实验六 稀释平板计数法
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实验六 实验六 稀释平板计数及霉菌 稀释平板计数及霉菌、酵母菌的分离 与鉴定
一、目的要求
学习了解稀释平板计数法的作用、原理和方法，并结合测定酱 学习了解稀释平板计数法的作用、原理和方法，并结合测定酱 油中微生物总数和葡萄、面包中霉菌的分离计数 的分离计数。 油中微生物总数和葡萄、面包中霉菌的分离计数。强调微生物的无菌 操作技术及无菌室的无菌的检测方法。 操作技术及无菌室的无菌的检测方法。
1mL
-4
-5
-6Fra Baidu bibliotek
-1 225mL无 无 菌生理盐水 25g/mL 样品
每管9mL无 每管 无 菌生理盐水 -4 每皿20mL 每皿 -4
0.1mL
0.1mL
0.1mL
-5
-6
-5
-6
琼脂培养基 -4
-5
-6
涂抹平板计数法
28℃培养3d 观察 ℃培养 结果
无菌室和实验室空气污染情况的检验
将牛肉膏琼脂和马铃薯蔗糖琼脂倒平板,冷却待用 每人每种一个 将牛肉膏琼脂和马铃薯蔗糖琼脂倒平板 冷却待用(每人每种一个 。 冷却待用 每人每种一个)。
四、操作方法
选择适当的稀释度） 1. 样本稀释液的制备 （选择适当的稀释度） 2. 平板接种培养 酱油中细菌总数， （1）平板混合培养法（测定酱油中细菌总数，稀释度采 ）平板混合培养法（测定酱油中细菌总数 用10-1、 10-2、 10-3 ）； 葡萄、 菌数， （2）平板涂抹计数法（分离或计算葡萄、面包中霉菌数， ）平板涂抹计数法（分离或计算葡萄 面包中霉菌数 稀释度采用10 稀释度采用 -1、 10-2、 10-3）。 3. 结果计算 （1） 每毫升中菌落形成单位（cfu）=同一稀释度 3 次重复的平均菌 ） 每毫升中菌落形成单位（ ） 同一稀释度
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-1 225mL无 无 菌生理盐水 25g/mL 样品
每管9mL无 每管 无 菌生理盐水 -4 每皿15mL 每皿 -4
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琼脂培养基
-4
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混合平板培养法
37℃培养48h观 ℃培养 观 察结果
1mL 1mL -2 -3
1mL
1mL
无菌室内进行空气中杂菌的检验，可在使用前或使用后进行， 无菌室内进行空气中杂菌的检验，可在使用前或使用后进行，方法 取牛肉膏琼脂和马铃薯蔗糖琼脂两种培养基的斜面和平板各3个 是：取牛肉膏琼脂和马铃薯蔗糖琼脂两种培养基的斜面和平板各 个， 于无菌室使用前(或使用后 ，在无菌室内揭开皿盖放置台面上，半小 于无菌室使用前 或使用后)，在无菌室内揭开皿盖放置台面上， 或使用后 时后重新盖上，另一皿不打开作对照。两者同时放30℃下培养， 时后重新盖上，另一皿不打开作对照。两者同时放 ℃下培养，48h 后检验平皿培养基表面有无菌生长及菌落数量， 后检验平皿培养基表面有无菌生长及菌落数量，根据检验结果采取措 施。 种培养基的各12个平板分别置于被测环境的室内和室外或其它需 将2种培养基的各 个平板分别置于被测环境的室内和室外或其它需 种培养基的各 监测的的地方，打开皿盖各暴露于空气5min和10min。加皿盖，倒 监测的的地方，打开皿盖各暴露于空气 和 。加皿盖， 置于28℃ 置于 ℃、37℃培养， 细菌 ，霉菌 ℃培养， 细菌2d，霉菌3-4d，放线菌 ，放线菌5-7d，计数。观 ，计数。 察菌落形态和颜色。 察菌落形态和颜色。
落数X稀释倍数 落数 稀释倍数 （2） 每毫升中菌落形成单位（cfu）=同一稀释度 3 次重复的平均菌落 ） 每毫升中菌落形成单位（ ） 同一稀释度 数X稀释倍数 X10 稀释倍数
4. 无菌操作技术及无菌室的无菌的检测和空气中微生物 每种培养基每人一皿） 的检测 （每种培养基每人一皿）
1mL 1mL -2 -3
二、基本原理
单个微生物细胞于适宜的条件下能在固体培养基上形成一个肉 眼可见的子细胞群体即菌落，一般来说， 眼可见的子细胞群体即菌落，一般来说，一个独立的菌落是由一个单 细胞微生物繁殖而成。该实验就是根据这一生理特性而设计的。 细胞微生物繁殖而成。该实验就是根据这一生理特性而设计的。
三、器具材料（见教材P62） 器具材料（见教材 ）
一、目的要求
学习了解稀释平板计数法的作用、原理和方法，并结合测定酱 学习了解稀释平板计数法的作用、原理和方法，并结合测定酱 油中微生物总数和葡萄、面包中霉菌的分离计数 的分离计数。 油中微生物总数和葡萄、面包中霉菌的分离计数。强调微生物的无菌 操作技术及无菌室的无菌的检测方法。 操作技术及无菌室的无菌的检测方法。
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-1 225mL无 无 菌生理盐水 25g/mL 样品
每管9mL无 每管 无 菌生理盐水 -4 每皿20mL 每皿 -4
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琼脂培养基 -4
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涂抹平板计数法
28℃培养3d 观察 ℃培养 结果
无菌室和实验室空气污染情况的检验
将牛肉膏琼脂和马铃薯蔗糖琼脂倒平板,冷却待用 每人每种一个 将牛肉膏琼脂和马铃薯蔗糖琼脂倒平板 冷却待用(每人每种一个 。 冷却待用 每人每种一个)。
四、操作方法
选择适当的稀释度） 1. 样本稀释液的制备 （选择适当的稀释度） 2. 平板接种培养 酱油中细菌总数， （1）平板混合培养法（测定酱油中细菌总数，稀释度采 ）平板混合培养法（测定酱油中细菌总数 用10-1、 10-2、 10-3 ）； 葡萄、 菌数， （2）平板涂抹计数法（分离或计算葡萄、面包中霉菌数， ）平板涂抹计数法（分离或计算葡萄 面包中霉菌数 稀释度采用10 稀释度采用 -1、 10-2、 10-3）。 3. 结果计算 （1） 每毫升中菌落形成单位（cfu）=同一稀释度 3 次重复的平均菌 ） 每毫升中菌落形成单位（ ） 同一稀释度
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-1 225mL无 无 菌生理盐水 25g/mL 样品
每管9mL无 每管 无 菌生理盐水 -4 每皿15mL 每皿 -4
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琼脂培养基
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混合平板培养法
37℃培养48h观 ℃培养 观 察结果
1mL 1mL -2 -3
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无菌室内进行空气中杂菌的检验，可在使用前或使用后进行， 无菌室内进行空气中杂菌的检验，可在使用前或使用后进行，方法 取牛肉膏琼脂和马铃薯蔗糖琼脂两种培养基的斜面和平板各3个 是：取牛肉膏琼脂和马铃薯蔗糖琼脂两种培养基的斜面和平板各 个， 于无菌室使用前(或使用后 ，在无菌室内揭开皿盖放置台面上，半小 于无菌室使用前 或使用后)，在无菌室内揭开皿盖放置台面上， 或使用后 时后重新盖上，另一皿不打开作对照。两者同时放30℃下培养， 时后重新盖上，另一皿不打开作对照。两者同时放 ℃下培养，48h 后检验平皿培养基表面有无菌生长及菌落数量， 后检验平皿培养基表面有无菌生长及菌落数量，根据检验结果采取措 施。 种培养基的各12个平板分别置于被测环境的室内和室外或其它需 将2种培养基的各 个平板分别置于被测环境的室内和室外或其它需 种培养基的各 监测的的地方，打开皿盖各暴露于空气5min和10min。加皿盖，倒 监测的的地方，打开皿盖各暴露于空气 和 。加皿盖， 置于28℃ 置于 ℃、37℃培养， 细菌 ，霉菌 ℃培养， 细菌2d，霉菌3-4d，放线菌 ，放线菌5-7d，计数。观 ，计数。 察菌落形态和颜色。 察菌落形态和颜色。
落数X稀释倍数 落数 稀释倍数 （2） 每毫升中菌落形成单位（cfu）=同一稀释度 3 次重复的平均菌落 ） 每毫升中菌落形成单位（ ） 同一稀释度 数X稀释倍数 X10 稀释倍数
4. 无菌操作技术及无菌室的无菌的检测和空气中微生物 每种培养基每人一皿） 的检测 （每种培养基每人一皿）
1mL 1mL -2 -3
二、基本原理
单个微生物细胞于适宜的条件下能在固体培养基上形成一个肉 眼可见的子细胞群体即菌落，一般来说， 眼可见的子细胞群体即菌落，一般来说，一个独立的菌落是由一个单 细胞微生物繁殖而成。该实验就是根据这一生理特性而设计的。 细胞微生物繁殖而成。该实验就是根据这一生理特性而设计的。
三、器具材料（见教材P62） 器具材料（见教材 ）