08平板菌落计数法
平板菌落计数的原理
平板菌落计数的原理平板菌落计数是一种常见的微生物计数方法，用于测定食品、饮用水、药品、环境样品等中微生物的数量。
其原理是将待测样品在富养分的琼脂平板上培养并计数形成的菌落，从而间接反映出样品中微生物的数量。
具体步骤如下：首先将样品经过适当的稀释处理，将适量的样品均匀地均匀涂布在琼脂平板上。
然后将涂布后的平板在37左右的恒温培养箱中培养一定的时间（通常为24至48小时，具体时间根据待测微生物的生长特性而定），待充分生长后，通过肉眼或显微镜观察，并进行计数，得出菌落数量。
最后根据分析结果，通过统计学的方法，计算出原始样品中微生物的数量。
平板菌落计数的原理主要包括以下几个方面：1.微生物生长特点：微生物在富含营养物质的培养基上，能够生长并形成可见的菌落。
通过培养基的选择和处理，可以促进待测微生物的生长，同时抑制其他微生物的生长，从而避免干扰计数结果。
这样才能保证所得结果的准确性。
2.稀释处理：由于待测样品中微生物的数量可能非常庞大，如果不进行适当的稀释处理，将直接进行培养可能会导致菌落过于密集，无法准确计数。
因此，在平板菌落计数中常常需要进行多级稀释处理，以保证所得的菌落数量在一定范围内，便于计数。
3.菌落计数：在恒温条件下培养一定时间后，会形成一定数量的菌落，通过肉眼或显微镜观察，可以将菌落进行计数。
一般来说，只会计数直径约1-2毫米的菌落，超过这个大小的菌落不予计数。
另外，由于每个菌落代表了一个微生物的起始数量，因此得到的菌落数量也就间接反映了原始样品中微生物的数量。
4.统计学处理：为了提高结果的可靠性，常常需要进行多次平板菌落计数，并计算平均值和标准差，来判断实验数据的稳定性和准确性。
另外，还需要进行对数转换，以便使用正态分布进行统计处理。
总的来说，平板菌落计数的原理是通过适当稀释后，将待测样品在琼脂平板上培养并计数形成的菌落，从而间接反映出样品中微生物的数量。
这种方法简单易行，且结果较为准确可信，因此被广泛应用于微生物数量的测定。
平板菌落计数法水中微生物的检测
钟，每个平板上生长得到的菌落不超过15 个——无菌室
1、采样： 四、实验步骤
1）自来水：先将自来水龙头用酒精灯火焰灼 烧灭菌，再开水龙头使水流5min，以灭菌 采样瓶接取水样备用。
(2)池水、河水或湖水等地面水源水：在距岸边5米处， 取距水面10—15cm的水样，先将灭菌的带塞的采样瓶， 瓶口向下浸入水层中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水 即流入瓶中，盛满后，将平塞盖好，从水中取出，若不 能在2h内检测的，需放入4℃冰箱中保存。
1、样品充分混匀，稀释时一个稀释度要换一支无 菌移液管（放菌液时 吸管尖不要碰到液面
2、由于细菌易吸附玻璃器皿表面，菌液加入后应 尽快倒培养基，立即摇匀；
3、倾注平板时的培养基温度冷却至45℃左右。 4、计数时，30―300个菌落的稀释度计算每毫升
的菌数最为合适 5、同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊
295
46
1.6
3 2890
271
60
2.2
4 无法计数 4650 513
___
5 27
11
5
___
6 无法计数 305
12
___
7 无法计数 无法计数 无法计数 ___
16400 37750 27100
1.6×104 3.8×104 2.7×104
513000 270 30500
5.1×105 2.7×102 3.1×104 10-3 无法计数
菌落计数方法及原则：
1）若只有一个稀释度的平均菌落数在30-300范围 时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。
2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在 30~300之间，则视二者之比值来决定，若 其比值小于2应报告两者的平均数。若大于 或等于2则报告其中较小的菌落总数。
平板计数法
稀释平板计数法实验目的学习稀释平板菌落计数的基本原理和方法。
实验内容用稀释平板菌落计数法对菌悬液进行计数。
实验原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2—3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水〔包括水源水〕等的含菌指数或污染程度的检测。
实验器材酿酒酵母菌悬液马铃薯培养基1m1吸管，平皿，试管，试管架，恒温培养箱等。
实验步骤1．无菌器材的准备(1) 无菌培养皿：取培养皿9套，包扎、灭菌。
(2) 无菌移液管的准备：取1m1移液管，在后部管口处用铁丝塞入棉花少许（长约1~1.5cm ），以防将菌液吸出，同时也可避免将外面的微生物吹入。
棉花要塞得松紧适宜吹时能通气但不使棉花滑下为准。
然后将移液管尖端放在4~5cm宽的长纸条一端呈45o角折叠纸条包住尖端，用左手捏住管身，右手将吸管压紧，在桌面上向前滚动，以螺旋式包扎起来，上端剩余纸条折叠打结后干热灭菌。
(3) 无菌水：取6支试管，分别装入4.5m1蒸馏水，加棉塞，灭菌。
2．样品稀释液的制备(1) 编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6(稀释度)各3套。
另取6支盛有4.5m1无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
平板菌落计数法
平板菌落计数法平板菌落计数法菌落形成单位(colony forming unit，cfu)是指在活菌培养计数时．由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁殖所形成的集落．称为菌落形成单位，以其表达活菌的数量。
菌落形成单位的计量方式与一般的计数方式不同，一般直接在显微镜下计算细菌数量会将活与死的细菌全部算入，但是CFU只计算活的细菌。
因此，可将菌液倍比稀释成不同浓度，每种浓度吸1毫升加到融化温度达50度的15毫升营养琼脂培养中混匀使其凝固，置35度孵育24小时，取出进行菌落计数，每个平板菌落数X稀释倍数得到每毫升中细菌数量，取平均值即可得到较准确的CFU/ml，一般对平板进行菌落计数，选择菌落数在30到300个平板为准。
个单位比“菌落数”更准确反映问题的实质。
从理论上认识，一个活细菌可以在条件合适的固体表面上形成一个菌落，但实际上远非如此。
例如，在环境因素作用下，每一个细菌的生活能力各不相同，会影响其在该条件下形成菌落的能力；又如，吸附于微小颗粒上的2个以上菌体或粘连在一起的菌团可能共同形成一个菌落等等。
致使形成的菌落数远远低于实际的活菌数。
因此目前可用菌落形成单位代替以往常用的“菌落数”单位。
平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液涂布到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不宜完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位（cfu ：colony-forming units），而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
[1][编辑本段]一、菌落总数介绍：菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。
平板计数法
稀释平板计数法实验目的学习稀释平板菌落计数的基本原理和方法。
实验内容用稀释平板菌落计数法对菌悬液进行计数。
实验原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2—3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水〔包括水源水〕等的含菌指数或污染程度的检测。
实验器材酿酒酵母菌悬液马铃薯培养基1m1吸管，平皿，试管，试管架，恒温培养箱等。
实验步骤1．无菌器材的准备(1) 无菌培养皿：取培养皿9套，包扎、灭菌。
(2) 无菌移液管的准备：取1m1移液管，在后部管口处用铁丝塞入棉花少许（长约1~1.5cm ），以防将菌液吸出，同时也可避免将外面的微生物吹入。
棉花要塞得松紧适宜吹时能通气但不使棉花滑下为准。
然后将移液管尖端放在4~5cm宽的长纸条一端呈45o角折叠纸条包住尖端，用左手捏住管身，右手将吸管压紧，在桌面上向前滚动，以螺旋式包扎起来，上端剩余纸条折叠打结后干热灭菌。
(3) 无菌水：取6支试管，分别装入4.5m1蒸馏水，加棉塞，灭菌。
2．样品稀释液的制备(1) 编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6(稀释度)各3套。
另取6支盛有4.5m1无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
平板计数法
平板菌落计数法平板菌落计数法，是种统计物品含菌数的有效方法。
方法如下：将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液涂布到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞；统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
目录一、菌落总数介绍：二、检验方法三、说明一、菌落总数介绍：二、检验方法三、说明展开但是，由于待测样品往往不宜完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位（cfu ：colony-forming units），而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
[1]编辑本段一、菌落总数介绍：菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。
当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。
菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。
因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。
菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
编辑本段二、检验方法菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。
平板菌落计数法
平板菌落计数法（一）目标请求进修平板菌落计数的基起源基础理和办法.（二）基起源基础理平板菌落计数法是将待测样品经恰当稀释之后,个中的微生物充分疏散成单个细胞,取必定量的稀释样液接种到平板上,经由造就,由每个单细胞发展滋生而形成肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞.统计菌落数,依据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数.但是,因为待测样品往往不轻易完整疏散成单个细胞,所以,长成的一个单菌落也可来自样品中的2～3或更多个细胞.是以平板菌落计数的成果往往偏低.为了清晰地阐述平板菌落计数的成果,如今已偏向应用菌落形成单位(colony-forming units,cfu)而不以绝对菌落数来暗示样品的活菌含量.平板菌落计数法固然操纵较繁,成果须要造就一段时光才干取得,并且测定成果易受多种身分的影响,但是,因为该计数办法的最大长处是可以获得活菌的信息,所以被普遍用于生物成品磨练(如活菌制剂),以及食物.饮料和水(包含水源水)等的含菌指数或污染程度的检测.（三）器材1．菌种大肠杆菌菌悬液.2．造就基牛肉膏蛋白陈造就基.3．仪器或其他器具1mL无菌吸管,无菌平皿,盛有4.5ml无菌水的试管,试管架,恒温造就箱等.（四）操纵步调l．编号取无菌平皿9套,分离用记号笔标明10-4.10-5.10-6.(稀释度)各3套.另取6支盛有4.5mL无菌水的试管,依次标是10-1.10-2.10-3.10-4.10-5.10-6.2．稀释用lmL无菌吸管汲取lmL已充分混匀的大肠杆菌菌县液(待测样品),准确地放0.5mL至10-1的试管中,此即为10倍稀释.将过剩的菌液放回原菌液中.将10-1试管置试管振荡器上振荡,使菌液充分混匀.另取一支lml吸管拔出10 1试管中往返吹吸菌悬液三次,进一步将菌体疏散.混匀.吹吸菌液时不要太猛太快,吸时吸管伸人管底,吹时分开液面,以免将吸管中的过滤棉花浸湿或使试管内液体外溢.用此吸管汲取10-1菌液lmL,准确地放0.5mL至10-2试管中,此即为100倍稀释.其余依次类推.放菌液时吸管尖不要碰着液面,即每一支吸管只能接触一个稀释度的菌悬液,不然稀释不准确,成果误差较大.3．取样用三支1mL无菌吸管分离汲取10-4.10-5和10-6的稀释菌悬液各lmL,对号放入编好号的无菌平皿中,每个平皿放0.2mL.不要用lmL吸管每次只靠吸管尖部吸0.2mL稀释菌液放入平皿臼,如许轻易加大统一稀释度几个反复平板间的操纵误差.4．倒平板尽快向上述盛有不合稀释度菌液的平皿中倒入熔化后冷却至45℃阁下的牛肉膏蛋白胨造就基约15mL/平皿,置程度地位敏捷旋动平皿,使造就基与菌液混杂平均,而又不使造就基荡出平皿或溅到平皿盖上.因为细菌易吸附到玻璃器皿概况,所以菌液参加到造就皿后,应尽快倒入熔化并于已冷却至45℃阁下的造就基,立刻摇匀,不然细菌将不轻易疏散或长成的菌落连在一路,影响计数.待造就基凝固后,将平板倒置于37℃恒温造就箱中造就.5．计数造就48h后,掏出造就平板,算出统一稀释度三个平板上的菌落平均数,并按下列公式进行盘算,每毫升中菌落形成单位(cfu)=统一稀释度三次反复的平均菌落数×稀释倍数×5一般选择每个平板上长有30~300个菌落的稀释度盘算每毫升的含菌量较为适合.统一稀释度的三个反复对比的菌落数不该相差很大,不然暗示实验不准确.现实工作中统一稀释度反复对比平板不克不及少于三个,如许便于数据统计,削减误差.由10-4.10-5.10-6三个稀释度盘算出的每毫升菌液中菌落形成单位数也不该相差太大.平板菌落计数法,所选择倒平板的稀释度是很主要的.一般以三个持续稀释度中的第二个稀释度倒平板造就后所消失的平均菌落数在50个阁下为好,不然要恰当增长或削减稀释度加以调剂.平板菌落计数法的操纵除上述倾泻倒平板的方法以外,还可以用涂布平板的方法进行.二者操纵基底细同,所不合的是后者先将牛肉膏蛋白胨造就基熔化后倒平板,待凝固后编号,并于37℃阁下的温箱中烘烤30min,或在超静工作台上恰当吹干,然后用无菌吸管汲取稀释好的菌液对号接种于不合稀释度编号的平板上,并尽快用无菌玻璃涂棒将菌液在平板上涂布平均,平放于实验台上20～30min,使菌液渗入造就基表层内,然后倒置37℃的恒温箱中造就24～48h.涂布平板用的菌悬液量一般以0.1mL较为合适,假如过少菌液不轻易涂布开,过多则在涂布完后或在造就时菌液仍会在平板概况流淌,不轻易形成单菌落.。
平均菌落数计算公式
平板菌落计数法公式为每毫升中菌落形成单位(cfu)=同一稀释度三次重复的平均菌落数×稀释倍数×5。
一般选择每个平板上长有30~300个菌落的稀释度计算每毫升的含菌量较为合适。
同一稀释度的三个重复对照的菌落数不应相差很大，否则表示试验不精确。
实际工作中同一稀释度重复对照平板不能少于三个，这样便于数据统计，减少误差。
由10-4、10-5、10-6三个稀释度计算出的每毫升菌液中菌落形成单位数也不应相差太大。
平板菌落计数法，所选择倒平板的稀释度是很重要的。
一般以三个连续稀释度中的第二个稀释度倒平板培养后所出现的平均菌落数在50个左右为好，否则要适当增加或减少稀释度加以调整。
平板计数琼脂培养基
PCA平板计数琼脂培养基平板计数琼脂培养基即PCA，是在08GB中用于菌落总数测定的配方：1、成分胰蛋白胨 5.0g酵母浸粉 2.5g葡萄糖 1.0g琼脂 15.0g蒸馏水1000mlpH 7.0士0.22、制法：将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。
分装试管或锥形瓶，121℃高压灭菌15min。
LST 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤简称LST，在08GB中是用于大肠菌群的检测，大肠杆菌的计数，金黄色葡萄球菌的检测。
配方：1、成分：胰蛋白胨或胰酪胨 20.0g氯化钠 5.0g乳糖 5.0g磷酸氢二钾 2.75g磷酸二氢钾 2.75g月桂基磺酸钠0.1g蒸馏水1000mlpH 6.8士0.22、制法：将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH ，分装到有玻璃小导管的试管中，每管10ml。
121℃高压灭菌15min。
煌绿乳糖胆盐肉汤BGLB煌绿乳糖胆盐肉汤简称BGLB，在08国标中是用于大肠菌群的检测配方：1、成分：蛋白胨10.0g乳糖 10.0g牛胆粉溶液 200.0ml0.1%煌绿水溶液 13.3ml蒸馏水1000mlpH 7.2士0.12、制法：将蛋白胨、乳糖溶解于500ml蒸馏水中，加入牛胆粉溶液200.0ml（将20.0g脱水牛胆粉溶于200ml的蒸馏水中，pH7.0-7.5）用蒸馏水稀释到975ml，调节pH至7.4，再加入0.1%煌绿水溶液13.3ml，用蒸馏水补足到1000ml，用棉花过滤后，分装到有玻璃小导管的试管中，每管10ml。
121℃高压灭菌15min。
V-P试剂 Voges-Proskauer试剂V-P试剂是Voges-Proskauer试剂的简称，用于副溶血性弧菌的V-P试验。
配方：1、成分甲液α-萘酚 5.0g无水乙醇100.0ml乙液氢氧化钾40.0g用蒸馏水加至1000ml2、试验方法将3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂生长物接种3%氯化钠MR-VP培养基，36℃士1℃培养48h。
微生物学 实验三 平板菌落计数法
实验三平板菌落计数一、目的要求学习菌种的平板菌落计数的基本原理和方法。
二、基本原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低，为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位（colony-forming units,cfu）而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水（包括水源水）等的含菌指数或污染程度的检测。
三、器材1 ．菌种：大肠杆菌菌悬液。
2 ．培养基：LB培养基。
3 ．仪器或其他用具： 1ml 无菌吸管，无菌平皿，盛有 4.5ml 无菌水的试管，试管架，恒温培养箱等。
四、操作步骤1 ．编号取无菌平皿 9 套，分别用记号笔标明 10-4、 10-5、 10-6（稀释度）各 3 套，另取 6 支盛有 4.5ml 无菌水的试管，依次标是 10-1、 10-2、 10-3、 10-4、 10-5、10-6。
2 ．稀释用 1ml 无菌吸管吸取 1ml 已充分混匀的大肠杆菌菌悬液（待测样品），精确地放0.5ml 至 10-1的试管中，此即为 10 倍稀释。
将多余的菌液放回原菌液中。
将 10-1试管置试管振荡器上振荡，使菌液充分混匀。
另取一支 1ml 吸管插入 10-1试管中来回吹吸菌悬液三次，进一步将菌体分散、混匀。
吹吸菌液时不要太猛太快，吸时吸管伸入管底，吹时离开液面，以免将吸管中的过滤棉花浸湿或使试管内液体外溢。
微生物的平板菌落计数法
<实验十三微生物的平板菌落计数法>一、实验目的学习微生物的平板计数法。
二、原理概述微生物的稀释平板计数是根据在固体培养基上所形成的一个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成，且肉眼可见的子细胞群体这一生理及培养特征进行的。
也就是说一个菌落即代表一个单细胞。
计数时，首先将待测样品制成均匀的一系列不同稀释液，并尽量使样品中的微生物细胞分散开来，使成单个细胞存在( 否则一个菌落就不只是代表一个菌 ) ，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。
经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。
此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数，一般用于某些成品检定 ( 如食品等 ) 、生物制品检定、土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检定。
三、实验器材1 、待测样品、所需各类培养基2 、天平、称样瓶、记号笔、容量瓶、无菌生理盐水、 1ml 和 5ml 无菌移液管、无菌平板、无菌试管四、操作步骤和内容1 、样品稀释液的制备准确称取待测样品 10g 或 10ml ，放入装有 90ml 无菌水并放有小玻璃珠的 250mL 三角瓶中，用手或置摇床上振荡 20min ，使微生物细胞分散，静置约 20-30s ，即成 10 -1 稀释液；再用 1ml 无菌吸管，吸取 10 -1 稀释液 1ml 移入装有 9ml 无菌水的试管中，吹吸 3 次，让菌液混合均匀，即成 10 -2 稀释液；再换一支无菌吸管吸取 10 -2 菌液 1mL 移入装有 9ml 无菌水试管中，即成 10 -3 稀释液；以此类推，一定要每次更换吸管，连续稀释，制成 10 -4 、 10 -5 、 10 -6 、 10 -7 、 10 -8 等一系列稀释度的菌液，供平板计数使用 ( 如图 13 － 1) 。
图 13 － 1 平板计数法中样品的稀释和稀释液的取样用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。
教你一招丨标准平板菌落计数法
教你一招丨标准平板菌落计数法检测食品中微生物数量，一般采用标准平板菌落计数法(SPC)对食品中的活的微生物进行菌落形成单位(CFU)数量的检测，即将部分样品取出混合均匀，用适当的稀释液进行梯度稀释，取一定量的稀释液涂布或倾注琼脂平板，在合适的温度下培养一定的时间，然后通过肉眼观察或电子计数器对所有可见菌落进行计数。
虽然日常检测大多采用倾注平板的方法，但是涂布法在检测热敏性菌体方面更有优势，能取得更好的计数结果，而且更适合于严格好氧菌。
涂布法的缺点是涂布时琼脂表面不干燥和培养后菌落蔓延导致无法计数。
(一)菌落计数器平板上的菌落个数可用肉眼直接观察进行计数，也可以借助仪器进行。
菌落计数器是一种数字显示式自动细菌检验仪器。
由计数器、探笔、计数池等部分组成，计数器采用CMOS集成电路精心设计， LED数码管显示，字高13mm,清晰明亮，配合专用探笔，计数灵敏准确。
黑色背景式计数池内，荧光灯照明，菌落对比清楚，便于观察。
菌落计数器分手动、半自动和全自动三种类型，可根据对精确度的要求，选择不同的计数器。
使用方法： (1)接通电源，平板去盖，皿底朝下放入计数器后开始计数，从平板的顶部开始计数，用方格线标记防止重复计数，利用这种机械式手动计数器，计数每一个菌落，无论多小或不典型。
(2)将探笔插入仪器上的探笔插孔内。
打开计数器，接通电源，计数池也内灯亮，并且显示窗内显示明亮，可以进行计数。
把待检的培养皿皿底朝上放入计数池内，并用探笔在培养皿底面对菌落进行计数，点到的菌落处被标上颜色，显示窗内数字会自动累加。
用放大镜仔细检查，确认点数无遗漏后，显示窗内的数字即为该培养皿内的菌落数。
使用注意事项：仪器要放在平整牢固的试验台上，点数时，探笔不要过于倾斜，轻点至有弹跳感，数字即可显示。
仪器应防尘，放大镜表面的灰尘，要用纯化水清洗后，再用镜头纸擦拭干净即可，另外还应防潮、防剧烈震动、防日光曝晒、防酸碱等，使用完后加防护罩。
平板菌落计数法
资料范本本资料为word版本，可以直接编辑和打印，感谢您的下载平板菌落计数法地点：__________________时间：__________________说明：本资料适用于约定双方经过谈判，协商而共同承认，共同遵守的责任与义务，仅供参考，文档可直接下载或修改，不需要的部分可直接删除，使用时请详细阅读内容平板菌落计数法（一）目的要求学习平板菌落计数的基本原理和方法。
（二）基本原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可来自样品中的2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(colony-forming units，cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验(如活菌制剂)，以及食品、饮料和水(包括水源水)等的含菌指数或污染程度的检测。
（三）器材1．菌种大肠杆菌菌悬液。
2．培养基牛肉膏蛋白陈培养基。
3．仪器或其他用具1mL无菌吸管，无菌平皿，盛有4.5ml无菌水的试管，试管架，恒温培养箱等。
（四）操作步骤l．编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6。
(稀释度)各3套。
另取6支盛有4.5mL无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
2．稀释用lmL无菌吸管吸取lmL已充分混匀的大肠杆菌菌县液(待测样品)，精确地放0.5mL至10-1的试管中，此即为10倍稀释。
平板菌落计数法和显微镜直接计数法
步骤
1. 制备酵母菌的菌悬液：酿酒酵母菌PDA斜面菌种一支，用无菌生理盐水，将菌苔洗
下，倒入装有玻璃珠的无菌三角瓶中，制成50 mL菌悬液。震荡，混匀。
2. 清洁血球计数板：镜检计数板，计数室内干净后才可以使用。如果有污物，先用自来
水冲洗血球计数板（切勿用硬毛刷刷洗），再用95%的酒精棉球轻轻擦拭，晾干后再次镜检。 盖玻片同样清洗和检查。
10-2
10-3
稀释度 菌落数之比
结果（菌落总 数，CFU/mL）
备注
1
1 365
164
2
2 760
295
3
2 890
271
4
150
30
5 多不可计 1 650
6
27ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
11
7 多不可计 305
20
—
1.6 ˣ 104（或
）
46 1.6(460/295)＜2 3.8 ˣ 104（或16 400） 两位以
思考题
1．测定时，融化后的固体培养基如果在40 ℃、45 ℃、55 ℃和60 ℃保温，测定结果和 50 ℃保温有何区别？ 2．本实验测定方法是十倍稀释，各梯度分别取样1 mL进行测定。如果只稀释至10-1，取 样1 mL、0.1 mL和0.01 mL进行测定，对结果有哪些影响？
原理
显微镜直接计数法：借助显微镜
谢谢
步骤
3. 加菌悬液：将盖玻片盖在计数室的上面，用细口滴管吹打菌悬液，充分混匀。然后吸
菌悬液，滴在计数室和盖玻片的边缘上，菌悬液自然渗入盖玻片和计数板间缝隙中。再用镊 子或接种环柄等轻压盖玻片，去除过多的菌悬液，以免实际的计数室体积变大。静置片刻， 待菌体自然沉降后，计数。
《平板菌落计数法》课件
02
稀释时需使用精确的稀释比，并 确保无菌操作，避免交叉污染。 稀释后的样品应尽快进行平板涂 布，以免菌落过度生长。
菌落计数的标准与误差控制
菌落计数是平板菌落计数的核心环节 ，需要遵循一定的标准。
计数时应选择菌落数在30-300之间的 平板进行计数，以减小误差。同时， 应定期对计数结果进行质量控制，确 保计数的准确性。
实验过程中的质量控制
质量控制是保证实验结果可靠性的重要手段。
实验前应对所有器具进行灭菌处理，确保无菌环境。实验过程中应定期对培养基、稀释液、样品等各 环节进行质量检查，及时发现并纠正问题。同时，应定期对实验人员进行培训和考核，提高实验技能 和素质。
04
平板菌落计数法的应用实例
在食品微生物检测中的应用
限制
平板菌落计数法对于一些特殊微生物的计数可能存在困难，如厌氧微生物、营 养要求较高的微生物等。此外，该方法需要较长时间的培养和计数，对于一些 快速繁殖的微生物可能不适用。
02
平板菌落计数法操作流程
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 培养基制备
总结词
培养基是菌落生长的温床，其制备是平板菌落计数法的第一 步。
详细描述
根据实验需求选择合适的培养基配方，按照比例称取所需的 成分，加入适量的蒸馏水，搅拌均匀后调节pH值，然后进行 灭菌处理。灭菌后的培养基倒入无菌平板中，冷却备用。
THANKS
感谢观看
样品稀释
总结词
样品稀释是为了将菌落分散开来，便于计数。
详细描述
将待测样品进行稀释，通常选用生理盐水或磷酸盐缓冲液作为稀释液。按照适当 的稀释比例，将样品与稀释液混合均匀，确保每个菌落都能独立分散开来。
计算菌落数的方法
计算菌落数的方法
1.直接计数法：是最简单和常用的计数方法，常用于对肠道菌落进行定量计数。
2.平板计数法：分为表面计数法和浸没计数法。
表面计数法是将待检物展布于平板上，待培养后直接数出部分细菌落，以此推出全部细菌落的数量。
浸没计数法是将待检物悬浮于液体培养基中，静置后将液体转移到尺寸已知的容器中，然后计数。
3.膜过滤计数法：膜过滤计数法是将液体待测物过滤通过孔径已知的微孔膜，然后将膜移到含营养物质的培养基中，酝酿一段时间后计数。
4.间接计数法：间接计数法常用于活性菌落数或真菌的计数。
这种方法基于目标细胞的活性或生物特性生成信号。
应用于测定活细胞的方法通常包括：匀浆技术、活菌计数仪、流式细胞技术等。
5.显微镜统计法：适用于对微小微生物，如细菌、霉菌等小孢子菌的数目和形
态结构的鉴定。
在显微镜镜下，结合数学计算方法，统计细胞和孢子的数量。
平板菌落计数法的流程
平板菌落计数法的流程平板菌落计数法呀，这可有意思啦。
一、准备工作。
咱得先把要用的东西都准备好。
那都有啥呢？培养基是肯定不能少的，就像做饭得有食材一样。
这个培养基得按照正确的配方去调配，可不能瞎弄哦。
还有培养皿，这就像是小盘子，是细菌们要住的小房子。
另外呢，接种工具也得备着，像接种环之类的。
再就是我们要计数的样品啦，不管是从哪儿弄来的样品，都得小心处理，就像对待宝贝一样。
而且啊，整个操作过程得在干净的环境里进行，要是周围脏兮兮的，那细菌的数量可就不准啦。
二、样品处理。
拿到样品以后呢，要把它处理成合适的状态。
如果是固体的样品，可能得先溶解或者研磨一下，让里面的细菌能分散开来。
要是液体样品呢，也得注意有没有沉淀之类的，要是有，得想办法让它均匀一点。
这一步就像是给细菌们做个前期的准备工作，让它们能更好地在培养基里生长。
三、接种。
接种这个环节可关键啦。
用接种工具蘸取处理好的样品，然后轻轻地在培养基上划呀划。
就像画画一样，不过这画的可是细菌的“家”呢。
要注意接种的量，不能太多也不能太少。
太多了的话，细菌们都挤在一起，长成一团，那就没法准确计数了。
太少呢，可能有些细菌都长不出来，那也不行。
而且在接种的时候，动作要轻柔，别把培养基给弄破了，培养基要是破了，就像房子塌了一样，细菌们可就没地方好好生长啦。
四、培养。
接种完了就该让细菌们在合适的环境里生长啦。
这个环境得是温暖的，温度要刚刚好，就像我们人住的房子温度得适宜一样。
还要注意湿度之类的条件。
在培养的过程中，可不能老是去打扰细菌们，得让它们安安静静地生长。
但是呢，也要时不时地去看看，就像看小宠物一样，看看它们有没有好好地长出来。
五、计数。
等细菌们在培养基上长成一个个小菌落的时候，就可以开始计数啦。
这可有点像数星星呢，不过要更仔细。
要用小眼睛仔细地看，一个一个地数。
有时候菌落可能会长得挨在一起，这时候就得靠我们的判断力啦，要把那些看起来像是分开的菌落都准确地数出来。
08平板菌落计数法
5．计数
培养24小时后，取出培养皿，算出同一稀释度 两个平皿上的菌落平均数，并按下列公式进行计算：
每毫升中总活菌数=同一稀释度两次重复的菌落 平均数×稀释倍数
四 实验结果
填表
➢ 一般选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释度计算每毫 升的菌数最为合适。
➢ 同一稀释度的两个重复的菌数不能相差很悬殊。 ➢ 不同稀释度计算出的每毫升菌液中总活菌数也不能相差悬
殊，如相差较大，表示试验不精确。
操作录像
实验安排
培养基配制:3种,分实验台配制（每组400mL） 第一台:牛肉膏蛋白胨固体培养基: 平板菌落计数法
用.
第二台:高氏一号固体培养基: 分离放线菌 第三台:土豆蔗糖培养基: 分离霉菌
分装:三角瓶(装99mL水(加玻璃珠)，每台1只) 斜面试管(装土豆蔗糖培养基,每人2只) 稀释用试管(事先装无菌水4.5mL,每组3只) 相关材料.
08平板菌落计数法
三、器材
酵母菌悬液， 牛肉膏蛋白胨培养基， 1mL无菌吸管 无菌平皿 盛有9 mL无菌水的试管
四、操作步骤
1．编号：
▪取无菌平皿 8套，在皿底分别标记10-5、10-6 、10-7、10 8各2套。（不得开盖，）
▪取1只装有99mL无菌水的三角瓶1只，标明10-2。
▪另取6支盛有9mL无菌水的试管，排列于试管架上，依次 标记10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8。
灭菌:轮流值守 摆放斜面试管:
土壤及细菌原液稀释:土壤稀释分离倒平板Leabharlann 每人3个,分离用2个,计数用1个.
接种:平板菌落计数每人一只平板.土壤稀释分离:
每人划2个平板,放线菌和霉菌各一个. 培养:细菌37℃;放线菌,霉菌28℃(分开放置) 观察,分离和计数:平板菌落计数48小时后;放线菌和霉
平板菌落计数法
平板菌落计数法之樊仲川亿创作（一）目的要求学习平板菌落计数的基来源根底理和办法.（二）基来源根底理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后,其中的微生物充分分离成单个细胞,取一定量的稀释样液接种到平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁衍而形成肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞.统计菌落数,按照其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数.但是,由于待测样品往往不容易完全分离成单个细胞,所以,长成的一个单菌落也可来自样品中的2～3或更多个细胞.因此平板菌落计数的结果往往偏低.为了清楚地论述平板菌落计数的结果,现在已倾向使用菌落形成单位(colony-forming units,cfu)而不以绝对菌落数来暗示样品的活菌含量.平板菌落计数法虽然操纵较繁,结果需要培养一段时间才干取得,并且测定结果易受多种因素的影响,但是,由于该计数办法的最大优点是可以获得活菌的信息,所以被广泛用于生物制品检验(如活菌制剂),以及食品、饮料和水(包含水源水)等的含菌指数或污染程度的检测.（三）器材1．菌种大肠杆菌菌悬液.2．培养基牛肉膏蛋白陈培养基.3．仪器或其他用具1mL无菌吸管,无菌平皿,盛有4.5ml无菌水的试管,试管架,恒温培养箱等.（四）操纵步调l．编号取无菌平皿9套,辨别用记号笔标明10-4、10-5、10-6.(稀释度)各3套.另取6支盛有4.5mL无菌水的试管,依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6.2．稀释用lmL无菌吸管吸取lmL已充分混匀的大肠杆菌菌县液(待测样品),精确地放0.5mL至10-1的试管中,此即为10倍稀释.将多余的菌液放回原菌液中.将10-1试管置试管振荡器上振荡,使菌液充分混匀.另取一支lml吸管拔出10 1试管中来回吹吸菌悬液三次,进一步将菌体分离、混匀.吹吸菌液时不要太猛太快,吸时吸管伸人管底,吹时离开液面,以免将吸管中的过滤棉花浸湿或使试管内液体外溢.用此吸管吸取10-1菌液lmL,精确地放0.5mL至10-2试管中,此即为100倍稀释.其余依次类推.放菌液时吸管尖不要碰到液面,即每一支吸管只能接触一个稀释度的菌悬液,不然稀释不精确,结果误差较大.3．取样用三支1mL无菌吸管辨别吸取10-4、10-5和10-6的稀释菌悬液各lmL,对号放入编好号的无菌平皿中,每个平皿放0.2mL.不要用lmL吸管每次只靠吸管尖部吸0.2mL稀释菌液放入平皿臼,这样容易加大同一稀释度几个重复平板间的操纵误差.4．倒平板尽快向上述盛有不合稀释度菌液的平皿中倒入融化后冷却至45℃左右的牛肉膏蛋白胨培养基约15mL/平皿,置水平位置迅速旋动平皿,使培养基与菌液混合均匀,而又不使培养基荡出平皿或溅到平皿盖上.由于细菌易吸附到玻璃器皿概略,所以菌液加入到培养皿后,应尽快倒入融化并于已冷却至45℃左右的培养基,立即摇匀,不然细菌将不容易分离或长成的菌落连在一起,影响计数.待培养基凝固后,将平板倒置于37℃恒温培养箱中培养.5．计数培养48h后,取出培养平板,算出同一稀释度三个平板上的菌落平均数,并按下列公式进行计算,每毫升中菌落形成单位(cfu)=同一稀释度三次重复的平均菌落数×稀释倍数×5一般选择每个平板上长有30~300个菌落的稀释度计算每毫升的含菌量较为合适.同一稀释度的三个重复对照的菌落数不该相差很大,不然暗示试验不精确.实际任务中同一稀释度重复对照平板不克不及少于三个,这样便于数据统计,减少误差.由10-4、10-5、10-6三个稀释度计算出的每毫升菌液中菌落形成单位数也不该相差太大.平板菌落计数法,所选择倒平板的稀释度是很重要的.一般以三个连续稀释度中的第二个稀释度倒平板培养后所出现的平均菌落数在50个左右为好,不然要适当增加或减少稀释度加以调整.平板菌落计数法的操纵除上述倾注倒平板的方法以外,还可以用涂布平板的方法进行.两者操纵基底细同,所不合的是后者先将牛肉膏蛋白胨培养基融化后倒平板,待凝固后编号,并于37℃左右的温箱中烘烤30min,或在超静任务台上适当吹干,然后用无菌吸管吸取稀释好的菌液对号接种于不合稀释度编号的平板上,并尽快用无菌玻璃涂棒将菌液在平板上涂布均匀,平放于实验台上20～30min,使菌液渗入培养基表层内,然后倒置37℃的恒温箱中培养24～48h.涂布平板用的菌悬液量一般以0.1mL较为适宜,如果过少菌液不容易涂布开,过多则在涂布完后或在培养时菌液仍会在平板概略流动,不容易形成单菌落.。
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一、目的要求
学习平板菌落计数的基本原理和方法。
二、基本原理
平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基 上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成 的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个 单细胞。计数时，先将待测样品作一系列稀释， 再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，使其 均匀分布于平皿中的培养基内，经培养后，由 单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目， 即可换算出样品中的含菌数。
3．取样
用4支1mL无菌吸管分别精确地吸取10-5、10-6、10-7、 10-8的稀释菌液1ml，对号放入编好号的无菌培养皿中。
4．倒平板
于上述盛有不同稀释度菌液的培养皿中，倒入溶化 后冷却至45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基约10— 15mL，置水平位置，迅速旋动混匀，待凝固后，倒 置于37℃温室中培养。
5．计数
培养24小时后，取出培养皿，算出同一稀释度 两个平皿上的菌落平均数，并按下列公式进行计算：
每毫升中总活菌数=同一稀释度两次重复的菌落 平均数×稀释倍数
四 实验结果
填表
➢ 一般选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释度计算每毫 升的菌数最为合适。
➢ 同一稀释度的两个重复的菌数不能相差很悬殊。 ➢ 不同稀释度计算出的每毫升菌液中总活菌数也不能相差悬
三、器材
酵母菌悬液， 牛肉膏蛋白胨培养基， 1mL无菌吸管 无菌平皿 盛有9 mL无菌水的试管
四、操作步骤
1．编号：
▪取无菌平皿 8套，在皿底分别标记10-5、10-6 、10-7、10 8各2套。（不得开盖，）
▪取1只装有99mL无菌水的三角瓶1只，标明10-2。
▪另取6支盛有9mL无菌水的试管，排列于试管架上，依次 标记10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8。
灭菌:轮流值守 摆放斜面试管:
土壤及细菌原液稀释:土壤稀释分离
倒平板:每人3个,分离用2个,计数用1个.
接种:平板菌落计数每人一只平板.土壤稀释分离:
每人划2个平板,放线菌和霉菌各一个. 培养:细菌37℃;放线菌,霉菌28℃(分开放置) 观察,分离和计数:平板菌落计数48小时后;放线菌和霉
菌接种3天后开始 形态观察:一周后.
2．稀释
用1ml无菌吸管精确地吸取1mL原菌悬液放入10-2的三 角瓶中，注意吸管尖端不要碰到液面，以免吹出时，容 器内液体外溢。然后仍用此吸管将瓶内悬液来回吸吹三 次，吸时伸入管底，吹时离开水面，使其混合均匀。另 取一支吸管自10-2三角瓶中吸1mL放入10-3试管中，吸吹
三次，……其余依次类推。整个稀验安排
培养基配制:3种,分实验台配制（每组400mL） 第一台:牛肉膏蛋白胨固体培养基: 平板菌落计数法
用.
第二台:高氏一号固体培养基: 分离放线菌 第三台:土豆蔗糖培养基: 分离霉菌
分装:三角瓶(装99mL水(加玻璃珠)，每台1只) 斜面试管(装土豆蔗糖培养基,每人2只) 稀释用试管(事先装无菌水4.5mL,每组3只) 相关材料.