实验一 紫外分光光度法测定苯甲酸

实验一紫外分光光度法测定苯甲酸

一、实验目的

学习、了解紫外分光光度法原理

了解紫外分光光度计的结构和使用方法

二、实验原理

当辐射能（光）通过吸光物质时，物质的分子对辐射能选择性的吸收而得到的光谱称为分子吸收光谱。分子吸收光谱的产生与物质的分子结构、物质所在状态、溶剂和溶液的PH等因素有关。分子吸收光谱的强度与吸光物质的浓度有关。表示物质对光的吸收程度，通常采用“吸光度”这一概念来量度。

根据朗伯－比尔定律，在一定的条件下，吸光物质的吸光度A 与该物质的浓度C和液层厚度成正比。即A＝ LC

因此，只要选择一定的波长测定溶液的吸光度，即可求出该溶液浓度，这就是紫外－可见分光光度计的基本原理。

在碱性条件下，苯甲酸形成苯甲酸盐，对紫外光有选择性吸收，其吸收光谱的最大吸收波长为225nm。因此，采用紫外分光光度计测定苯甲酸在225nm处的吸收度就能进行定量分析。

三、仪器与主要试剂

TU-1810紫外可见分光光度计1cm石英比色皿

0.1M氢氧化钠溶液

苯甲酸(AR)

四、实验步骤

1、苯甲酸标准溶液的制备

称取苯甲酸(105℃烘干)100mg,用0.1M氢氧化钠溶液100ml溶解后,转入1000ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度.此溶液1ml含0.1mg 苯甲酸.

2、制作苯甲酸吸收曲线,选择最大吸收波长

①移取苯甲酸标准溶液4.00ml于50ml容量瓶中,用0.01M氢氧化钠溶液定容,摇匀,此溶液1ml含苯甲酸8ug.

以氘灯为光源,用0.01M氢氧化钠溶液作为参比,改变测量波长(从210-240nm)测量8ug/ml苯甲酸的吸光度.

②以波长为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制苯甲酸的紫外吸收曲线,并找出最大的吸收波长 (是否是225nm).

3﹑样品的测定

①取10.00ml苯甲酸样品,放入50ml容量瓶中,用0.01M氢氧化钠

溶液定容,摇匀.

②在上述曲线中所找到的最大吸收波长作为入射光波长,以0.01M 氢氧化钠溶液作为参比,在上述相同条件下测出苯甲酸标准溶液

(8ug/ml苯甲酸)和稀释好的样品的吸光度,分别记录.

五、分析结果计算

计算样品液中苯甲酸的浓度

C样/C标=A样/A标

六、思考题

1、比较TU-1810与722S型分光光度计机构有何异同点?

2、本实验为什么要使用石英比色皿?

3、使用紫外光源(氘灯)应注意些什么?