ
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［ １ ０ ］Ｚ ｕ ｋ Ｐ Ａ， Ｚ ｈ ｕ Ｍ， Ａｓ ｈ ｊ ｉ ａ ｎ Ｐ， ｅ ｔ ａ １ ．Ｈ ｕ ｍａ ｎ ａ ｄ ｉ ｐ ｏ ｓ ｅ ｔ ｉ ｓ ｓ ｕ ｅ ｉ ｓ ａ ｓ ｏ ｕ ｒ ｃ ｅ
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脂肪干细胞培养方法 组织块培养法
脂肪干细胞是一种多能干细胞，存在于脂肪组织中，具有较强的自我更新和分化能力，因此在再生医学领域具有广阔的应用前景。
脂肪干细胞的培养方法是进行研究和应用的基础，其中组织块培养法是一种常用的培养方法，其流程和步骤需要严谨操作和控制，以获得高质量的脂肪干细胞。
一、脂肪组织的获得脂肪干细胞的来源是脂肪组织，脂肪组织的获得需要经过以下步骤：1. 临床患者手术采集：通过手术方式从患者身体的特定位置（如腹部、臀部等）采集脂肪组织。
2. 动物实验材料采集：通过特定的实验动物模型，在实验室条件下从动物体内获取脂肪组织。
脂肪组织的来源直接关系到后续脂肪干细胞的培养和应用性能，因此需要严格控制采集过程和条件，确保获得的脂肪组织质量和干细胞丰度。
二、脂肪组织处理和组织块制备1. 脂肪组织的去除杂质：将采集的脂肪组织在无菌条件下进行处理，去除多余的结缔组织、血管和表皮层，以获得纯净的脂肪组织。
2. 组织块的制备：将经过处理的脂肪组织切割成适当大小的块状（约1mm³），以便后续细胞的释放和培养。
三、脂肪干细胞的释放和培养1. 组织块的酶解：将制备好的组织块放入消化酶（如胰蛋白酶）的消化液中，在37℃的恒温培养箱内进行酶解，使脂肪干细胞从组织块中释放出来。
2. 细胞的培养和传代：将释放出的脂肪干细胞进行原代培养和传代培养，培养基的配方和培养条件需要进行严格控制和优化，以保证脂肪干细胞的生长和分化。
通过以上步骤和方法，我们可以获得高质量的脂肪干细胞，为其后续在再生医学、组织工程和临床治疗中的应用打下坚实基础。
在实际应用中，还需要结合特定的研究和临床需求，对脂肪干细胞进行进一步的分化和功能评价，以实现其在不同领域的应用和开发。
脂肪干细胞的培养方法对于再生医学和组织工程具有重要意义，通过持续的研究和优化，必将为人类健康事业带来更多的机遇和挑战。
希望本文对脂肪干细胞组织块培养方法的介绍，能够为相关研究和应用人员提供一定的参考和指导，共同推动脂肪干细胞领域的进步与发展。
干细胞成骨、成脂、成软骨诱导分化及检测
三个方向诱导分化诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化一、诱导方法将细胞悬液置于50 mL聚苯乙烯培养瓶(Nunclon)中培养。
完全培养基中加入能诱导MSCs 向软骨细胞转化的诱导因子: (一致统一的诱导物质)转化生长因子β1 10ng/ml,（左旋）维生素C 50 mg/L(也有0.1mmol/L)地塞米松0.1nmol/L （也有10 nmol/L）ITS 50mg/ml丙酮酸钠1mmol/L亚油酸5.35ug/mg牛血清白蛋白1.25ng/ml。
倒置显微镜逐日（1－3 weeks）观察细胞生长情况。
细胞长成单层后进行传代。
细胞培养3周。
去除培养液,晾干,①细胞用通用Ⅱ型胶原检测试剂盒(晶美生物工程有限公司) 免疫组化，按试剂盒说明书操作；②用alcian blue 孵育5 min, 流水冲洗2 min ,麦氏苏木素复染5 min ,流水冲洗2 min ,晾干，显微镜下观察细胞的蛋白聚糖沉积。
或者用甲苯胺蓝染色，具体我也没做过，查到一篇文章中是这么说的：MSC成软骨诱导后的甲苯胺蓝染色检测：培养不同时间的MSC培养皿倒掉诱导培养液，10％甲醛固定lh，自来水冲洗15min，双蒸水冲洗1次，滴加1％甲苯胺蓝染液于培养皿内，染色3h，加人95％乙醇，洗去多余的染液，烘干，中性树胶封片。
诱导骨髓间充质干细胞成骨方向分化成骨诱导培养: 取第3代细胞, 接种入含体积分数为0.1 的新生牛血清、0.1 μmol/L 地塞米松、50 μmol/L 抗坏血酸、10 mmol/L β- 甘油磷酸钠的高糖DMEM培养基进行成骨诱导培养, 进行形态观察、功能检测。
间充质干细胞成骨特性检测:①碱性磷酸酶组织化学染色:取成骨诱导14 d 的细胞, 40 g/L 中性甲醛固定15 min, Gomori改良钙钴法染色。
取5 块玻片, 每片随机取2个视野, 采用网格计数法, 计算碱性磷酸酶染色阳性细胞的百分比。
:取第3 代细胞, 以1×105/ 孔的密度接种于6 孔板中, 分别成骨诱导3, 5, 7, 10, 12, 14 d,按碱性磷酸酶活性检测试剂盒要求进行检测。
细胞自噬促进脂肪干细胞向软骨细胞分化
细胞自噬促进脂肪干细胞向软骨细胞分化陈全刚;陈仁金;袁红花【摘要】目的:探讨细胞自噬对ADSCs分化的影响.方法:无菌条件下取大鼠大网膜,肾周脂肪囊,睾丸周围等处取脂肪组织并分离ADSCs,用软骨细胞诱导培养基进行培养,并通过抑制剂或干扰分子改变细胞自噬水平,检测ADSCs向软骨细胞分化的变化情况.结果:抑制自噬,细胞表达软骨细胞标识蛋白,SOX-9的量显著下调:诱导自噬,SOX-9的表达显著升高,结论:细胞自噬促进ADSCs向软骨细胞分化.【期刊名称】《黑龙江医药科学》【年(卷),期】2016(039)006【总页数】4页(P1-3,8)【关键词】脂肪干细胞;细胞自噬;细胞分化【作者】陈全刚;陈仁金;袁红花【作者单位】徐州医科大学实验动物中心,江苏徐州221000;徐州医科大学实验动物中心,江苏徐州221000;徐州医科大学神经生物研究中心,江苏徐州221000【正文语种】中文【中图分类】R687软骨缺损是临床常见的一种骨科疾病，由于软骨是一种无神经及血管营养的组织，其自身修复能力有限，导致临床治疗困难重重。
构建组织工程软骨是一种有效的解决方式，然而，种子细胞的来源问题又一直制约着软骨组织工程的发展。
脂肪干细胞(adipose-derived-stem cells，ADSCs)的发现为解决这一问题提供了新的方法。
细胞自噬是一种高度保守的溶酶体依赖性降解途径。
通过自噬，细胞可以清除受损或衰老的细胞器及过度聚集的蛋白，在维持细胞内环境的稳态中发挥重要作用。
此外，越来越多的研究表明，细胞自噬还参与机体众多机能的调控，如细胞凋亡、天然免疫、获得性免疫、细胞分化等。
迄今为止，细胞自噬对ADSCs的调控作用仍然未被证实。
为此，本研究通过细胞自噬诱导剂雷帕霉素(Rapamycin)及抑制剂(3-MA)，分别诱导和抑制细胞自噬水平，进一步通过荧光定量PCR (qRT-PCR) 和Western blot检测软骨细胞标识物SOX-9的表达情况，发现诱导ADSCs的细胞自噬，显著提高其向软骨细胞的分化能力。
脂肪细胞的基础知识
脂肪细胞的基础知识脂肪细胞的生长全过程及其形态变化脂肪母细胞，是指能向脂肪细胞分化的ADSCs在激素、生物活性因子、寒冷等因素刺激下均能逐渐分化成为单能干细胞。
它可保持着干细胞增殖活跃的特性，脂肪母细胞再进一步分化为前脂肪细胞，即通常人们所说的脂肪细胞前体。
前脂肪细胞再经历细胞融合、接触抑制和克隆扩增等步骤启动向成熟脂肪细胞分化，并在胰岛素、地塞米松等诱导剂作用下完成向成熟脂肪细胞的分化。
全过程可以表示为：多能干细胞——脂肪母细胞——前脂肪细胞——不成熟脂肪细胞——成熟脂肪细胞。
生长期前脂肪细胞的形态与成纤维细胞相似，经诱导分化，其细胞骨架和细胞外基质发生变化，开始进入不成熟细胞向成熟细胞转变。
细胞形态由成纤维细胞样逐渐趋于类圆或圆形，胞体逐渐增大，胞质中开始出现小脂滴，脂质开始累积，以后小脂滴增多并融合为较大的脂滴，可经油红“O”染色等方法于显微镜下显色，从而获得成熟脂肪细胞的形态特征。
此时的细胞无分裂增殖能力，为脂肪细胞分化的终末阶段。
张高娜,梁正翠.动物脂肪细胞的研究进展[J].饲料工业,2009,30(2):42-44.脂肪细胞由起源于中胚层的间充质干细胞逐步分化形成,按间充质干细胞→脂肪母细胞→前脂肪细胞→不成熟脂肪细胞→成熟脂肪细胞的过程发展。
前脂肪细胞在多种转录因子调控下,激活脂肪组织相关基因,并在这些基因的顺序性调控下,经一系列复杂的步骤分化为成熟脂肪细胞。
张艳.脂肪细胞分化过程中的分子事件[J].儿科药学杂志,2008,14(1):56-57.间充质干细胞概念：不同文献中，分别命名为抽脂处理细胞（processed lipoaspirate cells, PLA），脂肪基质微管碎片细胞（stromal vascularfraction cells, SVF），脂肪组织源基质细胞（adipose-tissue derived stromal cells, ATSCs），脂肪源中胚层干细胞（adipose-derived mesodermal stem cells, ADMSCs）等。
脂肪干细胞运用
ADSCs的分离与纯化关于ADSCs的获取方法很多，但不管哪种方法所得到的并非单一的脂肪干细胞，是一组具有干细胞特性的细胞群。
目前应用最广泛的分离方法是酶胶原消化法。
首先将无菌条件下切取的脂肪组织块剪成细小的颗粒，PBS液冲洗干净后，用0．1％的胶原酶在37℃下振荡消化4O～90 min，再用含10％胎牛血清的等体积DMEM培养基终止。
1 200 r／min离心5～10 min，弃上清液及悬浮的脂肪组织，重悬细胞后经过细胞筛过滤，所得细胞按2—4×105／cm 接种于50ml培养瓶内。
37℃条件5％的CO 饱和湿度培养箱内培养，2 d后首次换液，以后3d换液一次，至细胞达70％～8O％融合时用0．25％胰酶消化，并传代。
经过提取获得的以脂肪干细胞为主的细胞群接种后数小时即开始贴壁生长，24h内完成贴壁。
细胞的形状与成纤维细胞相似，体积较小，核浆比较大，随后细胞体积渐增大，克隆形成。
经传代后，细胞的形态及排列才趋于一致。
由于目前尚未发现脂肪干细胞表面存在特异性的分子标记物，因此无法利用分子表型来分离纯化。
然而可通过纯化脂肪组织块来间接达到纯化脂肪干细胞的目的。
流式细胞仪检测显示：传至第3代时，可达95％以上的细胞纯度。
ADSCs的生物学特性1.ADSCs的鉴定在ADSCs鉴定上，现阶段尚无特异性鉴定方法。
用免疫荧光法和流式细胞术检测结果均显示ADSCs表达特异性分子CD44，OCT一4，E—eadherin，流式细胞术检测细胞周期显示绝大多数细胞是处于静止期的干细胞，传代后生长迅速，随机挑选来源标本，对细胞进行染色体核型分析显示ADSCs具有遗传稳定性。
ADSCs分泌多种生长因子在生理功能方面，脂肪干细胞能分泌相当数量的细胞因子，包括肝细胞生长因子(HGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、胎盘生长因子(PGF)、转化生长因子一B(TGF—B)、成纤维细胞生长因子(FGF一2)等，低表达的因子有Ang一2 C。
DFAT 细胞体外分化诱导实验及体内生物学特性综述
DFAT 细胞体外分化诱导实验及体内生物学特性综述李福海;王志;张陈匀【摘要】去分化脂肪（ dedifferentiated fat ，DFAT）细胞，由于来源广泛、取材方便、增殖能力强、免疫原性低、表型稳定，很大程度上符合再生医学对理想种子细胞的要求，现已成为各个领域的研究热点。
本文对体外诱导DFAT细胞向多个方向分化的诱导方法及DFAT细胞在动物模型体内的多向分化和组织修复特性进行了综述。
目前对DFAT的研究仍滞留于寻求更高效的分化诱导因子的早期阶段，若欲将DFAT细胞作为再生医学的种子细胞投入临床应用，仍需大量的研究与探索。
%Dedifferentiated fat ( DFAT) cells, which to a large extent meet the demands for the ideal seed cells of the regenerative medicine research for its extensive sources , convenient drawing , strong proliferation ability , weak immunogenicity and stable phenotype , have become a research hotspot in many fields.This thesis conducts a review on the induction methods of the differentiation of induced DFAT cells in vitro into multiple directions , the multi-directional differentiation and the tissue repairing features of DFAT cells.At present , the study on DFAT cells still stagnates at the early stage of seeking for more efficient differentiation inducing factors .A large amount of research and exploration remains to be done before DFAT cells are put into clinical use as the seed cells in the research of regenerative medicine .【期刊名称】《北京生物医学工程》【年(卷),期】2015(000)003【总页数】6页(P310-315)【关键词】去分化脂肪细胞;分化;诱导;生物学特性【作者】李福海;王志;张陈匀【作者单位】贵州省心血管病研究所贵阳 550002;贵州省心血管病研究所贵阳550002;贵州省心血管病研究所贵阳 550002; 贵州省人民医院心内科贵阳550002【正文语种】中文【中图分类】R31820世纪80年代后期，组织学工程概念的提出，把再生医学带入了一个充满机遇与挑战的新时期。