流感病毒实验室检测方法的对比分析

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人类流感病毒三种检测方法的比较

人类流感病毒三种检测方法的比较流行性感冒（流感）是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病，临床表现以高热、乏力、头痛、咳嗽、全身肌肉酸痛等全身中毒症状为主。

流感病毒易发生变异，传染性强，对老年人、儿童和有潜在健康问题的人有合并并发症甚至致命的危险。

在临床诊疗过程中，为了及时、有效的进行疾病治疗，我们需要早期、快速、精准的进行疾病诊断。

目前我国流感病毒的检测技术已经较为成熟，各类检测方法均表现出了良好的应用价值，从而有效的促进了流感诊疗综合水平的提升。

本文通过对当前临床检验最常见的三种流感病毒检测方法的介绍和比较，希望可以帮助广大人民群众了解流感病毒检测的相关医疗健康知识推动提高普通人群的医疗健康知识水平。

一、胶体金法胶体金检测技术是一种将抗原抗体免疫反应与胶体金标记示踪技术结合用于抗原、抗体定性检测的技术。

市面上的检测试剂主要用于定性检测人鼻咽和口咽拭子样本中的流感病毒抗原。

由于其快速、简便、成本低、稳定性好等优点，胶体金法检测在临床检测领域得到了广泛的应用。

在应用这一方法对流感病毒进行检测时，检验人员应积极做好样本的预处理工作。

主要包括震荡和在管壁反复挤压拭子。

其余两种检测方法的预处理方法同上。

总的来看，作为常用的检测方法，胶体金法的优势在于操作便捷，检测速度快（20分钟左右即可读取结果），有利于缩短检测的时长。

与此同时，该检测方法对于仪器的需要相对较低，通过简单的手工操作即可完成。

基于此，该方法适用于现场检测。

不过，其不足之处在于流感病毒的抗原性极易发生变异，很容易发生抗体/抗原不匹配而产生假阴性。

不同的流感型别之间还可能存在交叉反应，影响检测的特异性，这对检测结果的准确性造成了一定的影响。

另一方面，在应用该方法进行流感病毒检测的过程中，检验人员需要积极做好对于反应条件的控制，以便合理实现检测结果准确性的提升。

基于此，若不能有效促进其敏感性的提升，则通常不建议单独使用该方法进行病例的筛查与诊断工作。

流感病毒实验室检测方法的对比分析

抗原与核酸检测对比
鼻咽拭子标本或口咽拭子标本检测甲型流感时，用核酸方法检测的阳性率高，且敏感度也高于抗原方法，差异均有统计学意义。不管核酸方法和抗原方法，鼻咽拭子的阳性率高于口咽拭子。可能原因：①在鼻咽部采集的柱状上皮细胞多而鳞状上皮细胞少；②采集标本时拭子触及舌部被唾液中的溶菌酶污染所致；③含藻酸钙的拭子或木柄拭子含有可抑制PCR或使病毒失活的物质。
Rebeloh等利用病毒分离、EIA（免疫酶法）、RTห้องสมุดไป่ตู้PCR对流感的暴发流行进行诊断并比较，RT-PCT法比EIA法灵敏，并和地区流感暴发流行具有良好的相关性。
Rebelodeandrade H , Zambon M C . Different diagnostic methods for detection of influenza epidemics.[J]. Epidemiology & Infection, 2000, 124(3):515-522.
田燕, 梁洁, 陆志刚. 流感病毒不同检测方法的探讨[J]. 现代预防医学, 2013, 40(20):130-130. 张欣, 闫惠平, 马胤雪, et al. 不同方法检测流行性感冒样病例鼻咽和口咽拭子标本诊断甲型流行性感冒的评价[J]. 中华传染病杂志, 2011, 29(3):154-157.
流行性感冒诊疗方案（2018年版）[J].中国感染控制杂志, 2018.
潜伏期末到发病的急性期均有传染性。临床症状出现前24-48小时即可排出病毒，排毒量在0.5-1天显著增加，发病后24小时内达到高峰。成人和较大年龄儿童一般持续排毒5天（3-8天），低龄儿童发病时的排毒量与成人相同，但排毒时间更长。婴幼儿长期排毒很常见（1-3周）。研究证实，抗病毒药物需在症状出现后的36～48h内使用获取最大疗效。

PDF-不同方法检测流感病毒的敏感性

关于质量规范的产生和应用已做了大量的工作 #它们的传播主要是通过发表的论文(读者来信(综述(书籍中章节和会议论文集'然而#应该鼓励正确地应用规范' 与新的方法(试剂盒或分析系统评价有关的文章作者并没有使用客观的质量规范作为可接受性的准则 #杂志编辑和审稿人应该鼓励作者使用这些客观的规范&另外#杂志在给作者的须知中就应包括这些内容'工业上不仅要使用客观的规范来识别急需在方法上和系统的发展上需要改进的那些项目 #而且它们能帮助传播质量规范的有关资料#即在它们的标识上文件记录这些资料#就像当前介绍的性能特征和参考值一样'能力验证 $[<%计划和室间质量评价计划 $Wd;,%的组织者在鼓励使用客观质量规范上扮演着重要的角色 #即通过使用这些质量规范作为固定限来评估实验室的性能和通过使用这些准则强调可接受的和不可接受的方法'希望通过这些努力鼓励对于实验室程序的性能特征更多的使用基于生物学变异的质量规范'
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流感病毒检测中细胞培养法与实时荧光定量PCR法效果比较-

流感病毒检测中细胞培养法与实时荧光定量PCR法效果比较- 摘要】目的：研讨流感病毒检测中细胞培养法与实时荧光定量PCR法效果比较。

方法：选取2018-1至2020-1某医院518份流感季节符合流感病例定义的流感标本，采用数字随机表将其分为2个小组。

对照组：应用细胞培养法：实验组：应用实时荧光定量PCR法。

结果：实验组A/B型阳性率50.97%，B型阳性率3.86%，A型H3亚型阳性率17.76%，A型H1亚型阳性率34.75%高于对照组A/B型阳性率23.94%，B型阳性率1.16%，A型H3亚型阳性率6.18%，A型H1亚型阳性率12.74%，互比，存在差异性，（P＜0.05）。

结论：实时荧光定量PCR法与细胞培养流感病毒检测有一定价值，前者检测方法优势性更强，若有需要，还可将以上方法联合应用，更可提高检测价值。

【关键词】细胞培养法；流感病毒；检测；实时荧光定量PCR法;效果比较;流感病毒易诱发机体出现呼吸道感染等疾病，流感病毒不断演变，易增加流行性感冒，这对人们群众的机体健康非常不利。

近年来，医学研究者加强对流感病毒的研究，进一步分析与观察流感病毒流行株构成、抗原性以及基因特异性等，从而做好相关预防流感措施，确保我国人们群众身心健康[1]。

因此，本文针对流感病毒应用细胞培养法与实时荧光定量PCR法实施检测，观察检测效果。

1资料与方法1.1 一般资料选取2018-1至2020-1我某医院518份流感季节符合流感病例定义的流感标本，采用数字随机表将其分为2个小组。

对照组259例：女性119份，男140份，平均年龄（29.83±1.48）岁；实验组259例：女性122份，男137份，平均年龄（29.90±1.49）岁；两组在资料方面互比，差距小，（P＞0.05）。

将所有标本放置在-70°C环境中存放，在24h检测完毕。

1.2方法核酸提取：根据全自动核酸提取仪相关说明书与配套试剂进行相关操作。

不同流感病毒检验方法比较研究

不同流感病毒检验方法比较研究发布时间：2021-04-02T11:21:36.263Z 来源：《中国医学人文》2020年12月12期作者：赵夕萌[导读] 流感病毒是由流感急性病毒感染引起的一种传染病, 可能会引起一种地方性或者是世界性的大规模流行。

赵夕萌（四川大学-华西公共卫生学院；四川成都610000）摘要:流感病毒是由流感急性病毒感染引起的一种传染病, 可能会引起一种地方性或者是世界性的大规模流行。

为快速有效控制各类流感病毒暴发后的疫情,需要实验室尽快提供流感病原学上的检测试验结果。

因此,需要对目前在不同临床试验样本的流感检测中常用的几种不同检测手段方法进行综合比较研究,掌握不同方法的检测灵敏度、特异性程度的差异,为不同的应用领域、不同流感防控工作形式下如何选择流感检测手段方法应用提供重要依据。

本文主要就不同类型流感病毒检测方法检验比较的一些重要性问题进行了一定的理论研究与实验分析,并分别提出了不同类型流感病毒方法检验比较方法的一些优缺点,希望可以起到一定的研究借鉴促进作用。

关键词:不同流感病毒,检验方法,比较研究引言:流感病毒是由于人体感染各种流感传播病毒所致的一种急性感染,具有不同季节性、传播性和速度快、传染性强的主要特点,可通过吸入空气喷出飞沫、接触空气污染物等多种方式直接进行流感传播,多发于人体免疫力低下、老年、小儿等发病人群,感染后通常都会伴随着局部全身疼痛、高热、鼻塞、流鼻涕、咳嗽、呼吸急促等流感临床常见症状,流感严重时极易间接引发急性肺炎等严重流感并发症,进而极有可能直接导致患者死亡,因此我们需要医生采用一套科学的流感检验检测方法,及时准确检出各种流感传播病毒,指导医生制定合理的流感治疗措施方案。

一、不同流感病毒检验检测方法比较临床研究的重要性流感感冒是流行性细菌感冒的一种简称,其中主要有急性胃肠型细菌流感、中毒型细菌流感、肺炎型病毒流感、单纯型病毒流感等多种类型,主要病因是由于患者感染甲型流感流行病毒感染所致, 这种流行病毒传播感染速度快、传染性强、流行危害范围大,在各种低温、干燥、真空等污染环境中仍可以正常存活,患者表现为全身局部肌肉酸痛、头痛、急促引起高热、乏力等严重临床早期症状以及轻度的上呼吸道感染症状。

甲型流感病毒两种快速检测方法的诊断效能评价

分别采用化学显色法和荧光法检测流感
化学显色法与荧
【摘要】目的评价甲型流感病毒两种快速检测方法的临床诊断效能。方法
样病例咽拭子标本３７７例，同时采用实时荧光定量ＰＣＲ进行验证，以评价两种方法的临床诊断效能。结果
光法检测的灵敏度分别为７９．０８％和９０．２％，特异性分别为９１．９６％和９５．０９％，两种方法对甲型流感病毒的检出率相仿，其差异没有统计学意义（＝１．２５，Ｐ＞０．０５），总符合率为７８．７８％。结论
２８６
武警医学
２０１３年４月
第２４卷
第４期
ＭｅｄＪＣｈｉｎＰＡＰＦ，Ｖｏ１．２４，Ｎｏ．４，Ａｐｉｒｌ，２０１３
甲型流感病毒两种快速检测方法的诊断效能评价
余虹宇，王顺涛，刘彬，李筱芳
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｅｉｆｃｉｅｎｃｙｏｆｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅａｎｄｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃｓｕｂｓｔｒａｔｅｓｒａｐｉｄｔｅｓｔｓｉｎｃｌｉｎｉｃａｌ
，
２．ＢｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＣｅｎｔｅｒ，２ｎｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＢｅｉｊｉｎｇＡｒｍｅｄＰｏｌｉｃｅＦｏｒｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００３７；３．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＴｈｅｏｒｅｔｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｙｒ

流感病毒的实验室检测方法及进展

·１９０·星堕墅墅盘查！！！！生篁！！鲞釜ｉ塑！里！』曼！！丛！！至！坠：！！塑！！！！：！！：堕！：！流感病毒的实验室检测方法及进展李月越陈杭薇李兵【摘要】流行性感冒（流感）是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，其在人群中蔓延快，且具有高发病率及致死率的特点。

流感的诊断不仅要根据临床症状和体征，其确诊还有赖于实验室检查。

流感病毒的检测技术大致分为４个方面，即病毒分离培养、血清学诊断、现代免疫学诊断及分子生物学诊断。

现分别从以上几个方面对流感病毒实验室检测方法及进展进行综述。

【关键词】流感病毒；检测方法Ｌａｂ帅ｔｏｒｉａｌｍｅｔｈｏｄｓ狮ｄｐ哪哪艄０ｆｄ咖ｔｉＩｌｇｉＩＩｆｌｕ眦ａｖｉｎ麟Ｕｙ访ｙ獬，ＣＨＥＮ协咒ｇ－讹ｉ，ＵＢｉ恕ｇ．＆加仃批，ｚｆｏ，尺Ｐｓ加ｍ￡ｏ删Ｍ毒ｄ觑九８，＆巧ｉ挖ｇＣＤｍ凇挖ｄ＆咒８ｍ￡Ｈｏｓｐｉ￡ｎＺｏ，ＰＬＡ，＆巧锄ｇ１００７００，吼ｉ御（乃ｒｒ已ｓ户Ｄ行矗ｉ７２９口“腩ｏｒ：（ＨＥ小，Ｈ口ｎｇ一议，Ｐｉ【ＡｂｓｔＩ’ａｃｔ】Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｅｓｃａｕｓｅａｎａｃｕｔｅｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｄｉｓｅａｓｅｔｈａｔｓｐｒｅａｄｓｅｐｉｄｅｍｉｃａｌｌｙｉｎｔｈｅｈｕｍａｎｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．ＣｈａｒａｃｔｅｒｏｆＩｎｆｌｕｅｎｚａｉｓｈｉｇｈｍｏｒｂｉｄｉｔｙａｎｄｍｏｒｔａｌｉｔｙ．ＤｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｉｎｆｌｕｅｎｚａｄｅｐｅｎｄｓｏｎｎｏｔｏｎｌｙｃｌｉｎｉｃｉａｌｓｙｍｐｔｏｍｓａｎｄｓｉｎｇｓｂｕｔａｌｓｏｌａｂｏｒａｔｏｒｉａＩｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓ．Ｖｉｒａｌｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｓｅｒｏｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ｉｍｍｕｍｏｌｏ—ｇｉｃａｌａｓｓａｙａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏＩｏｇｉｃａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓａｒｅｆｏｕｒｍｅｔｈｏｄｓｔｈａｔｃｏｍｍｏｎｌｙｕｓｅｄｅｄｆｏｒｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉａｌｍｅｔｈｏｄｓａｎｄｐｒｏｇｒｅｓｓｅｓｏｆｄｅｔｅｃｔｉｎｇｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｅｓａｒｅｓｕｍｍａｒｉｚｅｄｉｎｔｈｅｆ０１ｌｏｗｉｎｇｔｅｘｔ．【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｅｓ；Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ流行性感冒简称流感，是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，传染性强，蔓延快，其抗原易变异，对人群尤其是儿童、老年人及机体免疫力低下的人群有较高的发病率及致死率，危害很大。

实时荧光RT-PCR法快速检测流感病毒的效果分析

通过本组研究可以发现，RT-PCR法快速检测流感病毒的特异性与敏感度均较高，而且具有良好的重复性和稳定性，可在3 h内提供检测结果。另外，5～岁组的样本阳性率最高，因此应作为流感防控的重点对象。
综上所述，实时荧光RT-PCR法快速检测流感病毒的特异性与灵敏度均较高，而且操作方便，效率高，可以作为公共卫生应急疫情的实验室快速诊断方法。
1.2.2检查方法
采用实时荧光RT-PCR法对本组所有样本进行流感病毒核酸检测分型，每次试验均设置阳性对照和阴性对照，保证Ct值符合试剂说明书的要求[3]。
2.结果
本组1355份咽拭子标本中共检测出流感病毒核酸阳性573份，总阳性率为42.29%；其中甲型H1N1流感352份，占流感阳性标本总数的61.43%；B型76份，占流感阳性标本总数的13.26%；季节性流感H1亚型21份，占流感阳性标本总数的3.66%；季节性流感H3亚型124份，占流感阳性标本总数的21.64%。
表1本组实时荧光RT-PCR检测情况分析
组别检测样本数阳性率（n/%）病毒型别
甲型H1N1 B型季节性流感H1季节性流感H3
0～岁组41 9/21.95 5 2 0 2
5～岁组135 108/80 73 15 11 9
15～岁组237 153/64.59 62 46 33 12
25～岁组118 63/53.39 42 31 24 21
摘要】目的：探讨实时荧光（RT-PCR）法快速检测流感病毒在临床中的应用效果，为今后的流行病学监测提供思路。方法：以我中心2014年1月至2014年12月期间采集的1355份流感样病例（ILI）及暴发疫点现患病例的咽拭子标本作为本组研究的观察对象，采用实时荧光RT-PCR方法对流感病毒核酸进行检测分型。结果：本组1355份咽拭子标本中共检测出流感病毒核酸阳性573份，总阳性率为42.29%；其中甲型H1N1流感352份，B型76份，季节性流感H1亚型21份，季节性流感H3亚型124份。结论：实时荧光RT-PCR法快速检测流感病毒的特异性与灵敏度均较高，而且操作方便，效率高，可以作为公共卫生应急疫情的实验室快速诊断方法。

流感病毒及实验室检测

流感病毒及实验室检测
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目录
• 流感病毒概述 • 流感病毒的实验室检测方法 • 实验室检测流程与规范 • 流感病毒的变异与进化 • 流感病毒的防治与未来展望 • 相关案例分析
01
流感病毒概述
Chapter
病毒类型与特点
流感病毒属于正粘病毒科，具有包膜、分节段和基因组等特点。
根据病毒核蛋白和基质蛋白的不同，流感病毒可分为甲、乙、丙三型，每型又根据病毒的抗原性不同分为若干亚型。流感病毒的遗传物质为RNA，具有高变异性，易引起病毒株的变异和流行。
03
对于流感患者，应及时隔离和治疗，以减少病毒的传播。
04
针对易感人群和高危人群，可采取抗病毒药物预防和治疗。
02
流感病毒的实验室检测方法
Chapter
抗原检测
01
02
03
直接免疫荧光法
利用特异性抗体标记荧光素，直接检测样本中的流感病毒抗原。
间接免疫荧光法
将样本与特异性抗体结合，再与荧光素标记的抗抗体结合，检测流感病毒抗原。
规范操作
实验操作应严格按照实验室规范进行，防止因操作不当导致的病毒感染或实验室事故。
04
流感病毒的变异与进化
Chapter
病毒变异类型与特点
抗原性变异
导致病毒的表面抗原结构发生变化，从而产生新的病毒株。这种变异是随机的、不定向的，并可能导致病毒逃逸免疫系统的识别
和攻击。
宿主适应性变异
使病毒能够在不同的宿主环境中生存和传播。这种变异通常涉及到病毒的基因组中的多个位点，并可能导致病毒对特定宿主产生
更强的致病性。
耐药性变异
使病毒对特定的抗病毒药物产生抵抗力。这种变异通常是由于病毒基因组中的突变积累所致，并可能导致病毒对多种药物产生耐

实时荧光定量PCR仪用于流感病毒检测的效果分析探讨

实时荧光定量PCR仪用于流感病毒检测的效果分析探讨摘要：目的：探讨在流感病毒检测中采用实时荧光定量PCR仪进行检验的临床效果。

方法：选择我院2018年1月至2018年12月收治180例流感病样病例为研究对象，使用咽拭子采集标本，使用实时荧光定量PCR法进行流感病毒核酸的测定，如果为阳性则执行MDCK培养同时进行分离，评估检验结果特异性、灵敏度的差异。

结果：实时荧光定量PCR仪检出阳性64例，阳性率为35.56%（64/180），细胞培养法分离出流感病毒35例，阳性率为19.44%（35/180），PCR仪检验阳性率高于细胞培养法，P<0.05。

细胞分离培养法对实时荧光PCR法的灵敏度、特异性分别为54.69%（35/64）、100.00%（116/116）。

结论：对流感病毒检测采用实时荧光定量PCR仪效果更为理想，值得推广。

关键词：实时荧光定量PCR仪；流感病毒；细胞培养法目前随着国内抗生素滥用问题的不断提出，流感病毒的耐药性也不断增加，并呈现出了变异高度化的特征，各种新型、亚型流感病毒不断出现，导致流感病毒防控的形势空前严峻，一旦出现疫情，如果未实现有效的检测与控制，很容易带来严重的危害。

为实现对流感病毒的有效预防与控制，及时进行检出的非常有必要的[1]。

为此探讨检验流感病毒的有效方法，本次研究以我院收治流感病样病例为研究对象，评估了实时荧光定量PCR仪检验的应用效果，结果显示采用实时荧光定量PCR仪检测效果更为理想，故现报告如下。

1.资料与方法1.1临床资料选择我院2018年1月至2018年12月收治180例流感病样病例为研究对象，使用咽拭子采集标本。

该180例患者中包括男86例，女94例，年龄18~72岁，均数（38.52±4.67）岁。

所有患者体温均大于38℃，同时存在咳嗽、咽痛等症状。

对所采集的标本，均存储于3ml的标本试管之中，后在24h内送检。

1.2方法1.2.1实时荧光定量PCR仪检验：对所采集的所有标本，均进行病毒核酸检测，按照试剂盒说明进行RNA提取与反应体系，并利用SDS软件进行PCR系统的操控，完成阳性、阴性对照组的设立。

流感病毒检验及相关方法

流感是因流感病毒造成的一种常见的人类呼吸道感染疾病，具有流行范围广、发病率高等特点，其不仅极易对儿童、老年人及免疫力低下的人群造成不可估量的危害，也给社会公共卫生的维持带来一定负担。

我国是流感病毒高发区，近年来，流感发生率不断升高，直接威胁人类生命健康。

目前临床对流感病毒诊断方法主要包括病毒分离、免疫学检测以及核酸检测等。

为了快速、准确诊断出流感病毒，并给予其特异抗病毒治疗，进而有效控制疫情，对降低疾病发病率及病死率，本人根据自身实际的工作经验,结合一些相关的理论知识。

就流感病毒检验及相关方法阐述意见。

①酶联免疫吸附试验:免疫学检测是检测流感病毒常用方式之一，其主要依据抗原抗体反应进行检验，一般需要对血清中的抗原或者抗体进行检测，而酶具有较高的催化频率，可在较大程度上放大其作用，提高测定结果的灵敏度。

在检测抗原与抗体时，可运用不同的酶联免疫吸附试验，具有方便快捷、灵敏度及特异度高等优点，是当前临床较为常用的免疫测定方式之一。

此外，在不同流感病毒亚型间，不同病毒之间均不存在交叉反应现象；根据部分研究的结果可发现，酶联免疫吸附法操作简单，具有较高灵敏度及特异度，可广泛应用于流感病毒实验室检测。

②聚合酶链反应 (PCR):聚合酶链反应（PCR）是核酸检测的一种，其通过分子生物学检测技术实现经 PCR 检测流感病毒，其技术原理在于可以在较短时间内添加大量特异性 DNA片段完成病毒检测，具体检测过程中仅需要少量样品即可完成检测工作的一项生物学技术，具有敏感性、特异性高、可重复操作、速度快等特点，可在较短时间内完成收集样本并获得最终的检测结果工作，对早期诊断流感病毒感染具有较高价值。

PCR 方法包括实时荧光定量方法、RT-PCR 方法、多重 RT-PCR 方法。

其中 RTPCR 方法包括检测 HA 基因片段、NA基因片段，目前检测未知流感，通过合并引物扩增病毒的基因片段完成分型。

研究显示，PCR技术用于病原体的确定，可有效检测出早期感染患者，与病毒分离法比，其敏感性是其500倍，同时可更加直观的检测荧光因子，有效降低检测假阳性可能性，但一般的PCR技术具有一定污染。

常用流感病毒实验室检测方法的比较

常用流感病毒实验室检测方法的比较摘要目的通过对四种常用流感病毒检测方法的比较，确定适用于常规监测及疫情暴发时的检测方法。

方法用四种方法对随机抽取的50份样品进行检测，对结果进行对比分析。

结果胶体金法虽简单快速，但漏检率较高（20.00%）；RT-PCR法灵敏快捷，准确度高（34.00%）；细胞培养法费用适中，检出率较高（14.00%）；鸡胚培养法检出率最低（2.00%）。

结论胶体金法适合疫情现场检测，RT-PCR法适合实验室内快速检测，组织培养法适合常规监测，鸡胚培养法适合流感疫苗生产。

关键词组织培养；鸡胚培养；病毒分离；RT-PCR；流感病毒现在实验室对流感病毒的检测手段有很多种，在本科室常用的方法有胶体金法、细胞培养法、鸡胚培养法、RT-PCR法四种。

为实际工作中找到最适合的检测方法，更及时准确的提供检测结果，对实验室常用的四种流感病毒检测方法进行比较。

现报告如下。

1 资料与方法1. 1 检测样品2014年1～4月份本院对就诊的流感样病例（发热，体温≥38℃，伴咳嗽或咽痛之一者，未服用过抗病毒药物[1]）采集的鼻咽拭子，随机抽取50份。

流感病毒采样管由北京友康恒业科技有限公司购买。

1. 2 实验方法1. 2. 1 胶体金法美国QUIDEL公司，QuickVue Influenza A+B Test，按照试剂盒说明书操作。

1. 2. 2 细胞培养法MDCK细胞由辽宁省疾病预防控制中心提供。

样品前处理：将采样管漩涡震荡10 s，反复挤压拭子头后弃去拭子，加入青霉素、链霉素、制霉菌素，4℃静置2 h。

细胞传代及病毒接种按照郭元吉等所著的《流行性感冒病毒及其实验技术》操作[2]。

样品接种MDCK细胞培养出的第一代病毒培养液用1%豚鼠血红血球进行微量血凝实验（haemagglutination assay，HA），HA≥1：8的第一代病毒培养液用血凝抑制法（hemagglutination inhibition，HI）进行流感病毒分型鉴定（鉴定试剂盒由国家流感中心提供）。

3种流感病毒检测方法的比较和应用

室诊断和病原学监测具有重大意义。关键词：流感病毒；通ＲＣ荧光定量ＲＴＰＲ；胞培养法普ＴＰＲ； —Ｃ细
中图分类号：４．Ｒ４６５文献标识码：Ａ
ＣｏｐａｉｏｎＡｐｉａｉｎｆＴｈｒｅｍｅｈｏｓｉｈｅｅｅｔｏｏｉｌｎｚｖｒｓＺＨＡＮＧｅ — ｅ，ＺＨＡＮＧ — ｍｒｓｎａｄｐｌｃｔｏｏｅｔｄｎｔｄｔｃｉｎｆｎｆｕｅａｉｕＷｉｗｉＬｉ
ａｎｄＤｏｇｋｉｄｎｅｅｌｐｓｇ（ＤＣＫ）ｃｌｕｌｕｒｎｏｒｒｔｏｐｒｈｅｉｉｉｙａｐｅｉｉｉｙｏｅｗｅｎｈｅ．ｙｃｌａｓａｅＭｅｌｃｔｅｉｄｅＯｃｍａｅｔｅｓｎｓｔｖｔｎｄｓｃｆｃｔｆｂｔｅｔｍ
感病毒６株（性率为１．）４阳６１。荧光定量Ｒ —Ｃ的灵敏度达到００Ｉ５，异性强。结论无论从敏感性、ＴＰＲ．１ＴＣＤ０特特异性还是从时间上，光Ｒ —Ｃ对于疫情的爆发更有应用价值。细胞培养法分离流感病毒对于核实疫情的实验荧ＴＰＲ
ＲｅｕｔＯｆ３ｈｒｔｓａａｐｌｓ１ｏｓｔｖａｐｌｓｗｅｅｃｎｆｒｅｃｏｒｎｇｔｅｈｏｌｏｒｓｅｅｌｔｍｅｓｌｓ９８ｔｏａｗｂｓｍｅ２９ｐｉｉｅｓｍｅｒｏｉｍｄａｃｄｉＯｍｔｄｏｆｆｕｅｃｎｔｒａ—ｉＲＴ— ＰＣＲｔａｒｔｆ３２４；９ｐｓｔｖａｐｅｅｅｉｏｌｔｄｂｙｏｒｉａｒａａｅｏ．３ｏｉｉｅｓｍｌｓｗｒｓａｅｄｎｙＲＴ— ＰＣＲｔａｒｔ３．；６ｔａｎｓｏｆａａｅｏｆ２４４ｓｒｉｉｆｕｅａｖｒｅｅｄｅｅｔｄｂｙＭＤＣＫｅｌｃｔｅａｅｔｄｐｉｉｔａｒｔｆ１．１．ｈｓｎｓｔｖｉｙｏｌｒｓｎｌｎｚｉｕｓｗｒｔｃｅｃｌｕｌｕｒｎｄｔｓｅｏｓｔｖｅａａｅｏ６Ｔｅｅｉｉｔｆｆｕｏｅ — ｃｎｔｒａｉｅＲＴ— ｅｅｌｔｍＰＣＲｓｈｉＯ０．０１ｉｇｈｔＴＣＩ。ａｔｈａｇｈｓｅｉｉｉｙＤ５ｎｄｉｓｈｉｐｃｆｃｔ．ＣｏｌｓｏｎｃｕｉｎＴｈｅｆｕｅｃｎｅｌｔｍｅｌｏｒｓｅｔｒａ— ｉＲＴ— ＰＣＲｖｏｒｐｐｉａｉｌｎｕｔｒａｆｔｐｄｍｉｂｃｕｓｆｉｓｓｎｉｉｉｙ，ｐｅｉｉｉｙａｐｅｄｈａｅｍｅａｌｃｔｏｎｖａｕｅｉｏｂｅｋｏｈｅｅｉｅｃｅａｅｏｔｅｓｔｖｔｓｃｆｃｔｎｄｓｅ．Ｂｕｃｌｔ，ｅｌ

流感病毒两种快速抗原检测方法的对比分析

流感病毒两种快速抗原检测方法的对比分析陈晨;范清琪;陈刚;朱梦琪;吴晶;张文宏;金嘉琳【摘要】目的分析比较两种流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金免疫层析法)检测的一致性,评价新型的基于银盐扩增技术的流感病毒抗原检测试剂盒在临床中的应用.方法选择2015年1月1日―2月28日在复旦大学附属华山医院就诊的体温>37.5℃,且具有流感样症状的患者,同时采集双份鼻拭子标本.采用IMMUNO AG Cartridge Flu AB试剂盒(简称AG1法)与甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(简称CV法)同时检测,并作PCR检测以确证.结果共检测患者91例,AG1法测定甲型流感病毒阳性7例,乙型流感病毒阳性53例;CV法测定甲型流感病毒阳性7例,其中弱阳性3例,乙型流感病毒阳性50例,其中弱阳性4例;PCR法检测甲型流感病毒阳性8例,乙型流感病毒阳性60例.AG1法检测甲型流感病毒灵敏度87.5%,特异度100%,乙型流感病毒灵敏度88.3%,特异度100%.CV法检测甲型流感病毒灵敏度87.5%,特异度100%,乙型流感病毒灵敏度83.3%,特异度100%.AG1法与CV法两种抗原快速检测甲型流感病毒检测的阳性符合率100%,乙型流感病毒的阳性符合率94.3%.结论两种流感病毒快速抗原检测方法一致性较好,AG1检测法可以减少针对弱阳性标本的人为判读误差,可应用于流感早期诊断.%Objective To analyze the consistency of two rapid antigen assays for the diagnosis of influenza A and B. We evaluated the clinical usefulness of silver amplification immunochromatography influenza virus detectionkit.Methods Nasopharyngeal swab samples were collected from patients who were suspected of influenza at Huashan Hospital between January and February 2015. Two samples were collected from the same one patient. The samples were tested simultaneously by using IMMUNO AG CartridgeFlu AB kit (AG1) and commercial immunochromatographic assay kit, Clearview exact influenza A&B (CV). PCR method was used as reference.Results A total of 91 samples were tested, of which 7 were positive for influenza A and 53 positive for influenza B by AG1 system; 7 positive for influenza A and 50 positive for influenza B by CV system; and 8 positive for influenza A and 60 positive for influenza B by PCR. The sensitivity and specificity of the AG1 system were 87.5 % and 100 % for influenza A, and 88.3 % and 100 % for influenza B; while the CV system showed sensitivity and specficity of 87.5 % and 100 % for influenza A, 83.3 % and 100 % for influenza B. The AG1 system was 100 % consistent with the CV system in the positive rate of influenza A, and 94.3 % consistent withthe CV system in the positive rate of influenza B.Conclusions The AG1 system is well consistent with the conventional immunochromatography-based diagnostic tests in diagnosis of influenza. The AG1 system is usefulin earlier diagnosis of influenza due to fewer human error in result interpretation.【期刊名称】《中国感染与化疗杂志》【年(卷),期】2017(017)001【总页数】4页(P29-32)【关键词】流感;快速抗原检测;免疫层析法【作者】陈晨;范清琪;陈刚;朱梦琪;吴晶;张文宏;金嘉琳【作者单位】复旦大学附属华山医院感染科,上海 200040;复旦大学附属华山医院感染科,上海 200040;复旦大学附属华山医院感染科,上海 200040;复旦大学附属华山医院感染科,上海 200040;复旦大学附属华山医院感染科,上海 200040;复旦大学附属华山医院感染科,上海 200040;复旦大学附属华山医院感染科,上海 200040【正文语种】中文【中图分类】R373.13近年来流感的疫情频繁出现，2005年H5N1人禽流感，2009年新甲型H1N1流感，2013年的H7N9禽流感疫情，引起了人们对流感更多的认识与关注。

流感病毒的快速检测方法

流感病毒的快速检测方法一、RT-PCR快速诊断方法（一）生物安全要求（二）病毒核酸提取（三）RT-PCR（四）PCR 产物纯化（五）流感病毒RT-PCR检测引物二、免疫荧光方法检测流感病毒（一）原理（二）标本处理（三）间接免疫荧光法（四）结果判断三、实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）快速诊断检测（一）基本原理（二）实验试剂（三）实验步骤四、快速诊断试剂盒流感的快速检测方法，与传统的病毒分离鉴定相比具有快速、简便的特点。

因此常用于流感暴发时早期病原学检测用。

流感的快速诊断包括直接和间接免疫荧光法、ELISA、RT-PCR、Real-Time PCR快速诊断速方法、流感快速诊断试剂盒等。

这里介绍RT-PCR、Real-Time PCR、免疫荧光快速诊断速诊断方法和几种流感快速诊断试剂盒优缺点。

无论那种快速诊断都无法代替传统的病毒分离鉴定方法。

一、RT-PCR快速诊断方法核酸检测是一种鉴定流感病毒基因组的有力方法，即使基因组含量很低或死病毒也可以检测到。

本章将介绍检测流感病毒的聚合酶链式反应（PCR）。

流感病毒的基因组是负链RNA，在进行PCR扩增前必须合成与病毒RNA 互补的DNA，即为cDNA。

逆转录酶（RT）就是用于合成cDNA的多聚酶，因此，扩增流感病毒基因组的过程称为RT-PCR。

RT-PCR需要一对型别特异引物，四种脱氧核苷酸（dNTPs），RNA模板，逆转录酶及Taq DNA 多聚酶；首先由逆转录酶将病毒的RNA逆转录合成cDNA，然后再进行聚合酶链反应经25～30个循环，使DNA产物达到倍增的效果。

（一）生物安全要求生物安全级别与个人防护要求：生物安全二级实验室，防护要求与二级实验室的要求相同。

并应遵守相应的生物安全规定。

进行高致病性禽H5 RT-PCR快速检测时可以在生物安全二级实验室里进行，核酸提取在生物安全三级实验室的生物安全柜里完成。

（二）病毒核酸提取1. 实验材料及仪器(1) QIAGEN公司的Rneasy Mini Kit（Catalog# 74104）(2) β-巯基乙醇（β-mercaptoethanol）(3) 70% 乙醇(4) 无菌1.5ml 离心管(5) 10μl、20μl、200μl、1000μl加样器和枪头(6) 可调14K微型离心机(7) 旋转混合器2. 操作步骤(1) 取1支无菌、无RNA酶的1.5ml Eppendorf管，加入500μl RLT。

流感病毒检测中细胞培养法与实时荧光定量PCR法效果比较

流感病毒检测中细胞培养法与实时荧光定量PCR法效果比较发表时间：2019-11-14T08:53:45.650Z 来源：《航空军医》2019年11期作者：叶招兴杨兴斌[导读] 评价采用细胞培养法以及实时荧光定量PCR法在流感病毒检测中的临床价值。

（南安市疾病预防控制中心 362300）摘要：目的评价采用细胞培养法以及实时荧光定量PCR法在流感病毒检测中的临床价值。

方法选择我中心于2018年6月-2019年8月收集采集到的流感样病例的350份咽拭子样本为研究对象，对其分别采取细胞培养法以及实时荧光定量PCR法进行检测，比较两种检验方式的阳性检出率。

结果实时荧光定量PCR法阳性检出率为11.43%高于细胞培养法的2.86%，差异具有统计学意义（P<0.05）。

结论实时荧光定量PCR法在临床检测中具有简单快捷、简单快捷以及灵敏度高等优势，可应用于流感爆发初期大面积快速筛查。

关键词：细胞培养法；实时荧光定量PCR法；流感病毒检测；阳性检出率流感病毒也可称之为流行性感冒，具有一定的传染性，可能导致急性呼吸道疾病。

尽管现阶段临床上可有效监测流感病毒，但仍旧无法对流感病毒予以完全控制，因而需临床加强对流感病毒准确鉴定及分离，以提高检出率[1]。

基于此，本文选择我中心于2018年6月-2019年8月收集采集到的流感样病例的350份咽拭子样本为研究对象，对其分别采取细胞培养法以及实时荧光定量PCR法进行检测，比较两种检验方式的阳性检出率。

现分析如下：1 资料与方法1.1基线资料选择我中心于2018年6月-2019年8月收集采集到的流感样病例的350份咽拭子样本为研究对象。

男性217例，女性133例；年龄3-59岁，平均年龄（32.07±7.22）岁。

纳入标准：体温＞38℃，发热症状在3d内，同时伴有咳嗽或咽痛症状。

将所收集到的咽拭子样本置于MEM采样液中，并于2-4℃保存运送至实验室。

1.2方法对咽拭子样本采取细胞培养法与实时荧光定量PCR法检测，具体方式如下：①细胞培养法：取1.5mLEDTA胰酶加入至细胞培养瓶中，摇动1min后倒掉EDTA胰酶，加入1.5mL EDTA胰酶，并于37℃下行4min温浴后将EDTA胰酶倒掉。

禽流感不同检测方法对比

禽流感不同检测方法对比作者：李玉莹来源：《中国动物保健》2014年第05期流感是一种历史悠久的疾病，人类历史上曾经多次流行并引起严重的后果，例如1918-1919年西班牙流感流行、1957-1958年始于中国贵州进而蔓延全球的流感疫情。

到了1997年香港发生人感染H5N1禽流感事件，造成150万只鸡被宰杀，6人死亡；2003年亚洲地区H5N1禽流感爆发，人禽均出现死亡病例；2009年H1N1流感大流行，疫情席卷全球持续了一年多，出现疫情的国家和地区达到了214个，造成约1.85万人死亡；2013年H7N9型禽流感在上海和安徽两地率先发现，造成全国37人死亡。

由资料可见，近几年禽流感疫情发生频率逐渐频繁、流行范围广、破坏力强，文章比较禽流感不同检测方法，旨在阐明各种检测方法优、劣势及适用范围，力争做到早发现、早确诊、早治疗，把危害降到最低。

疾病检测首先要了解病原体特性，进而选择特异性和敏感性的试验方法。

禽流感是由A 型禽流感病毒引起的家禽和人类急性接触性疾病，近年来以H5N1和H7N9发病次数多、致病力强，发病率和死亡率较高。

禽流感病毒为正粘病毒科流感病毒属、单链RNA、电镜下外观呈球形或多形态、直径80～120 nm、有包膜、包膜上有血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）两种糖蛋白突起为主要抗原成份。

但HA和NA亚型众多，而且各亚型或血清型之间无交叉反应性，这使得禽流感病毒的检测工作较为困难。

任何一种疾病检测均分为病原学检测和血清学检测两种方法，禽流感病原学检测方法主要为电镜直接观察法和培养法，血清学常用检测方法主要分为琼脂扩散实验、酶免实验、金标快速实验、免疫荧光实验等。

1 病原学检测1.1 电镜直接观察法取疑似感染的标本，以病毒分布较多的呼吸道及肺部取材，将标本处理后在电镜下直观观察，根据禽流感病毒自身的形态、结构等不同特征，能很快做出诊断。

但电镜观察结果与样本制备技术、病料采集的部位和时间、检测人员技术有关，且电镜法不能用于亚型及致病性的测定，因此该技术可用于科研方面，临床检测应用较少。

武汉市流感病毒流行特征及检测方法的比较

㊃论著㊃武汉市流感病毒流行特征及检测方法的比较*盛鄂湘,陈良君,段勇威,李一荣ә武汉大学中南医院检验科,湖北武汉430061摘要:目的探讨武汉市甲㊁乙型流感病毒的流行特征,通过比较巢式P C R和胶体金法检测对流感病毒的检出情况,评价后者能否为临床流感样患者的流感初筛和诊断提供快速有效的方法㊂方法采集2017 2019年武汉市流感样患者的鼻咽拭子,进行胶体金法检测,分析该地区甲㊁乙型流感病毒的流行病学特征;同时选取其中600份样本,进行巢式P C R检测复核结果㊂结果2017 2019年,各年份中甲型流感㊁乙型流感㊁混合感染检出率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);流感呈季节性;流感患者中18岁以下的人群所占比例较高(P<0.05);巢式P C R和胶体金法的一致性检验显示,K a p p a=0.40,二者一致性一般㊂结论胶体金法检测简便快速,能较好地满足对于临床标本初筛的要求,但其检测的灵敏度和特异度仍待提高㊂关键词:流感病毒;流行特征;快速抗原检测;巢式P C R检测D O I:10.3969/j.i s s n.1673-4130.2021.04.013中图法分类号:R446.5文章编号:1673-4130(2021)04-0444-04文献标志码:AC o m p a r i s o n o f e p i d e m i c c h a r a c t e r i s t i c s a n d d e t e c t i o n m e t h o d s o f i n f l u e n z a v i r u s i n W u h a n a r e a*S H E N G E'x i a n g,C H E N L i a n g j u n,D U A N Y o n g w e i,L I Y i r o n gәD e p a r t m e n t o f C l i n i c a l L a b o r a t o r y,Z h o n g n a n H o s p i t a l o f W u h a n U n i v e r s i t y,H u b e i430061,C h i n aA b s t r a c t:O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e e p i d e m i o l o g i c a l c h a r a c t e r i s t i c s o f i n f l u e n z a i n W u h a n,a n d c o m p a r e t h e c o n s i s t e n c y b e t w e e n t h e r a p i d a n t i g e n d e t e c t i o n a n d n e s t e d P C R t o v e r i f y w h e t h e r t h e s e n s i t i v i t y a n d s p e-c i f i c i t y o f t h e f o r m e r p r o v i d e a n e f f e c t i v e m e t h o d f o r t h e d i a g n o s i s o f c l i n i c a l i n f l u e n z a-l i k e p a t i e n t s. M e t h o d s C o l l e c t e d t h e n a s o p h a r y n g e a l s w a b s f r o m p a t i e n t s w i t h f l u-l i k e s y m p t o m s f r o m2017t o2019,a n d t h e n c o l l o i d a l g o l d m e t h o d w a s u s e d t o t e s t t h e s a m p l e s.T h e e p i d e m i o l o g i c a l c h a r a c t e r i s t i c s o f i n f l u e n z a A a n dB v i r u s e s i n t h e a r e a w e r e a n a l y z e d,m e a n w h i l e600s a m p l e s w e r e s e l e c t e d t o b e r e c h e c k e d b y n e s t e d PC R.R e-s u l t s F r o m2017t o2019,t h e r e w e r e s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e s i n t h e d e t e c t i o n r a t e s o f i n f l u e n z a A, B a n d m i x e d i n f e c t i o n i n e a c h y e a r(P<0.05);i n f l u e n z a w a s s e a s o n a l;t h e p r o p o r t i o n o f i n f l u e n z a p a t i e n t s u n-d e r18y e a r s o l d w a s h i g h e r t h a n t h e o t h e r a g e g r o u p s(P<0.05);t h e c o n s i s t e n c y t e s t o f n e s t e d P C R a n d c o l-l o i d a l g o l d m e t h o d s h o w e d t h a t K a p p a=0.40,t h e c o n s i s t e n c y w a s g e n e r a l.C o n c l u s i o n C o l l o i d a l g o l d m e t h o d i s c o n v e n i e n t a n d r a p i d,w h i c h c a n m e e t t h e r e q u i r e m e n t s o f c l i n i c a l s a m p l e s s c r e e n i n g,b u t i t s s e n s i t i v i t y a n d s p e c i f i c i t y s t i l l n e e d t o b e i m p r o v e d.K e y w o r d s:i n f l u e n z a v i r u s;e p i d e m i o l o g y;r a p i d a n t i g e n d e t e c t i o n;n e s t e d P C R d e t e c t i o n流感病毒是引起急性呼吸道感染的主要病原体之一,具有传播途径广,传染性强,极易引起局部流行和暴发大流行等特点㊂流感病毒属于正黏病毒科,为单股㊁负链㊁分节段的R N A病毒㊂根据核蛋白和基质蛋白的不同,流感病毒可以分为甲㊁乙㊁丙㊁丁4个型别[1]㊂人感染流感病毒严重者可导致病毒性肺炎㊁多脏器功能损伤㊁呼吸衰竭甚至死亡㊂流感的流行具有明显的季节性,中国的流感疫情暴发主要集中在秋冬季节,南方地区是流感样病例的高发地区[2]㊂目前人类无法有效地防控流感的流行,也缺乏可靠的预警㊁预测手段㊂每一次流感的大流行,都会对人类健康构成严重威胁和给社会造成巨大的经济损失[3]㊂因此,应进一步加大流感监测力度,密切关注流感病毒的变异及活动状态[4]㊂目前,流感患者的临床症状缺乏特异性,一般以轻症感染为主,但也可为重症并导致患者住院甚至死亡[5],临床医生仅凭临床㊃444㊃国际检验医学杂志2021年2月第42卷第4期I n t J L a b M e d,F e b r u a r y2021,V o l.42,N o.4*基金项目:武汉大学自主科研项目(2042018k f0058)㊂作者简介:盛鄂湘,女,技师,主要从事临床微生物学的研究㊂ә通信作者,E-m a i l:l i y i r o n g838@163.c o m㊂本文引用格式:盛鄂湘,陈良君,段勇威,等.武汉市流感病毒流行特征及检测方法的比较[J].国际检验医学杂志,2021,42(4):444-446.表现难以确诊,所以实验室病原学检测成为流感的主要诊断依据㊂流感病毒的检测方法有病毒的分离培养㊁血清学检测和病毒的快速检测,应用了免疫学和基因检测技术㊂病毒的分离培养是流感诊断的金标准,常依赖于鸡胚接种,是流感实验室诊断中高度灵敏㊁准确的方法之一,但鸡胚接种分离周期长,分离效率低[6]㊂血清学方法是检测流感病毒特异性抗体最常用的方法,如血凝抑制试验(H A I),但灵敏度难以令人满意[7]㊂胶体金法快速检测是利用抗原抗体反应,然后用胶体金结合物标记达到检测的目的;其优点是快速㊁简便,大大缩短了检测时间;灵敏㊁准确,结果受外界因素影响较少;安全简便,不需任何仪器和设备;成本低廉,所需时间和样本量少[8];但不能检测病毒亚型㊂临床上大多用此方法来初步快速筛查流感患者㊂P C R技术可以从核酸水平检测病毒,具有高灵敏度㊁特异度和较高的检出率,检测标本用量少,在病毒感染诊断中发挥着重要作用㊂本研究对武汉市甲型流感(以下简称甲流 )㊁乙型流感(以下简称乙流 )的流行病学特征进行了分析;选取600份经流感病毒胶体金法检测的标本,然后用巢式P C R来进行结果复核,旨在评价胶体金法检测的灵敏度和特异度能否满足流感患者初筛或诊断的要求㊂1资料与方法1.1一般资料根据‘全国流感监测方案(2010年版)“中流感样病例的定义:发热(体温ȡ38ħ),伴咳嗽或咽痛者,将2017 2019年因流感样症状于本院就诊的患者共60944例纳入研究,采集患者的鼻咽拭子标本,在检验科门诊进行流感病毒胶体金法检测;选取其中的600份样本,采用巢式P C R检测对结果进行复核㊂1.2方法1.2.1咽拭子标本的采集和保存将拭子从口腔完全插入咽喉中,以咽喉壁,上颚扁桃的发红部位为中心,适度用力擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,避免触及舌部㊂采集完拭子后,迅速将其放入采样管(内含3~ 4m L标本保存液)中,弃去尾部,旋紧管盖并密封,保存至-70ħ冰箱㊂1.2.2流感病毒胶体金法检测应用广州万孚生物技术股份有限公司生产的甲/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金法)对甲/乙型流感病毒抗原进行检测,严格按照试剂盒检测说明书进行操作并在有效期内使用㊂1.2.3流感病毒的巢式P C R检测采用美国T R-I z o l即用型试剂提取咽拭子标本的核酸,按照实验室标准操作流程进行㊂以武汉大学基础医学院病毒研究所实验室提供的特异性引物和扩增条件进行第一轮扩增:引物序列,上游为G A Y C C N C C N T A C A G C-C A T G G,下游为A Y C C T C T N A T T T G C A T Y C C-N G G;扩增条件如下,50ħ30m i n,94ħ3m i n,94ħ45s㊁52ħ45s㊁72ħ50s(36个循环),72ħ10m i n㊂第二轮扩增:引物序列,上游为A C N G G N T A Y A C-N A T G G A C A C R G T,下游为P B1_679R C C T C-T Y T C N G C R T C Y T T N G T C A T;扩增条件如下, 94ħ3m i n,94ħ45s㊁52ħ40s㊁72ħ45s(36个循环),72ħ10m i n㊂制备1%琼脂糖凝胶,取5μL 第二轮扩增产物,在120U的电压下,电泳20m i n,在526b p对应区段出现阳性条带者为检测阳性㊂1.3统计学处理采用S P S S22.0软件进行统计分析㊂计数资料以百分率表示,组间比较采用χ2检验, P<0.05为差异有统计学意义㊂采用K a p p a一致性检验分析两种方法的一致性:若K a p p a为0.0~< 0.20,则一致性极低;若K a p p a为0.20~0.40,则一致性一般;若K a p p a为>0.40~0.60,则一致性中等;若K a p p a为>0.60~0.80,则一致性高;若K a p p a 为>0.80~1.00,则几乎完全一致㊂2结果2.1 2017 2019年流感病毒检测的总体情况2017 2019年,各年份中甲流㊁乙流㊁混合感染检出率比较,差异均有统计学意义(P<0.05),见表1㊂表1武汉市2017 2019年流感病毒的流行情况[n(%)]年份n流感合计甲流乙流混合感染χ2P 2017年102922323(22.6)1319(12.8)956(9.3)48(0.5)1197.12<0.001 2018年136472620(19.2)2068(15.2)529(3.9)23(0.2)3886.46<0.001 2019年370058045(21.7)6147(16.6)1794(4.8)104(0.3)7815.94<0.0012.2流感病毒检出例数在不同月份的分布特点2017年的检出高峰为8月㊁9月和12月;2018年的检出高峰为12月㊁1月和2月;2019年与2017和2018年比较,检测总例数增加,从而各月份的检出例数有所增加,且检出高峰集中在1月㊁2月和12月;见图2㊂2.3不同年龄患者的流感病毒感染情况6岁以下及6~18岁的人群的流感病毒检出率较高,分别为24.53%和27.26%,各年龄段之间比较,差异有统计㊃544㊃国际检验医学杂志2021年2月第42卷第4期I n t J L a b M e d,F e b r u a r y2021,V o l.42,N o.4学意义(χ2=1490.85,P<0.05),见表2㊂图22017 2019年流感病毒检出例数在不同月份的分布情况表22017 2019年不同年龄段患者的流感病毒检出率年龄总数(n)阳性(n)检出率(%) <6岁27794681924.536~18岁14662399727.26>18~45岁134********.83>45岁505156911.27 2.4流感病毒胶体金法和巢式P C R检测结果的比较选取2018年1月份采集的600份流感样病例的标本,采用巢式P C R检测进行复核㊂两种方法一致性检验的K a p p a系数为0.40,一致性一般㊂见表3㊂表3胶体金法与巢式P C R检测的结果胶体金法巢式P C R阳性巢式P C R阴性合计阳性13753190阴性118292410合计2553456003讨论流行性感冒是由于流感病毒感染人或动物,导致其急性发病的一类以上呼吸道症状为特点的疾病㊂参与流感病毒复制的R N A聚合酶没有校正功能,所以流感病毒会频繁地出现基因突变㊂流感病毒具有节段分布的结构特点,易导致基因重组,亦称抗原漂移[9],这种变异易发生于甲型流感病毒,导致产生新的病毒亚型,人类历史上多次流感流行或暴发均与其相关[10]㊂乙型流感病毒只有一种型别,病毒变异少,其感染者为散发病例㊂本研究中,甲流检出率高于乙流,混合感染的检出率最低㊂流感病毒的流行具有明显的季节性,北方流行均发生在冬春季,而南方大部分发生在秋冬季或夏季[11]㊂本研究中,流感也具有季节流行性㊂流感病毒的易感人群为老年人㊁儿童㊁慢性病人群,以及免疫功能受到抑制者[12]㊂本研究对不同年龄段人群的病毒感染情况的分析表明,阳性患者中18岁以下的人群所占比例最高,特别是6岁以下的婴幼儿,为流感病毒的主要传播对象;而45岁以上的中年和老年人所占比例较低㊂这可能与就诊习惯有关,婴幼儿和青少年以发热和上呼吸道感染症状作为初始就诊原因的比例较高,较易筛查出流感病例,而中年人和老年人则以其他主诉症状为就诊原因的居多㊂对儿童和有基础疾病的老年人均应加强防护措施,及时接种疫苗,预防流感㊂流感病毒感染者的症状不明显,临床诊断主要依赖于实验室检测,可引起人类呼吸道感染的病毒有200余种,因此检测试剂和方法的灵敏度和特异度对临床诊断尤为重要㊂巢式P C R的检测具有高特异度,和定量P C R相比,灵敏度提高了,可以减少假阴性结果的出现,有助于临床治疗[13]㊂而流感病毒快速检测试剂具有操作简单㊁快捷,分析结果清楚㊁易于判断,且不需要任何仪器㊁成本低廉等优点,非常适用于临床大量标本的初筛[14]㊂本研究中,胶体金法和巢氏P C R检测结果的一致性一般,具有较高的灵敏度和特异度㊂假阴性出现的原因可能为胶体金法检测依赖于抗原的表达,病毒感染初期和后期受自身免疫系统清除的影响,抗原的表达量低,未达到试剂盒的检测限㊂当临床流感症状明显而胶体金法检测阴性时,应进一步检测㊂出现假阳性的原因可能是包被的病毒抗体纯化不够,导致其和非特异性病毒发生交叉反应㊂本课题组后续还将胶体金法检测结果为假阴性的118例样本送去测序,发现其中80.95%为甲型H1N1,1.20%为甲型H3N2,14.29%为甲型H5N6, 3.60%为乙型流感,表明漏检的样本主要是甲流H1N1,为临床医生提供了一定的判断依据,同时本研究中发现巢氏P C R检测存在一定的污染,应注重实验人员的操作技能和专业培训㊂流感的发生具有明显的季节性,发病率具有上升的趋势,好发于秋冬季,应加强流感病毒变异的监测和防控㊂6岁以下的婴幼儿是流感的高发和易感人群,应及时接种疫苗,加强管理㊂胶体金法检测操作快速㊁简便,能基本满足对临床大量标本进行初筛和诊断的要求,但还应不断提高灵敏度和特异度,为流感病毒的早期㊁准确筛查提供更有效的帮助㊂参考文献[1]J A K U B C O V A L,V O Z A R O V A M,HO L L Y J,e t a l.B i o-l o g i c a l p r o p e r t i e s o f i n f l u e n z a A v i r u s m u t a n t s w i t h a m i n oa c i d s ub s t i t u t i o n s i n t h e HA2g l yc o p r o t e i n o f t h e HA1/HA2i n t e r a c t i o n r e g i o n[J].J G e n V i r o l,2019,100(9): 1282-1292.[2]刘丽军,杨静,祝菲,等.2017 2018年中国流感样病例暴发疫情分析[J].中华预防医学杂志,2019,53(10):982-986.(下转第452页)㊃644㊃国际检验医学杂志2021年2月第42卷第4期I n t J L a b M e d,F e b r u a r y2021,V o l.42,N o.4[10]D AMM E R MA N N W,P O L YWK A S,D E T TMA N N I,e ta l.A u t o a n t ib o d i e s a g a i n s t"r o d s a n d r i n g s"-r e l a t e d I M P-D H2i n h e p a t i t i s C g e n o t y p e1a n d D A A t h e r a p y i n a"r e-a l l i f e"c o h o r t[J].M e d M i c r ob i o l I mm u n o l,2017,206(5):379-382.[11]A L B E R 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流感疫情的快速实验室诊断与分析

流感疫情的快速实验室诊断与分析王晗;徐军;马洪滨;李波;崔恩博;姜天俊;李伯安;毛远丽【摘要】目的通过实验室病原学检查,结合流行病学史及临床症状,初步确定某部集体发热疫情的致病病原体.方法采集患者的血液、结膜分泌物及鼻、咽拭子等标本,分别通过间接免疫荧光法、酶联免疫吸附试验(ELISA)、反转录巢氏聚合酶链反应(RT-PCR)实验、病毒分离培养和细菌培养等实验室诊断方法,筛查致病病原体.结果所有鼻、咽拭子、结膜分泌物及血细菌培养未见致病菌生长.3例最后退热患者咽拭子的病毒分离培养结果为阴性.20种呼吸道病原体免疫荧光IgM抗体筛查结果显示,流感A型阳性率为68.4%(39/57),其余病原体抗体阳性率的升高无统计学意义.ELISA流感病毒总IgM抗体阳性率70.2%(40/57)、流感病毒A型IgM抗体阳性率64.9%(37/57)、B型为35.1%(20/57).所有鼻、咽拭子及结膜分泌物RT-PCR扩增结果未见特异扩增带.结论初步诊断此次群体发热由流感病毒感染引起.该疫情的实验室快速诊断为今后疫情的早期诊治及医院实验室开展传染病防治工作积累了经验.【期刊名称】《解放军医学杂志》【年(卷),期】2010(035)003【总页数】3页(P246-248)【关键词】酶联免疫吸附测定;流感,人;逆转录聚合酶链反应【作者】王晗;徐军;马洪滨;李波;崔恩博;姜天俊;李伯安;毛远丽【作者单位】100039,北京,解放军302医院临检中心;100039,北京,解放军302医院临检中心;100039,北京,解放军302医院临检中心;100039,北京,解放军302医院临检中心;100039,北京,解放军302医院临检中心;100039,北京,解放军302医院临检中心感染一科;100039,北京,解放军302医院临检中心;100039,北京,解放军302医院临检中心【正文语种】中文【中图分类】R446.52007年6月,某部出现不明原因集体发热。