实验十一 稀释平板测数法
稀释涂布平板法计数公式
本文格式为Word 版，下载可任意编辑第 1 页 共 1 页稀释涂布平板法计数公式“微生物数量测量”是2017年高考大纲中的新内容，也是教学中的重要难点。
稀释涂板法是计数微生物的常用方法，用于计数样品中活菌的数量。
当样品的稀释度足够高时，在培养基表面上生长的菌落来自样品稀释液中的活细菌。
通过计算平板上的菌落数，我们可以猜测样品中有多少种活细菌。
但是，菌落计数结果的处理常常成为学生容易出错的地方。
典型示例：在从土壤中分离产生脲酶的细菌的实验中，将10g 土壤样品溶液进行梯度稀释，并将0.1mL 稀释倍数为105的土壤样品溶液接种在三个中板上。
培养一段时间后，平板上的细菌菌落数分别为42、200和256。
1g 土壤样品中的细菌数为。
在PEP 高中生物学选修课“生物技术实践”中，有这样一条陈述：用稀释包被板法计数菌落：为了确保结果的准确性，菌落数在30到30之间通常选择300和300进行计数。
但是，如果我们理所当然地认为42、200和256个数据都在30?300范围内，那么直接对它们求平均并乘以稀释倍数就可以得出错误的结果1.66×108。
这也是许多学生犯错误的原因。
实际上，教材中的相关表述仅说明了可计数菌落数的适当范围。
在一定稀释度下，三个平板中的菌落数不能简单地直接平均，应注意稀释度的设定和计数结果的允许差异。
为了确保准确确定有效活菌计数，必须设置三个稀释度并进行分级，并且每个梯度应设置三个重复。
为了确定土壤中细菌的数量，通常使用104、105和106倍的稀释剂进行平板培养。
为了确定放线菌的数量，通常使用103、104和105倍的稀释度。
为了确定真菌的数量，通常使用102、103和104倍的稀释度。
如果平板中的菌落数太少，必然会导致计数误差太大；相反，如果培养皿中的菌落太多，将导致计数困难。
因此，世界上菌落计数的基本原理是对稀释的平板进行计数，其中平板上有30?300个菌落。
同时，相同稀释度重复3次的平板上菌落数的标准差应小于允许的差。
平板计数法
稀释平板计数法实验目的学习稀释平板菌落计数的基本原理和方法。
实验内容用稀释平板菌落计数法对菌悬液进行计数。
实验原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2—3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水〔包括水源水〕等的含菌指数或污染程度的检测。
实验器材酿酒酵母菌悬液马铃薯培养基1m1吸管，平皿，试管，试管架，恒温培养箱等。
实验步骤1．无菌器材的准备(1) 无菌培养皿：取培养皿9套，包扎、灭菌。
(2) 无菌移液管的准备：取1m1移液管，在后部管口处用铁丝塞入棉花少许（长约1~1.5cm ），以防将菌液吸出，同时也可避免将外面的微生物吹入。
棉花要塞得松紧适宜吹时能通气但不使棉花滑下为准。
然后将移液管尖端放在4~5cm宽的长纸条一端呈45o角折叠纸条包住尖端，用左手捏住管身，右手将吸管压紧，在桌面上向前滚动，以螺旋式包扎起来，上端剩余纸条折叠打结后干热灭菌。
(3) 无菌水：取6支试管，分别装入4.5m1蒸馏水，加棉塞，灭菌。
2．样品稀释液的制备(1) 编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6(稀释度)各3套。
另取6支盛有4.5m1无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
稀释涂布平板法的计数公式
稀释涂布平板法的计数公式嘿，咱们来聊聊这个“稀释涂布平板法的计数公式”。
先来说说我曾经遇到的一件小事儿。
那时候我带着一群学生在实验室里做微生物实验，其中就有用到稀释涂布平板法。
有个学生，叫小李，特别积极，每次都冲在前面。
可这一次，他对着实验结果那是一脸懵，怎么都搞不明白计数公式。
我就站在他旁边，看着他那着急的样子，心里觉得又可爱又好笑。
那到底啥是稀释涂布平板法的计数公式呢？简单来说，就是用来估算样品中微生物数量的一个办法。
这个公式啊，通常是这样的：每克样品中的菌落数=（C÷V）×M 。
这里的 C 呢，指的是某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；V 代表涂布平板时所用稀释液的体积（mL）；M 则是稀释倍数。
比如说，咱们在某个稀释度下，平板上平均长了 50 个菌落，而涂布时用的稀释液体积是 0.1 mL，稀释倍数是 1000 倍，那每克样品中的菌落数就是（50÷0.1）×1000 = 5×10^5 个。
这公式看着好像挺简单，可实际用起来，麻烦事儿可不少。
就像刚才说的小李同学，他在计算的时候，一会儿把稀释液体积弄错了，一会儿又把稀释倍数搞混了。
这就好比走路迷路了，方向都没搞对，怎么能到达目的地呢？而且啊，在使用这个公式的时候，还有一些要特别注意的地方。
比如说，选择菌落数在 30 - 300 之间的平板进行计数才比较准确。
为啥呢？要是菌落数太少，可能是偶然因素导致的，不准确；要是太多，菌落都挤在一起，也没法准确计数。
再比如，在涂布的时候，一定要涂得均匀。
要是涂得厚薄不一，那长出来的菌落也不均匀，计数就会有偏差。
这就好像画画，颜色涂得不均匀，这画能好看吗？还有哦，不同的微生物生长速度不一样，有些长得快，有些长得慢。
所以在计数的时候，要考虑到微生物的生长特性，不然也会出错。
回到咱们的实验中，小李同学在我的指导下，终于搞清楚了这个计数公式，成功算出了样品中的微生物数量。
稀释涂布平板法计数公式
“微生物数量测量”是2017年高考大纲中的新内容，也是教学中的重要难点。
稀释涂板法是计数微生物的常用方法，用于计数样品中活菌的数量。
当样品的稀释度足够高时，在培养基表面上生长的菌落来自样品稀释液中的活细菌。
通过计算平板上的菌落数，我们可以猜测样品中有多少种活细菌。
但是，菌落计数结果的处理常常成为学生容易出错的地方。
典型示例：在从土壤中分离产生脲酶的细菌的实验中，将10g土壤样品溶液进行梯度稀释，并将0.1mL稀释倍数为105的土壤样品溶液接种在三个中板上。
培养一段时间后，平板上的细菌菌落数分别为42、200和256。
1g土壤样品中的细菌数为。
在PEP高中生物学选修课“生物技术实践”中，有这样一条陈述：用稀释包被板法计数菌落：为了确保结果的准确性，菌落数在30到30之间通常选择300和300进行计数。
但是，如果我们理所当然地认为42、200和256个数据都在30〜300范围内，那么直接对它们求平均并乘以稀释倍数就可以得出错误的结果1.66×108。
这也是许多学生犯错误的原因。
实际上，教材中的相关表述仅说明了可计数菌落数的适当范围。
在一定稀释度下，三个平板中的菌落数不能简单地直接平均，应注意稀释度的设定和计数结果的允许差异。
为了确保准确确定有效活菌计数，必须设置三个稀释度并进行分级，并且每个梯度应设置三个重复。
为了确定土壤中细菌的数量，通常使用104、105和106倍的稀释剂进行平板培养。
为了确定放线菌的数量，通常使用103、104和105倍的稀释度。
为了确定真菌的数量，通常使用102、103和104倍的稀释度。
如果平板中的菌落数太少，必然会导致计数误差太大；相反，如果培养皿中的菌落太多，将导致计数困难。
因此，世界上菌落计数的基本原理是对稀释的平板进行计数，其中平板上有30〜300个菌落。
同时，相同稀释度重复3次的平板上菌落数的标准差应小于允许的差。
也就是说，在平板计数试验中，如果在相同稀释度下三个重复菌落的数量在30〜300之间，但是数据相差很大，则需要将其丢弃。
稀释培养和稀释平板测数法
稀释培养和稀释平板测数法稀释培养测数法一、实验目的通过对好气性自生固氮菌的计数，了解稀释培养计数（MPN）的原理和方法。
二、实验原理最大或然数(most probable number，MPN)计数又称稀释培养计数，适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优势，但却具有特殊生理功能的类群。
其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度。
本法特别适合于测定土壤微生物中的特定生理群（如氨化、硝化、纤维素分解、固氮、硫化和反硫化细菌等。
见附表23-1）的数量和检测污水、牛奶及其他食品中特殊微生物类群（如大肠菌群）的数量，缺点是只适于进行特殊生理类群的测定，结果也较粗放，只有在因某种原因不能使用平板计数时才采用。
MPN计数是将待测样品作一系列稀释，一直稀释到将少量（如lm1）的稀释液接种到新鲜培养基中没有或极少出现生长繁殖。
根据没有生长的最低稀释度与出现生长的最高稀释度，采用“最大或然数”理论，可以计算出样品单位体积中细菌数的近似值。
具体地说，菌液经多次10倍稀释后，一定量菌液中细菌可以极少或无菌，然后每个稀释度取3—5次重复接种于适宜的液体培养基中。
培养后，将有菌液生长的最后3个稀释度（即临界级数）中出现细菌生长的管数作为数量指标，由最大或然数表（见附录九）上查出近似值，再乘以数量指标第一位数的稀释倍数，即为原菌液中的含菌数。
如某一细菌在稀释法中的生长情况如下；稀释度 lO-3 10-4 10-5 lO-6 10-7 10-8重复数 5 5 5 5 5 5出现生长的管数 5 5 5 4 1 0根据以上结果，在接种lO-3—10-5稀释液的试管中5个重复都有生长，在接种lO-6稀释液的试管中有4个重复生长，在接种10-7稀释液的试管中只有1个生长，而接种10-8稀释液的试管全无生长。
由此可得出其数量指标为“541”，查最大或然数表得近似值17，然后乘以第一位数的稀释倍数（10-5的稀释倍数为100 000）。
稀释涂布平板法计数公式
显微镜计数法即血球计数法，事先把菌液稀释到一定的倍数，然后通过血球计数板在显微镜下计数。
此法计数比较精准。
活菌计数法是将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.2ml放入无菌平皿，再倒入适量的已熔化并冷至45℃左右的培养基，与菌液混匀，冷却、待凝固后，放入适宜温度的培养箱或温室培养，长出菌落后，计数，按下面公式计算出原菌液的含菌数：每毫升原菌液活菌数=同一稀释度三个以上重复平皿菌落平均数×稀释倍数×5稀释涂布平板法是一种粗略的活菌计数法，即通过一定的稀释倍数，涂布到平板上，在适宜的条件下培养后，观察活菌数。
平板划线法是用来分离单菌落的一种方法，不是计数的方法。
如果只有一个稀释度的平均菌落数符合30~300这个范围
则以该稀释度平均菌落数除以涂布平板所用稀释液体积(0.1mL)，乘以稀释倍数作为该样品的细菌总数
如果有两个稀释度的平均菌落数符合要求
则按照两者菌落总数之比来决定
如果小于2，取两者的平均值
如果大于2，取较小的菌落总数
本题的46*10^3与295*10^2的比之为1.6
应取两者的平均值
（46*10^3+295*10^2)/0.1/2=3.775*10^5
相当于统计学里面的比较差异，
如果多比少大于2倍，则梯度浓度差异是10倍的情况下，其菌落是有很多重叠或者链接在一起的，这样就无法计算清楚是否为单菌落了，所以只有选择较小的菌落数。
来保证以上要求。
稀释平板计数法
实验原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2—3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水〔包括水源水〕等的含菌指数或污染程度的检测。
实验器材LB液体、固体培养基1m1移液器，平皿，试管，试管架，恒温培养箱等。
实验步骤1．无菌器材的准备(1) 无菌培养皿：取培养皿9套，包扎、灭菌。
(2) 无菌水：取6支试管，分别装入4.5m1蒸馏水，加棉塞，灭菌。
2．样品稀释液的制备(1) 编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6(稀释度)各3套。
另取6支盛有4.5m1无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
(2) 稀释用1m1移液器吸取0.5m1己充分混匀的菌悬液(待测样品)，至10-1的试管中，此即为10倍稀释。
将10-1试管置试管振荡器上振荡，使菌液充分混匀。
用1m1移液器在10-1试管中来回吹吸菌悬液三次，进一步将菌体分散、混匀。
吹吸菌液时不要太猛太快，吸时吸管伸入管底，吹时离开液面。
混匀后吸取至10-2试管中，此即为100倍稀释。
……其余依次类推，整个过程如图所示。
3．平板接种培养平板接种培养有浇注平板培养法和涂布平板培养法两种方法。
稀释平板计数法的原理和方法
稀释平板计数法的原理和方法
嘿，朋友们，今儿咱们来聊聊那个“稀释平板计数法”是咋个回事儿。
这个啊，咱们四川人儿叫“平板计数法”，陕西的朋友可能直接就说“计数法”，而北京的哥们儿估计会叫得更正式些。
但不管咋叫，这法儿都是用来计算微生物数量的。
咱们先从原理说起。
这个“稀释平板计数法”的原理啊，就像咱们四川人做泡菜一样，得掌握好比例和条件。
简单来说，就是把微生物样本进行一系列稀释，然后分别涂布在培养基平板上，让微生物在适宜的条件下生长。
长得好的那些菌落，咱们就能数出来，从而推算出原样本中微生物的数量。
再来说说方法。
首先呢，得准备好培养基平板，这就像是咱们陕西人准备面团一样，得精心调配。
然后，把微生物样本进行稀释，这一步很关键，得稀释到合适的程度，才能让微生物在平板上分散开，长成单个菌落。
接着，就是把稀释后的样本涂布在平板上了，这个得涂得均匀，不能厚此薄彼。
最后，就是放在培养箱里培养，等微生物长出来，咱们就能数菌落了。
这法儿虽然看起来简单，但实际操作起来还是有不少讲究的。
比如稀释的倍数、培养的条件、计数的方法等等，都得根据具体情况来调整。
就像咱们北京人说的，“做事儿得讲究个精细”，这“稀释平板计数法”也是这么回事儿。
总之啊，这个“稀释平板计数法”是个挺实用的方法，能帮咱们了解微生物的数量和分布情况。
不管是四川的、陕西的还是北京的，咱们都得好好掌握这个方法，才能更好地研究微生物、保护咱们的健康和环境。
实验十一 水中细菌总数和大肠菌群数的检测
3、结果计算
根据阳性管数查表得大肠菌群数。
五、思考题
1、记录每组样品中所测得的细菌总数和大肠菌群数。 2、典型的大肠杆菌群菌落特征是什么？
实验十一
水中细菌总数和大肠菌群 数的检测
一、实验目的
1、学习并掌握水体细菌学的检验 2、学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法
二、实验原理
1、细菌总数的测定：采用稀释平板法（混合平板法）
2、大肠菌群数的测定：采用多管发酵法（MPN法） 大肠菌群以大肠杆菌为主，能在37℃48h内发酵乳糖产酸、
产气。大肠菌群数可作为判断水源或食品污染的指标。
Байду номын сангаас（最好在30~300个之间）
（二）水中大肠菌群数的测定
1、初发酵实验
在3倍浓缩乳糖培养基中加入3个梯度样品各10ml（5个重
复），混匀37 ℃培养24h。
2、平板分离
不产酸不产气和不变浑浊 阴性
产酸产气或仅产酸
阳性
划线接种 于伊红美 兰平板， 37 ℃培养
24h
菌落为深紫黑色，具 金属光泽或紫黑色不 带金属光泽或淡紫红 色中心较深
最大概率数法：对未知样品进行十倍稀释，然后根据估算 取三个连续的稀释度平行接种多支试管，对这些平行试管 的微生物生长情况进行统计，长菌的为阳性，未长菌的为 阴性，然后根据数学统计计算出样品中的微生物数目。
三、实验材料
1、水样 2、培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、3倍浓缩乳糖蛋白胨培养
基（带指形管）、伊红美兰固体培养基
四、实验方法
（一）水中细菌总数的测定（混合平板法） 1、样品采集和稀释
自来水、纯净水、饮料作原样、 10-1 、10-2三个稀释度 污水作10-1 、10-2 、10-3三个稀释度 2、取3个稀释度样品各1ml于平皿中，再倒入50℃左右牛肉 膏蛋白胨培养基约15ml，轻轻转动混合均匀。凝固后37 ℃倒置培养。每个稀释度作3个重复。 细菌总数＝同一稀释度平板上菌落平均数×稀释倍数
稀释平板计数法
稀释平板计数法实验目得学习稀释平板菌落计数得基本原理与方法。
实验内容用稀释平板菌落计数法对菌悬液进行计数。
实验原理平板菌落计数法就是将待测样品经适当稀释之后，其中得微生物充分分散成单个细胞，取一定量得稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见得菌落，即一个单菌落应代表原样品中得一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数与取样接种量即可换算出样品中得含菌数。
但就是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成得一个单菌落也可能来自样品中得2—3或更多个细胞。
因此平板菌落计数得结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数得结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品得活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素得影响，但就是，由于该计数方法得最大优点就是可以获得活菌得信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料与水〔包括水源水〕等得含菌指数或污染程度得检测。
实验器材酿酒酵母菌悬液马铃薯培养基1m1吸管，平皿，试管，试管架，恒温培养箱等。
实验步骤1．无菌器材得准备(1) 无菌培养皿：取培养皿9套，包扎、灭菌。
(2) 无菌移液管得准备：取1m1移液管，在后部管口处用铁丝塞入棉花少许（长约1~1、5cm ），以防将菌液吸出，同时也可避免将外面得微生物吹入。
棉花要塞得松紧适宜吹时能通气但不使棉花滑下为准。
然后将移液管尖端放在4~5cm宽得长纸条一端呈45º角折叠纸条包住尖端，用左手捏住管身，右手将吸管压紧，在桌面上向前滚动，以螺旋式包扎起来，上端剩余纸条折叠打结后干热灭菌。
(3) 无菌水：取6支试管，分别装入4、5m1蒸馏水，加棉塞，灭菌。
2．样品稀释液得制备(1) 编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6(稀释度)各3套。
另取6支盛有4、5m1无菌水得试管，依次标就是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
稀释平板计数法要注意什么
稀释平板计数法要注意什么稀释平板计数法是化学实验中常用的一种计算方法，用于确定溶液中溶质的浓度。
在使用稀释平板计数法时需要注意以下几点：1. 定量稀释：稀释平板计数法是通过将溶液逐渐稀释来达到测定溶质浓度的目的。
因此，在进行计算之前，需要做好量取溶液和溶剂的准备工作，确保能够准确地配制出所需浓度的溶液。
2. 平板计数器的选择：平板计数器是稀释平板计数法中必不可少的工具。
在选择平板计数器时，需要考虑其精度、灵敏度、反应时间等因素。
只有选用合适的平板计数器，才能够准确地计数稀释液中的粒子。
3. 样品的准备：在进行稀释平板计数法时，需要将待测样品取适量加入溶剂中，形成一定的稀释倍数。
样品的准备过程中需要注意严格控制样品的量，确保溶液中粒子数量在一个适宜的范围内。
4. 校正因素的考虑：在使用稀释平板计数法时，还需要考虑一些校正因素。
例如，可能会存在某些粒子在稀释液中会聚、发生反应或沉淀等情况，从而影响最终的计数结果。
因此，在进行计算时，需要对这些校正因素进行修正，以得到准确的结果。
5. 数据分析：稀释平板计数法得到的结果一般为每个单位体积中的粒子数。
为了得到溶液中溶质的浓度，还需要对计数结果进行进一步的数据分析。
常见的数据分析方法包括绘制标准曲线、使用线性回归等。
6. 实验条件控制：在进行稀释平板计数法时，实验条件的控制也是十分重要的。
例如，在制备稀释液时，需要严格控制溶剂的纯度、质量以及溶液的pH值等。
此外，在使用平板计数器时，也需要注意环境的干净和稳定，以及合适的操作温度等。
7. 实验操作的重复性：为了得到准确可靠的结果，在使用稀释平板计数法时需要进行多次实验操作，并计算得出平均值和标准差。
通过多次实验的数据积累和平均处理，可以提高实验结果的可信度和可靠性。
总之，在使用稀释平板计数法时，需要严格控制实验条件，合理选择平板计数器，准确配制稀释液，并进行数据分析和实验操作的重复性验证。
只有在这些注意事项的指导下，才能够得到准确、可靠的结果，并为化学实验提供实际应用的参考价值。
稀释涂布平板法计数公式
稀释涂布平板法
操作过程：
稀释操作：
1、将分别盛有9ml水的6支试管灭菌,并按10^1到10^6的顺序进行编号
2、用移液试管吸取1ml培养的菌夜,注入10^1倍稀释的试管中.用手指轻压移夜管上的橡皮,
吹吸三次,使菌液与水充分混匀.
3、从10^1倍稀释的试管中吸取1ml稀释液,注入10^2倍稀释的试管中,重复第二步的混匀
操作.以此类推,直到完成最后一支试管的稀释.
涂布操作：
1、将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中.
2、取少量菌夜（不超过0.1ml）滴加到培养基表面.
3、将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃,待酒精燃尽后,冷却8~10s.
4、用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面,涂布时可转动培养皿,使菌液分布均匀.
计算公式：
菌体数量cfu/g（mL）土样=同一稀释度重复的菌落平均数×稀释倍数。
稀释涂布平板法计数公式
稀释涂布平板法计数公式
每克样品中的细菌数=（C△V）×M
C代表在一定稀释度下在平板上生长的菌落的平均数，V代表用于涂布平板的稀释剂的体积（ML），M代表稀释倍数。
很容易理解。
稀释包衣是为了使菌株生长到群落中。
培养的群落数量代表用于平板的稀释液中细菌的数量。
将稀释倍数乘以得到样品中细菌的数量涂布平板法
微生物实验中的一种操作方法。
因为将含有细菌的材料添加到仍然很热的培养基中，然后倒入培养皿中，很容易导致某些热敏感细菌死亡，并且稀释方法也会影响某些严格需氧细菌的生长，因为它们固定在琼脂中间并且缺氧，因此稀释涂板法在微生物学研究中更常用。
稀释板计数是根据微生物在固体培养基上形成的单个菌落的培养特性设计的计数方法，即一个菌落代表单个细胞。
计数时，首先将要测试的样品制成一系列均匀的稀释剂，并尝试使样品中的微生物细胞尽可能分散，以使单个细胞的存在（否则，菌落不仅代表将一定稀释度和一定量的稀释剂接种到板中，以使其均匀地分布在板中的培养基中。
培养后，通过单个细胞的生长和繁殖形成菌落。
样品中细菌的数量可以通过计算菌落的数量来计算。
通过这种方法计算出的细菌数就是在培养基上生长的菌落数，因此也称为存活数。
它通常用于检查某些成品（例如杀虫剂），生物产品，土壤细菌含量以及食品和水污染。
稀释涂布平板法计数原理
稀释涂布平板法计数原理
稀释涂布平板法是一种常用于微生物计数的方法，它的计数原理如下：
1.准备稀释液：将待测样品按照一定比例与适当的缓冲液（如生理盐水或稀释液）混合，制备一系列稀释液，以稀释样品中的微生物数量，使其适合于后续的计数。
2.取样：从适当稀释的样品中取一定体积的样品（通常是0.1毫升或1毫升），并将其均匀地涂布在含有富养基的平板上。
3.平板孵育：将涂有样品的平板在适当的温度和环境条件下进行孵育，以促使样品中的微生物生长形成可见的菌落。
4.菌落计数：根据菌落的数量和分布，使用裸眼或放大镜对平板上的菌落进行计数。
通常，选择适当的稀释液，以确保每个平板上菌落的数量在可计数的范围内，不会太多或太少。
5.结果计算：将平板上的菌落数量乘以适当的稀释倍数，得到样品中微生物的浓度或数量。
根据需要，可以将结果报告为菌落形成单位（CFU）/毫升或其他适当的单位。
稀释涂布平板法的原理是通过将样品稀释到适当的范围，使得每个平板上菌落的数量处于可计数的范围内。
通过对菌落的计数，并根据稀释倍数进行修正，可以推算出样品中微生物的浓度或数量。
这种方法广泛应用于微生物学研究、食品卫生检验、药品生产等领域，用于评估样品中微生物的数量和质量。
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稀释涂布平板法公式
稀释涂布平板法公式稀释涂布平板法是微生物学中常用的一种定量测定微生物数量的方法，它有一套相应的公式来帮助我们进行计算和分析。
咱们先来说说这个稀释涂布平板法到底是咋回事儿。
比如说，你从一块土壤里取了一些样本，这里面的微生物那可是种类繁多、数量庞大。
你要是直接去数，那简直就是不可能完成的任务。
这时候，稀释涂布平板法就派上用场啦！你把这个样本进行一系列的稀释，然后取一定量的稀释液均匀地涂在平板培养基上。
经过一段时间的培养，平板上就会长出一个个的菌落。
这些菌落可都是由单个微生物繁殖形成的哟！那这和公式有啥关系呢？假设你进行了一系列的稀释操作，比如 10 倍、100 倍、1000 倍……然后从某个稀释度的涂布平板上数出了菌落数。
这时候，就要用到公式来计算原始样本中的微生物数量啦。
公式是这样的：每克样品中的菌株数 = （C÷V）×M 。
这里的“C”表示某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，“V”代表涂布平板时所用稀释液的体积（单位是毫升），“M”则是稀释倍数。
我给您举个例子啊，就说有一次我带着学生们做实验。
我们从校园的花坛里取了土样，兴致勃勃地准备用稀释涂布平板法来测测里面的细菌数量。
一开始，大家都手忙脚乱的，不是这个同学稀释的时候比例弄错了，就是那个同学涂布不均匀。
好不容易都弄对了，放进培养箱里等着。
那几天，同学们天天盼着去看结果。
终于到了出结果的日子，大家围在实验台前，眼睛紧紧盯着那些平板。
有的平板上菌落密密麻麻，有的则稀稀拉拉。
我们就按照公式认真地计算起来。
有个小组特别有意思，他们数菌落的时候，因为太紧张，数错了好几次。
旁边的小组还笑话他们，结果等自己数的时候，也犯了同样的错误，把大家逗得哈哈大笑。
最后，通过计算，我们得出了花坛土壤中细菌的大致数量。
同学们都特别有成就感，也对微生物世界有了更直观的认识。
总之，稀释涂布平板法公式虽然看起来有点复杂，但只要咱们多做实验，多练习，就能熟练掌握。
(完整版)稀释平板计数法
实验十一稀释平板计数法实验目的学习稀释平板菌落计数的基来源理和方法。
实验内容用稀释平板菌落计数法对菌悬液进行计数。
实验原理平板菌落计数法是将待测样品经适合稀释以后，此中的微生物充足分别成单个细胞，取必定量的稀释样液接种到平板上，经过培育，由每个单细胞生长生殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，依据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
可是，因为待测样品常常不易完好分别成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2— 3 或更多个细胞。
所以平板菌落计数的结果常常偏低。
为了清楚地论述平板菌落计数的结果，此刻已偏向使用菌落形成单位(cfu) 而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法固然操作较繁，结果需要培育一段时间才能获得，并且测定结果易受多种要素的影响，可是，因为该计数方法的最大长处是能够获取活菌的信息，所以被宽泛用于生物制品查验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水〔包含水源水〕等的含菌指数或污染程度的检测。
实验器械酿酒酵母菌悬液马铃薯培育基1m1 吸管，平皿，试管，试管架，恒温培育箱等。
实验步骤1．无菌器械的准备(1)无菌培育皿：取培育皿 9 套，包扎、灭菌。
(2) 无菌移液管的准备：取 1m1 移液管，在后部管口处用铁丝塞入棉花少量（长约），以防将菌液吸出，同时也可防止将外面的微生物吹入。
棉花要塞得松紧适合吹时能通气但不使棉花滑下为准。
而后将移液管尖端放在4~5cm宽的长纸条一端呈45o 角折叠纸条包住尖端，用左手捏住管身，右手将吸管压紧，在桌面上向前转动，以螺旋式包扎起来，上端节余纸条折叠打结后干热灭菌。
(3) 无菌水：取 6 支试管，分别装入 4.5m1 蒸馏水，加棉塞，灭菌。
2．样品稀释液的制备(1)编号取无菌平皿 9 套，分别用记号笔注明 10-4、10-5、10-6(稀释度 )各 3 套。
另取 6 支盛有 4.5m1 无菌水的试管，挨次标是 10-1、 10-2、 10-3、 10-4、 10-5、 10-6。
实验十一 稀释平板测数法
实验十一稀释平板测数法实验十一稀释平板测数法一、实验目的了解稀释平板计数的原理，掌握涂抹平板培养法和混合平板培养法，认识细菌、放线菌、霉菌的菌落特征。
二、实验原理稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。
计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。
经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。
此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。
一般用于某些成品检定（如杀虫菌剂等）、生物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。
三、实验器材1．活材料：苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）菌剂。
2．培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（附录三、1）3．器材：90ml无菌水、9ml无菌水、无菌平皿、lml无菌吸管、天平、称样瓶、记号笔、玻璃刮铲等。
四、实验方法1．样品稀释液的制备准确称取待测样品l0g，放入装有90ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置摇床上振荡20 min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即成10-1稀释液；再用1ml无菌吸管，吸取10-1稀释液lml，移入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1 ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液（图22-1）。
图22-1 平板计数法中样品的稀释和稀释液的取样培养用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。
实验十一 平板菌落技术
的活菌数量。
活菌计数：
每g样品菌体数量＝平均菌落数×10×稀释 浓度/土壤克数
稀释度选择的评价： 通常在三个稀释度中，以中间稀释度平板 中长出50个左右菌落为好，否则需要重新 调整稀释度。
计数时稀释度的选择原则： 细菌、放线菌应选择菌落数为30～300 个的稀释度 霉菌10～100 同一稀释度的重复间菌落波动不能过 大
实验结果:
细菌稀释度 10-4
1皿 2皿
10-5
1皿 2皿
10-6
1皿 2皿
菌落数量
平均数 每g土样细菌量
放线菌稀释度 菌落数量 平均数 每g土样菌量
10-3
1皿 2皿
10-4
1皿 2皿
Байду номын сангаас
10-5
1皿 2皿
霉菌稀释度 菌落数量 平均数 每g土样霉菌量
10-2
1皿 2皿
10-3
1皿 2皿
10-4
1皿 2皿
实验分析
实验器材清洗：
培养皿
实验十一 土壤微生物的分离与纯化（三）
一、实验目的：
观察比较四大类微生物的菌落特征
掌握微生物的分离与纯化技术
掌握微生物的平板菌落计数法
练习接种技术
实验原理：
分离与纯化：
划线法
实验原理： 平板菌落计数法： 对样品进行一定浓度稀释后，取一定量将其均
匀涂布于平板中，平板中每个单菌落均由单细
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实验十一稀释平板测数法
一、实验目的
了解稀释平板计数的原理，掌握涂抹平板培养法和混合平板培养法，认识细菌、放线菌、霉菌的菌落特征。
二、实验原理
稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。
计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。
经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。
此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。
一般用于某些成品检定（如杀虫菌剂等）、生物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。
三、实验器材
1．活材料：苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）菌剂。
2．培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（附录三、1）
3．器材：90ml无菌水、9ml无菌水、无菌平皿、lml无菌吸管、天平、称样瓶、记号笔、玻璃刮铲等。
四、实验方法
1．样品稀释液的制备准确称取待测样品l0g，放入装有90ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置摇床上振荡20 min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即成10-1稀释液；再用1ml无菌吸管，吸取10-1稀释液lml，移入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1 ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液（图22-1）。
图22-1 平板计数法中样品的稀释和稀释液的取样培养
用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。
样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之则低。
通常测定细菌菌剂含菌数时，采用10-7、10-8、10-9稀释度，测定土壤细菌数量时，采用10-4、10-5、10-6稀释度，测定放线菌数量时，采用l0-3、10-4、10-5稀释度，测定真菌数量时，采用10-2、10-3、10-4稀释度。
2．平板接种培养平板接种培养有混合平板培养法和涂抹平板培养法两种方法。
（1）混合平板培养法将无菌平板编上10-7、10-8、10-9号码，每一号码设置三个重复，用无菌吸管按无菌操作要求吸取10-9稀释液各1ml放入编号10-9的3个平板中，同法吸取10-8稀释液各lml放入编号10-8的3个平板中，再吸取10-7稀释液各lml放入编号10-7的3个平板中（由低浓度向高浓度时，吸管可不必更换）。
然后在9个平板中分别倒入已融化并冷却至45—50℃的细菌培养基(图22-2)，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，适温培养。
至长出菌落后即可计数。
（2）涂抹平板计数法涂抹平板计数法与混合法基本相同，所不同的是先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，待凝固后编号，然后用无菌吸管吸取0.1ml菌液对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上（每个编号设三个重复）。
再用无菌刮铲将菌液在平板上涂抹均匀（图22-3），每个稀释度用一个灭菌刮铲，更换稀释度时需将刮铲灼烧灭菌。
在由低浓度向高浓度涂抹时，也可以不更换刮铲。
将涂抹好的平板平放于桌上20—30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至长出菌落后即可计数。
五、实验作业：
将实验结果填入下表中
计算结果时，常按下列标准从接种后的3个稀释度中选择一个合适的稀释度，求出每克菌剂中的含菌数。
（1）同一稀释度各个重复的菌数相差不太悬殊。
（2）细菌、放线菌、酵母菌以每皿30—300个菌落为宜，霉菌以每皿10—100个菌落为宜。
选择好计数的稀释度后，即可统计在平板上长出的菌落数，统计结果按下式计算。
混合平板计数法：
每克样品的菌数=同一稀释度几次重复的菌落平均数×稀释倍数
涂抹平板计效法：
每克样品的菌数=同一稀释度几次重复的菌落平均数×10×稀释倍数。