皮试法与ELISA法在奶牛结核病检测中的对比试验
ELISA方法检测奶牛结核病的实验研究
食 品 安 全
奶 牛结核病是 由牛型结 核分枝杆 菌 引起 的一种人畜共患 的慢性传染病 ， 具有 较强 的传染性 ， 属于二类 动物疫病 。奶牛 结核病不但危害健康牛只 ， 而且直接影响 牛 奶 卫生 质 量 与人 的身 体健 康 。为 此 ， 各 级 政 府 主管 部 门 制 定 了 预 防 控 制 及 净 化 奶 牛结 核病 的防治技 术 规范 。我 市根 据上 级主管部 门的工作部署 ， 进行 了为期 近一 个月的奶牛结核菌素皮内变态反应试验 ， 来 检 测我 市 奶 牛结 核 病 感染 情 况 ， 也 是 这 目前用 于结 核病 的临床 诊断 主要 方法 。根 据课 题 要求 ，０ ９上 、下半 年 ２次 奶 牛结 ２０ 核 菌 素皮 内变 态反 应 检 测 ， 采集 奶 牛血 共 清 １ １ ， Ｅ ＩＡ检 测 与 牛结 核 菌 素皮 ９ 份 经 ＬＳ 内变 态反 应 试验 阳性 牛 比较 ， 两种 方 法 的 符合率为 ８ ． 特异性为 １０ 取得较 ６ ％， ５ ０％， 为 理想 的试 验结 果 。
两种疗法检测奶牛结核病的比较分析
［ １ Ｊ 蔡 宝祥 ． 家 畜传 染病 学［ Ｍ１ ． ４版 ． 北京： 中国农 业 出版社 ， ２ ０ ０ ０ ：
１ １ ０ －ｌ ｌ ４ ．
响 。但 我们 对 牛 群进 行 Ｔ Ｓ Ｔ检 测 后 ４ ０ ｄ 、 ２ ８ ｄ 、 １ ４ ｄ
【 ３ ］ 张高迪， 邢新华， 杨醉宇 ， 等． 内蒙古哲里木盟人与 牛结 核相互传 播关 系的研究 ｌ Ｊ １ 内 蒙古畜牧兽医， １ ９ ９ ６ ， ２ ： ４ ７ — ４ ９ ．
［ ４ 】 陈祥， 徐 正中， 时振华， 等． 一干扰素试验 和皮试变态 反应对检 测奶牛结 核病的 比较 ［ Ｊ Ｊ ＿中国人兽共 患病学报 ， ２ ０ １ １ ， ２ ７ （ ２ ） ：
ｔ ｅ ｓ ｔ ｓ ｎｄ ａ ｖ ａ ｃ ｃ ｉ ｎ ｅ ｓ ｏｒ ｆ ｔ ｅ ｒ ｒ ｅ ｓ ｔ ｒ ｉ ａ ｌ ａ ｎ ｉ ｍａ ｌ ｓ［ Ｍ］ ． Ｐ ａ ｒ ｉ ｓ ， Ｂ ｏ ｖ ｉ ｎ ｅ ｔ ｕ ｂ ｅ ｒ —
ｃ ｕ ｌ ｏ ｓ ｉ ｓ ． ２ ０ ０ ９， １ ６ —２ ２ ．
学术研究
出， 部 分皮 内变 态反 应 阳性 牛呈 现 出假 阳性 结果 ， 若 单独 用该 方法 检 出的 Ｐ Ｐ Ｄ 阳性 牛 实行 扑 杀 策略 ， 势 必 误杀 部分 假 阳性牛 。 而对 于皮 内变态反 应 可疑 的 牛， 需 要在 ６ ０ ｄ后进 行 复检 ， 仍 为可 疑 的 ， 需要 再 过
６ ０ ｄ再 次进 行复 检 ，这 无 疑 造 成 了病 原 的 扩 散 和 皮 试 的特异 性很 低 ，而将 国内皮试 改进 为 国 内 比较 皮 试 ，则 与 国外 常规 的 比较皮 试具 有较 好 的 阳性符
比较皮试法与ELISA法在林芝牛结核病检测中的对比试验
当前 国 内外 用 于 牛结 核 病 诊 断 的方 法 主 要 有 ； 根据 临 床症 状 和病 理变 化诊 断 、 细菌 分 离培养 法 、 结 核菌 素 皮 内变态 反 应 （ Ｐ Ｐ Ｄ） 、 淋 巴细 胞 转化 试 验 、 一 干扰 素 试验 和血 清 学 方 法 等 ， 无 论 哪种 检 测 方 法 都 有其 优 缺点 。但 比较 皮 试 法 （ 比较 结 核 菌 素 皮 内变 态反 应 ） 的阳性 符 合 率 最 高 ， 结果较准确 ， 成 为 多 个
孑 Ｌ ； （ ３ ） 加样 ： 分别在阴、 阳性对 照孔 中加 入 阴 、 阳 性
对照 ５ Ｏ Ｌ。在 待测样 品孔 先加 样 品稀释 液 ４ ０ Ｌ， 再加 待测 样 品 １ ０ Ｌ， 然 后轻 轻 晃 动混 匀 ； （ ４ ） 温育 ： 用封板 膜 封板后 置 ３ ７ ℃温 育 ３ ０ ｍｉ ｎ ； （ ５ ） 洗涤 ： 小 心 揭掉 封板 膜 ， 弃 去 液体 ， 甩干 ， 每孔 加满 洗涤 液 ， 静 置 ３ Ｏ 后弃去， 如此重 复 ５次 ， 拍干 ； （ ６ ） 加酶 ： 每孔 加 入 酶标试 剂 ５ ０ Ｌ， 空 白孔 除 外 ； （ ７ ） 温育 ： 操作 同 ４ ； （ ８ ） 洗涤 ： 操作 同 ５ ； （ ９ ） 显 色： 每孔先加入显色剂 Ａ ５ Ｏ Ｌ， 再 加 入显 色剂 Ｂ ５ ０ Ｌ， 轻轻 震 荡 混匀 ， ３ ７ ℃ 避 光显 色 １ ５ ａｉ ｒ ｎ ； （ １ ０ ） 终止 ： 每孑 Ｌ 加 终止 液 ５ Ｏ Ｌ， 颜 色 由蓝 色立转 黄 色 ， 即为 反 应 终止 ； （ １ １ ） 测定 ： 以 空 白孔 调 零 ， ４ ５ ０ ｎ ｍ 波 长 依 序 测 量 各 孔 的 吸光 度
介绍奶牛结核病PPD反应的三种检疫判断标准
牛结核病是由牛结核分枝杆菌引起的人、畜和禽共患的一种慢性传染病，人结核的10％以上由牛分枝杆菌引起。
世界各国对结核病大多采取检疫净化的方法进行控制，皮内变态反应是世界动物卫生组织（OIE）唯一指定的检疫方法，其判断标准有三种：1、我国的国家标准注射方法：不论牛只大小，一律皮内注射0.1mL（20000 IU/ mL）的牛型提纯结核菌素，72h 后观察结果。
阳性反应：局部有明显的炎性反应，皮厚差大于或等于4.0 mm 。
疑似反应：局部炎性反应不明显，皮厚差大于或等于2.0 mm，同时小于4.0 mm ；阴性反应：无炎性反应，皮厚差在2.0 mm以下。
2、欧盟的对比PPD试验在注射牛型提纯结核菌素（注射方法、剂量同我国的标准）的同时，在牛的颈部另一侧对应部位（或在颈部同一侧，但两次注射的位置间隔大约为12～15cm），皮内注射禽型PPD（20000 IU/ mL） 0.1 mL，72h后观察结果。
阳性反应：牛型PPD反应阳性，且比禽型PPD反应大4mm以上；疑似反应：牛型PPD反应是阳性，并且牛型PPD反应仅比禽型PPD反应多1～4mm；阴性：牛型PPD反应是阳性或阴性，但其反应等于或小于禽反应。
3、世界动物卫生组织（OIE）判断标准仅用牛性结核菌素进行检疫，方法同中国国标，但判断标准较严：局部出现炎性反应，皮厚差≥2.0mm，判断为阳性；皮厚差<2.0mm判断为阴性。
综合来看，世界动物卫生组织（OIE）在牛结核变态反应判定标准较为严格。
欧盟比较法皮内变态反应是对传统的牛型PPD法的改进，能够区别被检动物是由牛型分枝杆菌感染还是由其它非典型分枝杆菌感染，可避免由于禽结核分支杆菌引起的非特异性反应，减少无害化处理损失，对于我国的奶牛结核病检疫净化具有一定的借鉴作用。
牛结核病两种检测方法的比较
技术 是用酶标记抗体 或抗 原 ． 以酶促
反应 指示免 疫 反应 的一类 测定相 应
菌 在 刺 激 机 体 发 生 免 疫 应 答 的 时 ２ １ 原 理 ．
候 ． 发性 变态 反应 也随 之产 生 ． 迟 二
抗 原或抗体 的性质 、 量及其分布部 含
１７ ９ ７年 ．ｅ ｚ Ｌ ｎｉ ｎ研 究 发 现 了 结 位的方法 ． 酶免疫技术具 有标记物稳
者 均 由 Ｔ细胞 介 导 产 生 ． 诱 导 产 核病 的细 胞免 疫与体 液 免疫 分离 的 定性 好 、 放射 性污染 等 优点 ． 但 无 还可 生 免 疫 和变 态 反 应 的 物 质不 同 ． 所 现象 他指 出 ． 细胞 免 疫随病 情加 重 以利 用催 化标 记物进 行 放大 和 自动
性仅 能 表 明在 过 去某一 时 间 曾经 发 义 细胞 免疫 是主 要 的免疫 方式 ． 结 抗 体 水 平 还 达 不 到 可 以检 出 的水
生过 的一 次结 核 菌感染 ．它无法 证 核菌 素试 验是 检测 细胞 免疫 ．血 清 平 ： 或者是 封 闭型结 核 ， 因为机 体 的
以检 测机 体对 结核 菌是 否发 生变 态 而减 弱 ．体液 免疫 随病 情加 重而 增 化分析处理 Ｅ ＩＡＥ ｚｍ －ｉｋ ｄ ＬＳ （ｎｙ ｅ ｌ ｅ ｎ 反应 ． 即可判 断是 否具 有免 疫力 ． 进 强 核菌是 典 型 的胞 内寄生菌 ． 结 尤 Ｉ ｕ ｏｏｂ ｎ ｓａ） ｍｍ ｎ ｓｒｅｔＡ ｓｙ作为一 种新 型
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中 国动 物 检 疫
２０ ０ ６年 第 ２ 第 １ ３卷 Ｏ期
一３ ０一
文章 编 号 ：０ ５ ９４ ２０ ）０ ０ ３ — ２ １０ — ４ Ｘ（０ ６ １—０ ０ ０
四种方法检测广西奶水牛结核病的比较
四种方法检测广西奶水牛结核病的比较谢志勤;黄海强;谢芝勋;刘加波;庞耀珊;邓显文;谢丽基;温娟;蓝如束;张振荣【摘要】应用牛结核菌素对奶水牛进行牛结核病皮内变态反应的检测,然后对皮内变态反应阳性牛采样进行分离培养、γ-干扰素ELISA和聚合酶链反应检测,比较这四种检测方法的符合率.结果共对1850头奶水牛进行皮内变态反应检测,皮内变态反应阳性的奶水牛有78头,从78头反应阳性的奶水牛中分离鉴定为牛分枝杆菌的有2份,γ-干扰素ELISA方法检测为牛分枝杆菌阳性的有5份,PCR方法鉴定阳性的有4份;阳性检出率以变态反应为最高78/1850(4.21%),γ-干扰素ELISA方法为5/78(0.27%),PCR检测方法为4/78(0.21%),而分离培养为最低2/78(0.105%).变态反应与分离鉴定的符合率最低,为0.105%;γ-干扰素ELISA方法、PCR方法与分离鉴定的符合率较接近,分别为40%和50%.γ-干扰素ELISA检测方法和PCR检测方法具有较好的特异性,可以作为变态反应检测的补充.【期刊名称】《中国动物检疫》【年(卷),期】2010(027)011【总页数】4页(P52-55)【关键词】牛结核病;变态反应;γ-干扰素ELISA;聚合酶链反应;分离【作者】谢志勤;黄海强;谢芝勋;刘加波;庞耀珊;邓显文;谢丽基;温娟;蓝如束;张振荣【作者单位】广西兽医研究所,广西南宁,530001;广西武宣动物疾病预防诊断中心,广西武宣,545900;广西兽医研究所,广西南宁,530001;广西兽医研究所,广西南宁,530001;广西兽医研究所,广西南宁,530001;广西兽医研究所,广西南宁,530001;广西兽医研究所,广西南宁,530001;广西南宁市动物疾病预防诊断中心,广西南宁,530001;广西壮族自治区疾病预防控制中心,广西南宁,530028;广西武宣动物疾病预防诊断中心,广西武宣,545900【正文语种】中文【中图分类】S852.618牛结核病（Bovine tuberculosis）主要是由牛分枝杆菌（Mycobacterium bovis）引起的一种慢性进行性传染病。
奶牛结核病不同检疫方法比较
牛结核病主要是由牛型结核分支杆菌引起的一种人畜共患、慢性、消耗性传染病，病原菌可通过空气、接触或牛奶感染人畜，严重威胁着动物和人类健康[1]。
牛结核病的监测和净化在活畜上需要依赖快速、敏感、特异性强的诊断方法。
目前广泛应用的诊断方法主要包括结核菌素皮内变态反应（TST）、欧盟皮内比较变态反应试验（SICTT）和牛γ干扰素酶联免疫吸附试验（IFN-γ-ELISA）。
TST作为OIE指定法定检疫方法，优点是敏感性高，但操作费时费力，特异性差，容易出现假阳性或早期感染易漏检[2-3]。
SICTT是TST方法的改进，可排除检疫中禽结核干扰导致的非特异性变态反应的影响，以避免不必要的淘汰和损失，目前欧盟等国普遍作为活畜检疫确认试验[4]。
IFN-γ-ELISA检测试剂盒是外周血γ-干扰素体外释放检测法在实际中的应用，操作简单、敏感性和特异性高，目前已经得到全世界的广泛认可[5]。
本研究同时采用以上3种方法对河北省石家庄市栾城县某奶牛场进行平行检测，比较不同检疫方法对奶牛结核病阳性率的影响，为今后检疫和奶牛结核病的净化提供技术支撑。
1材料与方法1.1材料1）试验奶牛。
中国荷斯坦奶牛300头，试验奶牛外观健康，无任何结核病临床症状，统一TMR饲喂，自由饮水。
2）主要试剂。
牛型提纯结核菌素（牛PPD，青岛瑞尔生物技术有限公司，批号：P201906-001）；禽型结核菌素（禽PPD，青岛瑞尔生物技术有限公司，批号：P201906-001）；牛结核分枝杆菌IFN-γ检测试剂盒（青岛瑞尔生物技术有限公司，批号：P201906-001）。
3）器材。
剃毛刀、注射器、游标卡尺、酶标仪，CO2培养箱、细胞培养板、肝素钠采血管、移液器、枪奶牛结核病不同检疫方法比较路广计1王晓芳2*马宏伟1张涛3范京慧4刘天驹1轩秋燕1范葶莉5邵丽玮2程丽华6边青岩61.河北省动物疫病预防控制中心，石家庄050000；2.河北省畜牧兽医研究所，河北保定071000；3.河北省石家庄市动物疫病预防控制中心，石家庄050000；4.河北农业大学，河北保定071000；5.沧州职业技术学院，河北沧州061000；6.河北省饶阳县农业农村局，河北饶阳053900摘要采用牛结核菌素皮内变态反应试验（TST）、欧盟比较变态反应试验（SICTT）和牛结核γ干扰素酶联免疫吸附试验（IFN-γ-ELISA）对河北省石家庄市栾城县某奶牛场300头奶牛进行结核病平行检测，比较不同检疫方法对奶牛结核病诊断结果的影响，并分析对比检测结果。
牛型结核菌素皮内变态反应试验和γ-干扰素ELISA试验检测奶牛结核病
８
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ａｎ ｉ ｍａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ｄ Ｖｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎ ａ ｒ ｙ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ
Ｖｏ １ ． ３ ３
Ｎｏ ． ６
２ ０ １ ４
牛 型 结 核 菌 素 皮 内变 态 反 应 试 验 和 一 干扰素 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 试 验 检 测 奶 牛 结 核 病 的 比 较 研 究
性 或 阴性 ； Ｐ Ｐ Ｄ 皮 内 变 态反 应 阴 性 样 品 经 ７ 一 干扰 素 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 试 验检 测 ， 结 果 为 阴性 或 禽 型 阳 性 。 在 检 测 奶 结核病 时， Ｐ Ｐ Ｄ皮 内变态反 应试验 特 异性 较 差 ， 一 干扰 素 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 试 验 结 果 与 牛 结 核 分 枝 杆 菌 细 菌 分 离鉴 定 结 果 一 致 ， 而且该技 术敏 感性 、 特 异 性和 鉴 别 假 阳性 均优 于 Ｐ Ｐ Ｄ 皮 内 变 态 反 应
试 验 。
关键词： 结核 病 ； 结核 菌 素 ； 一 干扰 素 ； 酶联 免疫 吸 附测定
［ 中 图分类 号］ Ｓ ８ ５ ５ ． ２ ［ 文献标 识码 ］ Ａ ［ 文章 编号 ］ １ ０ ０ ４ — ６ ７ ０ ４ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ６ — ０ ０ ０ ８ — ０ ３
奶牛结核病诊断方法的比较研究
奶牛结核病是主要由牛型分枝杆菌引起的一 种慢性消耗性人畜共患传染病。人可以通过喝未经 消毒的牛奶或可以通过飞沫传染牛结核…。因此，奶 牛结核病不仅严重影响奶牛养殖业的发展，而且对 人类健康造成巨大威胁。近年来，我国奶牛业蓬勃 发展，饲养量迅速增长，饲养模式呈现多元化，牛结 核病的风险随之增加。
关键词： 牛结核ＰＰＤ ＩＦＮ叫Ｉｎｄｉｒｅｃｔ ＥＬＩＳＡ胶体金
Ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｓｅｖｅｒａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ Ｂｏｖｉｎｅ Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ
Ｄｅｎｇ Ｑｕａｎｔａ０１ Ｃｈｅｎ Ｙｉｎｇｙｕ２ Ｇｕｏ Ａｉｚｈｅｎ２ Ｙｕ Ｂ０１ Ｚｈｏｕ Ｊｉａ）（ｉ１ Ｔａｎ Ｙｏｎｇｌｏｎ９１ ｊｉ Ｗｅｎｗｅｎｌ Ｙａｎｇ Ｃｕｉｈｕａｌ Ｄｅｎｇ Ｓｈａｏｈｕｉｌ
奶牛颈静脉采血５ ｍｌ，肝素（终浓度３ ＩＵ／ｍ１） 抗凝。将抗凝全血与含ｌＯ％小牛血清、１００ ＩＵ／ｍｌ青 霉素和１００ ｐ．ｇ／ｍ］链霉素的ＲＰＭＩ １６４０完全培养基 按Ｉ：１混合．分别加入２４孔细胞培养板中含有４ ¨ｌ（２０ ｗｇ）ＰＨＡ（阳性对照）、２０斗ｇ ＣＦＰｌ０／ＥＳＡＴ６融 合蛋白（抗原刺激孔）及１０山生理盐水（阴性对 照）的相应孔中，２０斗ｌ／孔。轻摇混合，于含５％Ｃ０２ 的培养箱中３７℃培养过夜。次日收集培养上清液， 取其中１００斗ｌ检测ＩＦＮ．＾ｙ浓度，其余培养液一２０℃ 冻存备用。
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｐａｐｅｒ ａｉｍｅｄ ｔｏ ｃｏｍｐａｒｅ ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍｅｔｈｏｄｓ，ｐｕｒｉｆｉｅｄ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ（ＰＰＤ）ｔｕｂｅｒｃｕｌｉｎ ｔｅｓｔ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｂｏｖｉｎｅ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｗａｓ ｃａｎｒｉｅｄ ｏｕｔ ａｓ ｗｅｌｌ．１４５ ＣＯＷＳ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＰＰＤ ｔｕｂｅｒｃｕｌｉｎ ｔｅｓｔ ｗｅｒｅ ｓｕｂｊｅｃｔｅｄ ｔｏ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｎａｌｙｓｉｓ。ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ＩＦＮ—ｇａｍｍａ（ＩＦＮ—ｇ）ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｒｅｌｅａｓｅ ａｓｓａｙ，ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＥＬＩＳＡ．ａｎｄ ｇｏｌｄ ｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ（ＧＩＣＧ）ａｓｓａｙ．Ａｓ ａ ｒｅｓｕｌｔ，ＩＦＮ－ｇ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｒｅｌｅａｓｅ ａｓｓａｙ ａｓ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｍｅｔｈｏｄ，ｈａｄ ｈｉｇｈ ａｇｒｅｅｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ＰＰＤ ｔｅｓｔ。ｔｈｕｓ ｉｔ ｗｏｕｌｄ ｂｅ ｍｏｒｅ ｕｓｅｆｕｌ ｔＯ ｄｅｔｅｃｔ ＣＯＷＳ ｉｎ ｌａｔｅｒ ｓｔａｇｅ ｏｆ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｃａｌｌ ｒｅｄｕｃｅ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｎｉｍａｌｓ ｃｕｌｌｅｄ ａｓ ｆａｌｓｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅｓ．Ｔｈｅ ｉＥＬＩＳＡ Ｗａｓ ｍｏｒｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｔｈａｎ ＧＩＣＧ ｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．
两种牛结核病检测方法的比较探索
两种牛结核病检测方法的比较探索作者：东毛来源：《农家致富顾问·下半月》2017年第12期摘要目的：比较两种牛结核病的检测方法。
方法：选择某奶牛场16头奶牛，分别利用变态反应试验与y-干扰素平行对比试验进行科学检测，比较两种方法的检测结果。
结果：两种检测方法的相符率高达93.75%，有且只有一头牛出现两种检测方法不一致的情况。
结论：变态反应试验适合在基层疫控机构推广，y-干扰素平行对比试验基于目前我国没有引进且成本高，推广起来有很大的难度。
关键词牛结核病；检测方法；比较探索本次研究的主要目的是对两种方法检测牛结核病的结果进行科学比较，从某奶牛场中挑选16头奶牛为分析对象，同时给予不同的方法进行检测，具体情况分析如下：1 材料与方法1.1 一般资料试剂：从哈药集团生物疫苗有效公司选购牛结核菌素，批号为201001；进口分装y-干扰素检测试剂由我国动物卫生与流行病学中心诊断试剂研究室所提供。
试验动物：选择某奶牛场的存栏奶牛为研究对象，该牛场大约有70头寸栏奶牛，产奶量普遍较低，奶牛的消瘦呈现出非常明显的渐进性，在2016年9月秋季检测出牛结核病阳性牛，现从中选出严重消瘦的奶牛共16头，进行从1到16进行编号。
1.2 方法1.2.1 牛分支杆菌结核菌素变态反应严格根据《动物结核病诊断》中的规定进行操作，不管牛大小，统一在皮下注射牛型结核分支杆菌PPD0.1ml，在72小时之内对各种炎性反应进行仔细观察，如局部是否出现肿胀和热痛等，在此基础上利用卡尺对皮皱厚度进行仔细测量。
若皮厚差在2毫米以下则为阴性牛，皮厚差超过4毫米则为阳性牛，皮厚差在2～4毫米之间则为疑似牛[1]。
1.2.2 y-干扰素平行对比试验严格按照相关规程进行操作。
第一，进行全血培养，利用肝素真空采血管将16头奶牛的血液采集起来，在25摄氏度下的条件下放置6小时，然后在24孔组织培养板中加入，将三管1.5ml分装抗凝血分别给每头牛，比高分别将PBS、禽PPD和牛PPD（刺激抗原）分别加入到三管中，在37摄氏度湿温培养箱中进行18小时的孵育，将上层血浆每孔400ul收集起来；第二，进行牛y-干扰素酶免疫试验[2]；第三，4个小时后在酶标仪上对OD450mm数值进行读取。
实验室检测奶牛结核病的方法比较
测 结核 病 早期 感 染 的能 力 ，通 过体 外 刺激 培养 ，检测 只 需要 采 集 次血 样 ，而 且 试验 特 异性 好 ，检 测 敏感 性 高 。商 品化 牛结 核 下 异性 好 和 灵敏 度 高 ，但 是 该方 法 成 本较 高 ， 目前 不 适合 全 面 推广 干 扰 素试验 试 剂盒 ，容 易 实现标 准 化 ，排 除了Ｐ Ｐ Ｄ 变 态 反应 结 使用 。 国 内 已经 开 始研 发 低 成 本 的 一 干 扰素 牛 结 核 病 诊 断试 剂 果判 定 人 为 因素 影响 。但 是 牛结 核 分 枝杆 菌下 一 干扰 素 检测 试 剂 盒 ，该试 剂 盒研 发成 功后 将 改变 我 国牛结 核病 的诊 断 方法 。 盒 价格 较 高 ，建 议 目前 将 该方 法 用 于复 核 检查 牛型 Ｐ Ｐ Ｄ 变 态 反应 阳性 牛 ，剔 除部 分 假 阳性 牛 型Ｐ Ｐ Ｄ 反 应 ，尽 量 减少 不 必要 的经 济 ４ 结 论 干 扰 素检 测 技 术 是 一 种 新 型 牛结 核 病 检 测 方 法 ，具 有 检 损失 。
７ ３ １ ６ ０ ０ ；
７ ３ １ ６ ０ ０ ）
恒 温箱 中 ，运送 到 实验 室 ，并 在 采血 后第 ２ ０ ｈ 进 行培 养 。轻轻 颠倒
试管ｌ ０ 次 ，在无 菌 条件 下 ，用 一 次性 自动移 液 器将 抗凝 血 加入 ２ ４ 孔 组织 培 养板 ，每 头 奶牛 加３ 孑 Ｌ １ ． ５ ｍ ｌ 血样 。每 个血 样 ３ 个孔 分别 加 入１ ０ ０ １ Ｐ Ｂ Ｓ 、禽 型提 纯结 核 菌素 、牛 型结核 菌 素将 含有 血液 和抗 原 的组 织 培养 板在 ３ ７ ％恒 温培 养箱 中孵育 ２ １ ． ５ ｈ 。孵 育后 将 ２ ４ 孔 板 在 室 温下 （ ２ ５ ℃ ），５ ０ ０ ｒ ｍ ｉ ｎ ，离 ， ￣ ｌ Ｏ ｍ ｉ ｎ ，小 心 吸 取上 层 血浆 ， 放入１ ． ５ ｍ ｌ 的离 心 管 中 。然 后按 照 试剂 盒 说 明对 一 干扰 素上 清 液 进 行检 测 。结果 判定 标 准 ：阴性 ＝ 牛 型提 纯结 核菌 素 的Ｏ Ｄ 一 阴性 抗 １ 材料 与方法 １ ． １ 材 料 原的Ｏ Ｄ＜０ ． １ 或 牛 型提 纯 结核 菌 素 的Ｏ Ｄ 一 禽 型提 纯结 核 菌 素 的Ｏ Ｄ １ ． １ ． １ 试剂 盒 ＜０ ． １ 。 阳性 ＝ 牛 型提 纯结 核 菌素 的Ｏ Ｄ 一 阴性抗 原 的Ｏ Ｄ ≥Ｏ ． １ 且 牛型 瑞 ￣Ｐ ｒ ｉ ｏ ｎ ｉ ｃ ｓ 公 Ｂ ｏ ｖ ｉ ｇ ａ ｍ牛 结核 分 枝 杆菌 一 干扰 素 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检 提 纯结 核菌 素 的Ｏ Ｄ 一 禽型 提纯结 核 菌素 的Ｏ Ｄ ≥０ ． １ 。 测试 剂盒 ，购 买 于北 京测 迪科 技 有 限公 司 。 ２ 结果 １ ． １ ． ２ 主 要 试 剂 （ １ ）牛型 提纯 结核 菌 素 （ Ｐ Ｐ Ｄ） 皮 内变态 反应 试验 选定 永 靖 牛结 核 菌素 由 哈药 集 团生 物疫 苗有 限公 司生产 ，Ｂ ｏ ｖ ｉ ｇ ａ ｍ牛型 县 ３ ９ 个奶 牛养 殖 场 （ 户 ）饲养 的５ ３ １ 头奶 牛进 行结 核病 检疫净 化 ， 提纯 结 核菌 素 （ Ｂ ｏ Ｐ Ｐ Ｄ）和Ｂ ｏ ｖ ｉ ｇ ａ ｍ 禽 型 提纯 结核 菌 素 （ Ａ ｖ Ｐ Ｐ Ｄ） 每年 ３ ～４ 月份 和 ９ —１ ０ 月份 分 为两次 进行 集 中检测 ，累计检 测３ １ ４ ０ 购买 于北 京测 迪科 技 有 限公 司 。 头 次 。检 出疑 似 阳性 牛 １ １ 头 ，在颈 部对 侧 复 检 的同 时 ，采集 血 液 １ ． １ ． ３ 试验 牛群 样本 。通 过皮 内变态 反应 法复 检排 除疑似 阳性牛４ 头 ，实 际阳性 牛 选择 全 县 饲 养 的 ５ ３ １ 头 奶 牛 ，从 ２ ０ １ ４ 年 开 始 到２ ０ １ ６ 年 ，每 年 为７ 头 ，奶牛 结核 阳性 率０ ． ２ ２ ％。 （ 详见 表 １ ） ３～ ４ 月份 和９ —１ ０ 月份 ，进 行结 核病 检 测 。 表１ ２ ０ １ ４ ￣２ ０ １ ６ 年全县奶牛结核病检测统计表 单位 ：头 、％ １ ． ２ 方法 １ ． ２ ． １ 牛型提 纯 结核 菌素 （ Ｐ Ｐ Ｄ ）皮 内变态反 应 试验 依 据 国 家 标 准 《动 物 结 核 病 诊 断 技 术 （ＧＢ ／ Ｔ１ ８ ６ ４ ５ — ２ ０ ０ ２ ）》 ，在 奶 牛 颈 部 用牛 型 Ｐ Ｐ Ｄ 进行 皮 内变 态反 应 试 验 ，剂 量 为２ ０ ０ ０ Ｉ Ｕ ／ 头 ，分 别在 注 射 前 和 注射 后 ７ ２ ｈ 测 量 皮肤 厚 度 ，并 计 算 （ ２ ）牛结 核 一 干扰 素检测 试验 出皮厚 差 ，对 于 皮厚 差在 ２ ． Ｏ ｍ ｍ以上 的 （ 包括２ ． ０ ａ ｒ ｍ）疑似 阳性 牛 通过 牛 结 核 一 干扰 素 检 测技 术 对 １ １ 头 疑 似 阳性 牛 进 行实 验 再 进行 对侧 重 复检 查 ，依 据 国家标 准判 断结 果 。 室血 清学 检 测 ，排 除 假 阳性奶 牛 ６ 头 ，最终 确定 结 核 阳性 牛５ 头， １ ． ２ ． ２ 牛结核 ｖ 一 干扰 素检 测 试验 奶 牛结 核 阳性 率０ ． １ ６ ％。 皮 内试 验第 ３ ｄ 采集 单侧 阳性 牛的血 液 （ 每 头６ ｍ１ ），放 入肝 素 抗 凝 管 中 ，轻轻 颠 倒 ３ ～５ 次 ，使肝 素 和 血液 充 分混 匀 ，放 人 ２ ２ ％
牛型结核菌素皮内变态反应试验和_干扰素ELISA试验检测奶牛结核病的比较研究
牛结核病是由牛结核分枝杆菌引起的动物和人 的一种慢性细菌 性 疾 病。 在 家 畜 中，奶 牛 最 易 感 染
结核 病，其 次 是 水 牛 和 黄 牛。 世 界 动 物 卫 生 组 织
（ＯＩＥ）将牛结核病列为 Ｂ 类动物疫病。 多数国家均
畜 牧 兽 医 杂 志 第 ３３ 卷 第 ６ 期 ２０１４ 年
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的方法，不 仅 消 除 了 结 核 菌 素 试 验 结 果 的 主 观 性， 而且也使 检 测 更 及 时。 本 研 究 旨 在 通 过 比 较 ＰＰＤ 皮内变 态 反 应 法 和 ＩＦＮ－γＥＬＩＳＡ 方 法 在 检 测 奶 牛 结核病时的优缺点，旨 确 定 快 速 准 确 的 奶 牛 结 核 病 诊断方法提供参考，同 时 也 为 摸 清 甘 肃 省 奶 牛 结 核 病的流行情况提供技术支撑。
师，主要从事动物疫病防 控 工 作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｏｕｌｉｎｇ １６３＠１６３．ｃｏｍ
“检疫－扑杀”的策略消灭 牛 结 核 病。 由 于 ＰＰＤ 皮 内 变 态 反 应 存 在 非 特 异 性 高 的 缺 点 ，常 会 造 成 误 杀 ， 因而探寻准确判断奶牛结核病的诊断新技术非常必 要。γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）ＥＬＩＳＡ 检 测 是 利 用 结 核 杆 菌 抗原致敏的 Ｔ 淋 巴 细 胞，若 再 次 遇 到 相 同 抗 原 时， 可在短时间内产生ＩＦＮ－γ，通过 ＥＬＩＳＡ 方法定量测 定培养上清液中 的ＩＦＮ－γ 的 量，以 间 接 检 测 牛 结 核 病。ＩＦＮ－γＥＬＩＳＡ 检 测 法 的 敏 感 性 明 显 高 于 ＰＰＤ 皮内变态反应试验，作 为 最 大 限 度 检 测 奶 牛 结 核 病
奶牛结核病两种检测方法的比较试验
２ ． ５ Ｍ Ｎａ Ｃ １ ， ５ ％Ｓ Ｄ Ｓ）； （ ４） ２×Ｔ ａ ｑ Ｐ ＣＲ Ｍａ ｓ ｔ ｅ ｒ Ｍｉ ｘ；
的慢性 传染病 ， 该 病 的传 播 流 行直 接 影 响 着 畜牧 业 生 产发 展和人 类 身体健 康 。要 消灭 和有效 控制 牛结
核病 ， 就 要对该 病 进 行 准确 的检 测 。近 年来 建 立 在
１ ． ２ 方法
采用 Ｐ Ｐ Ｄ和 Ｐ Ｃ Ｒ快速 诊断 试剂 盒分别
对 １ ０ ０头份 奶 样进 行 结 核病 检 测 ， 计算 ２种 检 测方 法 的符 合率 。 １ ． ２ ． １ Ｐ Ｐ Ｄ检 测 方 法 ： 在 编 号 的 牛 颈 侧 中 部 上 １ ／ ３处 剪 毛 ， 用 卡 尺 测 量 术 部 中央 皮 皱 厚 度 ， 作 好
的大 小 和皮 皱 的 厚 度 ， 作好记 录。在 ７ ２ ｈ观 察 后 呈 阴性 和 可 疑 反 应 的 牛 须 在 第 １次 注 射 的部 位 ，
以 同样 的 剂量 进 行 注 射 ， 在 第 ２次 注 射 后 ４ ８ ｈ再 观察 １次 ， 观察 项 目同上 ， 均 应 进 行 记 录 。判 断 标
准： 皮 差反 应 超 过 ４ ｍ ｍ 以上 为 阳 性 反 应 ； 皮 差 在 ２～ ４ ｍ ｌ ｌ ｑ为可 疑 反应 ； 皮差 不 超过 ２ Ｉ Ｔ ｌ ｍ 为 阴性 反
应（ 无 炎性 水 肿 ） 。
ｍ ｇ ／ ｍＬ ， 用 Ｔ Ｅ溶
摘要 ： 采用 自制的牛结核病 Ｐ Ｃ Ｒ快速诊断试剂盒 ， 对某奶牛场 ｌ Ｏ ０头份奶牛奶样进行 检测 ， 检 出阳性牛 １ ６头 ； 采用结 核 菌素皮 内注射法 （ Ｐ Ｐ Ｄ） 检 出阳性牛 １ ７头 ， 结果符合率 为 ９ ４ ． １ １ ％。用 牛结 核病 Ｐ Ｃ Ｒ快速诊 断试剂盒检测所 需时间为 ６ ｈ ， 显 示其快速 、 特异等优点 ， 为今后牛结核病的检疫工作提供了 １ 个新方法 。 关键词 ：奶牛 ； 结核病 ； 检测
两种方法在奶牛结核病检疫中的对比试验
72020.02·试验研究 | Experimental research0 引言牛结核病主要是由牛分枝杆菌引起的慢性细菌性人兽共患病，在全球范围内广泛流行[1]。
该病不仅严重影响奶牛业发展，也是公共卫生的重大威胁。
传统诊断方法，如涂片镜检、细菌培养等存在较多缺点，因此要求研究人员开发新的诊断技术或对传统的诊断方法进行改进。
目前基层兽医常用的牛结核病检疫方法是皮内变态反应，牛结核病γ干扰素ELISA 是个很好补充。
2019年10月18日，崇明奶牛“两病”区域净化示范区项目以高分通过国家验收，并获得授牌，成为国内首个疫病区域净化示范区，为奶业振兴打造了“崇明案例”。
下一步上海将在全辖区内整建制推进奶牛“两病”区域净化模式，示范引领全国奶牛“两病”净化工作。
本试验选用崇明某场选用皮内变态反应和γ干扰素ELISA 检疫，进行净化牛结核病的尝试，以期为该病的检疫添砖加瓦。
1 材料与方法1.1 试验及采样上海某区3个奶牛场饲养984头奶牛，近年偶尔有结核病可疑牛和阳性牛出现，为根除牛结核病对该奶牛场的威胁，技术人员根据该奶牛场情况制定了检疫计划，选用皮内变态反应与γ干扰素ELISA 检测相结合的方法，进而达到检疫的目的。
1年2次检疫使用牛型结核病PPD （纯化蛋白衍生物）皮内变态反应，出现阳性或可疑牛后，再对其以及接触较为密切的牛进行γ干扰素ELISA ，目的在于更好地净化牛结核病。
1.2 主要试剂及设备牛结核菌素购自某生物疫苗有限公司，批号为201008；BOVIGAM?牛结核分枝杆菌γ-干扰素检测试剂盒购自上海某生物有限公司，批号为6332607801；瑞士Tecan Sunris 酶标读数仪。
1.3 牛结核变态反应试验奶牛结核病按照国家标准（GB/T18645-2002），用牛型结核分支杆菌PPD 皮内变态反应试验进行奶牛结核病检测。
局部炎性反应明显，皮厚差≥4 mm 判定为阳性牛；局部炎性反应不明显，2 mm ≤皮厚差＜4 mm 判定为可疑牛；无炎性反应，皮厚差＜2 mm 判定为阴性牛[2]。
不同监测方法在奶牛结核病检疫中的应用
摘
要 ：为 了解牛型提 纯结核 菌素ｌ ￣ Ｐ ｆ ） 皮 内变态反 应试验 和牛结核 一 干扰 素Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ ＇ ￣
ｉ ｆ Ｏ 相关性 ，对规 模牛
场 先进行 牛型Ｐ Ｐ Ｄ皮 内变态反应试验 ，采集检疫 阳性牛 和部 分 阴性 牛抗凝 血进行 牛结 核 一 干扰 素Ｅ Ｌ １ Ｓ Ａ 试 验 ，通 过试验结 果找 出两者之 间的相关性 ，研 究牛 结核 一 干扰 素Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ试验 在牛结核病检 疫 中的可行性 关键词 ：奶牛 ；结核病 ；Ｐ Ｐ Ｄ 皮 内变态反应试 验 ；牛结核 ｙ一 干扰素 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 试验
７ １ 王海林， 舒适， 郑 家三， 等．黑龙江 垦区规模化 奶牛场肢蹄痛 的调 调 查 数据 显 示 ，胎 次 、年龄 与 奶 牛肢 蹄病 的关 系不 【
尽 相 同。３ － ６ 胎 次奶 牛 的发 病数 较 多 ，占 总发 病 头数 的
８ ５ ． １ ９ ％ 以上 ，其 原 因可 能 是 奶 牛 体 内 物 质代 谢 旺盛 ，
升 。 我 国奶 牛结 核 病 检疫 的 国 家标 准是 牛 型 结核 菌 素 皮
收稿 日期 ： ２ ０ １ ６ — ０ ６ — ２ ０
内变 态 反 应 （ ＧＢ ／ Ｔ １ ８ ６ ４ ５ — ２ ０ ０ ２），但 该 方 法 具 有操
营养 供 给 ，／ Ｊ Ｄ ， ￣ ０ 了蹄 变形 严 重程 度 ，二者 之 间 差异 极显 机 体 抵抗 力 相对 下 降 ，发病 率 大幅 上升 。还 应值 得 关 注 著 （ Ｐ ＜ ０ ． ０ １） 【 ６ ］ 。蹄 变 形和 蹄 叶炎 易使 蹄 抵抗 力下 降 ，
Ｉ ３ １ 吴树清， 马刚 ， 等 内蒙古 包头地 区奶 牛 变形蹄 与蹄 病的发 生及 相 关因素的调 查ｌ ＿ ｌ ｌ 畜牧 与饲料科 学， ２ Ｏ （ ， Ｉ ４ 邓益锋 ， 仇焕雷， 芮荣． 奶牛蹄 变形及蹄病发 生规律的研 究ｌ Ｊ ｌ ＿ 动
两种方法检测奶牛结核病的比较分析
两种方法检测奶牛结核病的比较分析作者：王丽霞李爱华王会杰刘翠梅刘天驹李狲韩庆安来源：《中国动物保健》2015年第01期摘要：采用常规皮内变态反应（TST方法）对唐山、秦皇岛、沧州和石家庄四个市共计2204头奶牛进行牛结核病检测，采用IFN-γ试验方法对PPD检测结果为阳性、可疑的牛以及部分阴性牛进行复检。
将IFN-γ试验与TST检测结果相比较，其敏感性为78.26%，特异性为89.09%，符合率为84.33%。
研究表明单独使用PPD皮内变态反应方法在牛结核病的诊断方面存在特异性差的缺点，用IFN-γ试验对TST试验阳性和可疑牛进行复检可以提高特异性，避免造成假阳性牛的误杀；该方法在临床上适合推广应用。
关键词：奶牛结核病；皮内变态反应；IFN-γ试验牛结核病（Bovine Tuherculosis）是由分支杆菌属牛分枝杆菌所引起的一种慢性消耗性传染病，由于该病也感染人，所以是人畜共患病。
该病虽然能够感染猪、鹿、猴等动物，但牛最易感；而在牛中，黄牛和牦牛感染级别较大，水牛易感性较高，但奶牛最易感染。
我国将该病列为二类动物疫病，而OIE将其列为需通报的B类动物疫病。
当前，人民对牛奶和牛肉的需求量较大，我国奶牛业发展较快，但通过对人结核病患者病原统计分析，有10%结核病病原为牛分枝杆菌，故该病控制的好坏，直接关系到奶牛养殖业的发展和居民的身体健康，因此及时检测、淘汰结核感染的奶牛具有重要的现实意义。
牛全血干扰素试验方法（牛IFN-γ试验方法）是牛结核诊断的一种新型的牛结核诊断方法，由Wood等首先将该方法用于牛结核病的检测，而澳大利亚利采用该方法作为牛结核病根除计划的首选试验方法运用于临床，效果显著，并于1997年底宣布消灭了牛结核病。
当前，该方法在欧盟和美国等发达国家也得到了承认，成为继TET方法之外的唯一的法定活畜牛结核病诊断试验。
当前我国主要采用颈部皮试变态反应（TST法）来进行牛结核病的检疫，对阳性牛进行扑杀，对可疑牛隔离后再次进行检疫，而国外采用的用于牛结核病检疫的牛IFN-γ试验方法目前在我国尚未正式推荐使用。
两种方法检测奶牛结核的比较
两种方法检测奶牛结核的比较
何昭阳;金璐娟
【期刊名称】《吉林农业大学学报》
【年(卷),期】1997(019)002
【摘要】采用变态反应ＥＬＩＳＡ同时奶牛结核病进行检测，并以剖检和细菌进行验证。
结果表明，变态反庆和ＥＬＩＳＡ奶牛结核的检出率分别为１．３％和０．３７％，变态反应阳性并不能包括ＥＬＩＳＡ阳性。
变态反应与剖检及细菌学检查的符合率分别为１８．８％和７．２％，而ＥＬＩＳＡ与剖检及细菌学检查的符合率分别为６６．６％和５５．５％，ＥＬＩＳＡ检测具有较好的特异性。
【总页数】4页(P77-80)
【作者】何昭阳;金璐娟
【作者单位】吉林农业大学动物科学系;吉林农业大学动物科学系
【正文语种】中文
【中图分类】S858.235.1
【相关文献】
1.两种方法检测结核杆菌的阳性率比较 [J], 徐红炜
2.检测结核分支杆菌L型的两种方法比较 [J], 李红光;田艳生;王江勇;张卫
3.184例肺结核病人连续三次痰真菌培养与血浆葡聚糖检测的两种方法比较 [J], 马立宗;郭建;纳媛娜
4.两种方法检测奶牛结核病的比较分析 [J], 王丽霞;李爱华;王会杰;刘翠梅;刘天驹;
李翀;韩庆安
5.两种方法检测结核分枝杆菌阳性率的比较 [J], 张正勋;邱光艳
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三种检测方法在翠屏区牛结核病检疫中的应用
三种检测方法在翠屏区牛结核病检疫中的应用
潘延乐;陈铭;王颖旺
【期刊名称】《中国动物保健》
【年(卷),期】2023(25)2
【摘要】本文旨在为翠屏区奶牛结核病诊断净化提供科学依据。
试验采用牛结核分枝杆菌皮内变态反应试验(PPD)、γ-干扰素ELISA试验、胶体金快速检测卡等三种方法分别进行牛结核病检疫。
三种方法均为阳性的有1头,均为阴性的有42头,总符合率为75.44%;γ-干扰素ELISA试验与PPD相比,均为阳性的1头,阳性符合率为12.5%。
胶体金快速检测卡与PPD相比,均为阳性的有6头,阳性符合率为75%。
结果表明:三种检测方法各有优缺点,在实际操作中应根据需要选择。
【总页数】3页(P124-126)
【作者】潘延乐;陈铭;王颖旺
【作者单位】宜宾市翠屏区动物疫病预防控制中心;河南省信阳市动物疫病预防控制中心
【正文语种】中文
【中图分类】R52
【相关文献】
1.γ-干扰素ELISA检测方法在牛结核病流行病学调查中的应用
2.提纯牛结核菌素在我省牛结核病检疫中的应用
3.牛结核γ-干扰素ELISPOT方法在奶牛结核病检疫
的应用4.两种检测方法在牛结核病检疫的应用5.牛副结核病检疫方法的应用与探讨
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牛结 核 病 是 由牛 结 核 分 枝 杆 菌 引起 的 一 种 慢
１ ． ３ 主 要 试 剂
试 剂均 为进 口或 国产分析 纯试 剂 。
性进 行性 传染 病 。近 年来 ， 随着 结 核 分 枝杆 菌 耐 药 性 菌株 的产生 及养 牛 的增 加 ， 结 核 病 的 阳性 检 出率
右 侧 国产 牛 型 Ｐ Ｐ Ｄ 和进 口牛 型 Ｐ Ｐ Ｄ 的试 验 结 果 ， 以评 价 国产 牛 型 Ｐ Ｐ Ｄ 和 进 口牛 型 Ｐ Ｐ Ｄ 的 应 用 效
果； 综 合 右侧 国产 牛 型 Ｐ Ｐ Ｄ 和左 侧 禽 型 Ｐ Ｐ Ｄ 的试
１ 材 料 与 方 法 １ ． １ 试 验 及 采 样 奶 牛 场
在上 海 某 区某 疑 似 结 核 污 染 奶 牛 场 与 某 区 的 某结 核 阴性奶 牛场进 行试 验及采 样 。
验 结果 为 国产 牛型 Ｐ Ｐ Ｄ的Ｓ Ｉ Ｃ Ｃ Ｔ结 果 ； 综 合 右侧
进 口牛型 Ｐ Ｐ Ｄ和左侧 禽型 Ｐ Ｐ Ｄ 的试验 结 果为 进 口 牛型 Ｐ Ｐ Ｄ的 Ｓ Ｉ Ｃ Ｃ Ｔ结果 。
ห้องสมุดไป่ตู้・
１ Ｏ ・
《 上 海畜牧 兽 医通讯 》 ２ ０ １ ５年 第 ２期
皮 试 法 与 ＥＬ Ｉ Ｓ Ａ 法在 奶牛 结 核 病检 测 中 的对 比试 验
杨显 超 吴 秀娟 李 凯航 王 建 （上 海市 动物 疫病 预防控 制 中心 上 海 ２ ０ １ １ ０ ３）
【 摘 要】通 过 单 纯 颈 部 皮 内 变 态反 应 （ Ｓ Ｉ Ｃ Ｔ） 、 比较 变 态反 应 （ Ｓ Ｉ Ｃ Ｃ Ｔ） 检 测方法、 了 一 干 扰 素 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ和 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ ４种 方 法 ， 同时检 测 上海 ２个奶 牛场 的 ２ ２ ２头奶 牛 。结 果发 现 ： 阳性检 出率 以颈 部 皮 内变态反应 为 最 高（ ６ ７ ． ６ ） 、 Ｅ Ｉ Ｉ Ｓ Ａ （ ４ ４ ． １ ％） 和 一 干扰素 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ居 中（ ３ １ ． １ ） ，比较 变 态 反应 最低 （ １ ３ ． １ ） ； 单 纯的颈部 皮 内变 态反 应 与 ２种 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 的符 合 率较 差 ， 而 比较 变 态反 应 与 ２ 种 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 具有较 好 的符合 率 ； 在 变态反应 阴性 牛 中， 仍 然检 出 了部 分 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 阳性 牛 。 由此认 为 ， 先 以 变态反应检 疫 牛群 ， 再 随之 实施 抗体检 测 ，会 更有利 于结核 病 牛场 的净化 与 防制 。
也在 逐年 上 升 。 由 于 牛 和 人 类 的 关 系 （ 牛奶 、 牛肉
１ ． ４ 牛 结核 变 态反 应 试 验
参 照 国家标准《 动 物结 核病诊 断技 术 （ Ｇ Ｂ ／ Ｔ １ ８ ６ ４ ５ — ２ ０ ０ ２ ） 》 进行 ， 仅采用进 口或国产 牛型 Ｐ Ｐ Ｄ进行 变 态反应试验 ， 国产 牛型 Ｐ Ｐ Ｄ剂 量为 ２ ０ ０ ０ Ｉ Ｕ， 进口 牛型 Ｐ Ｐ Ｄ剂量 为 ３ ０ ０ ０ Ｉ Ｕ。分 别 于注射 前和 注射后 ７ ２ ｈ 测 量皮肤厚 度 ， 并 计算 出皮 厚差 ， 依据 国家 标 准 判 断结果 。Ｓ Ｉ Ｃ Ｃ Ｔ参 照 Ｏ Ｉ Ｅ （ （ 动物 疫 苗 和诊 断手 册 》 中牛结 核病诊断方法进行 。 ， 在 颈部皮 内分点 注射 牛
型 和禽型 Ｐ Ｐ Ｄ， 使 用剂 量 为 国产 牛 型Ｐ Ｐ Ｄ ２ ０ ０ ０ Ｉ Ｕ，
进 口牛 型 Ｐ Ｐ Ｄ ３ ０ ０ ０ Ｉ Ｕ， 禽型 Ｐ Ｐ Ｄ ２ ５ ０ ０ Ｉ Ｕ。分 别 于
注 射前 和注 射后 ７ ２ ｈ测 量皮肤 厚度 ， 并 计算 出皮厚 差， 依据 ＯＩ Ｅ标 准 判 断 结 果 。为 区别 牛 型 和 禽 型 Ｐ Ｐ Ｄ， 在 牛 右颈侧 中部 上 三分 之 一 处 注 射 国产 牛型 Ｐ Ｐ Ｄ， 下方 间 隔 １ ５ ～２ ０ ｃ ｒ ｎ注射 进 口牛 型 Ｐ Ｐ Ｄ； 在 牛 左颈侧 中部 上 三 分 之 一处 注 射 禽 型 Ｐ Ｐ Ｄ。 比对
及耕 牛等 ） 密切， 牛 结 核 病 的存 在 不 仅 影 响 畜 牧 业 的健 康发 展 ， 还 严 重威 胁 人 类 的健康 。牛 结核 病 防 治 的有效 措施 是检 出所 有 的结 核 病 牛 ， 并进 行 隔 离 或淘 汰 。 当前 国内外 用 于牛结 核病诊 断 的方法 主 要有 ： 根 据 临床 症 状 和病 理 变 化 诊 断 、 细 菌 分 离 培 养法 、 结 核菌素 皮 内变态 反应 （ Ｐ Ｐ Ｄ） 、 淋 巴细 胞转 化 试验 、 丫 一 干扰 素试 验和 血清学 方法 等 ， 无论 哪 种检 测 方法 都有 其优 缺点 。但 比较 皮试 法 （ 比较结 核 菌 素 皮 内变态 反应 ） 的阳性 符 合 率 最 高 ， 结果较准确 ， 成 为多 个 国家法 定 的检测 方 法 。Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ检测法（ 酶 联免 疫 吸附试 验 ） 具有方便、 快速 、 高通量 、 可 自动 化、 特异 性强 等 特 点 ， 越 来 越 多 地 用 于 牛 结 核 病 的 检测 中 。本 试 验将这 种方 法 和变 态 反应 、 ７ 一干扰 素 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 同时 应用 于检 测结 核污 染 牛场 的牛群 ， 探 寻 其优 缺点 及在 实际 工 作 中 的应 用 价值 ， 以找 出结 核 病污 染群 的最 佳 防治 和净 化 方 法 ， 更 好 地 防制 牛 结 核病 ， 减少 人类 结核 的感染 。