流感病毒实验室检测方法的对比分析
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陈浩峰, 钟礼立, 方亦兵, et al. 流感病毒抗原消失时间探讨[J]. 中国当代儿科杂志, 2017(5).
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抗原与核酸检测对比
鼻咽拭子标本或口咽拭子标本检测甲型流感时，用核酸方法检测的阳性率高，且敏感度 也高于抗原方法，差异均有统计学意义。 不管核酸方法和抗原方法，鼻咽拭子的阳性率高于口咽拭子。可能原因：①在鼻咽部采 集的柱状上皮细胞多而鳞状上皮细胞少；②采集标本时拭子触及舌部被唾液中的溶菌酶 污染所致；③含藻酸钙的拭子或木柄拭子含有可抑制PCR或使病毒失活的物质。
PCR检测敏感性高于抗原检测的原因
以病毒 培养或RT—PCR法作为金标准检测甲、乙型流感 时，快速抗原方法 (美国Quidel公司生产)检测鼻咽拭子的敏感度最高(85％)、其次是鼻拭子 (78％)、鼻洗液(69％)，特异度均达97％。
3种不同的试剂在检测甲型H1N1(2009)流感患者鼻咽拭子时的敏感度也各 不相同，以Quidel公司 检测的敏感度最高，达53％。
田燕, 梁洁, 陆志刚. 流感病毒不同检测方法的探讨[J]. 现代预 防医学, 2013, 40(20):130-130. 张欣, 闫惠平, 马胤雪, et al. 不同方法检测流行性感冒样病例鼻咽和 口咽拭子标本诊断甲型流行性感冒的评价[J]. 中华传染病杂志, 2011, 29(3):154-157.
抗原与核酸检测对比
Plakokefalose等用ELISA和RT-PCR对甲型、乙型流感 病毒进行诊断，ELISA和RT-PCR的敏感性分别是64％和 100％，特异性分别是98％和97％。
Plakokefalos E , Markoulatos P ，Ktenas E ,et al. A comparative study of immunocapture ELISA and RTPCR for screening clinical samples from Southern Greece for human influenza virus types A and B[J]. Journal of Medical Microbiology, 2000, 49(11):1037.
张欣, 闫惠平, 马胤雪, et al. 不同方法检测流行性感冒样病例鼻咽和口咽拭 子标本诊断甲型流行性感冒的评价[J]. 中华传染病杂志, 2011, 29(3):154-157.
PCR检测敏感性高于抗原检测的原因
主要原因： PCR法在病毒含量低时经扩增仍能检出 其RNA，抗原检测在病毒含量较低（抗原载量低）时 达不到阳性检出限。 其他原因：与检测技术、标本类型不同或检测方法 及试剂不同有关。
Biblioteka Baidu
标本
鼻咽抽吸物(洗液)、支气管肺泡 灌洗液、咳出的痰、后鼻(喉)拭 子、鼻咽拭子、口咽拭子等。
抽吸物或洗液、灌洗液优于拭子 标本，因为拭子、痰标本中含有 较少的柱状上皮细胞(流感病毒 感染柱状上皮细胞并在其中繁殖) 而含有更多的鳞状上皮细胞。
拭子标本易于采集，往往在临床 上是首选。
抗原与核酸检测对比
流行性感冒诊疗方案（2018年版）[J].中国感染控制杂志, 2018.
潜伏期末到发病的急性期均有传染性。 临床症状出现前24-48小时即可排出病毒，排毒量在0.5-1天显 著增加，发病后24小时内达到高峰。 成人和较大年龄儿童一般持续排毒5天（3-8天），低龄儿童发 病时的排毒量与成人相同，但排毒时间更长。婴幼儿长期排毒 很常见（1-3周）。 研究证实，抗病毒药物需在症状出现后的36～48h内使用获取 最大疗效。
秦强, 徐保平. 流行性感冒诊疗方案（2018年版）解读[J]. 中国 临床医生杂志, 2018.
流感病毒实验室检测的方法
（1）血清学检测：血清IgM和IgG抗体。 （2）病毒抗原检测（快速诊断试剂检测）：检测核蛋白。免疫酶法、免疫胶体金和 免疫荧光法。 （3）病毒核酸检测：检测病毒的RNA。RT-PCR法（常规、荧光、套式、多重PCR、 PCR-RFLP、RRT-PCR）、实时荧光定量PCR法、依赖核酸序列的扩增法(NASBA)、介导 等温扩增法(LAMP)、焦磷酸测序法、基因芯片技术。特异性和敏感性最好，且能区 分病毒类型和亚型。 （4）病毒分离培养：使用鸡胚或传代细胞培养分离病毒，是流感病毒鉴定的金标准， 但灵敏度低、培养时间长、对实验室条件和实验人员的技术要求高。
流感病毒结构模式图 流感病毒电镜图
全国流感流行分析
2014-2018年4个监测年度流感病例时间分布
2017-2018全国各地区发病数地区分布
杨静, 陈涛, 祝菲, et al. 2017～2018年度中国大陆流行 性感冒病例报告情况分析[J]. 热带病与寄生虫学, 2018(2).
致病机制
1、血凝素结合呼吸道上皮含有唾 液酸受体的细胞 2、内吞作用进入细胞 3、病毒基因组在细胞核内进行转 录复制（8h） 4、呼吸道黏膜扩散并感染其他细 胞 5、诱发细胞因子风暴、全身炎症 反应、ARDS、休克及多脏器功能 衰竭。
血清学检测
• 检测患者血清中的抗体水平。 • 采集急性期、恢复期双份血清，通过血凝抑制实验、补体
结合实验、微量中和实验检测抗体滴度，若恢复期抗体滴 度比急性期上升4倍或4倍以上，便可诊断为流感。急性期 血清需在症状出现后尽快收集，恢复期血清则在2～4周后 采集。 • 用于回顾性诊断研究，监测流感病毒流行趋势的作用。
检测结果判读
核酸检测阳性：结合症状确诊流感病毒感染。 抗原检测阳性结果：结合症状临床诊断病毒感染。 抗原检测阴性结果：不能完全排除流感病毒感染。 假阴性：①病毒含量低；②靶表位区氨基酸的微小改变都可能造成单克 隆抗体不能检测或检测敏感性下降；③受稀释比例、结果判读时间长短 以及主观判断结果等不确定的因素影响。 建议核酸检测：抗原阳性但无症状，有症状但抗原阴性。 用药后症状消失抗原阳性。
Agoritsas K , Mack K , Bonsu B K , et al. Evaluation of the Quidel QuickVue Test for Detection of Influenza A and B Viruses in the Pediatric Emergency Medicine Setting by Use of Three Specimen Collection Methods[J]. Journal of Clinical Microbiology, 2006, 44(7):2638-2641. Vasoo S , Stevens J , Singh K . Rapid Antigen Tests for Diagnosis of Pandemic (Swine) Influenza A/H1N1[J]. Clinical Infectious Diseases, 2009, 49(7):1090-1093.
薛文仲, 张斌, 王中强, et al. 流感病毒的检测和分型技术研究进展[J]. 生 物技术通讯, 2011, 22(4):559-563. 流行性感冒诊疗方案（2018年版）[J]. 中国感染控制杂志, 2018. 田燕, 梁洁, 陆志刚. 流感病毒不同检测方法的探讨[J]. 现代预防医学, 2013, 40(20):130-130.
Rebeloh等利用病毒分离、EIA（免疫酶法）、RT-PCR对流感 的暴发流行进行诊断并比较，RT-PCT法比EIA法灵敏，并和 地区流感暴发流行具有良好的相关性。
Rebelodeandrade H , Zambon M C . Different diagnostic methods for detection of influenza epidemics.[J]. Epidemiology & Infection, 2000, 124(3):515-522.
流感病毒实验室检 测方法的对比分析
研究生：樊衡
流感病毒概述
• 正粘病毒科，RNA病毒。 • 感染对象：人、猪、马以及禽类。 • 核蛋白抗原性:甲型（A型）、乙
型（B型）、丙型（C型）。 • 甲流病毒根据H抗原（血凝素）和
N抗原（神经氨酸酶）分亚型，H 有17个亚型，N有10个亚型，乙型 流感病毒分Victoria和Yamagata系。 • 感染人的流感病毒：H1N1、H3N2， Victoria和Yamagata 系。 • 对乙醇、碘伏、碘酊等常用消毒 剂敏感；对紫外线和热敏感， 56℃条件下30分钟可灭活。
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抗原与核酸检测对比
鼻咽拭子标本或口咽拭子标本检测甲型流感时，用核酸方法检测的阳性率高，且敏感度 也高于抗原方法，差异均有统计学意义。 不管核酸方法和抗原方法，鼻咽拭子的阳性率高于口咽拭子。可能原因：①在鼻咽部采 集的柱状上皮细胞多而鳞状上皮细胞少；②采集标本时拭子触及舌部被唾液中的溶菌酶 污染所致；③含藻酸钙的拭子或木柄拭子含有可抑制PCR或使病毒失活的物质。
PCR检测敏感性高于抗原检测的原因
以病毒 培养或RT—PCR法作为金标准检测甲、乙型流感 时，快速抗原方法 (美国Quidel公司生产)检测鼻咽拭子的敏感度最高(85％)、其次是鼻拭子 (78％)、鼻洗液(69％)，特异度均达97％。
3种不同的试剂在检测甲型H1N1(2009)流感患者鼻咽拭子时的敏感度也各 不相同，以Quidel公司 检测的敏感度最高，达53％。
田燕, 梁洁, 陆志刚. 流感病毒不同检测方法的探讨[J]. 现代预 防医学, 2013, 40(20):130-130. 张欣, 闫惠平, 马胤雪, et al. 不同方法检测流行性感冒样病例鼻咽和 口咽拭子标本诊断甲型流行性感冒的评价[J]. 中华传染病杂志, 2011, 29(3):154-157.
抗原与核酸检测对比
Plakokefalose等用ELISA和RT-PCR对甲型、乙型流感 病毒进行诊断，ELISA和RT-PCR的敏感性分别是64％和 100％，特异性分别是98％和97％。
Plakokefalos E , Markoulatos P ，Ktenas E ,et al. A comparative study of immunocapture ELISA and RTPCR for screening clinical samples from Southern Greece for human influenza virus types A and B[J]. Journal of Medical Microbiology, 2000, 49(11):1037.
张欣, 闫惠平, 马胤雪, et al. 不同方法检测流行性感冒样病例鼻咽和口咽拭 子标本诊断甲型流行性感冒的评价[J]. 中华传染病杂志, 2011, 29(3):154-157.
PCR检测敏感性高于抗原检测的原因
主要原因： PCR法在病毒含量低时经扩增仍能检出 其RNA，抗原检测在病毒含量较低（抗原载量低）时 达不到阳性检出限。 其他原因：与检测技术、标本类型不同或检测方法 及试剂不同有关。
Biblioteka Baidu
标本
鼻咽抽吸物(洗液)、支气管肺泡 灌洗液、咳出的痰、后鼻(喉)拭 子、鼻咽拭子、口咽拭子等。
抽吸物或洗液、灌洗液优于拭子 标本，因为拭子、痰标本中含有 较少的柱状上皮细胞(流感病毒 感染柱状上皮细胞并在其中繁殖) 而含有更多的鳞状上皮细胞。
拭子标本易于采集，往往在临床 上是首选。
抗原与核酸检测对比
流行性感冒诊疗方案（2018年版）[J].中国感染控制杂志, 2018.
潜伏期末到发病的急性期均有传染性。 临床症状出现前24-48小时即可排出病毒，排毒量在0.5-1天显 著增加，发病后24小时内达到高峰。 成人和较大年龄儿童一般持续排毒5天（3-8天），低龄儿童发 病时的排毒量与成人相同，但排毒时间更长。婴幼儿长期排毒 很常见（1-3周）。 研究证实，抗病毒药物需在症状出现后的36～48h内使用获取 最大疗效。
秦强, 徐保平. 流行性感冒诊疗方案（2018年版）解读[J]. 中国 临床医生杂志, 2018.
流感病毒实验室检测的方法
（1）血清学检测：血清IgM和IgG抗体。 （2）病毒抗原检测（快速诊断试剂检测）：检测核蛋白。免疫酶法、免疫胶体金和 免疫荧光法。 （3）病毒核酸检测：检测病毒的RNA。RT-PCR法（常规、荧光、套式、多重PCR、 PCR-RFLP、RRT-PCR）、实时荧光定量PCR法、依赖核酸序列的扩增法(NASBA)、介导 等温扩增法(LAMP)、焦磷酸测序法、基因芯片技术。特异性和敏感性最好，且能区 分病毒类型和亚型。 （4）病毒分离培养：使用鸡胚或传代细胞培养分离病毒，是流感病毒鉴定的金标准， 但灵敏度低、培养时间长、对实验室条件和实验人员的技术要求高。
流感病毒结构模式图 流感病毒电镜图
全国流感流行分析
2014-2018年4个监测年度流感病例时间分布
2017-2018全国各地区发病数地区分布
杨静, 陈涛, 祝菲, et al. 2017～2018年度中国大陆流行 性感冒病例报告情况分析[J]. 热带病与寄生虫学, 2018(2).
致病机制
1、血凝素结合呼吸道上皮含有唾 液酸受体的细胞 2、内吞作用进入细胞 3、病毒基因组在细胞核内进行转 录复制（8h） 4、呼吸道黏膜扩散并感染其他细 胞 5、诱发细胞因子风暴、全身炎症 反应、ARDS、休克及多脏器功能 衰竭。
血清学检测
• 检测患者血清中的抗体水平。 • 采集急性期、恢复期双份血清，通过血凝抑制实验、补体
结合实验、微量中和实验检测抗体滴度，若恢复期抗体滴 度比急性期上升4倍或4倍以上，便可诊断为流感。急性期 血清需在症状出现后尽快收集，恢复期血清则在2～4周后 采集。 • 用于回顾性诊断研究，监测流感病毒流行趋势的作用。
检测结果判读
核酸检测阳性：结合症状确诊流感病毒感染。 抗原检测阳性结果：结合症状临床诊断病毒感染。 抗原检测阴性结果：不能完全排除流感病毒感染。 假阴性：①病毒含量低；②靶表位区氨基酸的微小改变都可能造成单克 隆抗体不能检测或检测敏感性下降；③受稀释比例、结果判读时间长短 以及主观判断结果等不确定的因素影响。 建议核酸检测：抗原阳性但无症状，有症状但抗原阴性。 用药后症状消失抗原阳性。
Agoritsas K , Mack K , Bonsu B K , et al. Evaluation of the Quidel QuickVue Test for Detection of Influenza A and B Viruses in the Pediatric Emergency Medicine Setting by Use of Three Specimen Collection Methods[J]. Journal of Clinical Microbiology, 2006, 44(7):2638-2641. Vasoo S , Stevens J , Singh K . Rapid Antigen Tests for Diagnosis of Pandemic (Swine) Influenza A/H1N1[J]. Clinical Infectious Diseases, 2009, 49(7):1090-1093.
薛文仲, 张斌, 王中强, et al. 流感病毒的检测和分型技术研究进展[J]. 生 物技术通讯, 2011, 22(4):559-563. 流行性感冒诊疗方案（2018年版）[J]. 中国感染控制杂志, 2018. 田燕, 梁洁, 陆志刚. 流感病毒不同检测方法的探讨[J]. 现代预防医学, 2013, 40(20):130-130.
Rebeloh等利用病毒分离、EIA（免疫酶法）、RT-PCR对流感 的暴发流行进行诊断并比较，RT-PCT法比EIA法灵敏，并和 地区流感暴发流行具有良好的相关性。
Rebelodeandrade H , Zambon M C . Different diagnostic methods for detection of influenza epidemics.[J]. Epidemiology & Infection, 2000, 124(3):515-522.
流感病毒实验室检 测方法的对比分析
研究生：樊衡
流感病毒概述
• 正粘病毒科，RNA病毒。 • 感染对象：人、猪、马以及禽类。 • 核蛋白抗原性:甲型（A型）、乙
型（B型）、丙型（C型）。 • 甲流病毒根据H抗原（血凝素）和
N抗原（神经氨酸酶）分亚型，H 有17个亚型，N有10个亚型，乙型 流感病毒分Victoria和Yamagata系。 • 感染人的流感病毒：H1N1、H3N2， Victoria和Yamagata 系。 • 对乙醇、碘伏、碘酊等常用消毒 剂敏感；对紫外线和热敏感， 56℃条件下30分钟可灭活。