注射用泮托拉唑钠无菌方法学验证试验_尹秀梅

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生脉饮提取物鉴别方法学验证
王欣宇 １ 王丽博 ２ 李 焱 ３ （1、 哈药集团三精制药股份有限公司， 黑龙江 哈尔滨 150000 2、 华北制药集团先泰药业有限公司北元五厂， 河北 石家庄 050000 华北制药集团综合实业有限责任公司， 河北 石家庄 050000 ） 3、 摘 要《 ： 中国药典》 2010 年版第一增补本对生脉饮的鉴别项目增加了五味子、 五味子醇甲对照鉴别一项， 公司依据药典方法建立了 质量标准， 为确认此方法的有效性， 特对此方法学经行研究。对该检验方法的专属性以及耐用性进行了验证。 关键词： 生脉饮； 五味子、 五味子醇甲对照； 专属性； 耐用性 １ 验证目的 对已批准的生脉饮提取物质量标准中的检查 方法进行验证，以确认已经建立起的质量控制方法 有效的控制产品的质量。 ２ 验证项目： 鉴别 ３ 材料： ３．１ 供试品。 品名： 生脉饮提取物； 来源： 黑龙江省格润药业 有限责任公司； 贮藏条件： 密封， 置阴凉处。 ３．２ 对照品 名称： 五味子对照药材； 来源： 中国食品药品鉴 １２０９２２－ ２０１１０８； 贮藏条件： 冷藏； 定研究院； 批号： 名称： 五味子醇甲对照品； 来源： 中国药品生物制品 检定所； 批号： １１０８５７－ ２０１０１０； 贮藏条件： 冷藏 ３．３ 试剂 １ ２ ３ ４ ５ １ ２ ３ ４ １ ２ ３ ４ 乙醚：天津市科密欧化学试剂有限公司 1—供试品： 生脉饮提取物 120601 1—供试品： 生脉饮提取物 120601 1—阴性对照样品 批号： ２０１２０６０２；乙醇：国药集团化学试剂有限公 2—供试品： 五味子对照药材 2—对照药材： 五味子对照药材 2—对照药材： 生脉饮提取物 120601 司； 批号： ２０１１０５１３； 三氯甲烷： 天津市科密欧化学 3-对 照 药 材： 3—对照品： 五味子醇甲对照品 3—对照品 ： 五味子醇甲对照品 五味子对照药材 4—供试品： 生脉饮提取物 120701 4—供试品： 生脉饮提取物 120701 ２０１１０３０４；石油醚 （３０～ 4—供试品： 试剂有限公司 批号： 生脉饮提取物 120701 对照品 ： 五味子醇甲对照品 5６０℃ ） ： 西陇化工股份有限公司； 批号： １００１０６； 甲酸 图１ 图２ 图３ ２００９０４０２； 甲酸： 西陇 乙酯： 天津永大化工厂； 批号： 化工股份有限公司； 批号： １１０２２５ 对照药材色谱和对照品色谱相应的位置 ３．４ 仪器 上， 未显相同颜色的斑点。 ５．１．２ 取供试品 各种玻璃器皿： 一般实验室经校准仪器； 分析天平： ＭＥＴＴＬＥＲ 公司 按照鉴别依法操作， 观察现象： 在与对照 ＳＹ－ 超声波清洗机： 济宁盛源超声电子有限公司 药材色谱和对照品色谱相应的位置上， 紫外可见投射反射仪： 上海精科实业有限公司 显相同颜色的主斑点。（如图 １ 所示） 结 ４ 质量标准： 生脉饮提取物质量标准 果表明：供试品在该条件下能在与对照 ４．１ 取本品 ４×收率 ｇ， 加水 ２０ｍｌ， 摇匀， 用乙醚振摇提取 ３ 次， 每次 药材及对照品色谱相应的位置上，显现 ３０ｍｌ，合并乙醚液， 蒸干， 残渣加乙醇 １ｍｌ 使溶解， 作为供试品溶液。 另取 相同颜色的主斑点；阴性对照样品在该 加三氯甲烷 ２０ｍｌ，超声处理 ３０ 分钟， 滤过， 滤液蒸 条件下观察现象：在与对照药材及对照 五味子对照药材 １ｇ， 干， 残渣加乙醇 １ｍｌ 使溶解， 作为对照药材溶液。再取五味子醇甲对照 品色谱相应的位置上，未显现相同颜色 品， 加三氯甲烷制成每 １ｍｌ 含 １ｍｇ 的溶液， 作为对照品溶液。照薄层色 的斑点。５．２ 耐用性： 将供试品按上述方 谱法试验， 吸取上述供试品溶液 ５～１０μｌ、 对照药材溶液与对照品溶液 法处理后， 放置 ２ 小时 （如图 ２ 所示 ） 、 ４ 各 ２￣５μｌ， 分别点于同一硅胶 ＧＦ２５４ 薄层板上， 以石油醚 （３０～６０℃ ） － 小时 （如图 ３ 所示 ） 、 隔夜后 （如图 ４ 所 甲酸乙酯 － 甲酸 （１５：５：１ ） 的上层溶液为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 置紫外 示 １ ２ ３ ４ ） 依法检查， 观察现象， 在与对照药材 生脉饮提取物 120601 ） 下检视。供试品色谱中， 在与对照药材色谱和对照品色谱 及对照品色谱相应的位置上，显现相同 1—供试品： 光灯 （２５４ｎｍ 五味子对照药材 相应的位置上， 显相同颜色的斑点。 结果表明： 测定条件有小 2—对照药材： 颜色的主斑点。 3—对照品： 五味子醇甲对照品 ４．２ 预验证内容。 的变动时， 检查结果不受影响， 可确保方 4—供试品： 生脉饮提取物 120701 专属性、 耐用性。 法有效。 图４ ５ 验证内容 ６ 验证结论 供试品： 生脉饮提取物 批号： １２０６０１ 收率： ８４．３８％ 通过对已批准的生脉饮提取物质量标准中的鉴别检查方法进行验 批号： １２０７０１ 收率： ８０．８３％ 证， 对照药材与供试品图谱斑点虽然不完全一致， 但主斑点相同。追溯 来源： 供试品斑点少于对照药材斑点的原因，可能是供试品在提取过程中有 阴性对照样品： 来源：自制 部分损失导致。但其主斑点与对照药材相一致，且通过阴性对照未检 依照 《中国药典》 ２０１０ 年版第一增补本生脉饮配方， 去除五味子一 出， 可得验证项目符合要求， 证明已经建立起的质量控制方法能有效的 味药材， 同药典同法自提作为阴性对照品。 控制产品质量。 ５．１ 专属性： ５．１．１ 阴性对照： 取按照鉴别依法操作， 观察现象： 在与 ８０ｍｇ 规格： ０５０７０１、 ０５０７０４、 ０５０７０７ ） ， 分别用无菌 （上接 ２６ 页） ０５０７１６； 水溶解， 用薄膜过滤法处理后， 依法检查， 应符合规定。 结果： 九批样品及对照样品均符合规定。 （ 见表 ３、 ４、 ５ ） 参考文献 ［１]中国药典[M].2010. [2]中国药品检验标准操作规范[S].2010．
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注射用泮托拉唑钠无菌方法学验证试验
尹秀梅
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
(哈药集团三精制药股份有限公司,黑龙江 哈尔滨 150000） 摘 要： 对注射用泮托拉唑钠进行无菌检查方法进行验证,以确认该药品的无菌检查方法,并为其科学有效性提供依据。 关键词： 注射用泮托拉唑钠； 无菌方法； 方法学验证 １ 实验材料 表 １ 金黄色葡萄球菌的生长情况 表 ２ 冲洗供试品后对其它各试 菌种： （ １ ） 金黄色葡萄球菌 （ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕ－ 验菌的试验结果 ｒｅｕｓ ） ［ＣＭＣＣ （Ｂ）２６ ００３］； （ ２ ） 铜绿假单胞菌 （ Ｐｓｅｕ－ ） ［ＣＭＣＣ（Ｂ）１０ １０４］； （ ３ ） 枯草芽孢 ｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ 杆菌 （ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ） ［ＣＭＣＣ（Ｂ）６３ ５０１］； （ ４ ） 生孢梭菌 （ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｐｏｒｏｇｅｎｅｓ ） ［ＣＭＣＣ（Ｂ）６４ ９４１］； （ ５ ） 白色念 ＂＋＋＂ 表示生长良好。 珠菌 （ Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ ） ［ＣＭＣＣ（Ｆ）９８ ００１］； （ ６ ） 黑曲霉 表 ３ 规格 ４０ｍｇ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ ） ［ＣＭＣＣ（Ｆ）９８ ００３］。 （ 以上菌种均购自黑龙江省药品检验所， 并已复活 的第一代新鲜培养物。 培养基： （ １ ） 硫乙醇酸盐流体培养基，批号： ０５０１１３， 购自北京三药科技开发公司； （ ２ ） 改良马丁培 ＂＋＋＂ 表示生长良好。 养基， 批号： ２００４１２１３， 购自黑龙江天宇药品科技开发 表 ４ 规格 ６０ｍｇ 公司； （ ３ ） 营养肉汤培养基， 批号： ０５０１２１， 购自北京三 ４ ） 营养琼脂培养基， 批号： ０５０１０６， 药科技开发公司； （ 购自北京三药科技开发公司。 ２ 菌液制备 ２．１ 分别接种金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、 枯 草芽孢杆菌的新鲜培养物置 ３ 平皿营养琼脂培养基 中， ３５℃培养 ２４ 小时。２．２ 接种生孢梭菌至硫乙醇流 体培养基中， ３５℃培养 ２４ 小时。２．３ 接种白色念珠菌 的新鲜培养物置改良马丁培养基中， ２８℃培养 ２４ 小 时。２．４ 接种黑曲霉菌的新鲜培养物置改良马丁培养 ＂－ ＂ 表示呈阴性反应， ＂＋＂ 表示呈阳性反应， ＂＋＋＂ 表示生长良好。 ２８℃培养 ５ 天。 将上述菌液制备中 １～３ 号 基平皿中， 培养皿及培养试管中的培养物用 ０．９％氯化钠无菌注射液按照比浊法配成 菌加入到硫乙醇酸盐流 体培养基； 白色念珠菌、 １００ｃｆｕ 的菌悬液。 黑曲霉加入改良马丁培 ３ 培养基灵敏度检验 其他同上操作， 结 ３．１ 取硫乙醇酸盐流体培养基试管 ９ 支， 每支装量 １２ｍｌ， 分别接种以 养基， 从表 ２ 可以看 上 １００ｃｆｕ 菌悬液， 金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、 枯草芽孢杆菌、 生孢梭 果见表 ２。 在规定的时限内， 与 菌各两支， 另 １ 支接种空白对照。 ３５℃培养 ３ 天， 逐日观察。 ３．２ 取改良马丁 出： ＂＋＂ 表示呈阳性反应， ＂＋＋＂ 表示生长良好。 培养基斜面试管 ３ 支， 每支装量 ９ｍｌ， 接种白色念珠菌 １００ｃｆｕ 菌悬液 ２ 支， 对照管比较，各供试品 ＂－ ＂ 表示呈阴性反应， 表 ５ 规格 ８０ｍｇ 另 １ 支未接种作为空白对照。 ２８℃培养 ５ 天。 逐日观察。 ３．３ 取黑曲霉菌平 培养管中试验菌均生长 皿， 加入 ５ｍｌ０．９％氯化钠无菌注射液， 将孢子洗脱， 用管口带有无菌纱布能 良好，则供试品在该检 除去菌丝的无菌毛细管，吸出孢子悬液，以 ０．９％氯化钠无菌注射液配成 查条件下无抑菌作用， １００ｃｆｕ 的菌悬液。取改良马丁培养基斜面试管 ３ 支， 每支装量 ９ｍｌ 接种黑 可照此条件进行供试品 曲霉菌 １００ｃｆｕ 菌悬液 ２ 支， 另 １ 支未接种作为空白对照。２８℃培养 ５ 天， 的无菌检查。 ６ 供试品检查 逐日观察。 结果： 经过 ３ 天培养观察证明， 硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度良 ６．１ 取注射用泮托拉 铜绿假单胞菌、 枯草杆菌、 生孢梭菌的培养； 经 好， 适用于金黄色葡萄球菌、 规格： ４０ｍｇ， 批号： 过 ５ 天培养观察证明， 改良马丁培养基灵敏度良好， 适用于白色念珠菌的 唑钠， ６０ 支，按照薄 培养； 经过 ５ 天培养观察证明， 改良马丁培养基灵敏度良好， 适用于黑曲霉 ０５０７１９， 膜过滤法过滤操作。每 菌的培养。 支加入 ３￣５ｍｌ 无菌水溶 ４ 培养基的制备 取硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基按照说明书方法配制， 灭 解后，采用封闭式薄膜 过滤器，抽至滤筒内过 菌后传入无菌室。 滤，以 ０．１％蛋白胨水溶 ５ 试验方法验证 ５．１ 冲洗液的制备。取蛋白胨 １．０ｇ， 加水 １０００ｍｌ， 微温溶解， 滤清， 调节 液作为冲洗液，每膜冲 冲洗后直接将 ｐＨ 值至 ７．１±０．２， 分装， 灭菌。 ５．２ 方法验证—— —金黄色葡萄球菌。 取本品 ２０ 洗 １００ｍｌ， ＂－ ＂ 表示呈阴性反应，＂＋＂ 表示呈阳性反应，＂＋＋＂ 表示生长良好。 支， 每支分别加入适量无菌水溶解后， 采用双筒封闭式薄膜过滤器， 将供试 培养基分装于各个滤筒 内， 其中两筒分别加入 １００ｍｌ 的硫乙醇酸盐流体培养基 （ ３０￣３５℃ ） 和改良 品抽至 １ 个滤筒内过滤， 以 ０．１％蛋白胨水溶液作为冲洗液， 冲洗 １００ｍｌ， 将 马丁培养基 （ ２３￣２８ ℃ ） ， 培养 １４ 天； 另一筒作为供试品阳性对照， 取金黄色 双筒内分别加入 １００ｍｌ 硫乙醇酸盐培养基，同时筒内各加入小于 １００ｃｆｕ 含菌量＜１００ｃｆｕ ／ｍｌ ） 加入 １００ｍｌ 硫乙醇酸盐流体培养基 金黄色葡萄球菌 １ｍｌ， 按规定温度 （ ３０～３５℃ ） 培养 ３～５ 天， 考察金黄色葡 葡萄球菌 １ｍｌ（ 中， 培养 （ ３０ ～ ３５ ℃ ） ４８ ～ ７２ 小时； 同时取相应的溶剂和稀释剂同法操作， 作 萄球菌的生成情况， 结果见表 １。上述结果表明， 本品的检验用量在冲洗量 为阴性对照 。 结果： 通过 １４ 天的观察， 符合规定 。 ６．２ 取本品 （ ４０ｍｇ 规格： 达到 ２０ 支 ／１００ｍｌ 时， 未体现出抑菌性。 ５．３ 其他试验菌考察。 以 １００ｍｌ 冲 ０５０７２２、 ０５０７２５； ６０ｍｇ 规格： ０５０７１０、 ０５０７１３、 （下转 ２７ 页） 洗量对其余几种试验菌逐一试验， 其中大肠埃希菌、 枯草芽孢杆菌、 生孢梭 ０５０７１９、