分解尿素

五华县田家炳中学高二生物自主学案

选修1第二章第二节土壤中分解尿素的细菌的分离与技术（1课时）尿素是重要的农业氮肥，只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用，那么怎么分离土壤中分解尿素的细菌呢？

（一）学习任务

一、理论基础

1．筛选菌株

(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时或其他微生物生长。

(2)选择培养基：在微生物学中，将允许种类的微生物生长，同时和其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

〖思考1〗根据本课题使用的培养基配方，请回答课本22的小字体内容的问题。

（3）配制选择培养基的依据

根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如，培养基中不加入有机物可以选择培养微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养；的微生物.加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。

2．统计菌落数目

（1）测定微生物数量的常用方法有和。

（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理

当样品的足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。此外，测定微生物数量的常用方法还有直接计数。

〖思考2〗请回答课本22的小字体内容的相关问题

〖思考3〗从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是？

〖思考4〗利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是什么？

3．设置对照，仔细阅读课本23页右上角，找出什么是对照试验

设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养的培养基作为空白对照。

〖思考5〗根据课本23页关于对照实验小字体的内容，请设计本实验的对照实验组。

二、实验设计

关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下：

1．取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。应先3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的中。

2．制备：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基

将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。

3．微生物的与观察

将10g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液，转移至盛有的生理盐水的无菌大试管中，将土样以1、101、102……依次等比稀释至107稀释度，并按照由107～103稀释度的顺序分别吸取进行平板涂布操作。每个稀释度下需要3个选择培养基、1个牛肉膏蛋白胨培养基。将涂布好的培养皿放在30℃温度下培养，及时观察和记录。挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含培养基的斜面中，观察能否产生如教材中图2-lO的颜色反应。

4．细菌的计数

当菌落数目稳定时，选取菌落数在的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。

〖思考6〗如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？

〖思考7〗为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？

5．课题延伸：对所需的微生物进行初步筛选，只是分离纯化菌种的第一步，要对分离的菌种进行一步的鉴定，还需要借助的方法

〖思考8〗无菌操作应该注意什么问题？

〖思考9〗行多组实验过程中，应注意做好标记，其目的是什么？应标记哪些内容？

〖思考10〗哪些方法对菌种进行鉴定？

自我检测

一、选择题

1．用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是( )

A．未接种的选择培养基B．未接种的牛肉膏蛋白胨(全营养)培养基

C．接种了的牛肉膏蛋白胨(全营养)培养基D．接种了的选择培养基

2．下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是………………( )

A．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、尿素、琼脂、水

B．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、琼脂、水

C．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、尿素、琼脂、水

D．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水；

3.某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每克样品中

的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL)…( )

A．2.34×108B．2.34×109C．234 D．23.4

4.在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的结果产生原因( )

①由于土样不同②由于培养基污染③由于操作失误④没有设置对照

A．①②③ B．②③④C．①③④ D．①②④

5.关于土壤取样的叙述错误的是………( )

A．土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤 B．先铲去表层土3cm左右，再取样

C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌D．应在火焰旁称取土壤

6.下列关于从土壤中分离细菌的操作步骤中，正确的是…………( )

①土壤取样②称取10g土壤取出加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中③吸取0.1mL进行平

板涂布④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度

A．①→②→③→④ B．①→③→②→④

C．①→②→④→③ D．①→④→②→③

7.下列关于测定土壤中细菌数量的叙述，正确的是………( )

A．一般选用103～107倍的稀液分别涂布

B．测定放线菌的数量，一般选用103、lO 4和105倍稀释

C．测定真菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释

D．当第一次测量某种细菌的数量，可以将101～107倍的稀释液分别涂布到平板上培养8.下列关于微生物的培养叙述错误的是( )

A．细菌一般在30～37℃的温度下培养1～2 d

B．放线菌一般在25～28℃的温度下培养5～7 d

C．霉菌一般在25～28℃的温度下培养3～4 d

D．不同种类的微生物，一般需要相同的培养温度和培养时间

9.下列操作需要在火焰旁进行的一组是( )

①土壤取样②称取土壤③稀释土壤溶液④涂布平板⑤微生物的培养

A．①②③④⑤B．②③④⑤④⑤ C．③④⑤ D．②③④

10.下列可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是…………( )

A．以尿素为唯一氮源的培养基中加人酚红指示剂

B．以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂

C．以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂

D．以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂

11.土壤取样时最好选择哪种环境中的土壤做分离细菌的实验……( )

A．街道旁 B．花盆中C．农田中 D．菜园里

12．实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用3种细菌在事先准备好的琼脂块平板上画3条等长的平行线（3条线均与下图中的链霉素带接触），将平板置于37℃条件下恒温培养3天，结果如图所示。从实验结果分析以下叙述，不正确的是（D）

A．链霉素能阻止结核菌的生长