平板菌落计数法水中微生物的检测

4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30， 则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀 释倍数报告之
5）若所有稀释度的平均菌落数均不在 30~300之间，则应以最接近30或300的平 均菌落数乘以稀释倍数报告之
6）平板出现大片菌苔不采用，菌苔小于平 板的一半，若另一半菌落分布均匀，则菌落 数× 2.
注意事项:
注意:作空白及取平行样(2-3组)
通常细菌、放线菌选择平均菌落数在30~300之 间者进行计算 ，霉菌选平均菌落数在10~100之 间。
3 菌落计数及报告方法 (实例)
不同稀释度的平均菌落数
10-1
10-2 10-3
两稀释度菌 菌落总数 报告方式 落数 之比
1 1365
164
20
---
2 2760
含细菌100-1000个/ml的水体为清洁 含细菌1000-10000个/ml的水体为不太清洁 含细菌多于10万个/ml的水体为极不清洁
含细菌1万-10万个/ml的水体为不清洁
二、基本原理
1、本试验采用平板菌落计数法对水样中的细菌计数， 这是一种测定水中好氧和兼性厌氧细菌密度的方法， 由于细菌在水体中，能以单个、成对、链状、成簇 或成团的方式存在，另外，没有单独的一种培养基 或某一环境条件能满足一个水样中所有细菌的生理 要求，所以由此法得到的菌落数，实际上要低于被 测水样中真正存在的活菌数。
二、基本原理
2、平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释 之后，其中的微生物充分分散成单个细胞， 取一定量的稀释液接种到平板上上，经培 养，由每个单细胞生长繁殖形成肉眼可见 的菌落，即一个单菌落代表样品中一个单 细胞
三、实验准备
器皿：无菌采样瓶、培养皿、移液管、试管等。 仪器：干热灭菌箱、高压蒸汽灭菌锅、恒温培
295
46
1.6
3 2890
271
60
2.2
4 无法计数 4650 513
___
5 27
11
5
___
6 无法计数 305
12
___
7 无法计数 无法计数 无法计数 ___
16400 37750 27100
1.6×104 3.8×104 2.7×104
513000 270 30500
5.1×105 2.7×102 3.1×104 10-3 无法计数
水中细菌总数的测定
——平板菌落计数法
一、细菌总数测定的意义
水中细菌总数往往同水中有机物污染的程度呈 正相关，它是评价水质污染程度重要指标之一
细菌总数：指水样在一定条件下培养后，1mL水样 所含菌落的总数。
我国生活饮用水标准（GB5749-85）规定，细 菌总数不得超过100个/ml
含细菌10-100个/ml的水体为极清洁
代表性：多采几个部位，液体样品需经过震摇，以 获得均匀稀释液。
2 水样的10倍稀释
第一步 稀释 水样 第二步： 接种平板
注意：稀释 度的选择
平板混合分离法： 将菌液分离样品摇匀，用无菌移液管取1 ml的
菌液移至无菌培养皿中，然后将融化，凉至45℃ 左右的培养基，在每个培养皿内各倒入约15 ml， 摇匀，凝固，制成平板。
养箱等。 试剂：牛肉膏蛋白胨培养基、无菌水 环境条件：营养琼脂平板在工作台上暴露15分
钟，每个平板上生长得到的菌落不超过15 个——无菌室
1、采样： 四、实验步骤
1）自来水：先将自来水龙头用酒精灯火焰灼 烧灭菌，再开水龙头使水流5min，以灭菌 采样瓶接取水样备用。
(2)池水、河水或湖水等地面水源水：在距岸边5米处， 取距水面10—15cm的水样，先将灭菌的带塞的采样瓶， 瓶口向下浸入水层中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水 即流入瓶中，盛满后，将平塞盖好，从水中取出，若不 能在2h内检测的，需放入4℃冰箱中保存。
平板菌落计数法的优点：
是能测出样品中的活菌数。此法常用 于某些成品和生物制品检定以及食品、水 源的污染程度的检定等。
缺点：
手续较繁，而且测定值常受各种因素 的影响。
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空气微生物的检测
1m3空气中细菌的总数：
C=
1000×50 N At
C——1m3空气中细菌的总数 N——平皿中平均菌落数 A——平皿的底面积cm2
1、样品充分混匀，稀释时一个稀释度要换一支无 菌移液管（放菌液时 吸管尖不要碰到液面
2、由于细菌易吸附玻璃器皿表面，菌液加入后应 尽快倒培养基，立即摇匀；
3、倾注平板时的培养基温度冷却至45℃左右。 4、计数时，30―300个菌落的稀释度计算每毫升
的菌数最为合适 5、同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊
t——平皿在空气中暴露的时间（min）
作业
对自己喜欢的某一食品进行微生物检验设计。 要点： ➢食品相关记录(名称、厂家、商店等) ➢所用物品清单 ➢工作计划（人员安排、进度安排等） ➢报告格式（表格设计及报告书等）
混合倒平板操作法示意图
2 水样的10倍稀释
10-3
10-4
10-5
第一步 稀释 水样
第二步： 接种平板
10-6
注意：稀释 度的选择
第三步： 培养
稀释度过低，菌 可以计数，但数量 数量合适，统计 数量太少，误差 落密集无法计数 过多，费时费力 计算，作为结果 大，不作计数
第四步 计 数
细菌数量=？ 细菌数量=同一稀释度的平均菌落数×稀释倍数 例如： 10-5 的平均菌落数是125个 细菌数量=125× 105 =1.25 × 107个/ml
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菌落计数方法及原则：
1）若只有一个稀释度的平均菌落数在30-300范围 时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。
2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在 30~300之间，则视二者之比值来决定，若 其比值小于2应报告两者的平均数。若大于 或等于2则报告其中较小的菌落总数。
3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300， 则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释 倍数报告之