紫外分光光度法检测规程

紫外分光光度法检测规程

目的：

5. 程序：

5.1. 定义：紫外分光光度法是通过被测物质在紫外光区或可见光区的特定

波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的

方法，本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。

5.1.1. 定量分析通常选择在物质的最大吸收波长处测出吸收度，然后用对照品或百分吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定。

5.1.2. 对已知物质定性可用吸收峰波长或吸收度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或在杂质的吸收峰处化合物无吸收，则可用本法作杂质检查。

5.2. 原理：物质对紫外辐射的吸收是由于分子中原子的外层电子跃迁所产

生的，

因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区（200-400nm）或可见光区（400-850nm）产生吸收。通常使用的紫外分光光度计的工作波长范围为190—900nm，因此又称紫外—可见分光光度计。紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。朗伯·比耳（lambert—Beer）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为：

A=lg 1

=ECL T

式中：A 为吸收度

T 为透光率

E 为吸收系数

C 为溶液浓度

L 为光路长度

如溶液的浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为1cm，相应的吸收系数为百分吸收系数，以E１％

１ｃｍ

表示。若溶液的浓度（C）为摩尔浓度（mol/L），光路长度为1cm时，则相应吸收系数为摩尔吸收系数，以ε来表示。

5.3. 仪器：

5.3.1. 紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。

5.3.2.为了满足紫外—可见光区全波长范围的测定，仪器备有二种光源，

即氘灯和

碘钨灯，前者用于紫外区，后者用于可见光区。

5.3.3.单色器通常由进光狭缝、出光狭缝、平行光装置、色散元件、聚焦

透镜或反

射镜等组成，色散元件有棱镜和光栅二种，棱镜多用天然石英或熔融硅石制成，对200—400nm波长光的色散能力很强，对600nm以上波长的光色散能力较差，棱镜色散所得的光谱为非匀排光谱。光栅系将反射或透射光经衍射而达到色散作用，故常称为衍射光栅，光栅光谱是按波长作线性排列，故为匀排光谱，双光束仪器多用光栅为色散元件。

5.3.4. 检测器有光电管和光电倍增管二种。

紫外分光光度计依据其结构和测量操作方式的不同，可分为单光束和双光束分光光度计二类。单光束分光光度计有些仍为手工操作，即固定在某一波长，分别测量比较空白、样品或参比的透光率或吸收度，操作比较费时，用于绘制吸收光谱图时很不方便，但适用于单波长的含量测定。双光束分光光度计藉扇形镜交替切换光路，使光分成样品（S）和参比（R）两光束，并先后到达检测器，检测器信号经调制分离成两光路对应信号，信号的比值直接用记录仪记录，双光束分光光度计操作简单，测量快速，自动化程度高，但作含量测定时，为求准确起见，仍宜用固定波长测量方式。

5.4. 紫外分光光度计的检定：

5.4.1. 波长准确度：

5.4.1.1.波长准确度的允差范围：双光束光栅型紫外—可见分光光度计波长

准确度

允许误差为±0.5nm。单光束棱镜型350nm处±0.7nm，500nm处±2.0nm，700nm 处±4.8nm。

5.4.1.2.波长准确度检定方法：

5.4.1.2.1. 用低压汞灯检定，关闭光源，将汞灯（用笔式汞灯最方便）直接对准进光狭缝，如为双光束仪器，用单光束能量测定方式，采用波长扫描方式，扫描速度“慢”（如15nm/min），响应“快”，最小狭缝宽度（如0.1nm）量程0—100%，在200—800nm范围内单方向重复扫描3次，由仪器识别记录各峰值（若仪器无“峰检测”功能，必要时可对指定波长进行“单峰”扫描）。单光束仪器以751G型为例，可将选择开关放在×0.1位置，透光率读数放在100（或选择开关放在×1，透光率放在10），关小狭缝，打开光闸门，缓缓转动波长盘，寻找汞灯54

6.07nm峰出现的位置，若与波长读数不符，应调节仪器左侧准直镜的波长调整螺丝。如波长向短波长方向移动，应顺时针方向旋转波长调整螺丝，如向长波长方向移动，则应反时针方向旋转波长调整螺丝，调整好后，再按汞灯的下列谱线测试，记录每条谱线与仪器波长读数的误差。用于检定紫外—可见分光光度计的汞灯谱线波长：23

7.83、253.65、275.28、296.73、302.15、313.16、334.15、365.02、365.48、366.33 、404.66 （紫色）、435.83（蓝色）、546.07（绿色）、576.96（黄色）、579.07nm。

5.4.1.2.2.用仪器固有的氘灯检定：本法主要用于日常工作中波长准确度的

核对，

取单光束能量测定方式，测量条件同上述低压汞灯的方法，对486.02及656.10nm 二单峰进行单方向重复扫描3次。

5.4.1.2.3.用氧化钬玻璃检定：将氧化钬玻璃放入样品光路，参比光路为空

气，按

测定吸收光谱图方法测定。校正自动记录仪器时，应考虑记录仪的时间常数，测定样品与校正时取同一扫描速度。氧化钬玻璃在279.4、287.5、333.7、360.9、418.7、460.0、484.5、536.2、637.5nm波长处有尖锐的吸收峰，可供波长检定用。氧化钬玻璃因制造的原因，每片氧化钬的吸收峰波长有差异，应使用经计量部门校验过的。

5.4.1.2.4.用高氯酸钬溶液检定：本法可供没有单光束测定功能的双光束紫

外分光

光度计波长准确度检定用。高氯酸钬溶液的配制方法：取10%高氯酸为溶剂，加入氧化钬（HO2O3），配成4%溶液即得。高氯酸钬溶液较强的吸收峰波长为