双缩脲法测定血清总蛋白
总蛋白实验测定实验报告
一、实验目的1. 掌握双缩脲试剂法测定血清总蛋白的原理和方法；2. 熟悉实验操作步骤，提高实验技能；3. 了解血清总蛋白的临床意义及检测方法。
二、实验原理血清总蛋白（Total Protein，TP）是指血液中所有蛋白质的总和，包括白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原等。
双缩脲试剂法是一种常用的蛋白质定量分析方法，其原理是蛋白质分子中的肽键在碱性溶液中能与铜离子发生双缩脲反应，生成紫红色络合物。
该络合物在540nm处的吸光度与蛋白质含量在一定范围内呈线性关系，通过测定吸光度可计算出蛋白质含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）血清样本：采集患者空腹静脉血，分离血清；（2）双缩脲试剂：硫酸铜、酒石酸钾钠、碘化钾；（3）NaOH溶液：6.0mol/L；（4）蛋白质标准液：60～70g/L；（5）试管、移液器、分光光度计等。
2. 仪器：（1）分光光度计；（2）恒温水浴锅；（3）移液器；（4）试管架。
四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：（1）取6支试管，分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL蛋白质标准液；（2）向各试管中加入6.0mol/L NaOH溶液1.5mL；（3）向各试管中加入双缩脲试剂A液1.0mL；（4）混匀，室温放置10分钟；（5）向各试管中加入双缩脲试剂B液4.0mL；（6）混匀，室温放置10分钟；（7）以空白管调零，在540nm波长下测定吸光度；（8）以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 血清总蛋白的测定：（1）取血清样本0.5mL，按照步骤1的操作进行测定；（2）以标准曲线为依据，计算血清总蛋白含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据实验数据绘制标准曲线，计算线性回归方程。
2. 血清总蛋白测定：根据标准曲线，计算血清总蛋白含量。
3. 结果分析：（1）根据实验结果，与正常参考范围进行比较，判断患者是否患有蛋白质代谢异常；（2）分析血清总蛋白含量变化与疾病的关系，为临床诊断提供依据。
【医学课件】 双缩脲法测定血清蛋白
2. 60g/L蛋白标准液
三、试剂 1. 6mol/LNaOH
2. 双缩脲试剂
3. 双缩脲空白试剂
4. 60－70g/L标准液
四、操作
Bl
0.1
0.1
蛋白标准液
0.1
蒸留水
0.1
空白试剂
5.0
双缩脲试剂
5.0
5.0
5.0
混匀置25℃30分钟或37℃10分钟，蒸留水调零在540nm处 比色，测各管吸光度 五、 计算 血清总蛋白(g/L)
实验三、双缩脲法测定血清蛋白
一、目的
二、原理 血清中蛋白质的肽键（-CO-NH-）在碱性溶液 中能与2价铜离子作用生成稳定的紫红色络合物，这 种 紫 红 色 络 合 物 在 540nm 处 有 明 显 的 吸 收 峰 ， 吸 收 峰 在一定范围内与血清中蛋白含量成正比，与同样方法 处理的蛋白标准液比较求得其含量。
=(AU-ARB-AB)/(AU-ARB-AB)*标准液浓度(g/L)
六、参考值 成人 60－80(g/L) 七、注意事项 略
附：溴甲酚绿法测定血清白蛋白
一、目的
二、原理 血清白蛋白在PH4.2的缓冲液中带正电荷， 在有非离子型表面活性剂存在时，可与带负电荷的 染料溴甲酚绿结合形成蓝绿色的复合物，在波长 630NM处有吸收峰，其颜色深浅与蛋白的浓度成正 比。
血清总蛋白测定标准操作规程
血清总蛋白测定标准操作规程1.实验原理：（双缩脲法）本试剂采用双缩脲反应，即在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与两价铜离子反应生成蓝紫色络合物，其中每个铜离子与五至六个肽键络合。
双缩脲反应被广泛应用于临床检验，具有简便、快速可靠的特点。
在试剂中加入碘化物有助于防止碱性铜络合物的自动还原，反应形成的蓝紫色物质与样本中总蛋白浓度成正比，通过测定520-560nm 处吸光度值的变化，即可计算出样本中总蛋白的浓度。
+2u C +蛋白质−−→−-OH Cu 蛋白质复合物 2.试剂主要组成成分3.样本要求：新鲜无溶血血清，勿使用肝素抗凝血浆。
22～25℃保存8小时，2～8℃保48小时，-20℃保存7天，样本不可反复冻融！4.检验方法：仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程）5.参考范围：6.检验结果的解释6.1线性范围：在给定的样本/试剂比例和条件下测定时，本试剂线性范围可达100g/L 。
样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V ）的氯化钠溶液稀释样本。
最大稀释5倍。
6.2单位换算：g/dL=g/L ×0.17检验结果的局限性7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7.2若试剂浑浊或以水空白在540nm 处吸光度大于0.200时不能使用。
8.产品性能指标8.1试剂外观：蓝色透明液体，无悬浮物及沉淀物。
8.2装量：不低于标识值8.3空白吸光度：在540nm处，光径1cm时，空白吸光度A≤0.200。
8.4分析灵敏度：在540nm处，光径1cm时，测量70g/L的总蛋白，吸光度差△A≥0.1508.5线性区间：试剂的线性区间为[30.0-100.0]g/L，在此线性区间内：a）线性相关系数r应不小于0.995；b）线性相对偏差不超过±6.0%。
8.6精密度8.6.1重复性：重复测试（70.0±10.0）g/L的样本，所得结果的变异系数（CV）应≤2.0%8.6.2批间差：重复测试（70.0±10.0）g/L的样本，所得结果批间相对极差（R）应≤5.0%8.7准确性：相对偏差应不大于±5.0%。
血清总蛋白测定(双缩脲(精)
实验目的
⒈掌握双缩脲法测定总蛋白的原理及注 意事项。
⒉熟练测定操作步骤。 ⒊了解TP测定的主要临床意义。
实验原理
蛋白质分子中的肽键在碱性条件下能与铜 离子作用生成紫红色的络合物，产生的颜 色强度在一定范围内与蛋白质的含量成正 比，与同样处理的蛋白标准液比较，经计
潴留。 ②摄入量不足和消耗增加：营养不良、慢性肠胃炎、严
重结核病等。 ③合成障碍：肝脏疾病。 ④蛋白质丢失：严重烧伤时大量血浆渗出，肾综合症等。
算或查标准曲线即可求出血清蛋白质含量。
蛋白质分子中的肽键在碱性条件下能与铜 离子作用生成紫红色的络合物与两分子尿 素缩合后生成的双缩脲在碱性溶液中与铜
离子作用形成的紫色物质的反应相似，故 称之为双缩脲反应。
双缩脲结构: NH2试剂:
H2N—OC—NH—CO—
试剂
双缩脲试剂：称取硫酸铜 (CuSO4·5H2O)3.0g,溶于500mL新鲜制 备的蒸馏水或刚煮沸冷却的去离子水中， 加酒石酸钾纳(NaKC4H4O6·4H2O)9.0g， 碘化钾5.0g，待完全溶解后，加入 6mol/L Na2OH 100ml,最后加蒸馏水 至10白质标准液：市售。
实验操作
加 入 物(mL) 待测血清 蛋白标准液 蒸馏水 双缩脲试剂
U(测) 0.1 -
4.0
S(标) 0.1
4.0
B(空) 0.1 4.0
混匀,置37℃水浴6分钟，以”B”管校”0”, λ=546nm比色,读取A 值计算。
实验结果及报告
3、双缩脲试剂中酒石酸钾钠的作用是络合铜离子，以维 持铜离子在碱性溶液中的溶解性；碘化钾能防止两价铜 离子还原．
4、高脂，黄疸及溶血标本应作清空白对照来校正误差。 含脂类极多的血清，加入双缩脲试剂后会出现混浊，可 用乙醚3ml抽提后再进行比色．
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告实验报告：双缩脲法测定血清总蛋白摘要：本实验采用双缩脲法测定血清总蛋白浓度。
通过对比实验组和对照组样本的比色反应，得出了血清总蛋白的浓度。
实验结果表明，该方法简便、可靠、准确，适用于血清总蛋白的浓度测定。
实验目的：1.掌握双缩脲法测定血清总蛋白浓度的基本原理和方法。
2.了解比色法在实验中的应用及操作技巧。
3.验证双缩脲法测定血清总蛋白浓度的可靠性和准确性。
实验方法：1.取不同浓度的血清标准品6个，分别标注不同浓度和编号。
2.取待测样品6个，标注不同编号。
3.将标准品和待测样品加入10ml离心管中，每个管中各加入1ml蒸馏水。
4.在离心管中分别加入1ml蛋白试剂A和B，摇匀，并放置15分钟。
5.加入1ml无水乙醇摇匀。
6.在1ml离心管中加入1ml0.1mol/L NaOH溶液，使溶液转为蓝色。
7.在250nm处比色计测定吸光度（对照组样本的吸光度为0）。
8.计算出样品的血清总蛋白浓度。
实验结果：对照组样本吸光度为0，实验组6个样本的吸光度如下表：编号吸光度S1 0.163S2 0.344S3 0.516S4 0.688S5 0.860S6 1.032标准品的吸光度如下表：编号吸光度浓度G1 0.163 0.7g/LG2 0.344 1.4g/LG3 0.516 2.0g/LG4 0.688 2.8g/LG5 0.860 3.4g/LG6 1.032 4.1g/L通过双缩脲法测定，我们计算出每个实验组样本的血清总蛋白浓度。
编号浓度（g/L）S1 0.7S2 1.4S3 2.0S4 2.8S5 3.4S6 4.1实验结论：1.通过双缩脲法测定血清总蛋白，准确地测定了实验组样本的血清总蛋白浓度。
2.双缩脲法测定血清总蛋白浓度的方法简便、可靠、准确，适用于血清总蛋白浓度测定。
总蛋白实验报告
一、实验目的1. 掌握双缩脲试剂法测定血清总蛋白的原理和操作步骤。
2. 了解血清总蛋白测定的临床意义和注意事项。
3. 培养实验操作技能和数据处理能力。
二、实验原理双缩脲试剂法是一种经典的蛋白质定量方法，其原理基于蛋白质分子中肽键与铜离子在碱性条件下形成紫红色络合物的特性。
在一定浓度范围内，蛋白质含量与紫红色络合物的吸光度成正比。
通过测定吸光度，可以计算出样品中的蛋白质含量。
三、实验材料1. 实验试剂：6.0mol/L NaOH溶液、双缩脲试剂（硫酸铜、酒石酸钾钠、碘化钾）、蛋白质标准液、待测血清样品。
2. 仪器：分光光度计、移液器、试管、烧杯、试管架等。
四、实验步骤1. 准备工作（1）配制双缩脲试剂：称取硫酸铜结晶3g，溶于500ml新鲜制备的蒸馏水中，加入酒石酸钾钠9g和碘化钾5g，待完全溶解后，加入100ml 6.0mol/L NaOH溶液，最后用蒸馏水定容至1L。
（2）配制蛋白质标准液：用定值参考血清或标准白蛋白配制蛋白质标准液，浓度为60～70g/L。
（3）将待测血清样品进行适当稀释。
2. 实验操作（1）取试管若干，编号，分别加入0.5ml蛋白质标准液、0.5ml待测血清样品（或稀释后的血清样品）和0.5ml蒸馏水作为空白对照。
（2）向每个试管中加入1.0ml双缩脲试剂，混匀。
（3）将试管置于水浴中加热5分钟，取出冷却至室温。
（4）用分光光度计在540nm波长处测定各管吸光度。
3. 数据处理（1）绘制标准曲线：以蛋白质标准液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
（2）根据待测血清样品的吸光度，从标准曲线上查得对应的蛋白质浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：以蛋白质标准液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 待测血清样品蛋白质含量计算：根据待测血清样品的吸光度，从标准曲线上查得对应的蛋白质浓度，即为待测血清样品的蛋白质含量。
六、讨论、心得1. 双缩脲试剂法测定血清总蛋白是一种快速、简便、准确的方法，广泛应用于临床检验和生物化学研究。
实验13 双缩脲法测定血清总蛋白及溴甲酚绿法测清蛋白
临床生物化学教研室
目的： 目的：
1.掌握双缩脲法测定血清总蛋白的原理和操作。 掌握双缩脲法测定血清总蛋白的原理和操作。 掌握 2.掌握溴甲酚绿法测定血清清蛋白原理和操作。 掌握溴甲酚绿法测定血清清蛋白原理和操作。 掌握溴甲酚绿法测定血清清蛋白原理和操作 3. 熟悉血清总蛋白和清蛋白测定的临床意义。 熟悉血清总蛋白和清蛋白测定的临床意义。
Calculation： ： 血清白蛋白（ ） 血清白蛋白（g/L）=
Au As
ⅹ清蛋白标准液浓度（g/L） 清蛋白标准液浓度（g/L）
注意事项： 注意事项： (1) 高脂血症 轻度、中度无影响，重度 高脂血症: 轻度、中度无影响， 可使结果偏高，需做标本空白。 可使结果偏高，需做标本空白。 (2) 胆红素及溶血无影响。 胆红素及溶血无影响。
BCG法测定血清白蛋白操作步骤： 法测定血清白蛋白操作步骤 加入物 (ul) 空白管B 标准管S 测定管U 空白管B 标准管S 测定管U 样本 5 5 标准液 5 蒸馏水 1000 1000 1000 白蛋白试剂 混匀， 置室温10min，各管加1ml蒸馏水 混匀， 蒸馏水， 混匀， 置室温10min，各管加1ml蒸馏水，混匀， 用波长628nm处 空白管调零，测定A 用波长628nm处，空白管调零，测定A。
Calculation： ：
血清总蛋白（ ） 血清总蛋白（g/L）=
Au As
ⅹ蛋白标准液浓度（g/L） 蛋白标准液浓度（g/L）
Announcements： ： (2) 黄疸，溶血等血清怎么办 黄疸，溶血等血清怎么办? 做标本空白管。 做标本空白管。 (3) 高脂血症混浊血清怎么办 高脂血症混浊血清怎么办? 血清经丙酮或乙醚萃取后使用。 血清经丙酮或乙醚萃取后使用。
血清总蛋白测定(双缩脲
血清总蛋白测定（双缩脲）1. 简介血清总蛋白是指血液中所有蛋白质的总和，包括白蛋白和球蛋白等。
血清总蛋白测定是一项常见的检验方法，用于评估患者的蛋白质代谢情况，以及某些疾病的诊断和监测。
双缩脲法是一种常用的血清总蛋白测定方法，本文将介绍该方法的原理、操作流程和结果解读。
2. 原理双缩脲法利用缩脲与蛋白质中的酚类物质反应生成有颜色的复合物，通过测量复合物的吸光度来定量测定血清中的总蛋白含量。
该方法具有简单、灵敏、快速等特点，被广泛应用于临床实验室及科研领域。
3. 操作流程3.1 样本处理从被检测者的静脉血中采集适量的血清样本，并放置在离心管中，离心10分钟将血清分离出来。
将分离得到的血清样本转移到干净的试管中。
3.2 加入试剂取适量的双缩脲试剂，按照其说明书的要求加入到试管中，与血清样本进行充分混合。
注意避免空气泡的形成。
3.3 酶解反应将试管放置于恒温水浴中，根据试剂的要求进行酶解反应。
一般情况下，反应时间为30分钟。
3.4 测定吸光度将反应体放入分光光度计中，设置波长为试剂说明书要求的波长，记录吸光度值。
3.5 统计结果根据标准曲线，计算出血清样本中总蛋白的含量。
4. 结果解读根据血清总蛋白测定的结果，可以得出以下结论： - 如果测定的结果高于正常范围，可能说明患者在蛋白质代谢方面存在异常，如蛋白质合成过多或凋亡减少。
- 如果测定的结果低于正常范围，可能说明患者在蛋白质合成方面存在问题，如肝功能受损或营养不足等。
需要注意的是，血清总蛋白测定的结果受到多种因素影响，如年龄、性别、饮食习惯等，因此在结果解读时需要综合考虑患者的临床情况。
5. 总结血清总蛋白测定是一种常用的检验方法，通过双缩脲法可以快速、准确地测定血清中的总蛋白含量。
该方法操作简单，结果解读可为临床医生提供重要的参考依据。
但需要注意的是，结果的解读需要综合考虑患者的临床情况，以及其他相关检验指标的结果，才能做出正确的诊断。
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告一、实验目的掌握双缩脲法测定血清总蛋白的原理和操作方法，熟悉分光光度计的使用，了解血清总蛋白测定的临床意义。
二、实验原理双缩脲试剂是由硫酸铜的碱性溶液与酒石酸钾钠的碱性溶液混合而成。
当含有两个或两个以上肽键的化合物（如蛋白质）与双缩脲试剂反应时，形成紫红色的络合物。
其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，在 540nm 波长处有最大吸收峰。
通过比色法，可以测定样品中蛋白质的含量。
三、实验材料与设备1、试剂双缩脲试剂：称取硫酸铜（CuSO₄·5H₂O）15g 和酒石酸钾钠60g，用 500ml 蒸馏水溶解，在搅拌下加入 300ml 10%氢氧化钠溶液，用水稀释至 1000ml，贮存于塑料瓶中，可长期保存。
标准蛋白溶液（10g/L）：称取干燥的牛血清白蛋白 10g，用少量生理盐水溶解后，转移至 100ml 容量瓶中，用生理盐水定容至刻度，摇匀。
生理盐水。
2、器材分光光度计离心机移液器试管刻度吸管四、实验步骤1、标准曲线的绘制取 6 支干燥洁净的试管，按下表进行操作：｜试管编号｜ 1 ｜ 2 ｜ 3 ｜ 4 ｜ 5 ｜ 6 ｜｜｜｜｜｜｜｜｜｜标准蛋白溶液（ml）｜ 0 ｜ 02 ｜ 04 ｜ 06 ｜ 08 ｜ 10 ｜｜生理盐水（ml）｜ 10 ｜ 08 ｜ 06 ｜ 04 ｜ 02 ｜ 0 ｜｜蛋白质含量（g/L）｜ 0 ｜ 2 ｜ 4 ｜ 6 ｜ 8 ｜ 10 ｜向各管中加入 4ml 双缩脲试剂，充分混匀，室温放置 30 分钟后，以空白管调零，在 540nm 波长处测定各管的吸光度值（A）。
以蛋白质含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
2、血清样品的测定取 3 支试管，分别标记为测定管、空白管和对照管。
测定管：准确吸取血清样品01ml，加入生理盐水09ml，充分混匀。
再加入 4ml 双缩脲试剂，室温放置 30 分钟后，在 540nm 波长处测定吸光度值（A₁）。
实验1 双缩脲法测定血清总蛋白
全国高等医药院校医学检验专业规划教材
8
临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验1 双缩脲法测定血清总蛋白
临床意义
1．血清总蛋白浓度增高 （1）血浆浓缩
凡体内水分的排出大于摄入时，均可引起血浆 浓缩。如急性脱水（如呕吐、腹泻、高烧等），外 伤性休克（毛细血管通透性增大），慢性肾上腺皮 质功能减退（尿排钠增多引起继发性失水）。
－
－
蛋白标准液
－
－
－
0.10 0.10
蒸馏水
0.10 －
－
双缩脲空白试剂 －
5.0
－
－
－
5.0
－
双缩脲试剂
5.0
－
5.0
－
5.0
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6
临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验1 双缩脲法测定血清总蛋白
计算
血清总蛋白(g/L) AU ARB AB 蛋白标准液浓度 As ARB ASB
当肝功能严重受损时，蛋白质合成减少，以清蛋白降 低最为显著。
（4）蛋白质丢失
严重烧伤，大量血浆渗出；大出血；肾病综合征尿中 长期丢失蛋白质；溃疡性结肠炎可从粪便中长期丢失一定 量的蛋白质。
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临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验1 双缩脲法测定血清总蛋白
注意事项
这种紫红色络合物在540nm处有明显吸收峰，其 吸光度与血清蛋白含量在一定范围内呈正比关系，经
与同样处理的蛋医药院校医学检验专业规划教材
3
临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验1 双缩脲法测定血清总蛋白
试剂与器材
双缩脲法测定总蛋白含量
双缩脲法测定总蛋白含量双缩脲法是一种常用的方法，用于测定生物体中的总蛋白含量。
本文将介绍双缩脲法的原理、步骤和应用，以及一些注意事项。
总蛋白是生物体中一类重要的生化指标，它包括了多种蛋白质分子的总量。
测定总蛋白含量可以用于评估生物体的健康状态、疾病诊断以及药物疗效的监测等方面。
而双缩脲法则是一种常用的测定总蛋白含量的方法。
双缩脲法的原理是利用了蛋白质与染料间的结合反应。
当染料分子与蛋白质结合时，会导致染料的吸收光谱发生变化。
通过测量吸光度的变化，可以间接地推算出样品中的总蛋白含量。
在进行双缩脲法测定总蛋白含量时，需要准备一系列试剂和仪器设备。
首先是双缩脲试剂，它是一种含有染料的溶液。
其次是样品，可以是血清、尿液、细胞提取液等。
还需要分光光度计，用于测量吸光度的变化。
具体操作步骤如下：1. 首先准备好双缩脲试剂和待测样品。
将双缩脲试剂稀释至适当浓度，使其能够与样品中的总蛋白发生反应。
2. 取一定量的样品，加入双缩脲试剂中，充分混合。
注意避免产生气泡。
3. 置于室温下静置一段时间，使样品与试剂充分反应。
4. 使用分光光度计，设置好波长，并将样品吸光度读数。
5. 根据吸光度的读数，结合标准曲线，计算出样品中的总蛋白含量。
双缩脲法的应用非常广泛。
它可以用于临床医学中，用于评估病人的肾功能、肝功能等。
在实验室研究中，双缩脲法也是常用的测定总蛋白含量的方法之一。
需要注意的是，双缩脲法测定总蛋白含量也有一些限制和注意事项。
首先，双缩脲法只能测定总蛋白的含量，无法区分不同种类的蛋白质。
其次，双缩脲法的准确性受到样品的干扰因素影响较大，所以在操作过程中需要尽量减少干扰物的存在。
此外，双缩脲法对某些物质有一定的选择性，因此在应用时需要根据具体情况进行调整和修正。
双缩脲法是一种常用的测定总蛋白含量的方法。
它通过测量吸光度的变化，间接地推算出样品中的总蛋白含量。
双缩脲法具有简单、快速、经济的特点，广泛应用于临床医学和科学研究领域。
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告
一、实验目的1. 掌握双缩脲法测定血清总蛋白的基本原理和操作步骤；2. 了解双缩脲试剂的配制方法和使用注意事项；3. 熟悉血清总蛋白的临床意义；4. 通过实验，提高实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理双缩脲法是一种测定蛋白质含量的方法，其原理是：在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与铜离子（Cu2+）发生反应，形成紫红色络合物。
该络合物在特定波长（如540nm）下的吸光度与蛋白质含量呈线性关系。
通过测定吸光度，可以计算出样品中蛋白质的含量。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：牛血清、生理盐水、双缩脲试剂、蛋白质标准液、试管、加样枪、刻度吸管、洗耳球、水浴锅、分光光度计。
2. 实验试剂：（1）双缩脲试剂：硫酸铜、酒石酸钾钠、碘化钾；（2）蛋白质标准液：70g/L；（3）生理盐水：0.9%。
四、实验步骤1. 准备工作：将牛血清、生理盐水、双缩脲试剂、蛋白质标准液等实验材料准备好，并检查仪器设备是否正常。
2. 标准曲线的制作：（1）取6支试管，分别编号为1-6号；（2）向1-5号试管中加入不同浓度的蛋白质标准液，6号试管为空白对照；（3）向每支试管中加入适量的双缩脲试剂；（4）将试管放入水浴锅中，室温放置30分钟；（5）用分光光度计测定540nm处的吸光度，记录数据；（6）以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品测定：（1）取3支试管，分别编号为A、B、C；（2）向A、B、C号试管中加入适量的牛血清；（3）向A、B号试管中加入适量的双缩脲试剂，C号试管为空白对照；（4）将试管放入水浴锅中，室温放置30分钟；（5）用分光光度计测定540nm处的吸光度，记录数据；（6）根据标准曲线，计算A、B号试管中蛋白质的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作：根据实验数据，绘制标准曲线，横坐标为蛋白质浓度（g/L），纵坐标为吸光度。
曲线线性良好，相关系数R2=0.99。
2. 样品测定：根据标准曲线，计算A、B号试管中蛋白质的含量，结果如下：A号试管：蛋白质含量为70g/L；B号试管：蛋白质含量为68g/L。
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告双缩脲法测定血清总蛋白实验报告引言：血清总蛋白是血液中的一种重要指标，它反映了人体内蛋白质的总量和分布情况。
测定血清总蛋白可以帮助医生判断患者的营养状况、肝功能以及某些疾病的发展情况。
本实验采用了双缩脲法，通过与标准物质的比色反应，定量测定了血清总蛋白的含量。
实验方法：1. 实验仪器与试剂准备本实验所需仪器有分光光度计、移液器、比色皿等。
所需试剂有双缩脲试剂、标准物质（如牛血清白蛋白）以及待测血清样品。
2. 样品预处理将待测血清样品离心，取上清液，并用移液器将上清液吸取到比色皿中。
3. 加入双缩脲试剂用移液器向比色皿中加入适量的双缩脲试剂，并轻轻搅拌均匀，使样品与试剂充分反应。
4. 与标准物质比色将标准物质分别加入不同的比色皿中，每个比色皿中加入相同体积的双缩脲试剂，与待测血清样品同时进行比色。
5. 分光光度计测定将比色皿放入分光光度计中，设定波长为标准波长，记录吸光度值。
6. 绘制标准曲线将吸光度值与标准物质的浓度进行对照，绘制标准曲线。
7. 计算待测血清样品的总蛋白含量根据待测血清样品的吸光度值，在标准曲线上找到对应的浓度，即可计算出待测血清样品的总蛋白含量。
结果与讨论：在本次实验中，我们测得待测血清样品的吸光度值为0.6。
根据标准曲线，我们可以得知该吸光度值对应的总蛋白浓度为30 g/L。
通过与标准物质的比色反应，我们成功地测定了待测血清样品的总蛋白含量。
总蛋白是人体内重要的营养物质，对于维持正常的生理功能至关重要。
通过测定血清总蛋白的含量，我们可以了解患者的营养状况。
如果总蛋白含量过低，可能意味着患者存在蛋白质摄入不足或吸收不良的问题。
而过高的总蛋白含量可能与肝功能异常、肾脏疾病等有关。
然而，需要注意的是，双缩脲法只能测定血清总蛋白的含量，并不能提供蛋白质的具体组成信息。
在实际应用中，还需要结合其他指标和临床病史来综合判断患者的健康状况。
结论：通过双缩脲法测定血清总蛋白的含量，我们可以快速、准确地了解患者的营养状况和某些疾病的发展情况。
血清总蛋白液体(TP)双缩脲法测定
血清总蛋白液体(TP)双缩脲法测定1.实验原理双缩脲比色终点法。
在碱性条件下，蛋白与铜离子生成紫蓝色复合物。
显色强度和蛋白浓度成正比。
OH—蛋白质+ Cu2+ -------------﹥紫红色复合物2. 标本采集2.1 病人准备：无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
2.2 类型：血清或血浆。
3. 标本存放20～25℃保存可稳定6天；4～8℃保存可稳定4周；-20℃保存至少可稳定1年。
4. 标本运输室温条件下运输5. 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。
6. 实验材料:6.1 奥林巴斯总蛋白测定试剂盒试剂1＋试剂26.1.1试剂准备：试剂为即用式。
6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂有效期为24个月。
试剂不可冰冻。
开盖后应避免污染。
6.1.3 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
6.1.4 注意事项：试剂中含有氢氧化钠，不可入口！如与皮肤及粘膜接触，请立即用大量水冲洗。
使用试剂时应采取必要的防护。
6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
11. 计算方法：以TruCal U复合校准品总蛋白校准值或标准品标准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以g/L报告。
实验二 血清总蛋白测定双缩脲法
实验二血清总蛋白测定（双缩脲法）血清总蛋白是血清中所有蛋白质的总称，正常人含量为60-80g/L。
按不同的分离方法可将血清蛋白质分为不同的组分。
从目前临床生化实际应用上，血清总蛋白分为清蛋白和球蛋白两大类，其中球蛋白又分为α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白四种。
正常成人每天所合成的血清蛋白质中，清蛋白及大部分α1、α2、β球蛋白是肝脏合成的，γ球蛋白（大部分是免疫球蛋白）则主要来源与浆细胞。
总蛋白测定，一般利用下列四种蛋白质的结构或性质进行：重复的肽键结构；酪氨酸和色氨酸残基对酚试剂反应或紫外吸收；与染料的结合能力；沉淀后借浊度或光折射测定。
目前临床应用最广泛的方法是利用蛋白质分子中的多个肽键与双缩脲试剂显色法。
【目的】1. 熟悉血清总蛋白测定的原理及基本操作。
2. 掌握血清总蛋白测定的临床意义。
【原理】蛋白质分子中的肽键（-CONH-）在碱性条件下能与Cu2+ 作用形成紫红色络合物。
此呈色反应与双缩脲（H2N-OC-NH-CO-NH2）在碱性溶液中与Cu2+ 作用产生紫红色的反应相似，故称为双缩脲反应。
反应中溶液颜色的深浅与蛋白质的含量成正比，可用分光光度法定量检测蛋白质的含量。
凡具有两个以上肽键结构的化合物均有此反应，因此双缩脲反应广泛用于肽及蛋白质定性、定量检测。
【器材】恒温水浴箱、分光光度计、刻度吸管、微量移液管、试管、试管架。
【试剂】1．6mol／L NaOH溶液?称取NaOH（优级纯）240g，溶解于新鲜蒸馏水中并加至1000ml。
置聚乙烯瓶内盖紧室温保存。
2. 双缩脲试剂?精确称取结晶硫酸铜(CuSO4·5H20)3.0g，酒石酸钾(NaKC4H4O6·4H2O) 9.0g，碘化钾(KI)5.0g，用500m1新鲜蒸馏水溶解。
在搅拌下，加入6mol／L氢氧化钠溶液100ml，最后加蒸馏水稀释至1000ml。
置聚乙烯瓶内盖紧室温保存。
3．70g/L蛋白标准液?可用商品血清蛋白标准液，也可收集混合新鲜血清用微量凯氏定氮法测定蛋白质含量，加叠氮钠防腐，冰冻保存。
双缩脲法测定血清总蛋白的方法学评价
双缩脲法测定血清总蛋白的方法学评价摘要：目的评价双缩脲法测定血清总蛋白的方法性能。
方法配制双缩脲试剂，并用所配双缩脲试剂和标准血清蛋白进行批内重复性试验、回收试验、线性范围测定。
结果双缩脲法测定血清总蛋白的批内重复性试验的变异系数CV%为6.42，回收试验平均回收率为109.3%，线性范围测定的R²为0.9877。
结论双缩脲法测定血清总蛋白的性能不高，本人测得的批内重复性试验的变异系数CV%偏大，回收率偏高，线性范围一般，或许这是个人操作因数，因为还有其他同学的结果比较好的。
关键词：双缩脲法；血清总蛋白；方法学评价双缩脲法测定血清总蛋白至今已经有近100年的历史，其间该方法也得到不断改进，是目前测定血清总蛋白的常用方法之一。
《全国临床检验操作规程》推荐Doumas双缩脲配方作为血清总蛋白测定的常规方法[1]。
方法学评价对于医学检验专业学生日后在工作中评价检验方法非常重要，对培养学生逻辑思维和实验室质量控制具有重要作用。
本文介绍双缩脲法测定血清总蛋白的方法学评价，对学生练习和掌握方法学评价有重要意义。
双缩脲试剂鉴定蛋白质的原理：双缩脲（NH2CONHCONH2）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。
在强碱性溶液中，双缩脲与二价铜离子形成紫色络合物，称为双缩脲反应。
凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。
蛋白质分子中含有许多和双缩脲结构相似的肽键，因此，也能在碱性环境中与二价铜离子结合生成紫红色络合物。
此反应不需要加热，被用来定性鉴定蛋白质。
但请注意：凡含有2个以上肽键的物质或含有1个肽键和1个一CS—NH2、一CH2一NH2、一CH20H、一CHOHCH2NH2等基团的物质，以及乙二酰乙二胺都有此颜色反应。
因此，一切蛋白质或二肽以上的多肽均有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽[2]。
紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。
临床生化检验：3-血清总蛋白测(双缩脲法)
优点
准确性好、精密度高、 灵敏度高。 特异性高、准确度好、 精密度高、操作简单方 便，显色稳定。
灵敏度高、达双缩脲法 的100倍。
快速简便、无损样品
灵敏、简便、快速，干 扰因素较少
简便、不需特殊仪器
缺点
适用范围
操作复杂，费时
用于标准蛋白质 的定值、对其他 方法校正等
灵敏度低
试剂与器材
双缩脲试剂盒 成分：硫酸酮、酒石酸钾钠、NaOH 、碘化钾
总蛋白质标准液（44.1g/L） 蒸馏水 混合血清 可见分光光度计 水浴锅
操作步骤
取3支试管，做好标记，按下表操作：
加入物（ml） 血清 蛋白标准液 蒸馏水 双缩脲试剂
B
S
U
-
-
0.06
-
0.06 -
0.06
-
-
3.0
血清总蛋白测定 (双缩脲法）
医学检验系临床生化检验教研室
实验目的
掌握双缩脲测定血清总蛋白的基本原理 熟悉血清总蛋白的临床意义；
总蛋白测定经典和常见的方法比较
方法
凯氏定氮法
双缩脲法
Lowry法 （Folin酚法 ）
紫外 分光光度法 考马斯亮蓝法 （Bradford）
化学比浊法
灵敏度
0.2~ 1.0mg氮 1～20mg 20～250ug
干扰物质多、操作 要求严格计时
为临床测定血清 总蛋白首选方法 。
适用于测定单一 蛋白质及测定蛋 白质含量较少的 标本如脑脊液
灵敏度低、干扰物 较多
常用于较纯的酶 和免疫球蛋白测 定
不同蛋白质与染料 常用于需求更高 结合力不一致，对 呈色灵敏度的蛋 比色杯有吸附作用 白电泳
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AU- ARB- AB 血清总蛋白（g/L）= ———— ×C标 AS-ARB •参考范围： 正常人：60~80g/L
五、方法学评价
• 目前常用的测定血清总蛋白的方法有如下 五种经典方法： 双缩脲法（Biuret法）：1~2mg
定氮法：灵敏度0.2~1.0mg
Folin－酚试剂法（Lowry法）：50~100μg 紫外吸收法：5μg 考马斯亮蓝法（Bradford法）：1~5μg
六、临床意义
• 血清总蛋白升高
1、蛋白合成增加：多见于多发性骨髓瘤
患者，主要是因为异常球蛋白增加
2、血浆浓缩：急性脱水、呕吐、腹泻等。
七、注意事项
• 双缩脲反应并非是蛋白质特有的颜色反应！ 凡分子内含有2个或2个以上肽健（—CO — NH — ）的化合物均可呈双缩脲反应。 • 双缩脲法显色反应和蛋白质中肽健数成正比 关系，与蛋白质的种类、分子量及氨基酸的
组成无明显关系。
七、注意事项
• 黄疸血清、严重溶血、葡萄糖、酚酞等对
本法有明显干扰，故用标本空白管来消除；
因双缩脲试剂中含有CuSO4具有颜色，故用
试剂空白管消除干扰。
七、注意事项
• 高脂血症混浊血清会干扰比色，可采用下
列方法消除：取2支离心管，各家待测血清
0.1ml，再加蒸馏水0.5ml和丙酮10ml，混
双缩脲法测定血清总蛋白
临床生化实验室
一、实验目的
• 掌握双缩脲法测定血清总蛋白的原理及操作。
• 了解血清总蛋白测定的临床意义。
二、实验原理
• 尿素被加热，则两分子的尿素放出一分子 氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性环境中， 能与硫酸铜结合成紫红色的化合物，此反 应称为双缩脲反应。
二、实验原理
蛋白质分子中含有肽键（—CO — NH — ） 与双缩脲结构相似，故也能进行此反应。双缩 脲反应可作为蛋白质定量测定的依据。
蛋白质标 —— 准液 5.0 蒸馏水
—— 5.0
——
0.1 ——
5.0
—— ——
5.0
—— ——
5.0
双缩脲空 —— 白试剂 双缩脲试 —— 剂
三、实验操作
• 混匀，置25 ℃水浴放置30min或37℃水浴
放置10min，以空白管调零，在540nm波长
处进行比色，分别读取各管的吸光度值。
四、结计算
五、方法学评价
双缩脲法优缺点： • 优点 操作简单，使用方便，作为临床测定血清
总蛋白的首选常规方法且重复性好。
• 缺点
灵敏度较低，比酚试剂法低100倍左右。
六、临床意义
• 血清总蛋白降低 1、蛋白合成障碍：肝功能严重受损 2、蛋白质丢失增多：严重烧伤，大量血浆渗出； 大出血；肾病综合症等 3、营养不良或消耗增加：如低蛋白饮食；慢性 消耗性疾病：结核病、恶性肿瘤等 4、血浆稀释：静脉注射过多低渗溶液或各种原 因引起的水钠潴留。
匀后离心。
• 因血清取量少，取量尽量准确。
• 碱液对玻璃仪器有腐蚀作用，尽量用塑料 瓶装。
二、实验原理
• 紫红色络合物在波长为540nm处的吸光度
与溶液中蛋白质的含量在一定范围内成正
比关系，经与同样处理的蛋白质标准液比
较，即可求得溶液中蛋白质的含量。 A测 • C测 = —— × C标 A标
三、实验操作
加入物 （ml） 血清 调零 管 —— 标本空 试剂空 标准管 测定管 白管(B) 白管(RB) (S) (U) 0.1 —— —— 0.1 —— —— 0.1 ——