紫外分光光度法测定未知物

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紫外可见分光光度计基本原理

应用
定量分析——标准曲线法
最大吸收波长
在一定波长下，测定某物质的标准系列溶液的吸光度做标准曲线，然后测定样品溶液的吸光度值，根据所测吸光度，求出所测溶液浓度。
吸
AX
光
度
波长范围
CX
应用
定量分析——对照法
A标 = K c标 l Ax = K cx l
cx = Ax C标
A0
谢谢！
称为电荷迁移吸收光谱。
例如:某些取代芳烃可产生这种分子内电荷迁移跃迁吸收带。谱带较宽，吸收强度较大， εmax可大于104
无机化合物电子迁移跃迁吸收光谱配位场跃迁
收能量后向σ*反键跃迁，这种跃迁可以吸收波长在200nm左右。
n
π *跃迁：含有杂原子不饱和基团，如C=O,C=S,-N=N-等化合物，这种跃
迁一般处于近紫外区（200 ～ 400nm）。
电荷迁移跃迁：用电磁辐射照射化合物时，电子从给予体向与接受体相联系
的轨道上跃迁。因此，电荷迁移跃迁实质是一个内氧化还原的过程，而相应的吸收光谱
吸光物质的溶液时，在入射光的波长强度以及溶液的温度等因素保持不变的情况下，该溶液的吸光度A与溶液的浓度c及液层厚度l的乘积成正比关系，称为朗伯比尔定律。
A=K·c·l
适用条件：单色光、稀溶液
朗伯比尔定律
A=K·c·l K—比例常数，与入射光的波长、溶液的性质、
液层厚度以及温度有关。 c—吸光物质的浓度。 l—透光液层厚度。
定义
紫外-可见分光光度法（ultraviolet and visible spectrophotometry ;
UV- vis ）是研究物质在紫外-可见光区（200 ～ 800nm）分子吸收光谱的分析方法。

1.紫外分光光度法测定未知样含量-方案+公式+图

紫外分光光度法测定未知样含量(含方案、公式、标准误吸收光谱图)1.仪器1.1紫外可见分光光度计(T6型)；1.2石英吸收池(1cm)：2只；1.3比色管（50mL）10支；1.4吸量管5mL：2支。

2.试剂2.1苯甲酸标准溶液(0.1mg/mL)；2.2未知液：浓度约为40～60ug/mL。

3.实验操作3.1吸收曲线的绘制3.1.1标准苯甲酸吸收曲线绘制在一支50mL比色管中由2.1配制成浓度为0～10ug/mL范围内的溶液，以水定容，并摇匀。

于波长200～350nm范围内每间隔10nm测定一次吸光度，在最大吸收波长附近间隔5 nm测定一次测定吸光度，再次根据最大吸收波长，附近间隔1 nm测定一次吸光度，绘制吸收曲线，从曲线上确定苯甲酸的最大吸收波长（作为定量测定波长）。

附图：苯甲酸的吸收曲线。

3.1.2标准水杨酸吸收曲线绘制在一支50mL比色管中由2.1配制成浓度为0～10ug/mL范围内的溶液，以水定容，并摇匀。

于波长200～350nm范围内每间隔10nm测定一次吸光度，在最大吸收波长附近间隔5 nm测定一次吸光度，再次根据最大吸收波长附近，间隔1 nm测定一次吸光度，绘制吸收曲线，从曲线上确定水杨酸的最大吸收波长（作为定量测定波长）。

附图：水杨酸吸收曲线。

3.1.3未知液吸收曲线的绘制准确吸取含苯甲酸的未知液若干体积（5mL）于一支50mL比色管中，以水定容并摇匀。

以蒸馏水为参比，于波长200～350nm范围内每间隔10nm测定一次吸光度，在最大吸收波长附近间隔5 nm测定一次吸光度，再次根据最大吸收波长，附近间隔1 nm测定一次吸光度，绘制吸收曲线。

（观察3.1.1和3.1.2各自所得吸收曲线有什么相同之处？这说明了什么问题？对于一个未知样品如何利用分光光度法进行定性？）附图：未知液的吸收曲线。

3.2吸收池配套性检查石英吸收池装蒸馏水，于定量测定波长处，以一个吸收池为参比，测定并记录另一吸收池的吸光度（其偏差应小于0.5%，可配成一套使用，否则更换）作为校正值。

紫外可见分光光度法

紫外可见分光光度法摘要：本文介绍了紫外可见分光光度法的发展、原理、特点及应用，并列举多项实例说紫外可见分光光度法在各个领域中的应用。

关键词有机分析吸收光谱紫外可见分光光度法1．发展人们在实践中早已总结出不同颜色的物质具有不同的物理利化学性质。

根据物质的这些特性可对它进行有效的分析和判别。

由于颜色本就惹人注意，根据物质的颜色深浅程度来对物质的含量进行估计，可追溯到古代及中世纪。

1852年，比尔(Beer)参考了布给尔(Bouguer) 1729年和朗伯(Lambert)在1760年所发表的文章，提出了分光光度的基本定律，即液层厚度相等时，颜色的强度与呈色溶液的浓度成比例，从而奠定了分光光度法的理论基础，这就是著名的比尔朗伯定律。

1854年，杜包斯克(Duboscq)和奈斯勒(Nessler)等人将此理论应用于定量分析化学领域，并且设计了第一台比色计。

到1918年，美国国家标准局制成了第一台紫外可见分光光度计。

此后，紫外可见分光光度计经不断改进，又出现自动记录、自动打印、数字显示、微机控制等各种类型的仪器，使光度法的灵敏度和准确度也不断提高，其应用范围也不断扩大。

紫外可见分光光度法从问世以来，在应用方面有了很大的发展，尤其是在相关科学发展的基础上，促使分光光度计仪器的不断创新，功能更加齐全，使得光度法的应用更拓宽了范围。

目前，分光光度法己为工农业各个部门和科学研究的各个领域所广泛采用，成为人们从事生产和科研的有力测试手段。

我国在分析化学领域有着坚实的基础，在分光光度分析方法和仪器的制造方面国际上都己达到一定的水平。

2．原理物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。

由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据关学科发展的基础上，促使分光光度计仪器的不断创新，功能更加齐全，使得光吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。

仪器分析紫外分光光度计习题答案

第4章紫外可见分光光度法-习题解答思考题1．什么是选择性吸收？它与物质的分子结构有什么关系？【答】当对某一物质从长波到短波进行扫描时，光波能量νh E =符合某一价电子的量子化能级差基态激发态E E E -=∆时，该频率ν（或波长λ）的光则被吸收，而其它波长的光不被吸收的现象，称为光的选择性吸收。

被选择性吸收的某一波长光的大小反映了某一跃迁所需的量子化能级差的大小，与跃迁类型有关，即与组成分子的元素和化学键类型有关，所以选择性吸收的波长是物质分子结构的反映。

2．紫外吸收光谱有什么特征？紫外光谱说明什么？【答】（1）紫外吸收光谱是由于分子的价电子能级跃迁引起的，是带状光谱。

（2）由于分子的价电子能级跃迁只有*→σσ、*→σn 、*→ππ、*→πn 四种基本跃迁类型，加上电荷迁移跃迁和配位场跃迁两种变化形式，所以分子的紫外吸收光谱一般吸收峰的数量比较少，而且各种能级跃迁的能量差别不是很大，各吸收带之间常常有重叠而不易区分的现象，特征性不是很强。

（3）紫外光谱的三大要素为吸收峰的位置（横坐标）、强度（纵坐标）和光谱形状。

吸收峰在横坐标的位置和形状为化合物定性的指标，而峰的强度为化合物定量的指标；基本参数是最大吸收峰的峰的位置max λ和相应吸收带的强度max ε。

（4）通过吸收峰位置可判断产生吸收带化合物的类型和骨架结构；吸收峰的强度有助于K 带、B 带和R 带灯吸收带类型的识别；峰的形状也有助于化合物类型的判断。

总之，化合物的紫外光谱是化合物元素组成、化学键、共轭与骨架情况的部分结构信息的反映。

3．为什么说Beer 定律只适用于单色光？【答】从吸收光谱的三大要素可知，吸收峰的强度是化合物定量的依据。

在一个吸收峰的不同波长处相对应的吸收强度是不相同，即它们的吸光系数不相同，在最大波长max λ处的吸光系数max ε最大，两侧均逐渐变小，所以可以认为吸光系数是波长的函数：)(λεf =，但在某一波长处——也就是单色光的条件下，吸光度系数是某一确定的常数值，这时才有化合物的吸光度与浓度成正比的关系式kc cl A ==ε成立。

紫外可见分光光度法与分子荧光光度法的比较

紫外可见分光光度法与分子荧光光度法的比较定义：紫外可见分光光度法：根据被测量物质分子对紫外-可见波段范围（150～800纳米）单色辐射的吸收或反射强度来进行物质的定性、定量或结构分析的一种方法；分子荧光光度法：利用物质吸收较短波长的光能后发射较长波长特征光谱的性质，对物质定性或定量分析的方法。

可以从发射光谱或激发光谱进行分析。

组成部件：紫外可见分光光度法：①辐射源。

必须具有稳定的、有足够输出功率的、能提供仪器使用波段的连续光谱，如钨灯、卤钨灯（波长范围350～2500纳米），氘灯或氢灯（180～460纳米），或可调谐染料激光光源等。

②单色器。

它由入射、出射狭缝、透镜系统和色散元件（棱镜或光栅）组成，是用以产生高纯度单色光束的装置，其功能包括将光源产生的复合光分解为单色光和分出所需的单色光束。

③试样容器，又称吸收池。

供盛放试液进行吸光度测量之用，分为石英池和玻璃池两种，前者适用于紫外到可见区，后者只适用于可见区。

容器的光程一般为 0.5～10厘米。

④检测器，又称光电转换器。

常用的有光电管或光电倍增管。

⑤显示装置。

这部分装置发展较快。

较高级的光度计，常备有微处理机、荧光屏显示和记录仪等，可将图谱、数据和操作条件都显示出来。

分子荧光光度法：激发光源、单色器、样品池、检测器和记录显示部分。

1. 光源能发射紫外到可见区波长的光、强度大、稳定。

常用的有溴钨灯、高压汞灯、氙灯。

2. 单色器，两个单色器。

3. 样品池通常用石英制成。

4. 检测器：光电倍增管。

常见类型：紫外可见分光光度法：1.单光束。

简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度，一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高的稳定性。

2.双光束自动记录，快速全波段扫描。

可消除光源不稳定、检测器灵敏度变化等因素的影响，特别适合于结构分析。

仪器复杂，价格较高。

3.双波长。

将不同波长的两束单色光(λ、λ1 ) 快束交替通过同一吸收池而后到达检测器。

紫外可见分光光度法简介

化合物
共轭双键数 max / nm
m ax
CH2 CH2
1
195
5000
C H 2 C H C O O H 2
200
10000
H 2 CC HC HC H 2 2
217
21000
CH3 CH CH2 COOH3
254
25000
H (C H C H )3H3
258
a
35000
10
另有一些基团，本身并不产生吸收峰，但与生色团共存于同一分子时，可引起吸收峰的位移和吸收强度的改变，这些基团称为助色团。如苯环的一个氢原子被一些基团取代后，苯环在254nm处的吸收带的最大吸收位置和强度就会改变。
吸光度: 为透光度倒数的对数，用A表示，即
A=lg1/T=lgI0/It
a
19
二、朗伯-比尔定律
朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即
A= κ cl
式中比例常数κ与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。c为吸光物质浓度，l为透光液层厚度。
a
5
在分子发生电子能级跃迁的同时，总是伴随着振动能级和转动能级的跃迁。所以，在分子的电子光谱中，包含有不同振动能级跃迁产生的若干吸收谱带和转动能级跃迁产生的若干吸收谱
线不。出一电般子情光况谱下中由振于动能E 级e和转动EV 能级跃E 迁r所,分产辨
生的谱线结构，观察到的只是这些谱线展宽后合并在一起形成的较宽的吸收带。所以通常又将分子的电子光谱称为带状光谱。
生色团化合物
羰基
H3C C
溶剂
正己烷
CH3

紫外分光光度法测定有机物实验方法

紫外分光光度法测定有机物实验方法紫外分光光度法测定未知物1.仪器1.1 紫外分光光度计（T6）；配石英比色皿（1cm）：4 个；1.2容量瓶（100mL、50mL）:各10 只；1.3吸量管（1mL、2mL 5mL 10mL）:各1 支；1.4移液管（20mL、25mL 50mL）:各1 支。

2.试剂2.1标准溶液（1mg/mL）:从维生素C水杨酸、糖精钠、苯甲酸四种物质中任取其中两种，分别配成1mg/mL的标准溶液，作为储备液。

2.2未知液：浓度约为40〜60ug/mL。

其必为给出的两种标准物质中的一种。

3. 实验操作3.1吸收池配套性检查石英吸收池在220nm装蒸馏水，以一个吸收池为参比，调节T为100%测定其余吸收池的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用，记录其余比色皿的吸光度值作为校正值。

说明:参赛选手可以自由选择使用比色皿的个数（大赛提供4 个）。

3.2未知物的定性分析将两种标准储备液和未知液均配成浓度约为10ug/mL的待测溶液（配制方法由选手自定）。

以蒸馏水为参比，于波长200〜350nm范围内测定三种溶液吸光度，并作吸收曲线。

根据吸收曲线的形状确定未知物，并从曲线上确定最大吸收波长作为定量测定时的测量波长。

四种标准物质溶液的吸收曲线参见附图。

3.3未知物的定量分析根据未知液吸收曲线上最大吸收波长处的吸光度，确定未知液的稀释倍数，并配制待测溶液。

合理配制标准系列溶液（推荐:标准储备液先稀释10 倍（100ug/mL），然后再配制成所需浓度），于最大吸收波长处分别测出其吸光度。

然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

根据待测溶液的吸光度，从标准曲线上查出未知样品的浓度。

未知样要平行测定两次。

推荐方法3.3.1维生素C含量的测定：准确吸取1mg/mL的维生素C标准储备液10ml，在100mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为100ug/mL）。

再分别准确移取0、1、2、4、6、8、10mL上述溶液，在50mL容量瓶中定容（浓度分别为0、2、4、8、12、16、20ug/mL）。

分析化学课后习题答案

第十章紫外－可见分光光度法1.名词解释:吸光度、透光率、吸光系数(摩尔吸光系数、百分吸光系数)、发色团、助色团、红移、蓝移。

2.什么叫选择吸收？它与物质的分子结构有什么关系？物质对不同波长的光吸收程度不同,往往对某一波长(或波段)的光表现出强烈的吸收。

这时称该物质对此波长(或波段)的光有选择性的吸收。

由于各种物质分子结构不同,从而对不同能量的光子有选择性吸收,吸收光子后产生的吸收光谱不同,利用物质的光谱可作为物质分析的依据。

3.电子跃迁有哪几种类型？跃迁所需的能量大小顺序如何？具有什么样结构的化合物产生紫外吸收光谱？紫外吸收光谱有何特征？电子跃迁类型有以下几种类型:σ→σ*跃迁,跃迁所需能量最大; n →σ*跃迁,跃迁所需能量较大,π→π*跃迁,跃迁所需能量较小;n→ π*跃迁,所需能量最低。

而电荷转移跃迁吸收峰可延伸至可见光区内,配位场跃迁的吸收峰也多在可见光区内。

分子结构中能产生电子能级跃迁的化合物可以产生紫外吸收光谱。

紫外吸收光谱又称紫外吸收曲线,就是以波长或波数为横坐标,以吸光度为纵坐标所描绘的图线。

在吸收光谱上,一般都有一些特征值,如最大吸收波长(吸收峰),最小吸收波长(吸收谷)、肩峰、末端吸收等。

mbert-Beer定律的物理意义就是什么？为什么说Beer定律只适用于单色光？浓度C与吸光度A线性关系发生偏离的主要因素有哪些？朗伯－比耳定律的物理意义:当一束平行单色光垂直通过某溶液时,溶液的吸光度A与吸光物质的浓度c及液层厚度l成正比。

Beer定律的一个重要前提就是单色光。

也就就是说物质对单色光吸收强弱与吸收光物质的浓度与厚度有一定的关系。

非单色光其吸收强弱与物质的浓度关系不确定,不能提供准确的定性定量信息。

浓度C与吸光度A线性关系发生偏离的主要因素(1)定律本身的局限性:定律适用于浓度小于0、01 mol/L的稀溶液,减免:将测定液稀释至小于0、01 mol/L测定(2)化学因素:溶液中发生电离、酸碱反应、配位及缔合反应而改变吸光物质的浓度等导致偏离Beer定律。

仪器分析实验

实验1：紫外分光光度法测定芳香族化合物一、实验目的了解紫外吸收光谱在有机化合物结构分析中的应用，籍注“标准吸收光谱鉴定未知物。

学习有机物的定量分析方法。

二、基本原理许多有机物在紫外区有特征吸收光谱，从而可用来进行有机物的鉴定及结构分析（主要用于鉴定有机物的官能团）。

此外，还可对同分异构体进行鉴别，对具有π键电子及共扼双键的化合物特别灵敏，在紫外光区有极强烈的吸收谱。

该法在有机物分析中主要可进行如下分析：①纯度检查。

②未知样的鉴定。

③互变异构体的判别。

④分子结构的推测。

⑤定量测定。

三、仪器试剂仪器：紫外可见分光光度计，1cm石英皿试剂：萘-乙醇溶液，10μg/mL、1μg/mL，苯酚，环己烷四、实验步骤1.未知物鉴定（苯酚）取约0.1mg的苯酚晶体，溶于5～10mL环己烷中。

以环己烷为参比，用1cm石英比色皿测定215-290nm波长的吸收光谱。

(注意:每隔0.2nm测定一个点,其中波峰处0.1nm测一个点，所有波长处测定前都应先以参比调整零点。

)2.萘的测定以无水乙醇为参比溶液，用1cm石英皿对浓度1μg/mL的萘乙醇溶液测其在210-230nm的紫外区间的吸收光谱（间隔2nm），准确找出最大吸收峰位置。

用10mL容量瓶6支，分别配制0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.5μg/mL的萘标准溶液各10mL。

在最大吸收波长处分别测定各标准溶液的吸光度，浓度由低向高记录所测定的吸光度。

测定未知样品的吸光度，注意测定条件应与标准一致。

五、实验数据及处理1.未知物的鉴定：记录不同波长及相应吸光度数据。

绘制吸收曲线，并与标准吸收光谱进行比较，以确定未知物的成分。

2．萘的定量分析：记录萘-乙醇溶液的波长—吸光度数据，绘制萘的吸收光谱，确定最大吸收峰波长。

记录萘系列标准溶液及未知试样的吸光度数据，绘制萘-乙醇标准溶液的标准工作曲线，由标准曲线查得样品的浓度。

实验2 原子吸收分光光度法测定饮用水中的钙一、实验目的掌握以原子吸收分光光度法进行定量测定的原理、方法，并了解原子吸收分光光度计的大致结构及使用方法。

1.紫外分光光度法测定未知样含量-方案+公式+图

2.相关系数
(x i (x i (y i
x y
2
( x )2 / n;
x )(y i y ) y )2
2
xy x y ( y ) / n;
2
/ n;

Lxy Lxx Lyy
3.相对标准偏差：按照未知稀释液的 A 校正计算相对标准偏差 RSD
5.未知溶液中待测组分的含量：根据未知液的稀释倍数，可求出未知溶液中待测组分的含量。
2
苯甲酸吸收曲线(10ug/mL) 1.600 1.400 1.200
吸光度
1.000 0.800 0.600 0.400 0.200 0.000 200 205 210 215 220 225 230 235 240 245 250 255 260 265 270 275 280 285 290 295 300 305 310 315 320 325 330 335 340 345 350 波长
附图-3
波长
附图
水杨酸吸收曲线
4
33校准曲线的绘制及未知样含量的测定准确移取与未知样相同的物质的标准溶液若干体积于50ml比色管中以水定容制成一系列相同体积不同浓度的标准溶液010ugml在最大吸收波长处以水为参比测定各自吸光度
紫外分光光度法测定未知样含量 (含方案、公式、标准误吸收光谱图)
1.仪器 1.1 紫外可见分光光度计(T6 型)； 1.2 石英吸收池(1cm)：2 只； 1.3 比色管（50mL）10 支； 1.4 吸量管 5mL：2 支。 2.试剂 2.1 苯甲酸、水杨酸标准溶液(0.1mg/mL)； 2.2 未知液：浓度约为 40～60ug/mL。 3.实验操作 3.1 吸收曲线的绘制 3.1.1 标准苯甲酸吸收曲线绘制在一支 50mL 比色管中由 2.1 配制成浓度为 0～10ug/mL 范围内的溶液，以水定容，并摇匀。于波长 200～350nm 范围内每间隔 10nm 测定一次吸光度，在最大吸收波长附近间隔 5 nm 测定一次测定吸光度，再次根据最大吸收波长，附近间隔 1 nm 测定一次吸光度，绘制吸收曲线，从曲线上确定苯甲酸的最大吸收波长（作为定量测定波长）。附图：苯甲酸的吸收曲线。 3.1.2 标准水杨酸吸收曲线绘制在一支 50mL 比色管中由 2.1 配制成浓度为 0～10ug/mL 范围内的溶液，以水定容，并摇匀。于波长 200～350nm 范围内每间隔 10nm 测定一次吸光度，在最大吸收波长附近间隔 5 nm 测定一次吸光度，再次根据最大吸收波长附近，间隔 1 nm 测定一次吸光度，绘制吸收曲线，从曲线上确定水杨酸的最大吸收波长（作为定量测定波长）。附图：水杨酸吸收曲线。 3.1.3 未知液吸收曲线的绘制准确吸取含苯甲酸的未知液若干体积（5mL）于一支 50mL 比色管中，以水定容并摇匀。以蒸馏水为参比，于波长 200～350nm 范围内每间隔 10nm 测定一次吸光度，在最大吸收波长附近间隔 5 nm 测定一次吸光度，再次根据最大吸收波长，附近间隔 1 nm 测定一次吸光度，绘制吸收曲线。（观察 3.1.1 和 3.1.2 各自所得吸收曲线有什么相同之处？这说明了什么问题？对于一个未知样品如何利用分光光度法进行定性？）附图：未知液的吸收曲线。 3.2 吸收池配套性检查石英吸收池装蒸馏水，于定量测定波长处，以一个吸收池为参比，测定并记录另一吸收池的吸光度（其偏差应小于 0.5%，可配成一套使用，否则更换）作为校正值。 3.3 校准曲线的绘制及未知样含量的测定准确移取与未知样相同的物质的标准溶液若干体积于 50mL 比色管中，以水定容，制成一系列相同体积不同浓度的标准溶液（0～10ug/mL），在最大吸收波长处，以水为参比，测定各自吸光度。由实验数据计算回归方程及相关系数，以浓度（ρ/ ug· mL-1）为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制校准曲线。在相同条件下，测定样品稀释液（配制方法同 3.1.2）的吸光度，代入回归方程计算出样品稀释液的浓度。试样平行测定三份。 4.结果计算根据未知液的稀释倍数，求出未知溶液中水杨酸的含量。

紫外-可见分光光度法测定未知物（中职）

紫外-可见分光光度法测定未知物(中职)一、仪器 1．紫外可见分光光度计(UV-1800PC-DS)；配1cm 石英比色皿2个（比色皿可以自带）；2．容量瓶：100mL10个；50mL10个；3．吸量管：10mL ，6支，二、试剂1．标准溶液：选择水杨酸、苯甲酸、磺基水杨酸、1-10邻菲啰啉、维生素c 五种标准试剂溶液中的三种。

2．未知液：三种标准溶液中的一种。

三、实验操作1．吸收池配套性检查石英吸收池在220nm 装蒸馏水，以一个吸收池为参比，调节τ为100%，测定其余吸收池的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用，记录其余比色皿的吸光度值作为校正值。

2．未知物的定性分析将三种标准溶液和未知液配制成约为一定浓度的溶液。

以蒸馏水为参比，于波长200～350nm 范围内测定溶液吸光度，并作吸收曲线。

根据吸收曲线的形状确定未知物，并从曲线上确定最大吸收波长作为定量测定时的测量波长。

3. 标准工作曲线配制分别准确移取一定体积的标准溶液于所选用的容量瓶中，以蒸馏水稀释至刻线，摇匀。

根据未知液吸收曲线上最大吸收波长，以蒸馏水为参比，测定吸光度。

然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

4．未知物的定量分析确定未知液的稀释倍数，并配制待测溶液于所选用的容量瓶中，以蒸馏水稀释至刻线，摇匀。

根据未知液吸收曲线上最大吸收波长，以蒸馏水为参比，测定吸光度。

根据待测溶液的吸光度，确定未知样品的浓度。

未知样要平行测定3次。

四、结果处理根据未知溶液的稀释倍数，求出未知物的含量。

计算公式：0X C C n =⨯0C ——原始未知溶液浓度，μg /mL ；X C ——查出的未知溶液浓度，μg/mL ；n ——未知溶液的稀释倍数。

紫外分光光度法-伍德沃德规则

环外双键
5
max
双键上的碳取代基
5
增量 Cl、Br
17
OH、OR
OCOR
SR
NR2
214
+39
30
5
5
5
6
0
30
60
注： A：当两种情形的二烯体系同时存在时，选择波长较长的为其母体系统
B：仅考虑连接在共轭体系碳上的取代基 C：环外双键：紧靠环的双键；仅考虑共轭体系中的环外双键
伍德沃德（Woodward）规则
基本值 =
m = mβ = mγ = mδ = e= n= r=
基本值 =
m = mβ = mγ = mδ = e= n= r=
O
基本值 = m = mβ = mγ = mδ = e= n= r=
O
基本值 = m = mβ = mγ = mδ = e= n= r=
10
—OH
35
CH3COO—
6
OR（烷氧基）
35
—Cl
15
—Br
25
—SR
—
—NH2 溶剂
己烷/环己烷
— 乙醚
校正值
+11
+7
取代位
β 12 30 6 30 12 30 85 93 二氧六环 +5
γ 18
6 17 — — — — 氯仿 +1
或更远 18 50 6 31 — — — — 水 -8
B、伍德沃德（Woodward）规则应用于共轭烯酮
5、有机化合物紫外最大吸收波长的推算伍德沃德（Woodward）规则和斯科特（Scott）规则
采用其他物理方法或化学方法推测出未知物有几种可能结

紫外分光光度法测定未知物

紫外分光光‎度法测定未‎知物1.仪器1.1紫外分光‎光度计（UV-1801型‎）；配石英比色‎皿（1cm）2个1.2容量瓶（100mL‎）：10个；容量瓶（250mL‎）1个1.3吸量管（10mL、5mL）：各1支1.4移液管（20mL、25mL、50mL）：各1支2.试剂2.1标准溶液‎（1mg/mL）：维生素C、水杨酸、苯甲酸、山梨酸、邻二氮菲分‎别配成1m‎g/mL的标准‎溶液，作为储备液‎。

2.2未知液：浓度约为（40~60ug/mL）。

（其必为给出‎的五种物质‎之一）3.实验操作3.1比色皿配‎套性检查石英比色皿‎装蒸馏水，以一只比色‎皿为参比，在测定波长‎下调节透射‎比为100‎%，测定其余比‎色皿的透射‎比，其偏差应小‎于0.5%，可配成一套‎使用。

3.2未知物的‎定性分析将五种标准‎储备液均稀‎释成10u‎g/mL的试液‎（配制方法由‎选手自定）。

以蒸馏水为‎参比，于波长20‎0~350nm‎范围内扫描‎五种溶液，绘制吸收曲‎线，根据所得到‎的吸收曲线‎对照标准谱‎图，确定被测物‎质的名称，并依据吸收‎曲线确定测‎定波长。

五种标准物‎质溶液的吸‎收曲线参五‎种标准物质‎溶液的吸收‎曲线参五种‎标准物质溶‎液的吸收曲‎线参五种标‎准物质溶液‎的吸收曲线‎参考考考考‎附图附图附‎图附图。

3.3未知物定‎量分析根据未知液‎吸收曲线上‎测定波长处‎的吸光度，确定未知液‎的稀释倍数‎，并配制待测‎溶液3份，进行平行测‎定。

推荐方法3.3.1维生素C‎含量的测定‎：准确吸取1‎m g/mL的维生‎素C标准储‎备液50.00mL，在250m‎L容量瓶中‎定容（此溶液的浓‎度为200‎u g/mL）。

再分别准确‎移取1、2、4、6、8、10mL上‎述溶液，在100m‎L容量瓶中‎定容（浓度分别为‎2、4、8、12、16、20 ug/mL）。

准确移取2‎0.00mL维‎生素C未知‎液，在100m‎L容量瓶中‎定容，于最大吸收‎波长处分别‎测定以上溶‎液的吸光度‎。

紫外分光光度法测定未知物

紫外分光光度法测定未知物1.仪器1.1紫外分光光度计（UV-1801型）；配石英比色皿（1cm）2个1.2容量瓶（100mL）：10个；容量瓶（250mL）1个1.3吸量管（10mL、5mL）：各1支1.4移液管（20mL、25mL、50mL）：各1支2.试剂2.1标准溶液（1mg/mL）：维生素C、水杨酸、苯甲酸、山梨酸、邻二氮菲分别配成1mg/mL的标准溶液，作为储备液。

2.2未知液：浓度约为（40~60ug/mL）。

（其必为给出的五种物质之一）3.实验操作3.1比色皿配套性检查石英比色皿装蒸馏水，以一只比色皿为参比，在测定波长下调节透射比为100%，测定其余比色皿的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用。

3.2未知物的定性分析将五种标准储备液均稀释成10ug/mL的试液（配制方法由选手自定）。

以蒸馏水为参比，于波长200~350nm范围内扫描五种溶液，绘制吸收曲线，根据所得到的吸收曲线对照标准谱图，确定被测物质的名称，并依据吸收曲线确定测定波长。

五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参考考考考附图附图附图附图。

3.3未知物定量分析根据未知液吸收曲线上测定波长处的吸光度，确定未知液的稀释倍数，并配制待测溶液3份，进行平行测定。

推荐方法3.3.1维生素C含量的测定：准确吸取1mg/mL的维生素C标准储备液50.00mL，在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为200ug/mL）。

再分别准确移取1、2、4、6、8、10mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容（浓度分别为2、4、8、12、16、20 ug/mL）。

准确移取20.00mL维生素C未知液，在100mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度。

由标准曲线上查得未知液的浓度。

3.3.2苯甲酸含量的测定：准确吸取1mg/mL的苯甲酸标准储备液25.00mL，在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为100 ug/mL）。

紫外吸收光谱法鉴定未知样及测定苯酚的含量

紫外吸收光谱法鉴定未知样及测定苯酚的含量一、实验目的1、掌握紫外光谱法进行物质定性、定量分析的基本原理；2、学习UV-1700型紫外--可见分光光度计的使用方法。

二、实验原理含有苯环和共轭双键的有机化合物在紫外区有特征吸收。

物质结构不同对紫外及可见光的吸收具有选择性。

其中，最大吸收波长/、摩尔吸收系数&及吸收曲线的形状不同是进行物质定性分析的依据。

本实验通过比较最大吸收波长和最大吸收波长与其所对应的吸光度的比值的一致性来鉴定化合物，我们首先从文献上查得这3种物质的紫外紫外吸收光谱数据，现如下表所列。

在紫外分光光度计上分别作3种物质水溶液（试液）的吸收光谱曲线，再由曲线上找出加ax与其对应的吸光度的比值，与表上所列数据进行对照，再比较加ax及吸光度比值是否一致，即可判断是何种物质。

由于在入max处吸光度A有最大值，在此波长下A随浓度的变化最为明显，方法的灵敏度最大，故在紫外分光光度计上作苯酚水溶液（试液）的吸收光谱曲线，再由曲线上找出入max据此对物质进行定量分析。

用紫外分光光度计进行定量分析时，若被分析物质浓度太低或太高，可使透光率的读数扩展10倍或缩小10倍，有利于低浓度或高浓度的分析，其方法原理是依据朗伯-比耳定律：A=g bc。

三、仪器与试剂（1）仪器：UV-1700型紫外-可见分光光度计；1cm石英吸收池2个；50mL比色管5支;5mL、10mL移液管各1支;25mL容量瓶6个；100mL、250mL烧杯各1个；吸耳球2个。

（2）试剂：苯酚标准溶液：100mg/L ;待测苯酚样品溶液（未知浓度）样品溶液：A液、B液、C液（浓度为3X10-3mol/L）四、实验内容与步骤1、定性分析(1)分析溶液的配制用移液管准确移取1mL未知液B液于25mL容量瓶中，用去离子水稀释至25mL刻度，摇匀。

取5个25mL的容量瓶，用移液管分别准确加入I.OmL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL浓度为1OOmg/L的苯酚标准溶液，用去离子水稀释至25mL刻度，摇匀。

4.紫外可见分光光度计检测

实验四紫外可见分光光度法测定亚甲基蓝浓度
一、实验目的
1初步熟悉可见-紫外分光光度仪的使用方法。

2熟悉测绘吸收曲线的方法。

3学会利用可见-紫外分光光度仪进行未知物的浓度分析。

二、实验原理
亚甲基蓝溶液在665nm下有最大光度吸收值，利用此性质绘制亚甲基蓝的吸收曲线，并测定未知亚甲基蓝溶液的浓度。

三、主要仪器与试剂
1.紫外可见分光光度计。

2.石英吸收池。

3.三水合亚甲基蓝。

四、实验步骤
1. 打开样品室的仓盖（预热20min），调节好测定波长。

2.配制亚甲基蓝溶液1mg/L、亚甲基蓝标准液2mg/L，亚甲基蓝标准液3mg/L，亚甲基蓝标准液4mg/L，亚甲基蓝标准液5mg/L。

3. 关上样品室仓盖，按100键至显示器显示100，再打开样品室仓盖，按0键归零。

4. 将空白比色皿放入样品池一号位，再依次放入装有不同浓度亚甲基蓝溶液的比色皿，盖好样品室仓盖进行测量，先测出亚甲基蓝标准液的吸光度，再测出亚甲基蓝未知液的吸光度。

五、数据处理
1.绘制出亚甲基蓝标准液的吸光度浓度吸收曲线，再利用吸光度浓度吸收曲线与测得的测出亚甲基蓝未知液的吸光度算出亚甲基蓝未知液的浓度度。