缩泉丸补肾缩尿的分子机制探讨

缩泉丸补肾缩尿的分子机制探讨作者：吴少波龚雪杨菲黄庆来源：《云南中医中药杂志》2016年第09期摘要：随着我国步入老龄化社会，越来越多老年人深受尿急、尿频、夜尿增多等“肾虚多尿”的困扰，严重影响患者身心健康和生活质量，也造成较大的经济支出。

缩泉丸作为临床上广泛使用“补肾缩尿”的经典方剂，疗效显著，深受临床工作者喜爱和推崇。

有学者针对缩泉丸“补肾缩尿”作用分子机制做相应的研究。

现就目前实验研究进展作一综述。

关键词：肾虚多尿；缩泉丸；补肾缩尿；分子机制中图分类号：R2895文献标志码：A文章编号：1007-2349（2016）09-0091-03缩泉丸出自《校注妇人良方》，由乌药、益智仁、山药3味药物组成，具有温肾化气、缩尿止遗的功效，主治膀胱虚寒证，症见小便频数，或遗尿不止，小腹怕冷，舌淡，脉沉弱。

方中益智仁辛温，固摄收敛，能温肾助阳，补益命门，固精缩尿，《本草经疏》曰：“益智仁，以其敛摄，故治遗精虚漏，及小便余沥，此皆肾气不固之证也”，故为君药；乌药辛温，温通行气，能下达肾与膀胱，具有温肾散寒，除膀胱冷气之功，止小便频数或遗尿，为臣药；山药益肾阴、补肾气，兼有固涩之性，固涩精气，为佐使之药。

三药合用，温肾驱寒，使下焦得温而寒去，则膀胱之气复常，约束有权，溺频遗尿自可痊愈。

该方组方严谨，配伍精炼，临床上疗效显著，深受临床工作者喜爱和推崇。

1中医对“肾虚多尿”的认识《灵枢·本输》云：“肾合膀胱，膀胱者，津液之府也。

”《素问·逆调论》曰：“肾者水脏，主津液。

”肾为主水之脏，开窍于二阴；膀胱属六腑之一，水液汇聚之所。

肾与膀胱相表里，相互协作，共同完成尿液的生成、贮存和排泄。

肾气充足，蒸化及固摄有力，则尿液的生成正常，贮于膀胱并排泄有度。

而年迈之人肾中精气会逐渐衰退，《素问·上古天真论》所说：“女子……二七而天癸至，任脉通，太冲脉盛，月事以时下，故有子；……七七，任脉虚，太冲脉衰少，天癸竭，地道不通，故形坏而无子也。

男子……二八，肾气盛，天癸至，精气溢泻，阴阳和，故能有子；……七八，天癸竭，精少，肾脏衰，形体皆极。

”肾气虚弱，下元虚寒，蒸化无力，或者固摄无权，则膀胱贮存、约束水液功能失司，故可见多尿、尿频、尿失禁等症状，《灵枢·本输》中言：“虚则遗溺，遗溺则补之”。

鉴于上述病因病机，临床上应用缩泉丸“补肾缩尿”治疗“肾虚多尿”疗效显著[1～4]。

2西医对“肾虚多尿”的认识“肾虚多尿”与西医学膀胱过度活动症（OAB）的概念相契合[5～6]。

根据2006年《膀胱过度活动症诊断治疗指南》[7]，OAB是一种以尿急为主要症状的综合征，常伴有尿频和夜尿症状，可伴或不伴有急迫性尿失禁；尿动力学上可表现为逼尿肌过度活动，也可为其他形式的尿道-膀胱功能障碍，不包括由急性尿路感染或其他形式的膀胱尿道局部病变所致的症状。

其病因尚不明确，目前认为可能与以下4种因素有关[7]：（1）逼尿肌不稳定；（2）膀胱感觉过敏；（3）尿道及盆底肌功能异常；（4）其他原因如精神行为异常，激素代谢失调等。

据流行病学调查，在美国大约有165%的成人有OAB 症状[8]；根据2010年6 月发布的调查数据显示：我国40 岁以上的人群有OAB症状可达113%[9]。

可见，OAB发病率较高。

现随着我国步入老龄化社会，以及糖尿病、神经系统损害疾病等疾病的增多，OAB发病率会逐渐增高，严重影响患者身心健康和生活质量，也造成较大的经济支出。

现治疗主要采取行为、神经调节及西药治疗，但临床效果欠佳，仍需不断努力探索。

3缩泉丸“补肾缩尿”作用机制研究概况鉴于缩泉丸临床上治疗“肾虚多尿”疗效显著，为此，一些学者进行一系列实验研究，从分子学水平探讨缩泉丸“补肾缩尿”作用机制。

简述如下：31水通道蛋白及抗利尿激素水通道蛋白（AQPs）是一类位于细胞膜上的蛋白质，可选择性调控水在细胞的进出。

迄今为止，哺乳动物体内共有13种水通道蛋白亚型被发现。

肾脏作为机体调节水代谢的主要器官，AQPs含量最高，尤以AQP-2在肾脏表达最为丰富，主要分布于肾脏集合管主细胞管腔膜及细胞内囊泡中，是调节肾脏集合管对水通透性的关键蛋白，在肾脏水代谢中起着重要作用。

任何原因导致的AQP-2表达异常，将影响肾脏集合管水的通透能力，肾小管水重吸收障碍，导致多尿症状。

例如，糖尿病肾病时，肾脏AQP2的分布数量降低而出现多尿现象[10]；相反，阿霉素肾病大鼠中存在过量的水盐重吸收，并有AQP2 表达的上调[11]。

实验证实[12～13]，缩泉丸可提高“肾虚多尿”大鼠肾脏AQP-2mRNA的表达，增强大鼠肾脏集合管主细胞胞膜胞浆AQP-2的表达，影响了集合管上皮细胞内含有AQP-2的囊泡向顶质膜穿梭，使AQP-2与管腔面细胞融合数量增多，从而插到膜中的AQP-2增多，增加了细胞膜的水渗透通透性，增加了肾集合管对水的重吸收。

同时，AQP-2亦是目前所知唯一的抗利尿激素（ADH）敏感性水通道蛋白。

ADH（又称血管升压素，AVP）是由下丘脑的视上核和视旁核的神经细胞分泌的激素，经下丘脑—垂体束到达神经垂体后叶后释放出来，其主要作用是提高远曲小管和集合管对水的通透性，促进水的吸收，是尿液浓缩和稀释的关键调节激素。

研究发现[12-14]，肾虚多尿大鼠肾脏AVPR-V2 mRNA表达明显降低，当AVP水平降低时，集合管主细胞管腔膜出现胞吞作用，重新形成含AQP2 的囊泡回到细胞内，管腔侧细胞膜上AQP-2 的数量相应减少。

而缩泉丸能提高AVPR-V2 mRNA的表达，增加AVP的释放。

当AVP水平增高后，细胞质内的囊泡与管腔面细胞膜融合，AQP-2通过出胞运动转移至管腔细胞膜上，使管腔侧细胞膜上AQP2 数量增加，对水的通透性增高。

可见，缩泉丸可通过上述途径调控肾脏水液代谢，减少尿量，从而达到“补肾缩尿”的作用。

32血管紧张素Ⅱ及血管紧张素1型受体肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）在调节水液代谢过程中亦发挥着十分重要的作用，其主要效应物质为血管紧张素Ⅱ（AngⅡ），AngⅡ促进醛固酮（ALD）的分泌。

ALD 最主要的生理作用是促进肾远曲小管和集合管对水、钠的重吸收，同时促进钾的排泄，以维持水盐代谢平衡。

当血浆中ALD浓度增高时，大量的钠在肾小管内被重吸收，在钠重吸收的同时，水的重吸收也增加，从而导致尿液排出减少。

相反，当其浓度减少时，水、钠重吸收减少，尿量也随之增加。

研究证实[15]，缩泉丸可增加血浆中AngⅡ含量，并可增加血浆ALD 含量，通过上述过程，从而达到“补肾缩尿”的目的。

而AngⅡ功能的发挥，主要依赖血管紧张素I型受体（AT1R）介导。

AT1R主要存在于肾小球、肾小管内皮细胞等部位，其表达水平的变化可影响水液代谢。

研究结果显示[16]，肾虚多尿模型组大鼠肾脏AT1RmRNA 明显减少，表明肾虚多尿时肾脏AT1R mRNA 表达下调，AT1R 蛋白阳性产物减少，而缩泉丸干预治疗后，一方面，肾虚多尿大鼠肾脏AT1R mRNA 和蛋白表达均明显增高。

其下游信号传导途径可能涉及以下几种：①通过激活磷脂酶A2，促进花生四烯酸、前列腺素、白三烯和血栓烷的生成，介导AngⅡ调节近端肾小管离子转运，②激活Ca2+的水平和激活Ca2+依赖性蛋白激醇C促进ALD的分泌，③调节细胞膜上的离子通道功能，引起ALD的分泌增加，调节人体的水液代谢；另一方面，还可增加AT1R与AngⅡ的结合量，使得AT1R介导的AngⅡ生物学效应增强，促进其介导的水液代谢的调节功能，如通过作用于肾小管的位点促进钠的重吸收，调节钠的转运，促进皮质酮转化为ALD等，最终发挥“补肾缩尿”的作用。

33CYP11B2基因CYP11B2作为调控醛固酮合成酶表达的主要基因，调控局部组织中ALD的分泌[17]，故其表达量及活性的差异直接影响体内醛固酮水平，调节该基因表达可调节水液代谢的功能得以正常发挥。

缩泉丸可上调CYP11B2 基因的表达，使其编码醛固酮合成酶的功能增强，发挥11β-羟化酶、18羟化酶和18氧化酶的活性，催化皮质酮经过3步连续反应合成更多的ALD，增强其生物学效应[18]，从而达到“补肾缩尿”的目的。

34盐皮质激素受体盐皮质激素受体（MR）主要位于远曲小管和集合管，是公认的与ALD 结合的特异性受体，ALD与MR结合成为ALD-MR复合物，诱导靶基因转录、翻译，最后产生醛固酮诱导蛋白，从而发挥生物效应[19]。

实验结果显示，缩泉丸可使模型大鼠MR mRNA 表达上调，蛋白表达增加，调节ALD的合成与分泌，增强其对水盐代谢的调节作用[20]。

35胆碱能神经受体胆碱能神经受体（M受体）在膀胱逼尿肌中大量存在。

现代研究表明，M受体在膀胱逼尿肌中存在M2和M3两种亚型，且M2含量更高，但在功能上却主要由M3受体介导。

M3受体的激活是逼尿肌收缩的重要环节之一，M3受体和递质结合后，与Gp/11蛋白偶联，激活磷脂酶C，使肌醇磷脂水解成IP3和DAG，IP3调节细胞质中Ca2+浓度，引起细胞内钙浓度增加，从而导致钙调素等活性的改变，导致逼尿肌收缩。

研究显示[21]，缩泉丸可减少衰老大鼠膀胱逼尿肌细胞中M3RmRNA及M3R蛋白的表达，从而影响膀胱逼尿肌收缩，增加膀胱容量，达到“补肾缩尿”的作用。

36β肾上腺素能受体β肾上腺素能受体（β-AR）主要在膀胱舒张过程中起重要作用。

当膀胱处于充盈期时，β-AR介导逼尿肌松弛，抑制逼尿肌反射，维持着膀胱的顺应性，其中又以β3-AR介导膀胱逼尿肌松弛为主。

有研究表明，随年龄增加，β3-AR 的密度逐渐减小，反应性逐渐降低[22]，介导逼尿肌舒张作用减弱，从而导致膀胱储存容量减少，较易引起排尿反射，产生多尿、尿频等症状。

衰老大鼠膀胱逼尿肌中β3-ARmRNA表达明显下降，而缩泉丸可显著增加衰老大鼠膀胱逼尿肌上β3-ARmRNA的表达[23]，增强β3-AR信号转导，有效地舒张膀胱逼尿肌，增加膀胱容量，从而达到“补肾缩尿”的功效。

此外，β3-AR还具有拮抗M3受体的作用。

故缩泉丸通过上调β3-AR、下调M3R的表达以及相互作用，调节膀胱逼尿肌的收缩和舒张，增加膀胱容量，缓解尿频症状，最终达到“补肾缩尿”的作用。

4小结目前关于缩泉丸“补肾缩尿”分子机制研究主要集中在AQPs、AT1R、MR、M受体、β-AR、CYP11B2、ADH、AngⅡ等方面，以广州中医药大学吴清和教授课题组研究成果为主。

可见对缩泉丸“补肾缩尿”作用机制和靶点深入研究较少，故需要我们运用更多的研究思路和方法，在分子水平进一步发现这个经方的奇妙之处，亦为其临床上更好的应用及其功效范围的扩大，提供更充足的理论依据。

参考文献：[1]陈建超加味缩泉丸治疗女性特发性膀胱过度活动症46例[J].中国民族民间医药，2010，10：117[2]蔡浙毅丹栀逍遥散合缩泉丸治疗尿道综合征的疗效观察[J].光明中医，2014，04，29（4），756-757，761[3]蔡剑，曾文彤，张培海，等缩泉丸与琥珀酸索利那新联合治疗肾虚型膀胱过度活动症72例临床观察[J].中药与临床，2013，4（5），39-41[4]罗勤，甘洪桥肾气丸联合缩泉丸治疗膀胱频动症的临床观察[J].实用中西医结合临床，201107，11（4），35-36[5]阎应禄补肾通淋汤治疗女性膀胱过度活动症96例的临床观察[J].中国实用医药，201012，5（35）：149-151[6]贾钢陈晓群张家林徐卓婧金匮肾气汤治疗老年性膀胱过度活动症疗效观察[J].陕西中医，2013，34（8）：955-956[7]膀胱过度活动症诊断治疗指南[J].中华医刊，2006，41（10），59-61[8]Wein AJ，Rackley RROveractive bladder：a better understanding of pathophysiology，diagnosis management[J].Urol，2006，175：S5-S10[9]许克新，王建业膀胱过度活动症的现状及展望[J].中华泌尿外科杂志，2012，33（9）：708-710[10]康白，毛淑梅，李承德，等黄芪多糖对糖尿病大鼠早期多尿的保护作用[J].中国药理学通报，2009，25（11）：1470-1473[11]孙香娟，常克，张娟，等真武汤对肾病综合征大鼠肾脏水通道蛋白2的影响[J].天津中医药，2010，10，27（5）：416-417[12]操红缨吴清和基于AQP-2研究缩泉丸补肾缩尿的机理[D].广州中医药大学，2008[13]操红缨，吴清和，黄萍，等缩泉丸对肾阳虚多尿大鼠肾脏AQP-2 mRNA与AVPR-V2 mRNA表达的影响[J]2009，32（6）：926-928[14]Noda Y，Sasaki SMolecular mechanisms and drug development in aquaporin water channel diseases：molecular mechanism of water channel aquaporin-2 trafficking[J].J Pharmacol Sci，2004，96（3）：249-54[15]李淑雯，吴清和，黄萍，等缩泉丸对肾虚多尿大鼠肾素-血管紧张素-醛固酮系统的影响[J].中国实验方剂学杂志，2010，09，16（11）：108-110[16]李淑雯，吴清和，黄萍缩泉丸对肾虚多尿大鼠肾脏AT1Rm RNA及蛋白表达的影响[J].时珍国医国药，2010，23（11）：2672-2674[17]李淑梅，吴平生，钟世顺，等ACEI及ATⅡRA长期治疗对高血压鼠肾醛固酮合成影响[J].实用老年医学，2004，18（2）：75-77[18]李淑雯，胡律江，吴清和，等缩泉丸对肾虚多尿大鼠肾脏CYP11B2 mRNA 表达的影响[J].中药材，201101，34（1）：80-83[19]梁靖媛，付平醛固酮受体拮抗剂治疗肾脏疾病的研究进展[J].临床荟萃，2008，23（15）：1135-1138[20]李淑雯，吴清和，黄萍，等缩泉丸对肾虚多尿大鼠肾脏MRmRNA及蛋白表达的影响[J].中药药理与临床，2010，06，26（6）：8-10[21]鲁湘鄂缩泉丸对自然衰老大鼠膀胱逼尿肌受体的调控及机制研究[D]广州：广州中医药大学，2012[22]Yamanishi T，Christopher R，Yoshida K，et alThe role of beta（3）adreno receptors in mediating relaxation of porcine detrusor muscle[J].Br J Pharmacol，2002，135（1）：129[23]吴君，吴清和基于β3-AR探讨缩泉丸补肾缩尿的作用机制[D].广州中医药大学，2011（收稿日期：2016-05-05）。