紫外分光光度法测定未知物

紫外分光光度法测定未知物

1.仪器

1.1紫外分光光度计（UV-1801型）；配石英比色皿（1cm）2个

1.2容量瓶（100mL）：10个；容量瓶（250mL）1个

1.3吸量管（10mL、5mL）：各1支

1.4移液管（20mL、25mL、50mL）：各1支

2.试剂

2.1标准溶液（1mg/mL）：维生素C、水杨酸、苯甲酸、山梨酸、邻二氮菲分别配成1mg/mL的标准溶液，作为储备液。

2.2未知液：浓度约为（40~60ug/mL）。（其必为给出的五种物质之一）

3.实验操作

3.1比色皿配套性检查

石英比色皿装蒸馏水，以一只比色皿为参比，在测定波长下调节透射比为100%，测定其余比色皿的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用。

3.2未知物的定性分析

将五种标准储备液均稀释成10ug/mL的试液（配制方法由选手自定）。以蒸馏水为参比，于波长200~350nm范围内扫描五种溶液，绘制吸收曲线，根据所得到的吸收曲线对照标准谱图，确定被测物质的名称，并依据吸收曲线确定测定波长。五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参考考考考附图附图附图附图。。。。

3.3未知物定量分析

根据未知液吸收曲线上测定波长处的吸光度，确定未知液的稀释倍数，并配制待测溶液3份，进行平行测定。

推荐方法

3.3.1维生素C含量的测定：准确吸取1mg/mL的维生素C标准储备液50.00mL，在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为200ug/mL）。再分别准确移取1、2、4、6、8、10mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容（浓度分别为2、4、8、12、16、20 ug/mL）。准确移取20.00mL维生素C未知液，在100mL容量瓶中定容，于

最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度。由标准曲线上查得未知液的浓度。

3.3.2苯甲酸含量的测定：准确吸取1mg/mL的苯甲酸标准储备液25.00mL，在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为100 ug/mL）。再分别准确移取1、2、4、6、8、10mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容（浓度分别为1、2、4、6、8、10ug/mL）。准确移取10.00mL苯甲酸未知液，在100mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度。由标准曲线上查得未知液的浓度。

3.3.3水杨酸含量的测定：准确吸取1mg/mL的水杨酸标准储备液50.00mL，在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为200ug/mL）。再分别准确移取1、2、4、6、8、10mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容，（浓度分别为2、4、8、12、16、20 ug/mL）。准确移取20.00mL水杨酸未知液，在100mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度。由标准曲线上查得未知液的浓度。

3.3.4山梨酸含量的测定准确吸取1mg/mL的山梨酸标准储备液25.00mL，在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为100 ug/mL）。再分别准确移取1、2、3、4、5mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容（浓度分别为1、2、3、4、5ug/mL）。准确移取5mL山梨酸未知液，在100mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度。由标准曲线上查得未知液的浓度。

3.3.5邻二氮菲含量的测定准确吸取1mg/mL的邻二氮菲标准储备液25.00mL，在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为100 ug/mL）。再分别准确移取1、2、3、4、5mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容（浓度分别为1、2、3、4、5ug/mL）。准确移取5mL邻二氮菲未知液，在100mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度。由标准曲线上查得未知液的浓度。4、结果计算根据未知液的稀释倍数，可求出样品溶液的浓度。

T6新世纪紫外可见分光光度计操作规程

一、开机自检：打开仪器主机电源，仪器开始初始化；约3分钟时间初始化完成。初始化完成后，仪器进入主菜单界面。

二、进入光度测量状态：按键，进入光度测量界面。

三、进入测量界面：按键进入样品测定界面。

四、设置测量波长：按键，输入测量的波长，按键确认，仪器将自动调整波长。

五、进入设置参数：按键进入参数设定界面，按键使光标移动到“试样设定”，按键确认，进入设定界面。

六、设定使用样品池个数：按键使光标移动到“使用样池数”，按键循环选择需要使用的样品池个数。

七、样品测量：按键返回到参数设定界面，再按键返回到光度测量界面。在1号样品池内放入空白溶液，2号池内放入待测样品。关闭好样品池盖后按键进行空白校正，再按键进行样品测量。如果需要测量下一个样品，取出比色皿，更换为下一个测量的样品按键既可读数。如果需要更换波长，可以直接按键，调整波长。如果每次使用的比色皿数量是固定个数，下一次使用仪器时可以跳过第五、六步骤直接进入样品测量。注意注意注意注意：：：：更换波长后必须重新按更换波长后必须重新按更换波长后必须重新按更换波长后必须重新按进行空白校正进行空白校正进行空白校正进行空白校正。。。。

八、结束测量：测量完成后记录数据, 退出程序或关闭仪器后测量数据将消失。确保已从样品池中取出所有比色皿，清洗干净以便下一次使用。按键直到返回到仪器主菜单界面后再关闭仪器电源.

紫外分光光度法测定水杨酸的含量

1.仪器

1.1紫外分光光度计（T6）

1.2石英比色皿（1cm）：2个

1.3容量瓶（100mL）：7只

1.4吸量管（1 mL、2 mL、5 mL、10mL）：各1只

2.试剂

2.1水杨酸标准溶液（1mg/mL）;

2.2未知液：浓度约为50~55。

3.实验操作

3.1吸收池配套性检查石英吸收池在220nm装蒸馏水，以一个吸收池为参比，调节为100%，测定另一吸收池的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用，记录第二比色皿的吸光度值作为校正值。

3.2吸收曲线的绘制准确吸取未知液5mL，于100 mL容量瓶中配成浓度约为10的待测溶液，以蒸馏水为参比，于波长200~350nm范围内测定吸光度，作吸收曲线，从曲线上查得最大吸收波长（230nm和297nm附近）。

3.3标准曲线的绘制准确吸取水杨酸标准溶液若干体积，稀释成一系列不同浓度的标准溶液（0~16），于最大吸收波长分别测出其吸光度。然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制出标准曲线。

3.4样品测定由步骤3.2的测定结果，从标准曲线查出样品的浓度。

4.结果计算

根据未知液的稀释倍数，可求出未知液的浓度。