MALDI-TOF质谱仪在临床常见细菌鉴定中的应用

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ａｓｓｔｉｍｉｃａｔｉｏｎｏｆｍａｔｒｉｘｉｓｔｅｄｌａｓｅｒｄｅｓｏｒｔｉｏｎｉｏｎｉｚａｔｉｏｎｅｏｆｆｌｉｈｔｍａｓｓｓｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒｉｎＡｌ－－ｐｇｐｐｐ
：（）ｔｒａｃｔＯｂｅｃｔｉｖｅｏｅｖａｌｕａｔｅｄｔｈｅａｌｉｃａｔｉｏｎｖａｌｕｅｏｆｔｗｏｋｉｎｄｓｏｆｍａｓｓｓｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒＭＳａｎｄＶｉｔｅｋＭＳｓｓｔｅｍｉｎｔｈｅｉＡｂｓＴ－ｐｐｐｙｊ）（ｄｅｎ１４ｇｅｎｅｒａａｎｄ３０ｓｅｃｉｅｓｉｉｓｏｌａｔｅｄｂａｃｔｅｒｉａｉｎｃｌｉｎｉｃ．Ｍｅｔｈｏｄｓ４９ｓｔｒａｉｎｓｏｆｃｏｍｍｏｎｂａｃｔｅｒｉａｉｎｃｌｕｄｉｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｒｏｕｔｉｎｅｌ－１ｐｇｙ，，，ｓｏｌ２０１３ｗｅｒｅａｔｅｄｆｒｏｍｂｌｏｏｄｕｒｉｎｅｃｅｒｅｂｒａｌｓｉｎａｌｆｌｕｉｄｓｅｃｒｅｔｉｏｎａｎｄｓｕｔｕｍｓａｍｌｅｓｉｎｏｕｒｈｏｓｉｔａｌｆｒｏｍＭａｒｃｈ２０１２ｔｏＪａｎｕａｒｐｐｐｐｙｓｓｉｍｉｓｔｅｄｌａｓｅｒｄｅｓｏｒｔｉｏｎｉｏｎｉｚａｔｉｏｎｅｏｆｆｌｉｈｔｍａｓｓｓｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒａｔ２ｋｉｎｄｓｏｆｍａｔｒｉｘｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｃｏｌｌｅｃｔｅｄａｎｄｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌ－－ｐｇｐｙｙ（）ｔｈｅｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎＭＡＬＤ－ＴｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅｃｏｍａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｏｓｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂＯＦ－ＭＳ．Ｔｐｙ（）１６ＳｒＤＮＡｅｎｅｓｅ３ｋｉｎｄｓｏｆｍｅｔｈｏｄｗｅｒｅｃｏｎｆｉｒｍｅｄｂＶｉｔｅｋ２ｃｏｍａｃｔ．Ｔｈｅｓｔｒａｉｎｓｗｉｔｈｔｈｅｉｎｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔｒｅｓｕｌｔｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂ－ｇｙｐｙ，ｕｅｎｔｈｅＢｒｕｋｅｒＢｉｏｔｅｒＭＳ１４９ｃｏｍｍｏｎｂａｃｔｅｒｉａｔｈｅｃｏｒｒｅｃｔｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｒａｔｅｓｏｆｅｎｕｓａｎｄｓｅｃｉｅｓｂｃｉｎ．ＲｅｓｕｌｔｓｏｎＡｍｑｙｐｇｐｙｇｇｔｈｅＶｉｔｅｋＭＳｓｓｔｅｍｗｅｒｅ９７％ａｎｄ９５％ｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌ．Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅｎｏｍｉｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｎｄｗｈｉｃｈｂｗｅｒｅ９８％ａｎｄ９６％ｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌｙｐｙｙｐｙｔｈｅｓｅｔｗｏｋｉｎｄｓｏｆＭＳ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｏｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄｂｅｔｗｅｅｎｂａｃｔｅｒｉａｌｓｔｒａｉｎｓｂＮｙ）０ｉｄｅｎ５．ＢｏｔｈｅｘｈｉｂｉｔｅｘｃｅｌｌｅｎｔｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｌｅｖｅｌａｎｄａｒｅｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｔｈｅｒｏｕｔｉｎｅｌａｂｏｒａｔｏｒＰ＞０．ｔｈｅｓｅｔｗｏｋｉｎｄｓｏｆＭＳｓｓｔｅｍ（－ｙｙｉｃａｔｉｏｎｏｆｃｌｉｎｉｃａｌｍｉｃｒｏｏｒａｎｉｓｍ．ｔｉｆｇ：；；Ｋｅｗｏｒｄｓｂａｃｔｅｒｉａｍａｓｓｓｅｃｔｒｏｒａｈｉｃａｎａｌｓｉｓ６ＳｒＲＮＡ１ｐｇｐｙｙ对临床分离细菌进行快速鉴定是临床医生和检验科的共同愿望，分子生物学鉴定方法快速准确，如荧光杂交和
王冰，任晓庆，褚美玲，杨柳，盛翔宇，周连庆，薛文成，孟冬娅△ （）沈阳军区总医院检验科，辽宁沈阳１０１６１０
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目的探讨两种质谱仪ＢＳ系统在临床常规分离细菌鉴定中的应用价值。方法收集沈阳军ｉｏｔｅｒＭＳ和Ｖｉｔｅｋ摘要：－Ｍｙｐ尿液、脑脊液、分泌物和痰液等标本的临床常见菌细菌１区总医院２包括１２年３月至２０１３年１月分离自血液、４个菌属０１４９株（。同时采用两种ＭＡ对３和３结果与Ｖｅｋ２ｃｏｍａｃｔ常规生化鉴定进行比较，０个菌种）ＬＤＩＯＦ－ＭＳ系统对上述菌株进行鉴定，ｉｔ－Ｔｐ种方法检测结果不一致菌株用１６ＳｒＲＮＡ测序进行确认。结果在１４９株常见细菌中，ｒｕｋｅｒＢｉｏｔｅ属和种的正确鉴定率分别Ｂｙｐ两种质为９Ｓ属和种的正确鉴定率分别为９６％，Ｖｉｔｅｋ５％。两者均无错误鉴定菌株。结论对该组常见细菌，８％和９７％和９－Ｍ），均呈现出优异的鉴定水平，适合用于临床微生物的常规鉴定。谱仪鉴定结果比较差异无统计学意义（０５Ｐ＞０．关键词：细菌；６ＳｒＲＮＡ质谱分析；１：／０．２０１４．１６．０４７ＤＯＩ１０．３９６９．ｉｓｓｎ．１６７３４１３－ｊ文献标识码：Ａ（）文章编号：３０２０１４１６８１６７４１３２２２０３－－－
·２２２８·
，，，国际检验医学杂志２０１Ｎｏ．４年８月第３５卷第１６期１６ＩｎｔＪＬａｂＭｅｄＡｕｕｓｔ２０１４Ｖｏｌ．３５ｇ
· 检验仪器与试剂评价 ·
ＭＡＬＯＦ质谱仪在临床常见细菌鉴定中的应用ＤＩ－Ｔ
［］不适合于常规大量样本的鉴定。但成本昂贵且费时，ＣＲ１，Ｐ
ＤＮＡ小量提取试剂盒（ＭｉｎｉＢＥＳＴＢａｃｔｅｒｉａｌＧｅｎｏｍｉｃＤＮＡＥｘ－及ＰｔｒａｃｔｉｏｎｋｉｔⅡ ）ＣＲ反应相关试剂（ＴａｋａＲａ１６ＳｒＤＮＡＢａｃ－），大连宝生物公司，ｉａｌＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎＰＣＲＫｉｔＲｏｃｈｅ４８０Ⅱ 实ｔｅｒ。时荧光定量Ｐ瑞士ＲＣＲ仪（ｏｃｈｅ公司）１．３方法１．３．１细菌分离培养所有菌株标本接种在相应培养基上（，３５ ℃ 孵育箱恒温培养２５％羊血琼脂或巧克力培养基）４～４８（生长条件有特殊要求的菌置于５％～１０％ＣＯｈ２培养箱或厌。氧袋中）１．３．２细菌的生化鉴定采用ＶＩＴＥＫ２ＣＯＭＰＡＣＴ自动鉴定仪及配套鉴定卡，严格按照说明书进行操作。１．３．３１６ＳｒＮＡ提取试剂盒提取模板ＲＮＡ检测及测序Ｄ进行１产物送大连宝生物有限ＤＮＡ，６ＳｒＲＮＡ基因ＰＣＲ扩增，公司测序部完成；结果在ＧｅｎＢａｎｋ数据库中进行比对。１．３．４细菌的ＭＡＬＤＩＳ鉴定用无菌接种环挑取适ＯＦＭ－Ｔ量（纯培养单个落菌涂于质谱仪样品检测板上，迅速３～５个）随后再点１μ 加０．５μ Ｌ的７０％甲酸覆盖加样的位置，Ｌα －氰
＊ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃｌｉｎｉｃａｌｃｏｍｍｏｎｂａｃｔｅｒｉａ
ａｎｉｎｅｎｉａｈｕｅｉａｎｉｕ，ｈｅｉａｈｏｉａｕｅｅｎｅｎｏｎａ△ ｏｉｎｌｉｎｎｎｕ，ｕｎｉｎｃｈｅｎＷＢＲＸＣＭＹＬＳＸＺＬＸＷＭＤｇｇ，ｇｇｇｙｑｇ，ｇ，ｇｇｙｑｇ，ｇ，（ｔｍｅｎｔｎｉｃａｌｏｒａｔｏｒｅｒａｌｔａｌｎａｎｉｔａｒｎ，ｎａｎｏｎｉｎ０１６，ｎａ）ＤｅａｒｏＣｌｉＬａｂＧｅｎＨｏｓｉｏＳｈｅＭｉｌＲｅｉｏＳｈｅＬｉａ１０Ｃｈｉｙ，ｙｇｙｙｇ，ｇ１ｐｆｐｆｇ