氢氧化钾蛋白质溶解度的测定

氢氧化钾蛋白质溶解度的测定

1、原理

氢氧化钾蛋白质溶解度可以反映蛋白质变性的情况。不同的蛋白质品种，氢氧化钾蛋白质溶解度不同。蛋白质变性越大，氢氧化钾蛋白质溶解度越小。

用一定浓度的氢氧化钾溶液提取试样中的可溶性蛋白质，在催化剂作用下用浓硫酸将提取液中可溶性蛋白质的氮转化为硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用盐酸滴定测出试样中可溶性蛋白质含量；同时，测定原始试样中粗蛋白质含量，计算出试样的蛋白溶解度。

2、试剂

a)??氢氧化钾（分析纯），无水硫酸钾、五水硫酸铜、氢氧化钠、硼酸、甲基红、溴甲酚绿、硫酸铵；

b)??浓硫酸、盐酸（分析纯）、95%乙醇、蒸馏水。

3、仪器和设备

a)??感量为g分析天平；

b)??磁力搅拌器；

c)??离心机（带离心管），转速为2700r/min以上；

d)??样品粉碎机；

e)??60目分析筛；

f)??电炉；

g)??100 mL或250 mL凯氏烧瓶；

h)??凯氏蒸馏装置；

i)??250 mL锥形瓶；

j)??1000 mL容量瓶；

k)??微量滴定管。

4、试剂的制备

a）??%氢氧化钾溶液

称取g氢氧化钾，加水溶解后，转移至1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。

b）??混合催化剂

称取6 g硫酸钾和g硫酸铜，磨碎混匀。

c)??氢氧化钠溶液

称取400 g氢氧化钠，加水溶解后，转移至1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。

d)??硼酸溶液

称取20 g硼酸，加水溶解后，转移至1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。

e)??盐酸标准溶液

量取mL浓盐酸，注入1000 mL水中混匀，按GB 601-88要求进行标定即可。

f)??混合指示剂

称取1 g甲基红和5 g溴甲酚绿，加入乙醇溶解后，转移至1000 mL

容量瓶中，用乙醇定容至刻度。

5、样品的制备

取具有代表性的蛋白质样品，用四分法缩减分取200g左右，粉碎过60目筛，充分混匀，装入磨口瓶中备用。

6、测定步骤

称取蛋白样品，精确到，置于250ml高型烧杯中，加入氢氧化钾溶液，在磁力搅拌器上搅拌20min，将溶液转移至离心管中，以2700r/min离心10min，小心移取上清液，放入消化管中，按照GB/T 6432-1994凯氏定氮法测定试样中可溶性蛋白质的含量。同时，按照GB/T 6432-1994凯氏定氮法测定同一试样中总的粗蛋白质含量。7、结果计算

氢氧化钾蛋白质溶解度X按下式计算：

X= W1/ W2*100%

式中：

W1—试样溶于氢氧化钾溶液中的粗蛋白质含量，%;

W2—试样总的粗蛋白质含量（以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果），%。

计算结果表示到小数点后一位。

8、精密度

a）重复性

在同一实验室，由同一操作人员完成的两个平行测定结果，相对偏差不大于2%；以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果。

b)再现性

在不同实验室，由不同操作人员用不同的仪器设备完成的两个测定结果，相对偏差不大于4%。