质谱在微生物检验方面的应用

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生物质谱技术在微生物学中的应用

生物质谱技术在微生物学中的应用

生物质谱技术在微生物学中的应用随着现代科技的不断进步,生物学的发展也越来越快速。

其中,生物质谱技术是一种被广泛应用于微生物学领域的高新技术。

它通过对样品中生物大分子如蛋白质、核酸、糖等进行分子解析,提供了微生物领域研究所需的高精度、高通量、高灵敏度、高信息的获得手段,因此在微生物学领域有着广泛的应用。

一、生物质谱技术的基本原理及分类生物质谱技术指用来检测生物样品分子量和结构的一系列物理和化学技术。

生物质谱学包括大量的方法和技术,例如质谱分析、质谱成像等。

质谱分析是基于质谱仪的原理,凭借质量分析仪对分子的质量进行分析,根据分子的质量和质子化程度可以推测分子结构及代谢通路。

质谱成像技术是在分子水平上,对含有多种组分的生物样品进行成像分析。

它利用质谱仪的成像功能,对生物样品进行离子成像,实现在细胞和组织水平上的高分辨率成像。

质谱成像技术不仅可以分析有机化合物、蛋白质和氨基酸等生物分子,还可以发现新的代谢途径、功能基团、化学生物标记物等,成为微生物代谢组学和生物学研究的有力工具。

二、生物质谱技术在微生物代谢组学中的应用微生物代谢组学是在代谢水平上对微生物的全面研究,它是利用各种生物技术单元或方法对微生物的代谢物进行鉴定、分析、识别,从而构建一个完整的微生物代谢物组,进而了解并研究微生物的代谢物谱的整体特点及代谢通路。

在微生物代谢组学领域,生物质谱技术的应用众多,以下列举几种:1.蛋白质谱分析:微生物体内的蛋白质是微生物代谢中最重要的功能性产物之一。

利用生物质谱技术对蛋白质进行分析,不仅可以鉴定新的蛋白质与蛋白复合物,还可以通过拟南芥前体文件夹的生物质谱分析,确定微生物蛋白的后转录修饰。

2. 代谢物质谱分析:微生物代谢产物是微生物代谢组学的重要研究内容,用生物质谱技术对微生物代谢产物进行分析,可以得到微生物的代谢通路和代谢产物谱,精准测定代谢产物的分子式和分子量,加深对微生物代谢的了解。

3. 生物膜成分分析:尤其在酵母细胞中,可以使用生物质谱技术对生物膜结构和成分进行研究,进一步了解细胞内物质运输和信号转导的过程。

质谱分析在生物分子检测中的应用

质谱分析在生物分子检测中的应用

质谱分析在生物分子检测中的应用质谱分析是一种常见的生物分析方法,广泛应用于生物分子检测和药物研发等领域。

从基础研究到临床诊断,质谱分析都扮演着重要的角色。

本文将介绍质谱分析在生物分子检测中的应用。

一、质谱分析的基本原理质谱分析是利用物质分子的质量谱图对化合物进行分析和鉴定的方法。

质谱分析基于质量谱仪,该仪器能够将分子通过质量分选,并将其转化为电子信号来进行分析。

质谱分析以其高灵敏度、高分辨率和全面性等优势,被广泛应用于生物分子检测领域。

二、质谱分析在生物分子检测中的应用2.1. 质谱分析在蛋白质分析中的应用蛋白质是生物体内功能最为广泛的生物分子之一。

质谱分析在蛋白质分析中发挥了重要作用。

质谱分析法可以利用蛋白质的氨基酸序列信息和质谱图数据来完成蛋白质定性、定量以及结构分析。

如疏水性荧光标记的蛋白质和胜肽通过质谱分析可以快速、高通量地进行定量和比较分析,从而为快速筛选药物靶点提供了方法。

2.2. 质谱分析在代谢物分析中的应用代谢物是生物体内的重要出口分子,帮助人们理解机体的代谢规律,以及对不同病态或药物处理的代谢反应。

质谱分析在代谢物分析中的应用越来越受到研究者的重视。

质谱分析法被广泛应用于代谢物分析中,特别是在代谢产物定量、中草药代谢和毒性测试等领域。

通过质谱分析法去定位并鉴定生物体内的代谢产物并可以为药物的合成和设计提供基础数据,达到了药物研发的目的。

2.3. 质谱分析在核酸分析中的应用核酸在生命体系中有着至关重要的作用。

质谱分析在核酸分析领域中得到了广泛的应用,特别是在核酸鉴定、DNA序列分析、酶促反应等方面。

核酸分析的难度在于分子的紫外吸收测定受到基团的影响,且从合成中的残留物中,或从样品的微量中无法获得足够数量的样品进行分析。

而质谱分析作为一种分析手段,可以将核酸分解为核苷酸,可以用作核酸定量等领域。

2.4. 质谱分析在微生物检测中的应用质谱分析在微生物检测领域中的应用,如细菌鉴定和抗生素靶点筛选等,因其快速、易操作、高效和领先地位而受到了青睐。

质谱在微生物检验方面的应用201512

质谱在微生物检验方面的应用201512

基质辅助激光解吸电离
三、MALDI Biotyper工作流程
直接涂抹法 (direct transfer ) 单一菌种 (Pure culture)
90-95% 以上的常规样品
涂抹单一菌落于样品盘上
(Single colony on MALDI )Target
可于此制备法得到鉴定结果
加上 1 μl 基质溶液
毛霉属:无匍匐菌丝与假根,囊轴呈鼓槌状
根霉属:有匍匐菌丝与假根,孢囊梗与假根对生,囊轴呈 雨伞状
m/z 4364,33 5095,82 5380,39 6255,39 6315,19 6410,60 7157,74 7273,45 7871,06 8368,76
5380.64
6315.49
6254.64
7870.62
1000
0 4000 4500 5000 5500 6000 6500 7000 7500 8000
谁 把 你 的 长 发 盘 起
谁 安 慰 爱 哭 的 你
谁 娶 了 多 愁 善 感 的 你
烟曲霉
土曲霉的“莫西干发型”
茄病镰刀菌 菌落颜色 大分生孢子 小分生孢子 瓶梗类型 厚壁孢子 大分生孢子 白、浅黄、淡兰 较多,粗壮 假头状着生 简单瓶梗,瓶梗 较长 有
串珠镰刀菌 浅紫、淡粉、白 较少,披针形, 细长 串状,假头状着 生 简单瓶梗 无
Who are you?!
理 数 微 生 物 显 示 很 少 的 形 态 学 特 征 !
• • • • • • •
Selective media plating/biochemical tests 生化测试 Pulsed field gel electrophoresis (PFGE)脉冲场凝胶电泳 PCR based detection (several) 基于聚合酶技术的检测方法 Microarrays/FISH hybridization/fluorescence microscopy 核酸探针 RiboPrinter DNA杂交 FT-IR 红外光谱 FAME (fatty acid methyl ester) GC-MS细胞脂肪酸甲基酯

质谱技术及其在临床微生物鉴定中的应用

质谱技术及其在临床微生物鉴定中的应用

确 率 分 别 为 97.4%、79%和 78.6%。Seng等 也 报 道 了 对 MA『 DI—TOF MS和 Vitek2两 种 微 生 物 鉴 定 系 统 进 行 比 对 的 结 果 ,对 1660株 临 床 分 离 的 细 菌 进 行 检 测 ,其 中 的 95_4%被 MAI DI—TOF MS准确 鉴 定 。两 个 实 验 室 的研 究 表 明基 于 MALDI—TOF MS鉴 定 微 生 物 的 方 法 具 有 很 高 的准 确性。lJa Scola等建立 了基于 MALDI—TOF MS鉴定血培养 阳性 的致病菌方法。首先通过连续 离心 的方法获得血培养 阳性 培养瓶 中的致病菌 ,然后致病 菌被 甲酸水解后再经离 心处 理 ,所 得 上 清 进行 MALDI—TOF MS方 法 鉴 定 。用 此 方 法检测 了 562例血培养 阳性 的致病 菌 ,准确 鉴定率 达到 76%。Eigner等 应 用 MALDI—TOF MS的方 法 检 测 了 1 1 16株 从 实 验 室 分 离 的细 菌 和 108株来 自美 国 菌种 保 藏 中心 的 参 考 菌 株 。结 果显 示 准 确 鉴定 101株 参 考 菌株 和 1062株 实验 室 分 离的 细菌 : 2.2 ESI MS Xiang等 应 用 ESI串 联 质 谱 法 检 测 了 大 肠 杆 菌的裂解液 ,找出了菌种特征峰。Vaidyanathan等报告了不 经过分离直接分析完整细菌的 ESI MS方法 ,鉴定 了 2种大 肠杆 菌 、2种芽 胞 杆 菌 和 1种 侧 胞 短芽 胞杆 菌 共 5种 菌株 。 新 发 展 的 解 吸 电喷 雾 (desorption eleetrospray ionization,DE— sI)质 谱 法 通 过 电喷 雾 产 生 的 带 电 液滴 直 接 打 到 凝 聚 态 的 样 品表面 ,使吸附在表面的被分析物受到带 电离子的撞击 从表面解吸出来并被 电离 ,进入质 量分 析器被分析 。Song 等报道基于 DES1 MS的方法成功鉴定 了枯草芽孢杆菌 ,分 析 时 间 不 到 两 分钟 。

质谱技术在微生物鉴定和检测中的应用

质谱技术在微生物鉴定和检测中的应用

《质谱技术在微生物鉴定和检测中的应用》摘要:质谱技术(Mass Spectrometry, MS)是一种根据离子产生的质量图谱来确定样品中分子组成的分析技术。

质谱法不仅可以对传统的目标分析物进行定性和定量分析,还可以用于细菌的快速准确鉴定。

基质辅助激光解吸电离飞行时间(Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization-Time of Flight, MALDI-TOF)质谱仪由于能快速准确地鉴定革兰氏阴性菌和阳性菌的种类,因此是生物学中最常用的质谱仪之一。

质谱法鉴定微生物是以鉴定每个物种的特征光谱为基础的,然后与仪器内的大型数据库进行匹配。

本综述阐述了细菌鉴定面临的挑战和机遇,特别是在微生物学领域中使用MALDI-TOF MS来鉴定微生物和分析抗菌药敏感性。

关键词:质谱技术;MALDI-TOF;特征光谱;细菌鉴定;抗菌药敏感试验质谱(MS)法通过分析电离分子的质荷比(m/z)来对分子进行定性定量分析。

质谱仪扫描的特征图谱可以确定样品内不同分子的组成,并且能够直接分析任何可电离的生物分子。

FENN[1]和TANAKA[2]在MS的基础上,分别建立了电喷雾电离(Electrospray Ionization,ESI)技术和基质辅助激光解吸电离(Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization,MALDI)技术。

MALDI最大的优势在于不需要复杂的预分析,就可以直接对样品与化学基质混合后产生的离子进行分析。

离子飞行时间(TOF)是指用探测器精确测量离子到达飞行管末端所花费的时间。

基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI-TOF)质谱技术是将MALDI技术和TOF技术整合在一起的一种技术。

自从关于MALDI-TOF技术的构想诞生以来,因其快速、高通量、低成本和高效的优点,该技术已经彻底改变了微生物实验室中鉴定微生物的方法。

MALDI-TOF MS的主要优点之一是节省时间,因为细菌鉴定不再需要经过24~48 h,只需不到一小时即可完成。

质谱仪在微生物中的应用及标准化操作

质谱仪在微生物中的应用及标准化操作

质谱仪在微生物中的应用及标准化操作
质谱仪在微生物中的应用及标准化操作如下:
质谱仪在微生物鉴定中具有重要作用。

微生物鉴定是临床诊断的重要环节,传统的生化原理检测方法流程复杂且能鉴别的种类有限。

相比之下,质谱技术凭借高通量、快速性、准确性和特异性等优点,在微生物检验方面的应用越来越多。

在质谱技术应用过程中,微生物样本和基质置于靶板上,两者混合干燥后形成晶体。

当紫外激光脉冲作用于晶体时,基质受到激发从固相转为气相,微生物蛋白和基质分子从靶板表面被喷射出去(解吸),质子从基质转移到蛋白(电离),使带正电荷的气相蛋白在静电场高电压作用下加速进入飞行管。

进入飞行管后,离子就以一定的速度飞向离子检测器,该速度取决于它们的“质核比”。

低“质核比”的小离子先到达,随后是“质核比”稍高的大分子。

用离子检测器可以检测每个离子的飞行时间,“质核比”可以计算出来,进而产生质谱图。

质谱图上显示的“质核比”数值在x轴上,信号强度在y轴上,因此已知m/z的越高丰度的蛋白会在质谱图上产生越高的峰。

通过该微生物全部蛋白质所构成的图形与数据库进行比对,从而完成微生物的鉴定。

此外,基质分子所吸收的能量可以使结晶体出现电离反应,并生成不同质荷比的带电离子。

样品离子可以在加速电场的作用下获得相同功能,经由高压加速处理及聚焦处理以后,研究者可以在样品离子进入时间质谱分析器以后进行质量分析。

就质谱技术的实施情况而言,离子的质荷比与飞行时间的平方之间具有正比例关系,相关人员在绘制质量图谱以后请确定的特异性图谱的软件分析比较可以为目标微生物菌种及菌株的区分提供帮助。

质谱技术在检验医学领域的应用

质谱技术在检验医学领域的应用

质谱技术在检验医学领域的应用在现代医学的发展进程中,检验医学扮演着至关重要的角色。

它为疾病的诊断、治疗和预防提供了关键的依据和指导。

而在众多的检验技术中,质谱技术犹如一颗璀璨的新星,逐渐展现出其独特的优势和广阔的应用前景。

质谱技术,简单来说,就是一种通过测量物质的质量和电荷比来确定其分子结构和组成的分析技术。

它具有高灵敏度、高特异性、高准确性等特点,能够对生物样本中的微量物质进行精准检测。

在临床生化检验方面,质谱技术为我们带来了更精准的检测结果。

传统的生化检测方法,如比色法、酶法等,在某些情况下可能会受到干扰,导致检测结果出现偏差。

而质谱技术能够直接对目标物质进行检测,避免了其他物质的干扰,从而大大提高了检测的准确性。

例如,对于一些小分子代谢物,如氨基酸、脂肪酸等,质谱技术可以实现对其快速、准确的定量分析。

这对于诊断某些遗传代谢性疾病,如苯丙酮尿症、枫糖尿症等,具有重要的意义。

通过检测患者血液或尿液中这些代谢物的含量变化,医生可以及时做出诊断,并制定相应的治疗方案。

在临床免疫学检验中,质谱技术也发挥着重要作用。

免疫分析方法常用于检测蛋白质、激素等生物大分子,但传统方法可能存在交叉反应等问题,影响检测结果的特异性。

质谱技术可以对蛋白质进行精确的分子量测定和肽段序列分析,从而更准确地鉴定和定量蛋白质。

例如,在肿瘤标志物的检测中,质谱技术能够检测到低浓度的肿瘤标志物,并且可以区分不同形式的标志物,为肿瘤的早期诊断和治疗监测提供更有价值的信息。

在微生物检验领域,质谱技术的应用更是为临床带来了革命性的改变。

传统的微生物鉴定方法通常需要较长的时间,而且准确性有限。

而基于质谱技术的微生物质谱分析系统,可以在短时间内对细菌、真菌等微生物进行快速鉴定。

其原理是通过对微生物的蛋白质指纹图谱进行分析,与数据库中的已知图谱进行比对,从而确定微生物的种类。

这不仅大大缩短了检测时间,提高了检测效率,而且能够准确鉴定一些难以通过传统方法鉴定的微生物,为临床抗感染治疗提供及时的指导。

谈一谈质谱技术在临床微生物检测中的应用

谈一谈质谱技术在临床微生物检测中的应用

谈一谈质谱技术在临床微生物检测中的应用随着医疗技术水平的不断进步,临床检验中引入了越来越多的高新技术,质谱技术就是其中之一,其主要是一种对蛋白质进行分析的较为强大的工具,其存在高通量、快速准确、自动化、操作简便等优点,所以在临床的微生物检验中应用较为广泛,在鉴定病原体方面具有显著效果。

这一技术从出现到发展对传统检验模式进行了挑战,令检验的实效性和灵敏度得以提升。

因此,为帮助病人们进行了解,下面就来介绍一下质谱技术在临床微生物检测中的主要应用。

一、质谱技术的原理和优点质谱技术的主要工作原理是把基质和样品进行混合,而后将其点在相应的金属靶盘上,构成一个共结晶,而后将激光当做能量的来源对结晶体进行辐射,此时基质分子会对能量进行吸收,令样品开始吸附,而后发生电离反应,形成质荷比不同的带电离子。

而样品离子处于加速的电场下,可以产生相同的动能,而后经过高压的加速和聚焦,进入到飞行时间的质谱分析器中,完成质量分析的操作。

其中,飞行时间的平方和离子质荷比呈现正相关的关系,通过计算机的处理,可以形成质量图谱,经过相关的软件进行分析和比较,可以筛选以及确定特异性的图谱,进而鉴定或者区分菌株以及微生物。

现今的临床微生物实验中,在鉴定细菌方面大都依靠传统生化反应以及形态学技术等,在鉴定细菌方面也需首先进分离纯化,就算利用相关的自动化鉴定仪,也需保证时效性的要求,特别是在检测菌血症这类重症感染的过程中。

而质谱技术一般不要求样品纯度,所以样品检测过程中可以不进分离和纯化,可以进行直接的点样。

该方式的操作较为简便,还可不断扩展数据库,所以可准确且快速地完成检测,还可保证高通量。

二、质谱技术在临床微生物检测中的应用就现今的情况来看,质谱技术现已被广泛应用于临床微生物检测中,主要检测的菌种包括霉菌、酵母菌、分枝杆菌、厌氧菌、需氧菌、革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌等。

1、鉴定及分析细菌质谱技术可对多种细菌进行充分分析,其中,检测的样本既可为进分离培养的一些纯菌落,同样也可为原始的临床样本,其可以被直接用来检测。

质谱技术在微生物鉴定和检测中的应用

质谱技术在微生物鉴定和检测中的应用

DOI:10.3969/j.issn.W04-6755.2019.W.011质谱技术在微生物鉴定和检测中的应用王淑娴,刁菁,樊英,李乐,刘洪军,叶海斌(山东省海洋生物研究院病害与渔药研究中心,山东青岛266104)摘要:质谱技术(Mass Spectrometry,MS)是一种根据离子产生的质量图谱来确定样品中分子组成的分析技术。

质谱法不仅可以对传统的目标分析物进行定性和定量分析,还可以用于细菌的快速准确鉴定。

基质辅助激光解吸电离飞行时【可(Matrix一Assisted Laser Desorption/Ionization—Time of Flight,MALDI一TOF)质谱仪由于能快速准确地鉴定革兰氏阴性菌和阳性菌的种类,因此是生物学中最常用的质谱仪之一。

质谱法鉴定微生物是以鉴定每个物种的特征光谱为基础的,然后与仪器内的大型数据库进行匹配$本综述阐述了细菌鉴定面临的挑战和机遇,特别是在微生物学领域中使用MALDI—TOF MS来鉴定微生物和分析抗菌药敏感性$关键词:质谱技术;MALDI—TOF;特征光谱;细菌鉴定;抗菌药敏感试验质谱(MS)法通过分析电离分子的质荷比(m/z)来对分子进行定性定量分析。

质谱仪扫描的特征图谱可以确定样品内不同分子的组成,并且能够直接分析任何可电离的生物分子。

FENN[1]和TANAKA⑵在MS的基础上,分别建立了电喷雾电离(Electrospray Ionization,ESI)技术和基质辅助激光解吸电离(Matrix—Assis-ted Laser Desorption/Ionization,MALDI)技术。

MALDI最大的优势在于不需要复杂的预分析,就可以直接对样品与化学基质混合后产生的离子进行分析。

离子飞行时间(TOF)是指用探测器精确测量离子到达飞行管末端所花费的时间。

基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI—TOF)质谱技术是将MALDI技术和TOF技术整合在一起的一种技术。

浅谈微生物快速检验技术及临床应用

浅谈微生物快速检验技术及临床应用

浅谈微生物快速检验技术及临床应用引言:微生物是指一类生物体,包括病原微生物和有益微生物。

对微生物进行快速检验,对于临床诊断和治疗具有重要意义。

本文将介绍不同的微生物快速检验技术,并探讨其在临床应用中的作用。

第一部分:传统微生物检验的局限性传统微生物检验技术通常需要培养微生物菌株,这个过程非常漫长而费时。

尽管传统培养方法仍然是微生物学的基础,但它们存在许多局限性。

首先,培养过程要求时间较长,无法及时提供结果。

其次,某些微生物可能无法在常规培养基上生长,导致假阴性结果。

不同的菌株也可能显示出不同的生长特性,增加了检测的困难。

第二部分:PCR技术在微生物快速检验中的应用聚合酶链反应(PCR)是一种广泛应用于微生物检验的技术。

PCR 技术能够快速扩增微生物DNA片段,从而使其检测变得更为敏感和准确。

此外,PCR技术还可以在非常短的时间内提供结果,这对于迅速确定感染病原体十分重要。

PCR技术的应用范围广泛,可以用于诊断各种感染疾病,如呼吸道感染、尿路感染和性传播疾病等。

第三部分:质谱技术在微生物快速检验中的应用质谱技术是一种基于微生物分子组成的快速检验技术。

通过质谱仪的扫描,可以得到微生物的质谱图谱。

这些图谱可以与数据库中的参考图谱进行比对,以确定微生物的种类和亚种。

质谱技术具有高度的特异性和准确性,能够在短时间内完成检测,并提供可靠的结果。

因此,质谱技术被广泛应用于微生物的鉴定和分类,对于临床感染的快速诊断具有重要意义。

第四部分:快速抗生素敏感性测试技术抗生素敏感性测试是临床微生物学中的重要环节。

传统的抗生素敏感性测试通常需要48小时以上才能得出结果。

然而,期间患者可能因感染加重而需要立即治疗。

因此,发展快速抗生素敏感性测试技术至关重要。

近年来,各种快速抗生素敏感性测试方法相继出现,如荧光型PCR、蛋白质芯片和电生理技术等。

这些新技术可以在短时间内测定微生物对抗生素的敏感性,为临床治疗提供及时指导。

结论:微生物快速检验技术在临床中的应用已经取得了显著进展。

质谱技术在微生物检测和鉴定中的应用

质谱技术在微生物检测和鉴定中的应用

2020年11月 第21期影像学及诊断检验质谱技术在微生物检测和鉴定中的应用左瑞菊沧州市人民医院,河北 沧州 061000【摘要】随着医学技术的蓬勃发展,质谱技术在医学中的应用越加广泛,质谱技术能够通过样品中离子产生的质量图谱对于其分子构成进行分析,广泛用于临床中细菌的快速鉴定中。

在生物学中常用MALDI-TOF质谱仪对于革兰氏阴性菌种与阳性菌种进行鉴定,通过质谱法对于微生物进行鉴定是基于不同物种不同的特征光谱来进行区别的。

本文通过对近年来相关文献的查阅,介绍了临床基于该技术的应用与样品的制备,简述了微生物检测分类,分析了该技术进行微生物检测的局限性,阐述了在细菌鉴定方面所可能遇见的挑战与应用情况,并就其日后的发展进行展望。

【关键词】质谱技术;质量图谱;细菌鉴定;特征光谱[中图分类号]Q93-331; O657.63 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249(2020)21-0180-02质谱法是通过对于电离分子质荷比进行分析从而对于分子进行定性定量分析的一种方法,其有事在于能够通过特征图谱对于样品分子组成进行确定的同时,直接分析其可电离生物分子[1]。

在此检测方法的基础上还发展出现了ESI技术与MALDI技术,MALDI技术能够减去复杂的预分析,直接对于检测物的产生离子进行分析,而TOF则是采用探测器将离子到达飞行官末端的花费时间进行测量,两种技术的的整合使用早就了质谱检验技术的基础,随着此种技术的临床广泛应用,微生物实验室中对于微生物的检验鉴定方法发生了翻天覆地的变化,该技术能够优先增加检验的效率,单次检验60min内即可完成,对于临床疾病的判断具有重要意义[2]。

1 质谱检测法的原理和发展质谱技术是一种新型的致病菌检测方法。

其原理是质谱仪离子源通过辐照或者电离效应给予了检测目标物质以较高的能量,目标物吸收能量后被激发,在激发过程中吸收高能的物质会产生强烈的离子化效能[3]。

带电离子发生离子化后被载气带入质谱仪,通过电压的作用加速飞行,因为各个离子间具有不同的质荷比,因此会按照质量数的大小被分离。

质谱技术在临床微生物检测中如何应用

质谱技术在临床微生物检测中如何应用

质谱技术在临床微生物检测中如何应用近年来,我国各种感染性疾病的发病率不断上升,老龄化人口比例的加重、抗生素使用的广泛、不正确的个人习惯等,导致感染性病原菌的种类呈现出复杂多变的特点,病菌的耐药性也在不断变化,感染性疾病的防治难度更高。

而加强临床微生物检测工作,能够更好的对各种致病的细菌和真菌等进行鉴别分析,以便于采取更好的措施对患者进行治疗。

但传统的生化检验工作受到很多因素的影响,耗时较长、准确性相对较低,已经不能满足当前的临床需求。

而质谱技术的应用,则很好的解决了这个问题。

那么,什么是质谱技术?质谱技术有什么用?咱们下面就来看一看。

1、什么是质谱技术?质谱技术是临床微生物检验中应用较为广泛也较为强大的高新技术,主要应用于对蛋白质进行分析。

在使用质谱技术的过程中,需要先将样品和基质进行混合,混合均匀后点在金属靶盘上形成结晶,对结晶使用激光进行辐射,其中的基质分子会将激光能量吸入,让样品在吸附后发生电离反应,出现不同质荷比的带电离子。

加速的电场会对样品离子的功能性进行激发,再经过高压状态的处理后进入质谱分析器,在计算机技术的处理下形成图谱,便于对微生物和菌株进行区分。

在当前的临床检验工作中,对于细菌等方面的鉴定主要是根据形态学技术标准或传统的生化反应进行的,在进行细菌鉴定的过程中,对于样品的纯度和时效性等都有较高的要求,而质谱技术对此却没有严格的要求,且检查的通量高、操作简便、检验用时低,在临床上有较高的应用价值。

2、质谱技术在临床微生物检测中如何应用?其实在现在的临床微生物检验过程中,质谱技术的应用非常普遍,而其检验的菌种类主要包括厌氧菌、霉菌、酵母菌、分歧杆菌、革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌等。

(1)使用质谱技术对细菌进行鉴定和分析质谱技术对于很多细菌都能够进行充分的分析,其中所使用的样本可以是原始的样本,也可以是培养出的菌群或纯菌落等,都能直接拿来测量,且在这些常见菌的鉴别中有很高的准确性,因此适用范围也较广。

质谱技术在临床微生物检验中的应用

质谱技术在临床微生物检验中的应用

真菌毒素检测
某些真菌可以产生毒素,质谱技术可 以检测这些毒素的成分和含量,有助 于评估真菌毒素对人体的危害。
04
质谱技术在临床微生物检验中的挑战与展望
标准化和规范化问题
缺乏统一的质谱技术标准和操作规范:不同实验室之间的结 果可比性差,影响临床诊断和治疗。
需建立标准化的实验流程和质控体系:确保实验结果的准确 性和可靠性。
80%
细菌分型与溯源
质谱技术可以对同种细菌的不同 菌株进行分型,有助于追踪感染 源和传播途径,控制疫情的扩散 。
质谱技术在病毒鉴定中的应用
病毒种属鉴定
通过对病毒的蛋白质组进行分 析,质谱技术可以快速鉴定病 毒的种属,有助于病毒性疾病 的诊断。
病毒变异分析
质谱技术可以检测病毒基因的 突变,从而分析病毒的变异情 况,为抗病毒药物的研发和疫 苗的研制提供依据。
03
质谱技术在临床微生物检验中的应用实例
质谱技术在细菌鉴定中的应用
80%
鉴定细菌种类
质谱技术通过对细菌的肽指纹图 谱进行分析,可以快速准确地鉴 定出细菌的种类,为临床诊断和 治疗提供依据。
ห้องสมุดไป่ตู้
100%
耐药性分析
质谱技术可以检测细菌的耐药性 相关蛋白,从而判断细菌对抗生 素的耐药性,有助于指导临床合 理用药。
临床应用的适应症和样本类型
需要进一步明确质谱技术在不同适应症和样本类型中的应用范围和优势。
未来发展方向和前景
加强基础研究和临床应用研究
01
深入研究和探索质谱技术在临床微生物检验中的潜力和应用前
景。
促进多学科交叉合作
02
加强与临床医学、药学、生物信息学等学科的交叉合作,共同

质谱技术在临床微生物实验室的应用进展

质谱技术在临床微生物实验室的应用进展

质谱技术在临床微生物实验室的应用进展韩志勇;刘媛媛【摘要】基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization-time of flight-mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)技术是一项能够分析多种组分(如蛋白质、脂类、脂多糖等)的技术,其以操作简便、自动化、快速和高通量的优点成为临床微生物检验的新方法。

MALDI-TOF-MS技术在细菌、真菌和厌氧菌鉴定中较其他常用微生物检验方法的准确率高,且均可鉴定到种。

但在亲缘关系较近的链球菌属和嗜麦芽窄食单胞菌中的鉴定准确性较低,仍需进一步探索研究。

MALDI-TOF-MS技术对金黄色葡萄球菌、产碳青霉烯酶细菌和鲍曼不动杆菌等的耐药性筛查具有较高的准确率,但对肠杆菌科耐药性的检测效果较差,仍需深入研究。

随着细菌数据库及标准菌株图谱的完善,MALDI-TOF-MS技术必将在微生物鉴定、分型和耐药监测等方面发挥更大作用。

【期刊名称】《实用检验医师杂志》【年(卷),期】2015(000)003【总页数】5页(P182-186)【关键词】基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱;细菌;真菌;厌氧菌;耐药性;菌种【作者】韩志勇;刘媛媛【作者单位】300280 天津市,天津海滨人民医院检验科;300280 天津市,天津海滨人民医院检验科【正文语种】中文目前,在医院临床微生物实验室鉴定细菌主要依赖于传统的生物化学反应、分子生物学和形态学等方法,培养分纯出单个细菌菌落的鉴定耗时长,即使使用自动化细菌鉴定仪器,在时间上还是不能满足临床对检测结果时效性的要求;而基于分子生物学方法进行微生物鉴定大大地提高了灵敏度和时效性,但对工作人员技术要求高,检测成本高,只能针对某些特定菌株,还是难以满足临床常规要求。

自80年代初,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization-time of flight-mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)技术就已经成为一个用于研究与分析蛋白质特征的有利工具,以其操作简便、自动化、快速、高通量等优势受到青睐,并开始应用于医院微生物实验室,成为了一种新的微生物鉴定方法。

质谱技术在临床微生物检验中的应用

质谱技术在临床微生物检验中的应用

质谱技术在临床微生物检 验中的优势与挑战
章节副标题
质谱技术的优势
高灵敏度:能够检测低浓度的微生物提高检测的准确性。 快速:能够在短时间内完成微生物的鉴定提高检测效率。 特异性高:能够针对不同种类的微生物进行特异性检测减少假阳性的可能性。 自动化程度高:可以自动化完成检测过程减少人为误差和操作时间。
添加项标题
自动化与智能化:研发自动化、智能化的质谱分析系统减少人为 误差提高检测效率和准确性。
添加项标题
多组学分析:结合其他组学技术对临床微生物进行多维度、全方 位的分析为临床诊断和治疗提供更全面的信息。
添加项标题
个性化医疗:根据个体差异制定个性化的质谱检测方案提高疾病 预防和治疗的精准度。
THEME TEMPLATE
感谢观看
质分析
农业领域:用 于农产品质量 检测、农药残 留分析和转基
因作物研究
质谱技术在临床微生物检 验中的应用
章节副标题
微生物的鉴定
质谱技术可以 快速准确地鉴 定临床微生物
样本
质谱技术可以 检测微生物的
耐药性
质谱技术可以 检测微生物的
基因突变
质谱技术可以 检测微生物的
毒力因子
微生物的耐药性分析
质谱技术可以快速准确地鉴定微生物种类为耐药性分析提供可靠依据。 通过质谱技术可以检测微生物对不同药物的敏感性为临床用药提供指导。 质谱技术可以检测微生物的基因突变研究耐药性的产生机制和传播途径。 质谱技术可以监测微生物的耐药性变化为临床治疗提供及时调整方案。
微生物的溯源与分型
质谱技术可以对微生物进行快速准确的溯源确定其来源和传播途径。 质谱技术可以对微生物进行分型有助于发现新的病原体和变异株。 质谱技术可以用于监测微生物耐药性的变化指导临床用药和治疗方案。 质谱技术可以应用于临床诊断和治疗过程中提高微生物感染性疾病的防控效果。

质谱技术在临床微生物检验中的应用

质谱技术在临床微生物检验中的应用
金黄色葡萄球菌
Escherichia coli
大肠埃希菌 8000
(四)、操作简便
基质辅助激光解吸电离-飞行时间
样品靶板 质谱
入口
MALDI-TOF MS
真空系统
样品靶板 细菌与基质
飞行管 质谱图
几秒钟即可得到结果
检测器
MALDI-TOF MS蛋白质指纹特征
质谱检测流程
挑取部分菌 落点样至靶 板
93.60%。
Autof ms1000鉴03定不结同前果处准理方确法、的鉴可靠04,适鉴定于重复临性床微
定准确性
生物检测。 三种前处理方式安图质谱Autof
ms1000的鉴定准确性均高于布鲁克
安图质谱Autof ms1000对 65株实验菌株的鉴定结果全 部可靠,重复性较好。
质谱,其中甲酸裂解法更适于临床使用。
对临床的意义: 分级报告,缩短了TAT时间,尤其是厌氧菌、 奴卡菌等非常难鉴定的菌提供巨大的帮助。
五、实现血培养的三级报告
微生物诊断技术不断发展给临床带来 了什么
1、非培养/难培养微生物的检测能力大大 提高
2、缩短了常规微生物培养鉴定诊断药敏 时间 即TAT时间
3、从微生物检验角度提供精准的诊断
飞行时间质谱仪MALDI-TOF MS
的组成
基质辅助激光解吸 电离离子源(MALDI)
主机
MALDI-TOF MS
数据库
飞行时间质量 检测器(TOF)
(三)、MALDI-TOF MS 的原理
基本原理是将样品分散在基质分子中并形成晶体。 当用激光照射晶体时,基质从激光中吸收能量, 样品解吸附,基质-样品之间发生电荷转移使得 样品分子电离,电离的样品在电场作用下飞过真 空的飞行管,根据到达检测器的飞行时间不同而 被检测,即通过离子的质量电荷之比(M/Z)与 离子的飞行时间成正比来分析离子,从而测得并 绘出样品分子的质谱图。

探秘微生物的秘密武器——质谱鉴定技术

探秘微生物的秘密武器——质谱鉴定技术

探秘微生物的秘密武器——质谱鉴定技术摘要:随着科学技术的不断进步,质谱鉴定技术被广泛应用于微生物领域,帮助人们更好地了解微生物的身份和功能。

本文将深入探讨质谱鉴定技术在微生物领域中的应用,揭示微生物的秘密武器。

关键词:微生物;质谱鉴定技术;代谢;特点一、引言细菌、真菌和病毒等微生物,是我们周围广泛存在的微小生命体。

它们既可以对人类健康产生重要的影响,也能在工农业、食品安全等领域扮演关键角色。

二、质谱鉴定技术的特点质谱鉴定技术作为一种基于质量-电荷比(m/z)的分析方法,已经在科学研究和应用领域中展现出其极高的价值和广泛的应用。

该技术通过将待测样品中的化合物分子进行分离和离子化,然后根据其质量和电荷比来进行检测和鉴定。

其一,质谱鉴定技术具有高灵敏度的特点。

它能够对微量的化合物进行检测和分析,甚至能够检测到仅有几个分子的存在。

这使得质谱鉴定技术在微生物领域中的应用具有重要意义,因为微生物中的活性物质往往以微量形式存在,而传统的分析方法很难对其进行有效的检测和分析。

其二,质谱鉴定技术具有高分辨率的特点。

它能够精确地分辨出不同化合物之间微小的质量差异,并提供详细的质谱图谱信息。

这对于微生物领域的研究非常重要,因为微生物中存在着众多类似结构的化合物,它们的质谱图谱往往非常相似。

通过高分辨率的质谱鉴定技术,科学家们能够准确地区分这些化合物并确定其结构,为微生物代谢和功能研究提供有力支持。

其三,质谱鉴定技术还具有快速分析的特点。

相比传统的分析方法,它能够在较短的时间内完成样品的检测和分析过程。

这对于微生物领域中需要大量样品分析的情况非常重要,能够提高实验的效率和准确性。

三、质谱鉴定技术在微生物领域的应用在微生物学领域,质谱鉴定技术已经成为了研究微生物的重要工具。

第一,质谱鉴定技术能够用于微生物的分子鉴定和分类。

传统的微生物学方法主要依靠生物学和生化特性对微生物进行分类,但这种方法具有耗时、依赖培养和较低的准确性的局限性。

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(Overlay with 1 μl HCCA Matrix)
质谱图:多数为核糖体蛋白(ribosomal proteins) 信号
Intens. [a.u.]
4364.06
ribosomal Protein m/z
5000
RL36
4364,33
6315.49 6254.64
5380.64
RS32
• MALDI-TOF 微生物特征蛋白指纹图谱分析
20世纪80年代,基质辅助激光解析电离技 术(MALDI)的发明使得质谱能够检测生物大 分子
Fox, A ed. 1990. Analytical microbiology methods: chromatography and mass spectrometry.
皮肤、眼、肺部 感染,角膜炎, 耳炎等, 也是外耳 道炎常见菌之一
可引起肺部、皮肤、眼 等感染
壳细胞
足细胞
烟 曲 霉
谁谁谁谁
为把安娶
你你慰了
做的爱多
的长哭愁
嫁发的善
衣盘你感



烟曲霉
土曲霉的“莫西干发型”
菌落颜色 大分生孢子 小分生孢子 瓶梗类型 厚壁孢子 大分生孢子
茄病镰刀菌 白、浅黄、淡兰 较多,粗壮
A 土曲霉 B 黄曲霉 C 镰刀菌 D 青霉菌
男,21岁,大学生,主因 “胸痛两周,发热4天, 咯血1天。体温最高39.5℃伴 畏寒“ 就诊。住院检查:WBC: 14 ×109 /L , 中性:84%。6个月前诊断溃疡 性结肠炎,糖激素治疗6个月(强的松50mg/d,逐渐减量)万古霉素、头孢 米诺、阿奇霉素、拜复乐治疗无效。支气管肺泡灌洗液培养48小时菌落和镜
最重要的临床环境菌, 确诊需谨慎。常见实验 室污染菌之一。
黄曲 霉
黄色 有放射 沟纹
球形\ 近球形
双层或单层,第一 层长,放射状,布 满顶囊表面。
孢子梗粗糙
过敏性支气管肺曲霉病 主要病原之一,可产真 菌毒素,如黄曲霉素
黑曲 霉
白→黄→ 黑,菌落 背面白色
土曲 霉
淡褐色 /褐色、 肉桂色
球形\ 近球形
基质辅助激光解吸电离
三、MALDI Biotyper工作流程
直接涂抹法 (direct transfer ) 单一菌种 (Pure culture)
涂抹单一菌落于样品盘上
(Single colony on MALDI )Target
90-95% 以上的常规样品 可于此制备法得到鉴定结果
加上 1 μl 基质溶液

理想很丰满,现实很骨感…
Wh 数 微 生 物 显 示 很 少 的 形 态 学 特 征 !
• Selective media plating/biochemical tests 生化测试 • Pulsed field gel electrophoresis (PFGE)脉冲场凝胶电泳 • PCR based detection (several) 基于聚合酶技术的检测方法 • Microarrays/FISH hybridization/fluorescence microscopy 核酸探针 • RiboPrinter DNA杂交 • FT-IR 红外光谱 • FAME (fatty acid methyl ester) GC-MS细胞脂肪酸甲基酯
镜下 菌落
治疗
尖端赛多孢(独生子女) 分赛多型和粘束孢型,可以耐受放线菌酮 有性期:波氏阿利什菌,不能耐受放线菌 酮 环痕孢子多以单个存在,分生孢子梗细长 白色至灰色羊毛样
对伊曲康唑有一定活性,伏立康唑,、泊 沙康唑、卡泊芬净有活性,对AMB耐药
多育赛多孢(多产多耐) 无有性阶段及粘束孢阶段,不能耐受放 线菌酮
对疑难菌鉴定优于生化法,即使不能鉴定 到种,大多数能鉴定到属水平
一些草绿色链球菌易被鉴定为肺炎链球菌,需要加以OP试验或胆汁溶 菌试验。最近一项全面评价试验表明,与OP敏感试验(约有4-11%遗 漏)相比,胆汁溶解试验显示出良好的灵敏性与特异性—Manual of Clinical Microbiology_11th
菌落形态相似的奈瑟菌,质谱鉴定完胜。无条件者可用超触酶试验加以区别。
100%淋病奈瑟菌+
卡他布兰汉+
JCM2012: Bruker MS能鉴定绝大多数奴卡
NTM除MTB复合群和麻风风枝 杆菌之外的分枝杆菌,有154种, 13亚种。大多数NTM对常用的抗
分枝杆菌药物均耐药,
生物安全防护水平3级BSL-3!需加热灭活!
微生物鉴定(纯菌种的鉴定和标本直接鉴 定)
菌种分型
细菌耐药分析
Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2014, 33(3):337-46. J Clin Microbiol. 2013,51(7):2225-31.
对常见细菌鉴定快速准确
对干燥、细小菌落鉴定表现出色
- 白色、干燥、短 粗糙细长真菌
绒状,有同心圈, 丝和关节孢子,
边缘放射状
关节孢子一角
可有芽管生出,
无芽生孢子
环痕分生孢 子 环痕分生孢子
芽生孢子 关节孢子
真菌丝
假菌丝
芽生裂殖菌、毛孢子菌、念珠地丝菌鉴别 (感谢东科老师、邹老师提供的图片)
以菌落形态与镜检特征为主要依据 根据真菌内转录间隔区(internal transcribed spacer, ITS)基因测序 丝状真菌质谱鉴定仍然比较困难,主要因为培养条件和蛋白质的提取
Description highly probable species identification
完全可靠地鉴定到种的水平
secure genus identification, probable species identification 鉴定到种的水平
probable genus identification
伏立康唑、伊曲康唑、AMB
条件致病菌,常见于免疫低下及慢性 消耗性疾病患者。临床常见眼眶及中 枢神经系统感染,也可见于播散性全 身感染,预后差
AMB、泊沙康唑、伊曲康唑(效果不 如前二者)
G\GM 阳性 试验
阴性
分生孢子梗茎
菌名
烟曲 霉
菌落 绿/深绿
顶囊
小梗
烧瓶状 单层,顶囊上部, 栅栏状
临床疾病
6410.90
1000
0 4000
4500
5000
5500
6000
6500
7000
7500
8000
m/z
步骤 3:数据库比对
绿色线条代表完全吻合的峰, 黄色线条表示在较宽边缘吻合, 红色线条表示在范围内没有吻合, 表格给出了评估和排序的结果。
Range 2.300 ... 3.000 2.000 ... 2.299 1.700 ... 1.999 0.000 ... 1.699
双层,第一层长, 并列柱状、放射状, 密生于顶囊全部表 面,形似“黑瞳”
半球形
双层,占顶囊2/3, 放射状,类似“莫 西干发型”
构巢 绿色
半球形 双层,顶囊上半部,
曲霉 暗绿色
放射状。小梗短弯 曲,易见足细胞,
较多壳细胞,可见
闭囊壳。
五种常见致病性曲霉菌的比较(图片资料来自已出版书籍及网络)
肺曲霉球中最常见,也 是引起外耳道炎最常见 的曲霉菌。常见实验室 污染菌之一。
咽拭子标本的停乳链,做与不做?
以前称营养缺陷链球菌,细菌难
培养,血平板需添加半胱氨酸和 吡哆醛,CO2或者厌氧环境下生 长,有些种初生代能在血平板上 生长。
光滑湿润、透明/半透明、露滴状 H. Influenzae
粗糙干燥微黄 H.parainfluenzae
菌落形态相似的嗜血杆菌,质谱快速鉴定,优势凸显。常规鉴定需注意区分。
5095,82
RL34
5380,39
RL33meth.
6255,39
4000
RL32Βιβλιοθήκη 6315,19RL30
6410,60
RL35
7157,74
RL29
7273,45
3000
RL31
7871,06
RS21
8368,76
5096.01
2000
7157.65 7273.87 7870.62 8368.99
- 头状芽生裂 白色或黄棕色、 有出芽酵母、
殖菌(头状 奶油状或干燥、 真菌丝、关节 地丝菌) 可有短绒,有同 孢子和环痕分
心圈,边缘放射 生孢子 状
+ 毛孢子菌属 酵母样,白色至 具关节孢子、 奶油色,中央突 芽生孢子、真 起,放射状或脑 /假菌丝
回状,有些质地 较硬不易乳化
念珠地丝菌 (地霉菌)
方法难以标准化 最近有研究对Broker Daltonik霉菌数据库进行验证,选则厂家推荐的
操作方法、丝状真菌鉴定软件(the Filamentous Fungi Library 1.0)以及 判断标准,丝状真菌属及种的鉴定率分别为78.3%及54.2%
曲霉菌
毛霉菌
属别 子囊菌门散囊菌目
接合菌门毛霉目
毛霉属:无匍匐菌丝与假根,囊轴呈鼓槌状
根霉属:有匍匐菌丝与假根,孢囊梗与假根对生,囊轴呈 雨伞状
囊轴和囊领
根毛霉属:有匍匐菌丝与假根,孢囊梗与假根不对生,囊轴呈 鼓槌状
小克银汉霉属:偶见匍匐菌丝,假根指状分枝,孢囊梗末端形成肿 大囊泡,表面有排列成球形齿轮状孢子囊
s
囊轴和囊领
七布鲁氏菌
柯氏染色方法:革兰4液加热至冒烟2分钟,冲洗,抗酸3液1分钟。
柯氏染色 Bruker MS 数据库不包括布鲁氏菌,生物安全手册亦不推荐在二级实验室用 全自动仪器鉴定(推荐柯氏染色和快速尿酶试验、血清凝集、接触史)
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