双缩脲法测定血清总蛋白

组成无明显关系。
七、注意事项
• 黄疸血清、严重溶血、葡萄糖、酚酞等对
本法有明显干扰，故用标本空白管来消除；
因双缩脲试剂中含有CuSO4具有颜色，故用
试剂空白管消除干扰。
七、注意事项
• 高脂血症混浊血清会干扰比色，可采用下
列方法消除：取2支离心管，各家待测血清
0.1ml，再加蒸馏水0.5ml和丙酮10ml，混
• 计算公式：
AU- ARB- AB 血清总蛋白（g/L）= ———— ×C标 AS-ARB •参考范围： 正常人：Байду номын сангаас0~80g/L
五、方法学评价
• 目前常用的测定血清总蛋白的方法有如下 五种经典方法： 双缩脲法（Biuret法）：1~2mg
定氮法：灵敏度0.2~1.0mg
Folin－酚试剂法（Lowry法）：50~100μg 紫外吸收法：5μg 考马斯亮蓝法（Bradford法）：1~5μg
二、实验原理
• 紫红色络合物在波长为540nm处的吸光度
与溶液中蛋白质的含量在一定范围内成正
比关系，经与同样处理的蛋白质标准液比
较，即可求得溶液中蛋白质的含量。 A测 • C测 = —— × C标 A标
三、实验操作
加入物 （ml） 血清 调零 管 —— 标本空 试剂空 标准管 测定管 白管(B) 白管(RB) (S) (U) 0.1 —— —— 0.1 —— —— 0.1 ——
双缩脲法测定血清总蛋白
临床生化实验室
一、实验目的
• 掌握双缩脲法测定血清总蛋白的原理及操作。
• 了解血清总蛋白测定的临床意义。
二、实验原理
• 尿素被加热，则两分子的尿素放出一分子 氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性环境中， 能与硫酸铜结合成紫红色的化合物，此反 应称为双缩脲反应。
二、实验原理
蛋白质分子中含有肽键（—CO — NH — ） 与双缩脲结构相似，故也能进行此反应。双缩 脲反应可作为蛋白质定量测定的依据。
匀后离心。
• 因血清取量少，取量尽量准确。
• 碱液对玻璃仪器有腐蚀作用，尽量用塑料 瓶装。
五、方法学评价
双缩脲法优缺点： • 优点 操作简单，使用方便，作为临床测定血清
总蛋白的首选常规方法且重复性好。
• 缺点
灵敏度较低，比酚试剂法低100倍左右。
六、临床意义
• 血清总蛋白降低 1、蛋白合成障碍：肝功能严重受损 2、蛋白质丢失增多：严重烧伤，大量血浆渗出； 大出血；肾病综合症等 3、营养不良或消耗增加：如低蛋白饮食；慢性 消耗性疾病：结核病、恶性肿瘤等 4、血浆稀释：静脉注射过多低渗溶液或各种原 因引起的水钠潴留。
六、临床意义
• 血清总蛋白升高
1、蛋白合成增加：多见于多发性骨髓瘤
患者，主要是因为异常球蛋白增加
2、血浆浓缩：急性脱水、呕吐、腹泻等。
七、注意事项
• 双缩脲反应并非是蛋白质特有的颜色反应！ 凡分子内含有2个或2个以上肽健（—CO — NH — ）的化合物均可呈双缩脲反应。 • 双缩脲法显色反应和蛋白质中肽健数成正比 关系，与蛋白质的种类、分子量及氨基酸的
蛋白质标 —— 准液 5.0 蒸馏水
—— 5.0
——
0.1 ——
5.0
—— ——
5.0
—— ——
5.0
双缩脲空 —— 白试剂 双缩脲试 —— 剂
三、实验操作
• 混匀，置25 ℃水浴放置30min或37℃水浴
放置10min，以空白管调零，在540nm波长
处进行比色，分别读取各管的吸光度值。
四、结果计算