补体检测及应用PPT课件

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（二） 替代途径（旁路途经） 激活剂是微生物的菌体多糖、内毒素、 蛋白水解酶、IgG4和IgA聚合物等，参与 的成分C3、C5-C9、B因子、D因子、P 因子。
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两种补体激活途径的比较
经典途径
替代途径
激活物 参与成分 始动分子 所需离子 C3 转化酶 C5转化酶
抗原抗体复合物
脂多糖、酵母多糖
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（1）指示系统：兔抗血清致敏SRBC （2）实验反应系统的补体：选用或制备缺乏 某单一补体成分动物或人血清的试剂 （3）待测血清：待测血清标本中的补体
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测定成分
C4
补体来源
豚鼠血清
处理方法
氨水
去除成分
C4
指示系统
致敏红细胞
结果
不溶血
加入待测血清补充成分 C4
结果 溶血途径
溶血 经典途径
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溶血素的滴定
管号 溶血素
试管内加入的试剂量（ml）
稀释度 溶血素 1:60 补体 缓冲液 2%SRBC
结果
1 1：1000 0.1
2 1：2000 0.1
3 1：3000 0.1
4 1：4000 0.1
5 1：5000 0.1
6 1：6000 0.1
7 1：8000 0.1
8 1：10000 0.1
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图19-3
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二、试验方法
（一）试剂的制备
1.抗原适当纯化 2.抗原和抗体的滴定:选择抗原与抗体均呈
强阳性反应（100%不溶血）的最高稀释 度作为抗原和抗体的效价，即一个单位 由方阵滴定表可见1:64的抗原和1:32的抗 体为一个单位,正式试验抗原用2-4个单位, 抗体用4个单位
C1-C9
C3、C5-C9 B、D、P因子
C1q Ca+2、Mg +2
C3b Mg +2
C4b2a
C3bBb
C4b2a3b
（C3b）nBb 或 （C3b）nBbP
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第二节 补体总活性测定
一、血清补体总活性测定（CH50试验）
（一）实验原理： 特异性抗体与红细胞结合后可激活补体，导致红
细胞表面形成跨膜小孔，使胞外水分渗入，引起红 细胞肿胀而发生溶血，溶血程度与补体的活性有关。 溶血反应程度与补体的剂量依赖呈S型曲线。
B 因子 正常人血清 加热 B 因子 兔红细胞 不溶血 B 因子 溶血 旁路途径
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二、免疫化学法
单向免疫扩散法 火箭免疫电泳 透射比浊法 散射比浊法
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第四节 补体结合试验
一、试验原理 补体结合试验三个系统： 反应系统：已知抗原或抗体与待测抗体或抗原 补体系统：豚鼠血清 指示系统：SRBC与溶血素结合成为致敏绵羊红 细胞
补体检测及应用
四川大学华西医院临床免疫实验室 刘瑾
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1
第一节 补体的性质与活化途径
一、补体的性质
补体是一组存在于人和脊柱动物血清及 组织液中,具有酶样活性,不耐热,功能上 连续反应的糖蛋白,是抗体溶解细胞必要 的补充条件。
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补体系统组成
补体的固有成分；C1-C9、C1q、C1r C1s 共11中蛋白分子 调节和控制补体系统活化的成分；C1抑制 物，膜协同因子蛋白等 补体受体：补体C3的受体，CR1-5等
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（二）试验方法
1.2%-5%绵羊红细胞（SRBC）的配置 2.溶血素：抗绵羊红细胞抗体，是以SRBC免疫 家兔所得的兔抗血清。试验前要进行溶血素的 稀释和滴定。 3.稀释缓冲液:PH7.2-7.4磷酸盐缓冲液 Ca+2、Mg
+2
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不同稀释度溶血素的配置
最终稀释度 稀释液(ml) 稀释度
溶血素（ml）
1:1000
1.8
1:100
0.2
1:2000
0.2
1:1000
0.2
1:3000
0.4
1:1000
0.2
1:4000
0.2
1:2000
0.2
1:5000
0.8
1:1000
0.2
1:6000
0.2
1:3000
0.2
1:8000
0.2
1:4000
0.2
1:10000
0.2
1:5000
0.2
主要检测的单个补体成分：C3、C4、C1q、B因子 和C1脂酶抑制物
方法：免疫溶血法 测定补体的溶血活性 免疫化学法 测定补体的含量
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一、免疫溶血法
定义：抗原与特异性抗体结合后激活补体的经典途径， 导致红细胞溶解。当缺乏某种补体成分时，加入指 示系统，不能使补体连续激活，不发生溶血；再加 入待测血清，使原来缺乏的成分得到补偿，补体成 分齐全，级联反应恢复，产生溶血，溶血程度与以 待测补体成分活性有关，以50%溶血为终点。
2%SRBC
1
0.10
1.40
2
0.15
1.35
3
0.20
1.30
4
0Biblioteka Baidu25
1.25
5
0.30
1.20
6
0.35
1.15
7
0.40
1.10
8
0.45
1.05
9
0.50
1.00
10
0,00
1.50
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
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3
补体系统功能
参与机体的抗感染防御反应，介导细胞 溶解，调理吞噬，免疫黏附以及参与炎 症反应引起的机体的免疫损伤，是体内 具有生物学功能的免疫效应系统和放大 系统
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二 、主要两种补体的活化途径
（一）经典途径：是以IgG或IgM类抗体 结合抗原后的免疫复合物为主要的激活 剂，补体的11种成分全部参与的途经。 分为识别、活化和膜攻破三个阶段。
0.5
0.5
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按以下公式求50%溶血的总补体值
1
CH50（U/ml）=
×稀释倍数
血清用量
总补体活性参考范围:50-100 U /ml
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(三)方法评价
CH50测定经典途径总补体溶血活性
反应的是补体9种成分综合水平
缓冲液PH 、离子强度、Ca+2、Mg +2浓度各 个环节严加控制。
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第三节 单个补体成分的测定
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4. 50%溶血标准管配制
试剂 2% SRBC D H 2O 1 .8 % N a cl 2% SRBC
用量 0 .5 m l 2 .0 m l 2 .0 m l 0 .5 m l
溶血程度 100% 50%
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5.血清总补体50%溶血活性测定(ml)
试管号 1：20稀释血清 巴比妥缓冲
2u溶血素
9 对照
_
0.2
0.2
0.1
全溶血
0.2
0.2
0.1
全溶血
0.2
0.2
0.1 37℃ 全溶血
0.2
0.2
0.1 30分钟 全溶血
0.2
0.2
0.1
大部分溶血
0.2
0.2
0.1
微溶血
0.2
0.2
0.1
不溶血
0.2
0.2
0.1
不溶血
_
0.2
0.1
不溶血
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以最高稀释度的溶血素仍能产生完全溶 血为最大有效反应管(1：4000)即为1个单 位，一般试验使用2个单位(1：2000)