药敏试验操作
药物敏感试验实验报告
一、实验目的本实验旨在通过药物敏感试验，了解病原菌对各种抗生素的敏感性，为临床合理选用抗生素提供科学依据，以指导临床治疗，提高治疗效果。
二、实验原理药物敏感试验是微生物学实验中的一种重要方法，其原理是通过观察细菌在含有不同浓度抗生素的培养基上的生长情况，来判断细菌对该抗生素的敏感性。
当细菌对某种抗生素敏感时，其在含有该抗生素的培养基上生长受到抑制，形成抑菌圈；反之，当细菌对该抗生素不敏感时，其在含有该抗生素的培养基上仍能生长。
三、实验材料1. 样本：临床分离的细菌菌株2. 培养基：琼脂平板、肉汤培养基3. 抗生素：青霉素、链霉素、红霉素等4. 仪器：恒温培养箱、显微镜、酒精灯、镊子等5. 试剂：生理盐水、消毒液等四、实验方法1. 样本处理：将临床分离的细菌菌株接种于肉汤培养基中，37℃培养18-24小时，观察细菌生长情况。
2. 琼脂平板制备：将肉汤培养基加热融化，待冷却至50-55℃时，加入抗生素纸片，轻轻摇匀，倒入平板，待凝固。
3. 抑菌圈测定：将培养好的细菌菌株接种于琼脂平板上，37℃培养18-24小时，观察抑菌圈的形成情况。
4. 结果记录：记录不同抗生素对细菌的抑菌圈直径，并按抑菌圈直径大小进行敏感性分级。
五、实验结果1. 青霉素：抑菌圈直径为20mm，敏感；2. 链霉素：抑菌圈直径为15mm，中敏感；3. 红霉素：抑菌圈直径为10mm，低敏感。
六、实验讨论1. 通过本实验，我们了解到青霉素对所检测的细菌菌株具有较好的敏感性，可以作为一种治疗该菌株感染的抗生素选择。
2. 链霉素对所检测的细菌菌株具有中敏感，可以作为一种辅助治疗药物。
3. 红霉素对所检测的细菌菌株具有低敏感，不建议作为首选治疗药物。
4. 在临床治疗过程中，应根据药物敏感试验结果，合理选用抗生素，以减少耐药菌株的产生。
七、实验结论本实验通过药物敏感试验，成功检测了细菌对各种抗生素的敏感性，为临床合理选用抗生素提供了科学依据。
实验结果表明，青霉素对所检测的细菌菌株具有较好的敏感性，可以作为一种治疗该菌株感染的首选抗生素。
药敏试验
注意事项：
放4℃保存，在5日内用完，使用前应在37℃培养箱烤干平皿表面水滴。
倾注平皿前应用pH计测pH值是否正确(pH应为7.3)。
pH过低会导致氨基糖苷类，大环内酯类失效，而青霉素活力增强。
(2) 药敏纸片长期储存应于－20℃，日常使用的小量纸片可放在4℃，但应至于含干燥剂的密封容器内。
使用时从低温取出后,放置平衡到室温后才可打开，用完后应立即将纸片放回冰箱内的密封容器内。
过期纸片不能使用, 应弃去。
(4) 保证质控菌株不变异的简便方法，将新得到的冻干菌株接种含血的M-H平板复活。
然后每株细菌接种10支高层琼脂管，放置冰箱保
存。
每月取出一支，传出细菌供常规用。
待用剩至最后一支，可传种在M-H平板上，再接种一批高层琼脂管备用。
如此可保证原始菌种永不接触抗菌素。
（5）每个平板贴5张纸片，每张纸片间距不少于24mm，纸片中心距平皿边缘不少于15mm。
在菌接种后15分钟内贴完纸片。
药敏试验操作方法
药敏试验操作方法
药敏试验操作方法一般包括以下步骤：
1. 菌株选取：选择适当的病原菌株进行测试，一般使用已知药敏性的参比菌株作为对照。
2. 菌液的制备：将菌株接种到培养基上培养，培养至菌量合适后，采用生理盐水调制成适宜浓度的菌悬液。
3. 菌液的稀释：取一定数量的菌悬液，根据草浆法或直接法进行适当稀释，使菌量达到目标细菌的浓度，一般为0.5-2×10^8个CFU/mL。
4. 抗生素的制备：按照制备好的抗生素试纸或试剂盒的说明，将抗生素溶液或药片溶解成合适浓度的抗生素溶液。
5. 稀释菌液的扩散：将已制备好的菌液均匀涂布在含有良好的抗生素稀释浓度梯度的培养基上。
6. 培养基的培养：将涂布了菌液的培养基在合适的温度（通常为35-37）下培养约16-20小时。
7. 结果的解读：通过观察培养基上微生物的生长情况，判断细菌对抗生素的敏
感性。
一般，对抗生素敏感细菌培养后，会在培养基上形成清晰的抑菌圈，直径会随着对菌体敏感程度的增加而扩大。
8. 数据记录和分析：记录抗生素的名称、浓度、菌株信息、抗菌圈直径等数据，并进行统计和分析。
需要注意的是，药敏试验的具体操作方法可能会因实验目的、试验样本、试剂等因素而有所不同，因此在进行药敏试验前应详细阅读试剂盒或试纸的使用说明，并按照说明书操作。
药敏试验方法1
药敏试验方法：K-B法：1 从孵育了16-24小时的琼脂平板上（血平板），挑出单个菌落，直接用生理盐水制成0.5麦氏单位。
2 在15分钟内，用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁处旋转并用力挤压几次，以从中挤出过多的菌液。
3 用棉拭子在无菌的M-H培养基表面化线接种，再重复操作两次，每次将平板转动60度，每次接种都应保证接种物均匀分布，最后用棉拭子涂抹平板的边缘。
4 将确定好的药敏纸片分贴到平板表面。
每个纸片都应压一下，以保证与平板表面完全接触。
每个纸片中心间距24mm。
纸片一旦与平板接触，不应再移动。
5 贴完纸片后，应在15分钟内放入35度孵箱。
嗜血杆菌属，链球菌属放入3%-5%的CO2烛缸。
6 孵育24小时以后，测量各药敏纸片抑菌圈直径，与NCCLS手册比较，作出结果判断。
说明：细菌药敏结果的判断以NCCLS为标准，所以药敏试验的每一步都应严格按照NCCLS操作，否则将失去意义。
链球菌、奈瑟菌属、流感嗜血杆菌、除铜绿假单孢菌和不动杆菌外的假单孢菌属不用K-B法.肺炎链球菌胶乳凝集测定法1 在一干净玻片上分别滴两滴生理盐水。
2 从冰箱取出鉴定试剂(Slidexpneumo-kit)于室温。
3 在其中一滴生理盐水上滴加R1试剂，在另外一滴上滴加R2试剂，用搅拌棒混匀。
4 轻轻晃动玻片2分钟，观察结果。
5 2分钟内，如R1出现凝集为阳性；如R1和R2均未出现凝集为阴性。
注：R3为阳性对照。
药敏纸片的选择1、革兰阴性杆菌（肠杆菌科）头孢噻肟（CTX）头孢唑林（CZ）头孢他定（CAZ）氨苄西林（AM）哌拉西林（PIP）阿米卡星（AN）头孢噻吩（CF）环丙沙星（CIP）头孢呋辛（CXM）庆大霉素（GM）头孢噻肟/棒酸（CTX/CA）头孢他定/克拉维酸（CAZ/CA）羧苄青霉素（CB）奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦（PIP/TZ）亚安培南头孢匹肟（FEP）头孢克罗（CEC）2、铜绿假单孢菌/不动杆菌妥布霉素（TM）阿米卡星（AN）安曲南（AZT）头孢哌酮（CFP）哌拉西林（PIP）头孢匹肟头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP）头孢他定（CAZ）左旋氧氟沙星（OFL）亚安培南哌拉西林/三唑巴坦3、金黄色葡萄球菌苯唑西林（OX）青霉素G（P）头孢唑林（CZ）阿米卡星（AN）红霉素（E）头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP）万古霉素奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦头孢噻吩（CF）4 、肠球菌氨苄西林（AM）万古霉素环丙沙星（CIP）庆大霉素（GM）红霉素（E）氧氟沙星（OFL）5、除肺炎链球菌外链球菌氨苄西林（AM）头孢噻肟（CTX）万古霉素红霉素（E）氧氟沙星（OFL）克林霉素(CM)肺炎克雷伯菌产酸克雷伯菌和大肠杆菌ESBLs的检测MH培养基上贴头孢他定，头孢他定/克拉维酸，头孢噻肟/棒酸，安曲南。
药敏试验
判定标准
清晰无细菌生长的试管对应的药物浓度为该药
的MIC；
以MIC前2支试管液体涂培养基
培养 菌落少于5个的试管对应的药物浓度为该 药的MBC。
试 材
试管、移液管、营养琼脂和营养肉汤
方 法
（1）制备药液、菌液、培养基; （2）向第1支试管中加入0.9mL营养肉汤、其 余各试管中加入0.5mL； （3）向第1支试管中加0.1mL药液 取0.5mL 加到第2支试管中……至13支试管，取0.5mL涂 平板 向1-14试管中各加0.5mL菌液 培养。
耐药：直径＜10mm液、牛津杯、钢管放置器、陶瓦盖 步 骤 （1）制备菌液：106-7 （2）制备药液：1280μg/mL （3）制备培养基 （4）涂菌液 （5）放置牛津杯 （6）加菌液 （7）盖陶瓦盖 （8）培养 （9）量直径
三、液体试管二倍稀释法
药敏实验
一、药敏纸片法
试 材
培养皿、培养基、菌种（病料）、药敏片、 培养箱
方 法
（1）制备药敏片 （2）制备培养基：营养琼脂、营养肉汤 （3）涂菌：菌液105 CFU （4）贴药敏片 （5）培养:37℃ 24小时 （6）量直径：
判定标准
敏感：直径＞15mm
中度敏感： 10~15mm
药敏实验的操作规程
药敏实验的操作规程药敏实验是一种常用的实验方法，用于测试不同药物对细菌的敏感性。
其操作规程如下：1. 准备工作a. 选择适当的培养基：根据实验目的和细菌的需求，选择适合的培养基。
常用的培养基有Muller-Hinton (MH) 培养基和血琼脂基质（Blood Agar）。
b. 准备药物：根据研究的需求，选择要测试的药物，先进行浓度调节并制备药物试液。
c. 选择试验细菌：选择需要测试的细菌菌株，可选择多种细菌进行测试。
2. 制备药物试液a. 根据药物的浓度和用途，按照配制方法将药物试液制备好。
b. 对于不同药物，可根据需要设定不同的浓度梯度。
通常使用两倍稀释法制备浓度梯度。
3. 制备细菌悬浮液a. 从培养基中取出所需菌株，并用无菌生理盐水进行洗涤，以去除残余培养基或其他杂质。
b. 将菌株悬浮于无菌生理盐水中，通过眼镜划线计数法或光密度测定法调整细菌悬浮液的浓度至合适的范围。
4. 进行测定a. 在MH培养基或血琼脂基质上均匀涂布细菌悬浮液，使其形成薄膜。
b. 将培养基上涂有菌株的培养皿分成数个区域，每个区域均加入一种药物试液。
c. 用无菌的扩菌针分别在每个区域上刺入药物试液，使药物试液与菌株接触。
d. 将培养皿孵育于适当的环境条件下，一般为37℃，孵育时间根据实验目的而定，通常为24小时。
5. 结果判读a. 在观察期间，观察每个区域的菌落生长情况。
b. 比较不同药物试液对细菌生长的影响，评定其敏感性。
c. 根据实验目的和相应参考标准，判断细菌对药物的敏感性、中等敏感性或耐药性。
6. 数据处理和分析a. 统计每个药物试液对细菌的抑菌效果，记录菌落生长情况。
b. 根据实验结果，绘制抑菌效果图或者计算药物的最小抑菌浓度（MIC）。
7. 实验注意事项a. 所有操作必须在无菌条件下进行，避免细菌的污染。
b. 实验人员必须戴上手套，避免药物对皮肤造成刺激。
c. 严格按照药物的安全操作规程进行操作，避免药物泄漏和误服。
药敏试验纸片扩散法操作步骤
药敏试验纸片扩散法操作步骤
药敏试验纸片扩散法是一种常用的检测细菌对抗生素敏感性的方法，其操作步骤如下：
1. 准备培养基：根据需要选择合适的培养基，如Mueller-Hinton（MH）琼脂（常用于细菌药敏试验）。
按照制造商的
说明溶解固体培养基，并加入适当量的琼脂（通常为2%），
将其加热溶解，然后用无菌盘口装好。
2. 菌液制备：从培养基上的细菌菌落中接种一根病菌棒，将其浸入含有3-5毫升无菌盐水的试管中。
3. 菌液浓度调整：将试管中的细菌菌液用比例稀释至合适的浓度（通常为0.5麦克百尼尔/毫升）。
4. 纸片扩散：用无菌的棉签将稀释后的菌液均匀地涂抹在一块布拉格琼脂平板上，然后在琼脂上按要求摆放敏感纸片（一般为阿莫西林、头孢菌素等常用抗生素），注意要与纸片相距一定距离。
5. 培养：将布拉格琼脂平板反面朝上，用无菌培养皿盖好，然后放入恒温培养箱中进行孵育。
通常在35-37°C条件下培养
24小时。
6. 结果录入和解读：观察纸片周围的细菌生长情况，通过测量纸片周围形成的抑制圈直径来评估细菌对不同抗生素的敏感性。
根据抑制圈的直径大小，将细菌的敏感性分为敏感、中等和耐
药三个等级。
注意事项：
- 操作过程需要严格无菌，以免细菌的外源污染影响结果。
- 确保培养皿紧闭，避免细菌的空气传播。
- 操作前后要做好清洁，避免微生物交叉感染。
- 移栽过程要注意避光，避免紫外线对细胞的破坏。
药敏试验操作方法
药敏试验操作方法药敏试验是一种常用的实验方法，用于确定某种药物对细菌的敏感性或抗性。
下面是药敏试验的一般操作方法：1. 菌株的培养与准备：首先，选择要测试的细菌株。
常用的菌株包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。
将菌株从冻存状态中转移到琼脂平板上进行培养，然后选取单个菌落进行继续培养。
2. 制备药物浓度梯度：为了测试细菌对不同浓度药物的敏感性，需要制备一系列药物浓度梯度。
可以选择常用的抗生素，如青霉素、利福平等。
根据药物的最小抑菌浓度（MIC）确定所需药物的最高浓度。
3. 制备洗涤液：制备1倍洗涤液，一般使用生理盐水或缓冲液。
如要进行中药药敏试验，可根据实验需求选择适当的提取液。
4. 制备菌悬液：从培养得到的菌落中选择单个菌落，接种到含有洗涤液的试管或培养皿中。
使用比例约为1:100（菌悬液：洗涤液），均匀混合。
5. 药物与细菌接触：将制备好的菌悬液均匀涂布在琼脂平板上，然后使用定量器将一定量的药物滴在琼脂平板上。
确定滴药量时应根据具体药物的MIC进行调整。
6. 培养与观察结果：将涂有菌悬液和药物的琼脂平板进行孵育，时间和温度可以根据具体的实验目的和菌株要求进行调整。
观察培养后的平板上是否出现菌落生长，以及菌落的数量和形态特征。
7. 结果解读与分析：根据观察到的结果，分析不同浓度药物对细菌的抑菌效果，评估细菌对药物的敏感性。
可以根据菌落的出现与否、数量的多少和生长的形态特征来判断细菌是否对药物敏感。
总结：药敏试验是一种重要的实验方法，可以评估细菌对药物的敏感性或抗性。
操作时需要注意菌株的选择和培养方法、药物浓度的制备、菌悬液的制备和药物与细菌的接触方法，以及培养和观察结果等。
通过药敏试验的结果，可以帮助医生选择适当的药物治疗感染病情。
药敏试验实验报告
药敏试验实验报告概述：药敏试验是一种用来测试细菌对不同抗生素的敏感性的实验方法。
本实验旨在通过观察不同药物对细菌的杀菌效果，评估药物的抗菌活性。
通过实验结果，可以为临床医生提供选择合适药物治疗感染的依据。
实验步骤：1. 细菌培养：从临床患者的感染部位采集样本，进行无菌处理后，接种于含有丰富营养物质的琼脂培养基上，利用恒温培养箱在37摄氏度下培养。
2. 药物制备：根据实验要求选用常见的抗生素药物，配制合适浓度的药物溶液。
3. 药敏纸片实验：将药敏纸片铺在含有培养菌的琼脂平板上，利用吸管滴取一定量的药物溶液滴在药敏纸片上。
将琼脂平板放置在恒温培养箱中培养。
4. 结果观察：观察培养基上的药物液滴周围是否出现抑菌圈，测量抑菌圈的直径。
根据抑菌圈的大小和药物浓度的对应关系，判断细菌对药物的敏感性。
实验结果：通过对不同抗生素药物的实验观察，我们得到了如下结果：1. 对照组：在没有添加药物的培养基上，细菌在一定时间内呈现正常生长。
2. 敏感性试验：观察到在添加了某些药物后，细菌周围出现了抑菌圈。
抑菌圈的直径越大，说明细菌对该药物的敏感性越高。
根据抑菌圈的直径，我们判断药物的敏感性分为不同级别。
3. 抗药性试验：观察到在添加了某些药物后，细菌周围未出现抑菌圈，或抑菌圈的直径很小。
这说明细菌对该药物的敏感性较低，甚至产生了抗药性。
讨论和分析：通过药敏试验的结果，我们可以根据细菌对不同药物的敏感性来选择合适的抗生素治疗感染。
药敏试验是临床医生进行抗生素选择的重要依据之一。
根据不同细菌的敏感性结果，医生可以根据药物的目标细菌的敏感性，选择合适的药物和剂量进行治疗。
同时，药敏试验也可以帮助医生监测和了解细菌对药物的抗药性情况。
随着抗生素的广泛使用，一些细菌逐渐产生了对药物的抗药性。
通过药敏试验，可以及早发现和监测细菌的抗药性情况，为防控细菌抗药性提供依据。
然而，药敏试验也存在一些限制。
首先，该试验只能测试抗生素对细菌的杀菌效果，不能完全模拟临床环境中抗生素的药效。
kb法药敏试验流程
kb法药敏试验流程KB法药敏试验是一种常见的药物敏感性检测方法，它可以用来检测细菌对不同抗生素的敏感性。
这种方法可以帮助医生选择最有效的治疗方案，从而提高治疗效果，减少药物滥用和耐药性的发展。
KB法药敏试验的流程大致如下：1. 培养细菌首先需要从患者样本中分离出病原菌，并在培养基上进行细菌培养。
通常会选择含有营养物质丰富的琼脂培养基，让细菌在其中生长繁殖。
2. 制备药物接下来需要准备不同种类的抗生素药物。
这些药物可以是单一的化合物，也可以是混合物。
通常会选择一些常用的抗生素，如青霉素、头孢菌素、氨基糖苷类等。
3. 稀释药物为了确定细菌对不同浓度的药物的敏感性，需要将药物进行稀释。
通常会选择两倍稀释法，即每次将药物浓度减半，直到得到一系列不同浓度的药物。
4. 加入细菌将不同浓度的药物加入到含有细菌的琼脂培养基上，并在恒温箱中进行培养。
通常会选择37℃左右的温度，让细菌在其中生长繁殖。
5. 观察结果观察不同浓度的药物对细菌生长的影响，可以通过肉眼或显微镜进行观察。
如果药物浓度过低，细菌可以正常生长；如果药物浓度过高，细菌无法生长；如果药物浓度适中，细菌可以生长但速度较慢。
6. 计算MIC值MIC（最小抑菌浓度）是指能够抑制细菌生长的最低药物浓度。
通过观察不同浓度药物对细菌生长的影响，可以确定MIC值。
通常会选择MIC为药物敏感性的判断标准，MIC值越小表示细菌对该药物越敏感。
总之，KB法药敏试验是一种简单而有效的药物敏感性检测方法。
通过这种方法可以快速、准确地确定细菌对不同抗生素的敏感性，为医生选择最佳治疗方案提供了重要依据。
抗菌药物敏感试验实验
无菌试管、刻稀释法
K-B法操作方法
操作注意事项：
菌液应在15分钟内接种完毕 接种后，平板放置时间不要超过5min 注意纸片距离
肉汤稀释法操作方法
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
M-H肉汤(ml)
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
抗生素(ml) 菌液(ml)
2
2
2
2
2
2
2
2
2弃 －
去
0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
35℃孵育16~18h，观察结果
实验内容
第二次 1.观察K-B法的结果 2.观察肉汤稀释法的结果
K-B法结果解释
测量抑菌圈直径，参照CLSI的标准解释结果。
20mm
金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性试验结果判断
大肠埃希菌抗菌药物敏感性试验结果判断
实验目的 1.掌握纸片扩散法（K-B法）和肉汤稀释法
的原理、操作方法、结果的判读及其临床 意义。 2.掌握纸片扩散法和肉汤稀释法的质量控制。
实验内容 纸片琼脂扩散法（K-B法） 肉汤稀释法
实验器材
1. 菌种： 金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌 2. 培养基：水解酪蛋白琼脂（MH琼脂）、MH肉汤 3. 抗菌纸片：青霉素（PEN）、庆大霉素（GEN）、
药敏试验的实验步骤及结果判定方法
药敏试验的实验步骤及结果判定方法一、实验准备在进行药敏试验之前，需要准备以下物品：1. 抗菌药物纸片。
2. 药敏试验培养基（如MH琼脂）。
3. 待测菌株。
4. 无菌棉签。
5. 吸管或微量加样器。
6. 手套、口罩和实验服。
7. 药敏试验记录表。
二、菌株接种1. 使用无菌棉签蘸取待测菌株，轻轻涂布在MH琼脂表面，确保菌株分布均匀。
2. 将涂布好的培养基放在37℃恒温箱中培养18-24小时。
三、药物稀释1. 根据抗菌药物的说明书，配置好所需浓度的药物溶液。
2. 使用吸管或微量加样器，将药物溶液按比例稀释。
四、药敏片制备1. 准备抗菌药物纸片，根据说明书要求进行剪裁。
2. 将抗菌药物纸片放在无菌平皿中，每片纸片标记对应的药物名称。
五、药敏试验1. 在培养基上标记好菌株的名称和实验日期。
2. 使用无菌棉签或吸管，将菌株涂布在药敏试验培养基上，确保菌株分布均匀。
3. 用无菌镊子取抗菌药物纸片，轻轻贴在培养基表面，每个药物纸片间隔15-20mm。
4. 将培养基放在37℃恒温箱中培养18-24小时。
六、结果判定1. 在规定时间内观察并记录每个抗菌药物纸片周围的抑菌圈大小。
2. 根据抑菌圈大小，参照抗菌药物的敏感度判定标准，判断菌株对药物的敏感度（如敏感、中介或耐药）。
3. 综合不同抗菌药物的敏感度结果，给出最终的药敏试验报告。
七、结果记录将实验步骤和结果详细记录在药敏试验记录表中，以便后续分析和报告编写。
记录内容包括：菌株名称、实验日期、药物名称、药物浓度、抑菌圈大小、敏感度判断和实验员等信息。
八、结果解读根据药敏试验结果，临床医生可以了解菌株对不同抗菌药物的敏感性和耐药性，从而选择合适的药物进行治疗。
药敏试验结果也是抗菌药物合理使用的重要依据，有助于减少耐药性的产生和抗生素的滥用。
同时，实验室可以通过药敏试验结果的统计分析，了解地区或医院内常见病原菌的耐药情况，为抗菌药物的研发和使用提供科学依据。
药敏试验方案
1抗菌药物筛选1.1 菌液的制备将菌株接种于普通琼脂平板上，置于37℃恒温箱中培养24h，分别挑取单个特征菌落接种于灭菌肉汤培养基中，置37℃恒温箱中过夜培养。
取过夜培养的菌悬液100 μL加入到900μL的肉汤培养基中，依次进行稀释，然后选取适当的浓度涂板，每个浓度三个平行。
选取平板上菌落数目在30～300之间的进行计数，最后用肉汤或无菌生理盐水配成浓度为5个×107-8CFU/mL的菌液作初筛用。
1.2 琼脂扩散法 (K-B) 抑菌试验用无菌棉签将浓度为5个×107-8CFU/mL的标准菌液均匀涂布于普通营养琼脂培养基上，反复几次，每次将平板旋转60度，最后沿周边绕两圈，保证涂均匀。
然后用直径为6mm的无菌圆形玻璃管打孔，将供试药物浓度为100mg／ml的药液加入孔中，加满为止，不得溢出。
再将培养皿置于37℃恒温箱中培养24h，取出观察，用卡尺测量抑菌圈的直径。
每次实验前用大肠杆菌ATCC25922进行质量控制，设置阴性对照和阳性对照，阳性药物的选择依据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)公布的标准。
1.3 药敏试验判断标准按照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)，抑菌圈直径d小于等于6 为-；d小于等于10为+；d小于等于16为++；d小于等于26为+++；d大于26为++++ 。
一般认为++以上具有抑菌活性。
2 抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)测定2.1 菌悬液的制备将细菌菌液接种到麦康凯培养基上进行纯化培养，37℃震荡培养24 h。
分别挑取单个特征菌落接种于灭菌肉汤培养基中，置37℃恒温箱中过夜培养。
取过夜培养的菌悬液100 μL加入到900μL的肉汤培养基中，依次进行稀释，然后选取适当的浓度涂板，每个浓度三个平行。
选取平板上菌落数目在30～300之间的进行计数，最后用肉汤稀释菌悬液至含菌落数105 ～106 CFU/mL后备用。
2.2 MIC和MBC测定将1mL的2倍终浓度的药物放到第1管，采用二倍稀释法将药液从第1管到第10分别稀释。
药敏试验的操作方法
药敏试验的操作方法
药物敏感性试验是一种常用的药物敏感性检测方法，它可以评估不同药物对细菌的杀菌效果。
操作步骤如下：
1. 准备培养基：根据实验需要选择适宜的培养基，如Mueller-Hinton琼脂培养基等，并按照说明书的要求制备好培养基。
2. 细菌的孵育：将需要测试的细菌株均匀涂布在琼脂培养基的表面上，然后在37C下孵育24小时，使得菌落生长。
3. 制备药物试验片：将需要测试的药物稀释成不同浓度的溶液，通常是2倍稀释系列。
将药物溶液滴在试验片上。
4. 放置试验片：将制备好的试验片放置在含有菌落的琼脂培养板上，并轻轻压平，使得药物溶液能够与细菌接触。
5. 孵育试验片：将装有试验片的琼脂培养板置于37C下孵育24小时，使得细菌在药物的作用下生长或者抑制生长。
6. 结果的观察和解读：观察试验片上细菌的生长情况，根据细菌对药物的敏感性判断药物的杀菌效果。
常用的评估标准是观察试验片上出现最低抑菌浓度（MIC）。
7. 数据记录和分析：将观察到的结果记录下来，并根据试验片上出现的细菌生长情况分析药物的抗菌活性。
值得注意的是，药物敏感性试验只是一种体外实验，并不能完全代表细菌在体内的敏感性。
因此，对于真实应用中的治疗选择，还需要综合考虑其他因素，并结合临床实践进行判断。
药敏试验操作方法
制作步骤：
1、纸片的准备 2、药液的配制 3、抗菌药敏纸片制作
质控：标准菌株的抑菌 圈直径应落在预期范围 内，如果超出该范围， 应视为失控而予以纠正。
简易药敏片的制法
纸片的准备：
1、取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆 形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中， 瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压消毒后， 放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。
3、为经验用药提供所选药物的参考依据，可预测抗菌 治疗的效果。“敏感”治疗可能有效；“耐药” 肯定 失败
4、新抗菌药的研究
以下情况不需进行药敏测定：
标本污染细菌，非致病菌引起 已知某些抗菌药对某菌有良好的抗菌作用且很少
有耐药菌产生 已知细菌全部耐药的药物 对营养要求高而不易生长的细菌
二、常用的药敏测定方法
3、E测定法（E test）：
与扩散法相似，但药物包被于长塑料条上，能够精确测定 MIC值。适于一些特殊病原菌的药敏测试，但价格较为昂贵。品（单品药、药厂的成品药、中药）、恒温培养箱、药敏片、 培养基、平皿（直径90mm）、烧杯、蒸馏水、滤纸、打孔器（文 具店有售）、
1、纸片琼脂扩散法（3/3）
3、培养观 察
将平 皿培养基 置于37℃ 温箱中倒 置培养24 小时后， 观察效果
2、牛津杯法
第一步同“纸片法”细菌涂抹平板。 以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（内径6nm、外径8nm、
高10 nm的圆形小管，管的两端要光滑，也可用玻璃管、 瓷管），放置在培养基上，轻轻加压，使其与培养基接 触无空隙，并在小管处标记各种药物名称。每个平板可 放4-6支小管。待分钟后，分别向各小管中滴加一定数 量的各种药液，勿使其外溢。
药敏试验的操作方法及注意事项
药敏试验的操作方法及注意事项
（1）M-H平板的制备：将在约56℃恒温的无菌M-H琼脂倾注直径为90mm的平板，其厚度4mm。
（2）比浊管的配置：0.5麦氏比浊管的配置：取0.048mol/L的氯化钡溶液（1.175%w/v，BaCl2•2H2O）0.5ml，加至99.5ml0.18mol/L的硫酸溶液（1%v/v）中，不断搅拌使成混悬液。
取4～6ml硫酸钡混悬液，置与稀释菌悬液相同规格的具塞试管中，密封，室温避光保存。
（3）菌液的制备：A 肉汤法：无菌挑取菌落于MH肉汤中，摇菌2-6h；B 直接法：无菌挑取4-5个菌落于PBS中，混匀。
（4）比浊：将制备好的菌液与比浊液管置比色卡上对着光源比较，适当情况下可用无菌生理盐水或肉汤稀释菌悬液，使两者浊度一致，即菌悬液的浓度为0.5标准麦氏单位。
（5）涂菌：用无菌棉签浸入细菌悬液中，将拭子在试管上壁轻轻挤压以挤去过多的菌液。
棉签在三个方向均匀抹琼脂表面（每次转60℃）最后沿平板内缘涂抹一周，使菌液均匀分布。
（6）贴药敏片：用无菌镊子或纸片分配器将抗菌纸片粘贴于M-H琼脂的表面，一旦纸片贴上，不能移动；一般一个平皿贴5-6个药敏片。
（7）培养：一般细菌：37℃培养16～18h；流感和副流感嗜血杆菌：5%CO2 37℃16-18h。
（8）用游标卡尺取抑菌环直径，根据CLSI标准。
判断待测菌对抗生素是敏感，中介还是耐药，选择敏感药物进行疾病治疗。
中介是一个缓冲区，若无敏感药物可提高中介药物的浓度来使用。
中国药敏试验标准
中国药敏试验标准药敏试验是一种通过检测细菌对不同抗生素的敏感性，从而确定最佳治疗选择的方法。
中国药敏试验标准是指在中国地区进行药敏试验时所遵循的一系列规范和方法。
背景药物的发展和使用引发了细菌耐药性的问题。
为了有效治疗感染疾病，了解细菌对不同抗生素的敏感性变得至关重要。
药敏试验可以帮助医生选择合适的治疗方案，减少使用无效药物的风险。
药敏试验的目的药敏试验的主要目的是评估细菌对不同抗生素的敏感性和耐药性。
通过这些试验，可以确定可治疗感染的最佳药物选择。
药敏试验可以帮助医生制定个体化的治疗方案，提高治疗效果。
药敏试验的步骤药敏试验主要包括以下步骤：1.细菌培养：从临床标本中分离出细菌，并进行培养以增加菌落数量。
2.准备试验药物：根据需要准备不同浓度的抗生素。
3.进行药敏试验：将不同浓度的抗生素样品与培养好的细菌接触，观察细菌对不同抗生素的反应。
4.数据分析：根据细菌的生长情况，确定细菌对不同抗生素的敏感性和耐药性。
药敏试验标准中国药敏试验标准主要参考以下几个方面：1.国际标准：中国药敏试验标准与国际上通用的药敏试验标准保持一致，例如美国临床和实验室标准研究所（CLSI）发布的相关标准。
2.地区特点：中国药敏试验标准也会考虑国内特殊情况，例如常见的致病菌种类和抗生素的使用情况。
3.经验总结：中国药敏试验标准会结合国内的临床实践和经验总结，尽可能提供针对中国地区的指导建议。
药敏试验标准的遵循能够确保得到准确且可靠的结果，进而指导临床治疗。
标准的制定需要定期更新，以适应新的抗生素和药物治疗技术的出现。
结论药敏试验在临床治疗中具有重要作用。
中国药敏试验标准的制定旨在确保药敏试验的准确性和可靠性。
遵循标准能够提高医生的决策依据，减少药物耐药性的发展，并提高患者的治疗效果。
药敏试验标准的制定是一个复杂而系统的过程，需要考虑国际标准、地区特点和临床经验。
只有通过不断地更新和优化，药敏试验才能更好地适应不断变化的医疗需求，为患者提供更好的治疗选择。
药敏试验操作方法
药敏试验操作方法药物敏感性试验是一种常见的实验方法，用于评估药物对细菌或其他微生物的敏感性。
下面我将详细介绍药敏试验的操作方法。
一、实验仪器和试剂准备1. 培养基：根据要测试的细菌种类选择相应的培养基，并按照说明书配制。
2. 抗生素：根据实验需求选择合适的抗生素。
可以是已知的抗生素，也可以是待测的新药物。
3. 细菌悬浮液：从培养物中挑取单一菌落，转接到培养基中培养一夜，然后取一定量的细菌悬浮液用生理盐水调制。
二、药敏试验步骤1. 稀释菌悬液：将细菌悬液稀释至适宜浓度，通常为0.5 McFarland 标准浓度，以确保实验准确性。
2. 制备琼脂平板：将培养基煎化至液态，待温度降至45-50时加入相应抗生素浓度，快速混合后倒入培养皿中。
3. 扩展细菌：将含有药物的琼脂平板倒扣在灭菌台上，用细菌悬液均匀涂抹在琼脂平板表面上。
4. 培养和观察：将培养皿放入恒温培养箱中，在适宜的温度下培养一段时间，通常为18-24小时。
培养结束后，观察菌落生长情况，并记录结果。
5. 结果解读：根据菌落的生长情况和直径大小，判断细菌对药物的敏感性。
通常，抗生素有效抑制菌落生长的区域称为抑制圈，其直径大小与药物对细菌的抑菌效果相关。
- 抗生素敏感（S）：抑制圈直径大于抗生素的最低抑菌浓度（MIC）；- 中度敏感（I）：抑制圈直径仅略大于MIC；- 抗生素耐药（R）：抑制圈直径小于MIC。
6. 结果记录和分析：将对应的药敏结果记录下来，并进行案例分析和数据统计。
7. 实验验证：如果需要，可以对少数样本进行二次验证以确保结果的准确性。
三、注意事项和常见问题1. 实验操作要严格遵守无菌技术，以防止外界细菌的污染。
2. 实验室工作人员应佩戴适当的个人防护装备，如实验手套、口罩等。
3. 实验仪器和试剂要经过严格的消毒和无菌处理。
4. 抗生素的选择要与实验目的和细菌种类相匹配，避免选择不当的抗生素。
5. 实验结束后，应正确处置培养皿和含有抗生素的废弃物，以避免对环境造成污染。
药敏实验的操作规程
药敏实验的操作规程
《药敏实验操作规程》
一、实验目的
本实验旨在测试不同药物对细菌的药敏性，为临床用药提供参考。
二、实验材料
1. 不同种类的药物
2. 革兰氏阳性细菌及革兰氏阴性细菌培养基
3. 培养皿、消毒酒精、移液器、离心机等常规实验器材
三、实验步骤
1. 将革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌分别分装于培养皿中，均匀涂布于培养基表面。
2. 在分装有不同药物的培养皿上分别滴加一定量的药物液体，确保液体能够均匀覆盖培养基表面。
3. 将处理好的培养皿置于恒温培养箱中，设置合适的温度和时间，培养细菌。
4. 观察培养皿上不同区域的细菌生长情况，记录并比较各种药物对细菌的影响。
四、实验注意事项
1. 操作过程需注意无菌操作，避免外界污染。
2. 按照实验要求使用药物，注意用药量和涂布均匀性。
3. 实验完成后，将培养皿和实验用具进行正确处理，避免对环境造成污染。
五、实验结论
通过对培养皿上不同区域的细菌生长情况观察和分析比较，得出不同药物对细菌的药敏性，并据此提供临床用药建议。
六、实验意义
药敏实验的结果对临床治疗中的抗菌药物选择，以及对细菌感染病症的诊断和预防具有重要的指导意义。
以上为《药敏实验操作规程》，希望实验者严格按照规程操作，确保实验结果的准确性和可靠性。
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药敏试验操作
录入时间:2011-4-21 13:46:47 来源：中华检验医学网
实验步骤
一、实验材料
普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦康凯培养基。
做沙门氏菌可选择血清培养基。
药敏试纸：购买或自制（详见实验准备）
细菌：待做药敏试验的细菌
仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头
二、实验准备
2.1 药敏片的准备：购买或自制
2.1.1 制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。
取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。
经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。
2.1.2 抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。
同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。
切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。
2.2 药液的制备（用于商品药的试验）：按商品药的使用治疗量的比例配制药液；如商品药百病消按其说明量治疗量0.01%饮水，可按这个比例配制药液，可取10毫克加入10毫升的水中混匀。
此稀释液即为用于做药敏试验的药液。
三、实验操作方法
3.1 药敏片法
3.1.1 在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。
具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。
然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。
（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。
要求涂布均匀致密）
3.1.2 将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停，取药敏片贴到平皿培养基表面。
为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。
为了使能准确的观察结果，要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上；一般可在平皿中央贴一片，外周可等距离贴若干片（外周一般可贴七片），每种药敏片的名称要记住。
3.1.3 将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。
3.2 牛津杯法
3.2.1 在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。
具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。
然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。
（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。
要求涂布均匀致密。
）
3.2.2 以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（内径6nm、外径8nm、高10nm的圆形小管，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培养基上，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙，并在小管处标记各种药物名称。
每个平板可放4-6支小管。
待分钟后，分别向各小管中滴加一定数量的各种药液，勿使其外溢。
置37℃培养8-18小时，观察结果。
3.2.3 将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。
3.3 打孔法：
该法较简单，成本低，易操作，比较适用于商品药物的检测。
3.3.1 在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。
具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。
然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。
（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。
要求涂布均匀致密。
）
3.3.2 以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（外径为4毫米、孔径与孔距均为3毫米，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培养基上打孔，将孔中的培养基用针头挑出，并以火焰封底，使培养基能充分的与平皿融合（以防药液渗漏，影响结果）。
3.3.3 加样：按不同药液加样，样品加至满而不溢为止。
3.3.4 将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。
结果观察
在涂有细菌的琼脂平板上，抗菌药物在琼脂内向四周扩散，其浓度呈梯度递减，因此在纸片周围一定距离内的细菌生长受到抑制。
过夜培养后形成一个抑菌圈，抑菌圈越大，说明该菌对此药敏感性越大，反之越小，若无抑菌圈，则说明该菌对此药具有耐药性。
其直径大小与药物浓度、划线细菌浓度有直接关系。
判定标准
一、药敏实验的结果，应按抑菌圈直径大小作为判定敏感度高低的标准。
表1 药物敏感实验判定标准
抑菌圈直径（毫米）敏感度
20以上极敏
15~20 高敏
10~14 中敏
10以下低敏
0 不敏
二、药物敏感实验判定标准参考表1，多黏菌素抑菌圈；在9毫米以上为高敏，6—9毫米为低敏，无抑菌圈为不敏。