微生物接种方法-教学设计.

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实验六产淀粉酶细菌的分离二微生物的分离培养和接种方法教案

本实验采用透明圈检验法检测培养物中是否有产淀粉酶微生物的生长。
三、实验器材
1、材料：土壤、粮食或者食品。 2、培养基：PDA培养基、营养琼脂培养基。 3、器皿：三角瓶、移液管、试管、培养皿、玻璃刮铲、酒精灯、接种环等。 4、仪器：电炉、恒温培养箱。
四、实验方法和步骤
1、微生物的纯种分离平板稀释分离法
10-3 1ml
10-4
试管中原始装 9ml无菌水
四、实验方法和步骤
1、微生物的纯种分离
（1）稀释涂布分离法：制平板—制菌悬液— 涂布—培养—获得纯种微生物。
（2）平板划线法：制平板—制菌悬液—划线—培养—获得纯种微生物。
微生物纯种分离
（一）涂布分离法
微生物纯种分离
（二）划线分离法
微生物纯种分离
（三）定量稀释分离法
四、实验方法和步骤
2、微生物的接种
（1）斜面接种五步曲：a. 接种环灭菌 b. 拔棉塞及试管口
灭菌 c. 接种 d. 塞棉塞 e. 接种环灭菌（2）培养皿接种（霉菌形态观察及鉴定用）倒平板 — 接种（单/三点接）— 接种环灭菌。
五、作业题
1、为什么用稀释法和平板划线法能获得微生物纯种？ 2、霉菌平板接种为什么要使平板倒置？
一、实验目的及要求
1、掌握稀释分离和平板划线获得微生物纯种的方法。 2、学会微生物接种技术。
二、实验原理
从混杂微生物群体中获得只含某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离纯化。平板分离法普遍适用于微生物的分离与纯化，其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求，或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。

微生物接种方法

微生物接种1、平板倾注法1）、以无菌操作，将检样25g（或25ml）剪碎放于含有225ml灭菌生理盐水的广口瓶内（瓶内置有适量玻璃珠）或灭菌研钵内，经充分振摇或研磨用成1：10的均匀稀释液。

2）、用1.0ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1.0ml，沿管壁徐徐注入含有9.0ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内液面），振摇试管混合均匀，作成1：100的稀释液。

3）、另取1.0ml灭菌吸管，按上述操作作10倍稀释，如此每递增稀释一次，即换1支1.0ml 吸管。

4）、根据食品卫生要求或对标本污染程度的估计，选择2-3个适宜稀释度，分别作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释液的吸管移1.0ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。

5）、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃营养琼脂（可放于46×1℃水浴保温）注入平皿约15ml，并移动平皿使混合均匀。

同时将营养琼脂培养基倾入加有1.0ml灭菌生理盐水的平皿内作空白对照。

6）、待稀释液入平皿后，翻转平板，置36×1℃温箱内培养24±2h（肉、水产品、乳和蛋品为48±2h）取出，计算平板内菌落数，乘以稀释倍数，即得每克（或ml）样品所含菌落总数。

2、平板表面涂布法将营养琼脂制成平板，经50℃l一2小时或35℃18—20小时干燥后，于其上滴加检样稀释液0．2ml，用L捧涂布于整个平板的表面，放置片刻(约lO分钟)，将平板翻转，移至36±1℃温箱内培养24±2小时(水产品用30℃培养48±2小时)，取出，按前述方式进行菌落计数，然后乘以5(由O．2m1换算为1m1)，再乘以样品稀释的倍数，即得每g或m1 检样所含菌落数。

此法较上述倾注法为优，因菌落生长在表面，便于识别和检查其形态，虽检样中带有食品颗粒也不会发生混淆，同时还可使细菌不必遭受融化琼脂的热力，不致因此而使菌细胞受到损伤而不生长，从而可避免由于检验操作中的不良因素而使检样中细菌菌落数降低。

实验二微生物的分离、纯化和接种

实验二微生物的分离、纯化和接种微生物的分离、纯化1、目的要求1.1了解微生物分离和纯化的原理1.2掌握常用的纯化分离微生物的方法2、基本原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。

本实验采用平板分离法：该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化。

其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、pH值、温度和溶解氧等要求，或者加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。

微生物在固体培养基生长形成的单个菌落可以是一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。

获得单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术来完成。

而纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到。

本实验将在混合有几种微生物菌液中分离纯化出两种微生物来。

3、实验材料3.1培养基肉汤培养基（固体）。

3.2溶液或试剂盛4.5ml无菌水的试管，其中有一只盛有玻璃珠。

3.3仪器或其他用具无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环，无菌培养皿，涂布器等。

4流程倒平板制备梯度稀释液涂布（或划线法）培养挑单菌落保存。

5、步骤5.1平板划线分离法5.1.1倒平板倒平板的方法：右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻轻地拔出，试管或瓶口保持对着火焰；然后左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约15ml,加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后置于桌面上，待凝固后即成平板(教材p367图13-14)。

并用记号笔标明培养基名称、菌液编号和试验日期。

5.1.2划线在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取菌悬液一环在平板上划线(教材p367图13-15)。

划线的方法很多，但无论采用哪种方法，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使之形成单个菌落。

微生物常用的接种方法

微生物常用的接种方法微生物的接种是微生物学实验中的一个重要步骤，它是将微生物从一个培养基转移到另一个培养基的过程。

接种方法的选择对于微生物的培养和研究具有重要意义。

下面将介绍一些微生物常用的接种方法。

一、平板接种法。

平板接种法是将微生物接种在培养基的表面上，通过接种棒或铅笔头的方式在培养基表面画线或涂抹，形成菌落。

这种接种方法适用于培养革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，通常用于分离和计数微生物。

在进行平板接种时，需要注意接种的均匀性和细菌数量的控制，以避免产生过多或过少的菌落。

二、液体接种法。

液体接种法是将微生物接种在含有营养物质的液体培养基中，通过摇床或振荡器进行培养。

这种接种方法适用于培养需要大量微生物的情况，如大规模生产微生物菌种或进行微生物代谢产物的生产。

在进行液体接种时，需要注意培养液的搅拌速度和通气情况，以保证微生物的充分生长和代谢。

三、斜面接种法。

斜面接种法是将微生物接种在倾斜的培养基表面上，通过接种棒或铅笔头的方式在斜面上画线或涂抹，形成菌落。

这种接种方法适用于培养对氧需求较高的微生物，如厌氧菌和微需氧菌。

在进行斜面接种时，需要注意斜面的倾斜角度和接种的均匀性，以保证微生物的充分生长和代谢。

四、深层接种法。

深层接种法是将微生物接种在含有固体琼脂的试管或培养瓶中，通过接种棒或铅笔头的方式在琼脂表面插入或涂抹，形成菌落。

这种接种方法适用于培养对氧需求较低的微生物，如厌氧菌和微需氧菌。

在进行深层接种时，需要注意琼脂的固化温度和接种的深度，以保证微生物的充分生长和代谢。

五、滴播接种法。

滴播接种法是将微生物接种在含有营养物质的琼脂平板上，通过滴管或移液器滴播微生物悬液，形成菌落。

这种接种方法适用于培养对氧需求较高的微生物，如厌氧菌和微需氧菌。

在进行滴播接种时，需要注意滴播的均匀性和微生物悬液的浓度，以保证微生物的充分生长和代谢。

总结，微生物的接种方法多种多样，选择合适的接种方法对于微生物的培养和研究具有重要意义。

微生物接种方法

微生物接种方法微生物接种是生物实验中的一项基本技术，也是各种微生物检测和研究中不可缺少的步骤。

本文将介绍一些常见的微生物接种方法，包括平板划线法、斜面接种法、液体培养基接种法和穿刺接种法等。

平板划线法是一种常用的微生物接种方法，其目的是将菌种纯化，得到单一的菌落。

该方法通过在固体培养基上划线，使菌种在培养基上繁殖并形成菌落。

具体步骤如下：(1)将固体培养基灭菌后倒入培养皿中，待凝固后加入适量菌液。

(2)用接种环取适量菌液，在培养皿表面划线。

(3)将培养皿放入适宜的温度下培养，观察菌落的生长情况。

(4)根据需要重复划线操作，直至得到单一的菌落。

斜面接种法是一种常用的微生物接种方法，其目的是将菌种接种到斜面培养基上，以便于观察和保存。

该方法通过将菌液加入到灭菌后的斜面培养基中，使菌种在斜面上繁殖并形成菌落。

具体步骤如下：(1)将斜面培养基灭菌后放置在实验台上，用无菌操作法加入适量菌液。

(2)将接种环放入菌液中沾取少量菌种，然后在斜面培养基上划线接种。

(3)将培养皿放入适宜的温度下培养，观察菌落的生长情况。

(4)根据需要重复划线操作，直至得到单一的菌落。

液体培养基接种法是一种常用的微生物接种方法，其目的是将菌种接种到液体培养基中，以便于微生物的生长和繁殖。

该方法通过将菌液加入到灭菌后的液体培养基中，使菌种在液体培养基中繁殖并形成微生物。

具体步骤如下：(1)将液体培养基灭菌后倒入试管中，加入适量菌液。

(2)用摇床或其他设备将试管中的培养基混合均匀。

(3)将试管放入适宜的温度下培养，观察微生物的生长情况。

微生物接种技术是生物工程中一项重要的技术，广泛应用于生物制品制造、环境生物治理、医学诊断等领域。

本文将介绍微生物接种技术的基本原理、应用场景以及发展前景。

微生物接种技术是指将目的微生物通过一定的方式引入到培养基或发酵系统中，使其在特定的环境下生长繁殖，以达到特定的生物制品或环境治理的目的。

该技术的主要环节包括菌种选择、接种量确定、接种方法选择和培养条件控制等。

实验3-微生物接种技术

实验三微生物接种技术一、实验目的1、掌握无菌操作在微生物接种过程中的重要性。

2、掌握几种常用的微生物接种方法。

3、掌握微生物微生物扩大繁殖的基本方法。

4、认识微生物接种工具二、实验原理微生物接种技术是生物科学研究中最基本的操作技术。

由于实验目的、培养基种类及容器等不同，所用接种方法不同，如斜面接种、液体接种、固体接种和穿刺接种等，以获得生长良好的纯种微生物。

为此，接种必须在一个无杂菌污染的环境中进行严格的无菌操作；同时，因接种方法的不同，常采用不同的接种工具，如接种针、接种环、移液管和玻璃刮铲等。

三、实验器材主要仪器及设备无菌室、超净工作台、培养箱、振荡器、接种针、接种环、接种钩、接种铲，试管固体斜面培养基、培养基平板、三角瓶液体培养基，PDA平板及斜面，牛肉膏-蛋白胨-琼脂平板、斜面培养基、牛肉膏-蛋白胨液体培养基、试管半固体培养基。

菌种大肠杆菌（Escherichia coli)、青霉(Penicillium sp．)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae Hansen)、细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)放线菌等。

四、操作步骤(一)斜面接种技术具体操作如下：1、贴标签接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等。

贴在距试管口径2-3厘米的位置。

2、点燃酒精灯。

3、接种用接种环将菌种移接到贴好标签的试管斜面上。

无菌操作程序简述如下：⑴手持试管将菌种和用于接种的斜面两支试管用大拇指和其他四指握在左手中、使中指位于两试管之间。

斜面向上，并使它们位于水平位置(图a)。

⑵旋松棉塞先用右手将棉塞旋松，以便接种时易于拔出。

⑶取接种环右手拿接种环在火焰将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管的其余部分，均用火烧过灭菌。

⑷拔棉塞用右手的无名指、小指和手掌边先后拔出试管的棉塞，然后让试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫)，如图b、c所示。

⑸环冷却将灼烧过的接种环伸入菌种管，先使环接触没有长菌的培养基部分，使其冷却。

实验微生物接种技术讲解

实验微生物接种技术讲解实验微生物接种技术讲解微生物接种篇一：实验微生物接种技术一、目的：学习微生物工作的基本接种方法，建立纯培养技术中的“无菌”概念，掌握无菌操作技术。

二、原理：所谓接种就是将一定量的纯种微生物在无菌操作条件下转移到另一已灭菌，并适宜于该菌生长繁殖所需的培养基上的过程。

本实验要求严格进行无菌操作，一般是在无菌操作台或在实验室内火焰旁进行。

根据不同的实验目的和培养方式，可以采用不同的接种工具和接种方法。

三、实验材料：斜面培养基、液体培养基、平板培养基、记号笔、酒精灯、接种针、消毒酒精、涂布棒等。

四、操作步骤（一）无菌操作菌种分离或移接工作应在无菌环境中进行，接种室、接种箱或超净工作台是常用的接种环境。

用前先清洁好卫生，再进行消毒处理。

可用紫外线灯和甲醛熏蒸的双重作用，或用3%来苏尔及其他表面消毒进行喷雾。

操作者的手应先用肥皂洗净，再用酒精棉球消毒；整个操作过程都要靠近酒精灯火焰；接种工具在用前和用后必须在灯焰上灭菌；棉塞不得乱放，操作中只能夹在手上；不能有跑、跳等力度大的动作，以免引起空气大振动而增加染菌机会。

（二）接种方法（1）斜面接种：从已长好微生物的菌种管移接到另一斜面管的方法。

此法用于好气性微生物的接种。

左手持菌种管和斜面管，使斜面向上，并尽量放平。

用右手先将棉塞拧转松动，再拿接种环，用右手的小指、无名指和手掌拨下棉塞并夹紧，同时将管口在火焰上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌后插入管内，冷却、挑菌，立即转入斜面管底部，沿斜面划曲线或直线。

图1.斜面接种示意图（2）液体接种：由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。

操作与上法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基中时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀，即可培养。

如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管接种。

（3）穿刺接种：用接种针挑取菌种后，插入深层固体培养基内，（不要刺到底部），再沿原路拔出，此法用于厌气性细菌接种、检查细菌的运动能力。

微生物实验中的接种分离和培养操作步骤

微生物实验中的接种、分离和培养操作步骤微生物实验中的接种、分离和培养操作步骤一、目的要求1、掌握各种分离、接种方法。

2、掌握无菌操作基本环节。

二、实验说明微生物在自然界中呈混杂状态存在，要获得所需菌种，必需从中把它们分离出来。

在保存菌种时不慎受到到污染也需予以分纯。

微生物分离和纯化的方法很多，但基本原理却是相似的，即将待分离的样品进行一定的稀释，并使微生物的细胞（或孢子）尽量以分散状态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。

然而上述工作又离不开接种，即将一种微生物移到另一灭过菌的培养基上的过程。

三、实验材料1、恒温培养箱。

2、接种环、玻璃棒、吸管、酒精灯。

3、培养基（上次实验配制的）。

4、大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌。

四、方法步骤（一）接种的操作1、斜面接种（接金黄葡萄球菌）（1）操作前，先用75%酒精擦手，待酒精挥发后点燃酒精灯。

（2）将菌种管和斜面握在左手大姆指和其它四指之间，使斜面和有菌种的一面向上，并处于水平位置。

（3）先将菌种和斜面的棉塞旋转一下，以便接种时便于拔出。

（4）左手拿接种环（如握钢笔一样），以火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管其余部位也过火灭菌。

（5）用右手的无名指、小指和手掌将菌种管和待接斜面试管的棉花塞或试管帽同时拔出，然后让试管口缓缓过火灭菌（切勿烧过烫）。

（6）将灼烧过的接种环伸入菌种管内，接种环在试管内壁或未长菌苔的培养基上接触一下，让其充分冷却，然后轻轻刮取少许菌苔，再从菌种管内抽出接种环。

（7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。

从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。

有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。

（7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。

从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。

有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。

（8）接种完毕后抽出接种环灼烧管口，塞上棉塞。

微生物接种方法

常用的几种接种细菌应用接种针（环）来沾取细菌标本，进行接种。

接种环与接种针为用白金丝或合金丝所制，亦可用电炉丝代替，因它能耐高热且散热快，便于接种前后通过火焰灭菌（整个接种环烧红即达到灭菌目的）。

在使用接种环时一般用右手持笔式较为方便，左手可持培养基进行配合，其接种程序可分为：灭菌接种环T稍冷T沾取细菌样品T进行接种（包括：启盖或塞、接种划线、加盖或塞）T进行接种环火菌等五个程序。

不同培养基，接种方法也不同，分述如下：一、平板划线接种法（分离培养法）是将细菌分离培养的常用技术，其目的是将混有多种细菌的培养物，或标本中不同的细菌（病原菌与非病原菌）使其分散生长，形成单个菌落或分离出单一菌株，便于识别鉴定。

平板划线接种方法较多，其中以分段划线法与曲线划线法较为常用。

（一）分段划线法平板分段划线（左）及培养后菌落分布图本法多用于含菌量较多的标本。

方法是以接种环沾取少许样品先涂布于平板培养基表面一角作为第一段划线（划线时接种环与培养基表面呈45 度角），然后将接种环置火焰上灭菌，俟冷（可接触平板试之，如不融化琼脂，即已冷却），于第二段处再作划线，且在开始划线时与第一段的划线相交接数次，以后划线不必再相接，待第二段划完时，再如上法灭菌，接种划线，依次划至最后一段，灭菌接种环。

这样每一段划线内的细菌数逐渐减少，即以获得单个菌落，戈U线接种完毕，盖好平皿盖，倒置（平板底部向上）于37C温箱中培养。

（二）连续划线法：此法多用于接种材料中含菌数量不太多的样品或培养物。

方法是先将样品或培养物涂于平板表面的一角，然后用接种环自样品涂擦处开始，向左右两侧划开并逐渐向下移动，连续划成若干条分散的平等线。

二、斜面接种法此法主要用于移种纯菌，使其增殖后用于鉴定或保存菌种。

通常是从平板培养物上挑取某一单独菌落或者从一支已长好的斜面菌种，移种至斜面培养基上，接种步骤如下（以从已长好的斜面菌种转接为例）：（一）左手拿两支试管，一支为经灭菌的斜面，另一支为已长好的菌种。

微生物接种方法-倾注法接种及注意事项-PPT.pptx

注
分散的细菌就被固定在原位形成菌落。
意
事
项
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过渡页
倾注法接种操作
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1.菌悬液梯度稀释 2.加样 3.倾注平板
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倾
二、倾注法接种操作
注
法
1.菌悬液梯度稀释
接种及注意事项
① 编号：取6支盛有9mL无菌水的试管排列于试管架上，依次标上10-1，102，10-3，10-4，10-5，10-6字样。 ② 稀释：以1ml无菌吸管按无菌操作从样品管中吸取1mL菌液于10-1试管中，然后用另一吸管在10-1试管中来回吹吸三次，使其混合均匀，制成10-1稀释液。再用此吸管从10-1管中吸取1mL稀释液注入10-2管中，依次制成10-2， 10-3，10-4，10-5，10-6稀释液。
倾注法接种及注意事项
主讲：王娟
目录页
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倾注法接种定义倾注法接种操作
注意事项
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倾
一、倾注法接种定义
注
法接
定义：
种
将微生物菌悬液放入培养皿中，然后再倒入冷却至45℃左右的固体培养
及
基，迅速轻轻摇匀，借熔化的琼脂将菌液中的菌群冲散，待琼脂冷凝后，
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倾
二、倾注法接种操作
注
法接
2.加样
种
用1mL无菌吸管分别吸取10-4，10-5，10-6稀释液1mL注入已编好号的10-4，
及
10-5，10-6号无菌培养皿中。
注
意
事

微生物常用的接种方法

微生物常用的接种方法微生物的接种方法主要分为直接接种和间接接种两种。

1. 直接接种：直接将微生物菌株接种到所需培养基或宿主中，常见的直接接种方法包括：刷涂法、滴液法、插管法、点刺法等。

刷涂法：将微生物菌株涂布在培养基表面，常用在固体培养基上。

先将培养基倒在无菌平板上，然后用无菌棉签挑取微生物菌株，涂布在培养基表面。

然后，用无菌铂丝将涂布的微生物菌株均匀划开，使其均匀分布在培养基上。

滴液法：将微生物菌株滴加到培养基上，常用于液体培养基。

将所需培养基倒入无菌试管中，然后用移液器吸取微生物菌株悬液，滴入试管中的培养基。

插管法：适用于需要氧气的微生物。

首先将无菌棉球塞入试管底部，然后用被接种菌株液体湿润棉球，最后将试管加盖并放入适宜的环境进行培养。

点刺法：适用于菌落计数。

选取已培养的纯菌落，用精细铂丝在无菌培养基上点刺菌落，再迅速涂布在培养基上。

2. 间接接种：首先将微生物菌株培养增殖至一定量或特定状态，然后将培养液接种到所需培养基或宿主中。

常见的间接接种方法包括：液体传代接种、平板传代接种和传代接种。

液体传代接种：将微生物初代培养液添加至新的液体培养基中进行传代培养。

首先取少量初代培养液，转移到新的培养基中，然后逐渐增加培养基的体积，直至达到所需的培养体积。

平板传代接种：将微生物初代培养液均匀涂布在培养基表面，待菌落生长后，挑取单个菌落接种到新的培养基或药敏试验板中。

传代接种：通过逐步培养，将微生物菌株传代至新的培养条件。

首先从原始菌株中选取少量接种到培养基中，经过一段时间的培养后，再从这些培养物中选取一部分接种到新的培养条件中，如改变培养基成分、温度等，以适应新的培养条件。

微生物的接种方法不仅影响菌落生长、菌株纯度和培养效率，也直接影响到后续实验的结果准确性。

因此，在进行微生物实验时，需要根据实验的目的和要求选择合适的接种方法，并严格遵守无菌操作的规范，以保证实验结果的可靠性。

微生物的接种、分离和培养

实验六微生物的接种、分离和培养一、目的要求1．理解和掌握微生物接种、分离基本技术的原理与操作要领。

2．熟悉微生物接种、分离的无菌操作过程。

3．了解微生物需氧培养的方法。

4．学会观察和描述微生物的各种培养性状。

二、实验原理1. 微生物接种指将微生物纯种或含菌材料转移到另一营养基质上的过程。

根据不同的目的可采用的不同的接种方法，如平板划线法、斜面划线法、浸洗法、涂布法、倾注法、穿刺法、点植法和影印法。

2. 微生物分离指依据微生物的特征，采用各种方法从含菌样品中获得由单一个体（如单一菌体或孢子）或一段菌丝生长繁殖形成的微生物群体的过程。

常用的分离方法有：平板划线法、稀释涂布平板分离法、稀释倾注平板分离法和单细胞分离法。

平板分离法的基本原理包括两个方面：（1）选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养、酸碱度、温度和氧等要求或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。

（2）微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。

因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。

值得指出的是从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。

因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微生物的纯培养要经过一系列的分离与纯化过程和多种特征鉴定方能得到。

3. 微生物培养指微生物被接种到营养基质后，在一定条件下生长繁殖的过程，分需氧培养法和厌氧培养法。

本实验所做的需氧培养法，是采用生化培养箱和恒温摇床进行的。

4. 微生物的培养形状培养性状是微生物在培养基上所表现的群体形态和生长情况。

平板菌落特征、斜面和液体培养特征、半固体穿刺培养特征等培养性状，是鉴定微生物的重要形态学依据。

菌落是由单个或少数细胞在固体培养基表面或里面生长繁殖所形成的眼可见的子细胞群体。

菌落形态会因菌种不同或菌种相同但所用培养基、培养温度和时间等条件不同而存在不同程度的差异。

微生物的接种实验报告

微生物的接种实验报告微生物的接种实验报告一、引言微生物是一类极小的生物体，包括细菌、真菌、病毒等。

它们广泛存在于自然界中的各个环境中，对生态系统的平衡和人类健康具有重要影响。

本实验旨在通过接种微生物的方式，观察其在不同培养基条件下的生长情况，为微生物研究提供一定的参考。

二、实验材料与方法1. 实验材料：- 细菌培养基：含有营养物质的琼脂培养基、大肠杆菌培养基、葡萄球菌培养基。

- 真菌培养基：含有蔗糖和琼脂的培养基。

- 病毒培养基：含有细胞培养基和病毒接种液的培养基。

- 微生物接种液：细菌、真菌、病毒接种液各一份。

2. 实验方法：- 准备好所需的培养基和接种液。

- 将细菌培养基倒入培养皿中，用接种针分别从细菌接种液中取出适量的细菌，均匀涂抹在培养基上。

- 将真菌培养基倒入培养皿中，用接种针分别从真菌接种液中取出适量的真菌，均匀涂抹在培养基上。

- 将病毒培养基倒入培养皿中，用接种针分别从病毒接种液中取出适量的病毒，滴在培养基上。

- 将培养皿密封好，放置在恒温培养箱中，保持适宜的温度和湿度。

- 观察培养皿中微生物的生长情况，记录相关数据和现象。

三、实验结果与分析1. 细菌生长情况：在琼脂培养基上，细菌呈现出白色或黄色的圆形菌落，生长迅速，菌落边缘清晰。

大肠杆菌在大肠杆菌培养基上呈现出金黄色的菌落，而葡萄球菌在葡萄球菌培养基上呈现出乳白色的菌落。

这说明不同的细菌对培养基的要求有所不同，不同的培养基能够提供不同的营养物质，从而影响细菌的生长。

2. 真菌生长情况：在含有蔗糖和琼脂的培养基上，真菌呈现出丰富的菌丝生长，形成了类似蜘蛛网状的结构。

这说明真菌对蔗糖等碳源的利用能力较强，能够迅速生长和繁殖。

3. 病毒生长情况：由于病毒需要依赖宿主细胞进行复制和生长，因此在培养基上无法直接观察到病毒的生长情况。

但我们可以通过观察宿主细胞的变化来间接判断病毒是否感染了宿主细胞。

如果宿主细胞出现异常形态、细胞质变化或细胞溶解等现象，可以初步判断宿主细胞可能受到病毒感染。

2024年微生物学实验教案(多场合)

2024年微生物学实验教案一、教案背景与目标微生物学作为生命科学领域的重要组成部分，在研究微生物的结构、功能、遗传和生态等方面具有重要作用。

本教案旨在通过实验操作，让学生深入了解微生物的基本特性，掌握微生物学实验的基本技能，培养其实验操作能力和科学思维能力。

二、教学内容与实验项目1.微生物的形态观察（1）光学显微镜的使用与维护（2）细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的形态观察2.微生物的染色技术（1）革兰氏染色法（2）芽孢染色法（3）抗酸染色法3.微生物的纯培养技术（1）无菌操作技术（2）接种与分离技术（3）纯培养的鉴定与保存4.微生物计数与生长曲线测定（1）显微镜直接计数法（2）平板计数法（3）生长曲线的测定5.微生物的生理生化实验（1）碳源利用实验（2）氮源利用实验（3）维生素需求实验（4）酶活性实验6.微生物的分子生物学实验（1）DNA提取与纯化（2）PCR扩增技术（3）基因克隆与表达三、教学安排与课时分配1.微生物的形态观察（2课时）2.微生物的染色技术（4课时）3.微生物的纯培养技术（6课时）4.微生物计数与生长曲线测定（4课时）5.微生物的生理生化实验（6课时）6.微生物的分子生物学实验（6课时）四、教学方法与手段1.讲授与演示：教师通过讲解、演示实验操作，使学生了解实验原理、方法和操作步骤。

2.实践操作：学生在教师指导下进行实验操作，培养实验技能。

3.小组讨论：学生分组进行实验数据的分析与讨论，培养团队协作和科学思维能力。

4.考核评价：通过实验报告、操作考试和理论知识考试，全面评价学生的学习效果。

五、教学资源与设施1.教材：选用权威、实用的微生物学实验教材。

2.实验室：配备光学显微镜、PCR仪、电泳仪、恒温培养箱等实验设备。

3.试剂与耗材：提供细菌、放线菌、酵母菌和霉菌等微生物菌株，以及实验所需试剂和耗材。

4.网络资源：利用网络平台，提供实验课件、教学视频等辅助教学资源。

六、教学效果与反馈1.学生能熟练掌握微生物学实验的基本技能，具备独立进行实验操作的能力。

微生物接种技术

实验八微生物无菌接种技术一、实验原理微生物接种就是在无菌条件下，用接种工具（针、环）从一支原菌种中挑取少许菌体，接入到另一支新的培养基上扩大培养的技术。

要想得到大量的菌种，适应生产、科研和教学要求，就要进行微生物的接种，扩大菌种数量。

接种因使用不同容器、不同的培养基，达到不同的目的，而有不同的接种方法，但它们的基本要求是相同的。

通常接种都应在空气经过消毒灭菌的接种室或接种箱或超净工作台内完成。

二、实验步骤1.斜面接种（1）左手夹住试管（2）灼烧接种环（3）拔出棉塞，夹在小指、无名指上，管口过火（4）取菌、接种，接种后在火焰上方迅速塞好棉塞（5）写好标签（菌种名、日期、接种者姓名），贴于斜面正上方前端约1cm处.（6）于37度培养箱中培养24小时。

（全班统一装入一保鲜袋）（7）一星期后观察分离效果，拍照，分析结果2.平板培养基（平板）制备（1）将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。

（2）右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。

（3）用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约10到20ml）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。

（4）等待平板冷却凝固。

3.涂布平板法（以小组为单位，对混合菌菌悬液进行涂布分离）(1)用75%酒精或0.01%新洁而灭擦洗双手,进行消毒处理。

（2）将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。

(3) 取少量菌液滴加到培养基表面。

（4）将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8~10s。

（5）用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面，涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀。

（6）将接种好的平板在皿底做好标记。

（7）涂布分离的平板全班一起放入保鲜袋中，37度培养箱中倒置培养24h。

（8）一星期后以小组为单位观察分离效果，拍照，分析结果4.划线分离：从污染平板中纯化细菌菌落（每人1个平板）(1)用75%酒精或0.01%新洁而灭擦洗双手,进行消毒处理。

接种方法——精选推荐

实验六、微生物细胞数量的平板培养计数微生物菌种纯化保藏一、微生物细胞数量的平板培养计数法（一）、实验目的了解微生物细胞数量的稀释平板培养计数方法、接种方法，确定不同土壤样品中细菌、放线菌、霉菌等的细胞数量，学习鉴别不同微生物的菌落特征。

、实验材料（二）1．样品：过筛风干的大田土和过筛新鲜的园艺土；植物种子等。

2．培养基：3．试剂：5mL 1%重铬酸钾溶液分装在 15×150 试管中，灭菌备用；20mg/mL 链霉素溶液过滤除菌后，分装在1.5mL Enpendorff管中备用。

4．其他灭菌物品：90mL 无菌水分装于 300mL 三角瓶中（含 30～40 粒玻璃珠）；4.5mL 无菌水分装于 15×150 试管中；Φ=9cm的培养皿；1mL 吸管；滴管；1mL 枪头 5．仪器与材料：lmL移液器、天平、称量纸、记号笔、玻璃刮铲等。

、实验原理（三）微生物细胞数量的测定通常包括总细胞计数法、比浊法和活菌计数法三种方法。

其中血球计数板法在前面实验中已作过详细介绍，而本实验则要求大家重点掌握活菌计数法。

稀释平板计数法是根据微生物在固体培养基表面所形成的单个菌落这一培养特征而设计的，其前提是必须由一个单细胞繁殖形成一个菌落，即一个菌落代表一个单细胞。

计数时，首先将待测样品制成一系列均匀的稀释液，并尽量使样品中的微生物细胞充分散开，以保证每个细胞能完全单独存在，否则一个菌落就不能代表一个细胞，然后选择合适的稀释度和稀释液接种到培养基平板中，使其均匀分布于平板培养基内。

最后经过一段时间的培养，统计相应稀释度平板上的菌落数目，即可计算出样品的含菌数。

因此该方法包括了含菌样品稀释液的制备、培养基平板接种、培养和计数及微生物细胞数量的计算等四个步骤，常用于某些成品如杀虫菌剂的检定、生物制品的检验、土壤含菌量的测定以及食品、水源等污染程度的检验等。

在稀释平板计数法的进行过程中，通常需要根据不同的分离目的采取不同的微生物细胞接种方法，即表面涂布法和混菌法，或称为表面接种法和基内接种法。

《接种方法》教学设计

《接种方法》教学设计一、教学目标了解微生物接种的工具和基本方法二、教学重难点平板划线法、涂布平板法三、教学过程导入新课微生物培养的目的就是为了获得纯净的微生物，由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。

纯培养的步骤包括配制培养基、灭菌（培养基和器具）、微生物接种、分离、恒温箱中培养。

我们这节课就一起来了解一下微生物常用的接种方法。

微生物接种指在无菌条件下将微生物或含菌材料转移到合适其生长繁殖的培养基中的过程。

接种工具：1）玻璃涂布器——涂布接种2）接种针——穿刺接种3）接种环——划线接种微生物方法1、划线接种这是最常用的接种方法。

即在固体培养基表面作来回线形的移动，就可达到接种的作用。

斜面培养法：用琼脂等固体培养基在试管中制成斜面，在此面上对微生物进行培养称为斜面培养。

这种培养可以充分观察所培养的微生物的生长状态，并且接种方便。

（视频展示）平板划线法：用带有微生物的接种环在平板培养基表面通过分区划线而达到纯化分离微生物的方法。

通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，称为菌落。

2、涂布接种将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。

通过涂布器在琼脂固体培养基表面的操作，使菌种分散到培养基的表面。

可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。

（视频展示）3、穿刺接种在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。

用的接种工具是接种针;用的培养基一般是半固体培养基。

接种时，用接种针(尖部挺直的)蘸取少量菌液，自固体深层培养基表面的中心点垂直穿刺，直到底部，保持接种线整齐。

接种完毕后，静置培养，可根据穿刺部分菌落的生长和扩散状况来判断该微生物的运动性能和对氧气的需求状况。

在微生物接种过程中的注意事项：1、保证器具的灭菌。

“微生物的接种以及菌落和抗生素抑菌现象的观察”实验教学设计

“微生物的接种以及菌落和抗生素抑菌现象的观察”实验教学
设计
吴晓凌;谭桂花
【期刊名称】《中学生物学》
【年(卷),期】2022(38)9
【摘要】“微生物的实验室培养”这一实验是高中生物的一个重要实验,常见的是利用大肠杆菌进行相应的实验操作,学习微生物培养的基本技术。

在高三一轮复习时,笔者将该部分内容与人教版新教材必修2中“探究抗生素对细菌的选择作用”有机整合进行复习,确定了本节课的课题“微生物的接种以及菌落和抗生素抑菌现象的观察”,以培养学生的科学思维与科学研究能力,提升学生的生物学学科核心素养。

【总页数】2页(P54-55)
【作者】吴晓凌;谭桂花
【作者单位】江阴市青阳中学
【正文语种】中文
【中图分类】G63
【相关文献】
1."细菌的菌落观察及抗生素抑菌作用的探究"实验的教学分析
2.关于"菌落和抗生素抑菌现象的观察"实验的一点探究
3.SBI全自动微生物接种计数系统在检测菌落总数中的应用
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