培养基手册
麦康凯说明书
麦康凯培养基使用说明书【产品名称】通用名称：麦康凯培养基英文名称：MacConkey Agar Medium【包装规格】Φ90㎜和Φ70㎜，5块／包。
【预期用途】本产品用于革兰氏阴性肠道菌的分离、培养。
【检验原理】培养基（Medium）是指由人工方法配制而成的，专供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存用的混合营养制品。
培养基按用途分为基础培养基、增菌培养基、选择性培养基、鉴别培养基和厌氧培养基等，按原料来源分为天然培养基、半合成培养基和合成培养基。
按形态分为液体培养基、流体培养基、半固体培养基和固体培养基等。
本产品是以人工的方法配制而成的，针对不同种类的肠道微生物适宜生长的培养基不同，利用细菌的培养特性、生化特性等方法对肠道菌进行分离、培养和鉴定。
【主要组成成份】麦康凯培养基由蛋白胨、琼脂粉、乳糖、胆盐和玫瑰红酸等培养基原料经配制、高压灭菌，定量灌入一次性塑料培养基内而成。
【贮存条件及有效期】2-8℃，避光保存，有效期3个月，用前复温。
【样本要求】标本可以是液体也可以是固体，液体标本可以直接使用，固体标本需用适量无菌生理盐水溶解后，取溶液使用。
根据浓度需要决定是否采用10倍稀释法进行稀释。
【检验方法】用接种环或棉签以无菌方法取标本直接画线接种于培养基中，或无菌吸取0.1ml适当浓度的标本溶液用玻璃涂布棒均匀涂布于培养基中，置35~37℃温箱中培养。
【检验结果的解释】大肠埃希氏菌生长良好，呈红色菌落；肺炎克利伯菌生长良好，呈红色菌落；金黄色葡萄球菌被抑制或生长较差呈白色菌落。
【检验方法的局限性】正确的标本采集及良好的细菌划线分离技术是检出细菌的基础，所检出细菌要经镜检、生化鉴定来确认。
【注意事项】1．该培养基仅用于体外诊断。
2．使用前必须检查培养基，若培养基有污染迹象或超过有效期不得使用。
3．采集的标本必须尽快接种培养，以保证结果准确。
4．所用标本及其培养废弃物应视为有潜在传染性的物质，应按传染病实验室操作规范处理。
细胞培养手册
细胞培养手册1.培养基配制（如200 mL）：①胎牛血清10%（20 mL）②双抗1%（青霉素-链霉素，2 mL）③加入DMEM 至200 mL。
2.细胞复苏：①将冻存于-80℃或液氮中的细胞取出，放在37℃的温水中来回摇晃，使处于冰状的细胞解冻。
②将培养基、PBS提前预热至37℃，可增大细胞复苏成功率。
③将解冻的细胞（含培养基）移至15 mL的离心管中，1000 rpm离心10 min。
④倒掉上清液，向离心管中加入1-3 mL的完全培养基，用移液枪将细胞轻轻吹打，使得细胞均匀地悬浮在培养基中。
⑤将吹散的细胞加到装有培养基的培养皿（或培养瓶）中，再将培养皿（或培养瓶）轻轻摇晃，使细胞均匀地分布在培养基中。
⑥将接种有细胞的培养皿（或培养瓶）放入37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养。
2.细胞传代①将培养瓶（皿）中的培养液倒出至废液盒中。
②向培养瓶（皿）中加入2 mL胰蛋白酶，消化细胞，让贴壁的细胞分散开来。
③加入胰蛋白酶消化2 min后，向培养瓶（皿）中加入4 mL培养基，同时轻轻吹打培养瓶（皿）壁，将贴壁生长的细胞吹散开。
④将胰蛋白酶消化过的细胞移至15 mL离心管中，1000 rpm离心10 min。
⑤将离心后的上清液倒掉，向离心管中加入4-6 mL的培养基，轻轻地将细胞吹打开，使细胞均匀地悬浮在培养基中。
再将分散好的细胞加入到培养瓶（皿），每个培养皿中加入2 mL细胞悬浮液。
⑥将接种有细胞的培养皿置于37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养。
3.细胞冻存将经胰蛋白酶消化后的细胞1000 rpm离心10 min，去掉上清液，再向离心管中加入1-1.5 mL冻存液（冻存液配制：70%DMEM-1050μL、20%FBS-300μL、10%DMSO-150μL），先放在4℃存放1 h，再放在-20℃存放1 h，然后再放在-80℃下过夜，最后放在液氮中长期储存。
4.细胞计算。
自诱导培养基(lac启动子)说明书
自诱导培养基(lac启动子)说明书产品及特点本产品是本产品是在pET专用生长培养基的基础上开发而成的，它利用E.coli自身对培养基中不同碳源的调控利用机制，实现外源蛋白在细菌达到饱和生长期后的自动诱发。
本产品具有下列特点：1.本产品自动诱导表达，不需要添加任何IPTG或相关诱导物，节约成本。
2.免去了密切监控菌液密度的过程，尤其适合大规模筛选。
3.极大将细菌的生长密度OD600从2左右提高20以上。
4.极大提高外源蛋白的表达量，最高可占细菌总蛋白的45%。
5.与各种细胞培养容器（如培养瓶、培养罐、深孔管、发酵罐等）兼容。
6.本产品即开即用，非常方便。
7.适用于T7RNA聚合酶基因由lac启动子控制的任何表达系统，如pET系列。
8.不适用于lacZ或lacY突变的宿主菌。
规格及成分成份200mL塑料瓶包装成份A200mL成份B 1.25mL使用手册1份运输及保存常温运输及保存，有效期两年。
自备试剂蒸馏水使用方法一：培养基的配制1.配制自诱导培养基：将1.25mL溶液B全部加入到200mL的溶液A中即得自诱导培养基。
注意：必须严格无菌操作，否则自诱导培养基非常容易长细菌。
2.贴好标签待用。
如果长期时间不用，可以冻存在-20℃。
二：培养基的使用1.将构建好的质粒转化入细菌，如BL21（DE3），涂于自备的、含有1%葡萄糖的LB培养基中（需要加入适当浓度的抗菌素），37℃培养过夜。
2.挑取单个细菌接种到自备的、含适当浓度抗菌素的液体LB培养基中，37℃培养直到菌液浑浊但不饱和（一般需要6-8小时）。
3.将所得菌液按千分之一的体积比例加入自诱导培养基中（如果自诱导培养基体积是100mL，则加入100uL菌液），同时加入适当的抗菌素。
注意：在自诱导培养基中，如果使用卡拉霉素，其终浓度比一般的培养基高，需要100ug/mL。
由于本方法所得菌液密度大，故需要大量氧气，因此培养基的体积不能超过三角瓶的五分之一。
CHO细胞无血清培养基技术手册
(1)无血清培养基，为一般意义上无血清培养基，用各类可替代血清功能的生物材料配制细胞培养基，如牛血清白蛋白(BSA)、转铁蛋白、胰岛素等生物大分子物质，以及从血清中提取的去除蛋白质的混合脂类以及水解蛋白等。其特点是培养基中的蛋白含量较高,添加物质的化学成分不明确，其中含有大量的动物来源蛋白。
5 CHO细胞无血清无动物组分培养基（SAF-CHO-G-004）
其实个性化培养基并不新鲜，在国外生物制药企业普遍采用个性化培养基，世界著名的生物制药公司（如Amgen、Genetech）往往和培养基企业合作，通过细胞培养基的客户定制方式，研制最适合自身细胞特点的个性化细胞培养基应用于生产实践，用于提高细胞产率和生产效率。另有数据显示，国际上的细胞培养基生产企业，个性化、定制培养基占其培养基业务的90%以上，目录培养基不足10%。
ATCC提供的CHO/dhfr-细胞照片
2 CHO细胞表达系统的优势与特点
由于哺乳动物细胞结构、功能和基因表达调控的复杂性，外源基因在哺乳动物细胞中的表达与在原核生物中的表达存在较大差异，因而外源基因在哺乳动物细胞中高效表达所需的元件也不同于在原核生物细胞中的表达所需的元件。外源基因在哺乳动物细胞中的表达包括基因的转录、mRNA翻译及翻译后蛋白质的加工等过程，如蛋白质的糖基化、磷酸化、寡聚体的形成以及蛋白质分子内或分子间二硫键的形成等比较复杂，要表达具有生物学功能的蛋白质如膜蛋白、抗体和具有特异性催化功能的酶需要在哺乳动物细胞中进行。
其它
无水葡萄糖、HEPES、丙酮酸钠、亚油酸、硫辛酸、胰岛素、亚硒酸钠、植物蛋白等
血琼脂平板说明书
血琼脂基础培养基使用说明书【产品名称】通用名称：血琼脂基础培养基英文名称：Blood Agar Base Medium【包装规格】Φ90㎜和Φ70㎜，5块／包。
【预期用途】本产品用于营养需求较高的细菌培养和保存菌种用。
【检验原理】培养基（Medium）是指由人工方法配制而成的，专供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存用的混合营养制品。
培养基按用途分为基础培养基、增菌培养基、选择性培养基、鉴别培养基和厌氧培养基等，按原料来源分为天然培养基、半合成培养基和合成培养基。
按形态分为液体培养基、流体培养基、半固体培养基和固体培养基等。
本产品是以人工的方法配制而成的，除基础培养基外另外还添加了脱纤维羊血，以增加营养性能，适应有些细菌的特殊营养要求。
【主要组成成份】血琼脂基础培养基由脱纤维羊血、蛋白胨、氯化钠、牛肉浸粉、琼脂粉和玫瑰红酸原料经配制、高压灭菌，至45℃加入动物血定量灌入一次性塑料培养基内而成。
【贮存条件及有效期】2-8℃，避光保存，有效期3个月，用前复温。
【样本要求】标本可以是液体也可以是固体，液体标本可以直接使用，固体标本需用适量无菌生理盐水溶解后，取溶液使用。
根据浓度需要决定是否采用10倍稀释法进行稀释。
【检验方法】用接种环或棉签以无菌方法取标本直接画线接种于培养基中，或无菌吸取0.1ml适当浓度的标本溶液用玻璃涂布棒均匀涂布于培养基中，置35~37℃温箱中培养。
【检验结果的解释】大肠埃希氏菌菌落白色，有时带黄白色，不同菌株的溶血作用变化很大，其中有致病力的菌株产生β-溶血环；葡萄球菌圆形，橙色至白色，其中金黄色葡萄球菌产生β-溶血环，而表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌无溶血作用；链球菌菌落圆形突起，透明或半透明，其中草绿色链球菌产生α-溶血环，化脓性链球菌产生β-溶血环，不溶血性链球菌没有溶血作用；脑膜炎奈瑟氏菌菌落圆形，凸起，透明，带兰灰色，不溶血；肺炎球菌菌落圆形，扁平，透明或半透明，在菌落周围有草绿色狭窄溶血环；产气荚膜梭菌菌落灰白色，圆形，多数菌株有双层溶血环。
血琼脂平板培养基
血琼脂平板培养基 使用说明书
【产品名称】
血琼脂平板培养基
【规格、型号和包装】
见下表：
组成 型号 规格 包装 血琼脂、一次性塑料培养皿 P0901 9cm 20个/盒
血琼脂、一次性塑料培养皿 P0701 7cm 20个/盒
特殊型号，按客户要求规定。
【预期用途】
本品供普通细菌培养和保存菌种用。
【检验原理】
动物血是微生物生长繁殖的良好营养物质，在45-55℃的基础培养基中加入血液可以保存血液中某些不耐热的生长因子，促使细菌生长繁殖。
【主要组成成份】
每1000mL琼脂含：
酪蛋白胰酶消化物 10.0g
心胰酶消化物 3.0g
玉米淀粉 1.0g
琼脂 13.0g～15.0g
肉胃酶消化物 5.0g
酵母浸出粉 5.0g 氯化钠 5.0g
蒸馏水 1000mL
羊血或马血 50mL～70mL
【储存条件及有效期】
2℃～8℃保存，切勿冻藏。
在储存条件下，自生产之日起有效期60天。
【样本要求】
按照《全国临床检验操作规程》要求处理。
【检验方法】
1. 将培养基复温至常温25℃；
2. 将标本划线接种于培养基琼脂面上；
3. 置培养箱，37℃温箱培养18小时至48小时；
4. 观察菌落形态。
【检验结果的解释】
普通细菌培养后，菌落形态典型。
【检验方法的局限性】
本产品仅适用于普通细菌培养和保存菌种。
【产品性能指标】
培养基接种质控菌株，生长情况应符合下表要求：。
API 50 CHE培养基(Ref 50400)
必备实验室设备 ： - 温箱(37°C) - 冰箱 - 本生灯 - 记号笔
培养基成份
API 50 CHE 培养基 10 ml
试剂
一套包括(10 次测定) ： - 10 API 50 CHE 培养基的安瓿 - 1 份说明书
附加产品(不包括一套中) ： - API 50 CH 试验条(ref. 50 300) - API 20 E 试验条(ref. 20 100) - API 20 E 试剂(ref. 20 120) - 悬液培养基，5ml (ref. 20 150) - 无菌蒸馏水，1ml - McFarland 标准(ref. 70 900)或 光密度计： DENSIMAT (ref. 99234)或
试验条的成份
试验条 20-29 管 / 底物
20 α-甲基-D-甘露糖甙 21 α-甲基-D-葡萄糖甙 22 N-乙酰-葡糖胺 23 苦杏仁甙 24 熊 果 甙 25 七 叶 灵 26 柳醇 27 纤维二糖 28 麦 芽 糖 29 乳糖
试验条 30-39 管 / 底物
30 蜜二糖 31 蔗糖 32 海藻糖 33 菊糖 34 松叁糖 35 棉子糖 36 淀粉 37 肝糖 38 木糖醇 39 龙胆二糖
试验条接种 用已接种的 API 50 CHE 培养基接种，只加管(不加 杯)，并用矿物油覆盖所有测定管。 在好氧条件下在 37°C 培养 48 小时。 接种 API 20 E 试验条(见 API 20 E 说明书)
读试验条 (见 API 50 CH 和 API 20 E 说明书) 培养 24 和 48 小时后，读结果。 对 API 50 CH 试验条： - 产酸阳性结果，由于酚红指示剂而致培养基颜色变 黄色。 - 七叶灵阳性结果(第 25 号管)，颜色由红变黑。 记录结果于报告单。 对 API 20 E 试验条： - 在最后观察结果前，加入试剂。 - 参照 API 20 E 说明书读测定结果。
人干细胞无血清培养基
人干细胞无血清/无饲养层培养基Stemmera TM人无血清/无饲养层培养基（SFM）是在无血清和饲养层情况下，用于培养人的干细胞能支持干细胞的生长，包括胚胎干细胞和诱导多能干细胞。
规格: 500ml产品描述：Stemmera TM人ESCs/iPSCs无血清/无饲养层培养基(hStemSFM)是一种成分明确的即用型培养基，特殊的配方，在完全无血清和无饲养层环境下能用于人诱导多能干细胞（hiPSCs）和胚胎干细胞(hESC)的重编程、增殖和维持。
产品成分：两种成分混合后是一种即用型完全培养基存储和运输：Stemmera TM hStemSFM中的两种成分是分开运输的，基本培养基在室温下运输然而SFM添加物是在干冰环境下运输。
在收到产品后基本培养基需存储在2-8°C环境中而SFM 需要存储在-20°C，避免多次冻融。
完全培养基储存在2-8°C的黑暗环境中能使用长达1个月。
完全培养基分成等份的供每日使用，避免反复预热，避光保存最佳。
产品使用：该产品是仅用于体外使用和研究使用。
不可用于人类或动物的诊断或治疗使用。
使用注意事项：1.使用aerosol barrier枪头，每次用完更换新的枪头。
2.要用新的，干净的手套和穿实验服。
3.材料安全数据表（MSDS）可在网站下载。
4.用70%乙醇或其他合适的消毒剂清洁工作空间。
培养条件:培养基：Stemmera TM hStemSFM。
细胞：人诱导多能干细胞（hiPSCs）和人胚胎干细胞（hESCs）。
培养类型：单细胞传代和贴壁培养。
温度范围：37°C。
孵育器的环境：在含5% CO2或5% O2的潮湿环境中，确保适当的气体交换，减少与外界接触。
建议培养容器：基质胶包被的板子、皿或烧瓶（Corning，货号：356231，稀释比1:100），根据容器的大小，调整细胞数量。
操作手册:•完全SFM培养基的制备：添加3.5ml冷冻SFM添加物（货号 ST02001-S1）到500ml 基础培养基中（货号st02001-bm 500ml），搅拌均匀，0.22µM滤膜过滤。
微生物培养技术手册
微生物培养技术手册一、前言微生物是生命科学中重要的一个研究领域，微生物培养技术是微生物研究的基础。
本手册旨在提供一份简明易懂的微生物培养技术指南，介绍微生物分类、培养方法和培养基制备等实验步骤。
二、微生物基础知识微生物是指体型微小的生物，包括细菌、真菌和病毒等。
微生物在自然界中广泛存在，是环境检测、生产加工和医学诊断等方面的重要对象。
1.微生物分类微生物按照形态分类可分为细菌、真菌和病毒，按照营养及生长需求分类可分为需氧菌和厌氧菌。
2.微生物培养基础微生物培养需要一定的培养基，培养基是一种支持微生物生长的营养溶液。
根据微生物的分类和需求，培养基可分为营养琼脂培养基、选种培养基、富集培养基等。
三、微生物培养方法根据不同的微生物分类和实验条件，微生物培养方法也有所不同。
下面介绍常用的细菌和真菌培养方法。
1.细菌培养方法（1）液体培养：将含有细菌的营养液置于培养器中，在适宜的条件下（光照、温度、氧气等），细菌在其中生长繁殖。
（2）平板培养：将含有细菌的营养琼脂培养基平铺在培养皿上，待琼脂凝固后，将细菌接种于平板上，细菌在琼脂表面形成菌落。
（3）斜面培养：与平板培养类似，只是将琼脂斜置于培养皿中，使细菌在琼脂表面上生长而不扩散至其它区域。
2.真菌培养方法（1）液体培养：将含有真菌孢子的液体营养基置于培养器中，在适宜的条件下（光照、温度、氧气等），真菌在其中生长繁殖。
（2）平板培养：将含有真菌孢子的营养琼脂培养基平铺在培养皿上，待琼脂凝固后，将真菌接种于平板上，真菌在琼脂表面形成菌落。
（3）分生子囊培养：真菌的生殖方式为分生子形成，可在特定的富集培养基上进行分生子囊培养，观察其分生子形成和发育过程。
四、微生物培养基制备微生物培养基的制备需要遵循一定的原则和步骤，下面以制备营养琼脂培养基为例，介绍具体的制备步骤。
1.原材料准备淀粉、蛋白胨、琼脂粉、氯化钠、磷酸氢二钠、葡萄糖、蛋白酶胨、磷酸氢氢二钾、氯化钙等原材料按照一定比例准备。
GIBCO细胞培养基本知识手册(中文版)
MH培养基配制标准操作规程
MH培养基配制标准操作规程1．目的规范M-H培养基配制标准操作规程，保证培养基质量。
2．原理M-H培养基用Mueller-Hinton琼脂（水解酪蛋白琼脂）配制，淀粉为保护性胶体，能对抗细菌中的毒性物质，水解酪蛋白含多种氨基酸，牛肉浸膏能提供细菌氮源的主要营养物质。
药敏试验中，为保证结果重复性及抑菌环的大小、清晰，因此培养基不含对抗生素及磺胺药物的拮抗剂。
3．用途用于普通细菌的抗菌药物敏感试验。
4．配方成品OXOID M-H干粉38g、蒸馏水1000ml，pH7.1～7.5。
5.操作步骤将上述成分混合，校正pH。
121℃高压灭菌15分钟。
冷至50℃左右，无菌定量吸取25ml于直径9cm的无菌平板4mm. 内，凝固后冷藏备用。
琼脂层厚6.储存条件2～8℃冰箱。
7.有效期实验室自行规定，确保培养基质量。
8. 质量控制8.1 质控频度每次新配制时做质控8.2 质控方法及结果见表5-20.表5-18 配制M-H培养基质量控制方法及结果结果试验方法无细菌生长，>100块<100块抽检5%无菌试验CO235℃，随机取10块，小时培养24出现一个边缘清楚的质量检测培养基上涂布粪肠在M-H ≧应径，菌抑圈直，用甲氧ATCC29212球菌平行试验20mm 苄啶∕磺胺甲噁纸片进行小℃培养药敏试验，3524时做质控时，取新旧批号的培养基同时做9.注意事项9.1 倾注琼脂量为25ml，平板深度4mm。
若太薄，易产生假敏感。
若太厚，平皿中的抗生素往下扩散而使抑菌环变狭窄，产生假耐药性。
9.2 pH会影响某些抗生素的活性。
实验时不可将平板培养在CO2培养箱中，否则会在琼脂的潮湿表面产生碳酸而降低pH值，将影响各种抗生素的扩散速度、抑菌环大小。
参献文考上海：临床微生物学诊断与图解..第二版.周庭银编著[1] 2007上海科学技术出版社，.王钦升，周正明，高屹主编[2] .实用医学培养基手册1999北京：人民军医出版社，（周庭银）编写人：AAA、BBB 操作人：本室操作人员批准人：。
细胞培养完整手册
细胞培养完整手册引言细胞培养是现代生物学和医学研究领域必不可少的一环。
本文将介绍细胞培养的基本原理、操作步骤、培养常见问题及解决方法。
细胞培养基本原理细胞培养是指利用人工制备的培养基以及适当的生长因子、激素和营养物质等对细胞进行体外培养和扩增，从而使细胞可以在体外连续增殖并保持原有的生物学特性。
细胞培养是现代细胞生物学、免疫学、病毒学、分子生物学以及药学研究的基础。
细胞培养的操作步骤实验前准备实验前要准备工具、试剂和消毒物品等，以确保实验的顺利进行和细胞的纯度与无菌。
细胞解冻1.从低温冻存罐中取出样品，将其放在37℃恒温水浴中解冻，不要使用冷却液或热盘等快速解冻方式。
2.用培养基缓慢悬浮细胞，宜加入10% FBS卡死细胞，避免冷冻完再活化产生过多氧化物等致细胞杀伤性的物质。
3.对细胞悬浮液进行离心，弃掉上清液，用适量的完整培养基重悬细胞沉淀，充分混匀后接续培养。
细胞传代1.用 PBS 泡洗清除细胞上附着的蛋白质和细胞碎片等杂质。
2.加入胰酶 0.05% 消化 3~5 分钟，让细胞分离迅速、均匀，切勿长时间消化。
3.将消化细胞在上清液中轻轻悬浮，检查细胞的分离和体积大小。
4.将细胞上清液转移至新的培养瓶中，鉴定细胞标记和污染情况。
5.加适量的完整培养基，并放入 CO2 培养箱中进行培养，定期观察细胞的生长情况，每两到三天定期更换培养基。
技巧提示1.培养瓶应洗涤干净，并喷壁消毒剂。
2.常用的培养基配方包括 DMEM 培养基、RPMI 1640 培养基、F12 培养基等，根据不同的实验需要进行选择。
3.培养箱应定期清洗和消毒，保证无菌环境。
4.细胞的传代次数不应过多，避免引起细胞特性的变化和突变。
细胞培养常见问题及解决方法细胞失活或死亡1.培养基中缺失营养物质如血清、氨基酸等，应加入完整培养基进行补充。
2.细胞感染，需要添加抗生素，如青霉素、链霉素等。
3.培养条件不适宜，如 CO2 浓度、温度等，应适当调节。
中国蓝 中国蓝琼脂培养基 使用说明书
中国蓝中国蓝琼脂培养基琼脂培养基琼脂培养基（（培养法培养法）） 使用说明书【产品名称】中国蓝琼脂培养基（培养法）。
本产品以下简称为“培养基”。
【组成、型号、培养皿规格】 表1组成 型号 培养皿规格中国蓝琼脂 一次性塑料培养皿P0731 7cm P09319cm【包装规格】20人份/盒。
【预期用途】适用于肠道菌的分离培养用。
【检验原理】此培养基为标准的无抑制作用的固体分离培养基，中国蓝为指示剂，无抑制作用，玫瑰红酸仅能抑制革兰氏阳性细菌生长，而对大肠埃希氏菌没有抑制作用，故标本接种量不宜太多，否则杂菌生长过密影响致病菌检出。
【主要组成成份】每1000mL 中国蓝琼脂含：a) 肉膏汤琼脂（pH7.4） （BR 级） 1000mL， b) 1%中国蓝水溶液 （AR 级） 10mL， c) 乳糖 （AR 级） 10g， d) 1%玫瑰红酸乙醇溶液 （AR 级） 10mL。
【储存条件及有效期】2℃～8℃保存，切勿冻藏。
在规定的储存条件下，自生产之日起有效期60天。
【样本要求】取经增菌培养后或新鲜标本经处理后的标本，直接用分段划线的方法接种到分离培养基上。
【检验方法】1） 将培养基复温至常温25℃；2） 取新鲜标本经处理后或经增菌培养后的标本，直接用分段划线的方法接种到培养基上；3） 35±2℃培养18～24小时。
【检验结果的解释】1. 分解乳糖的细菌在培养基上形成蓝色菌落。
2. 不分解乳糖的细菌在培养基上形成淡红色的透明菌落。
【检验方法的局限性】本培养基仅适用于肠道菌的分离培养用，鉴定需作进一步试验。
【产品性能指标】1.生长试验应符合表2的要求。
表2质控菌株 菌株号 生长情况生长率 大肠埃希氏菌ATCC25922单个菌落大小约为2.0mm，蓝色菌落100%2.特异性试验应符合表3的要求。
表3质控菌株 菌株号 生长情况金黄色葡萄球菌 ATCC25923 抑制性生长3.重复性a）批间差：检测同一批产品，按照生长试验方法试验，生长率为100%。
ips培养技术手册
ips 培养技术手册IP细胞培养技术手册1. 引言细胞培养技术是一种重要的生物学研究方法，用于研究细胞生物学、药理学、毒理学等领域。
IP细胞培养技术是一种特殊的细胞培养方法，通过使用IP细胞培养基和特定的培养条件，可以有效地培养和维持细胞。
本手册将介绍IP细胞培养技术的基本步骤和注意事项。
2. 材料与设备2.1 材料•IP细胞培养基•细胞培养皿•细胞培养瓶•双抗（青霉素和链霉素）•细胞培养相关试剂2.2 设备•CO2培养箱•细胞培养超净工作台•细胞计数仪3. 细胞培养步骤3.1 细胞复苏1.从-80°C冰箱中取出细胞冻存管。
2.将冻存管放入37°C水浴中快速融化。
3.轻柔地将细胞悬液转移至离心管中。
4.加入适量培养基，轻轻吹打细胞，使其均匀分散。
5.将细胞悬液转移至新的培养瓶中，加入适量培养基，混匀。
3.2 细胞培养1.将细胞悬液转移至细胞培养皿中。
2.将细胞培养皿放入CO2培养箱中，37°C、5% CO2条件下培养。
3.每隔一天更换一次培养基。
3.3 细胞传代1.弃去培养皿中的培养基。
2.加入适量胰蛋白酶，轻轻摇晃，使细胞分散。
3.等待细胞消化至适当程度后，加入适量培养基终止消化。
4.使用细胞刮刀将细胞从培养皿壁上刮下。
5.离心收集细胞，弃去上清。
6.加入适量培养基，轻轻吹打细胞，使其均匀分散。
7.将细胞悬液转移至新的培养瓶中，加入适量培养基，混匀。
4. 注意事项1.操作过程中应严格遵守无菌操作原则，避免污染。
2.使用新鲜、合格的细胞培养基和试剂。
3.细胞培养过程中应避免剧烈震荡，以免损伤细胞。
4.定期观察细胞生长状况，如细胞密度、形态等，及时调整培养条件。
5.细胞传代时，应注意控制胰蛋白酶的浓度和消化时间，避免过度消化。
5. 结语IP细胞培养技术是一种有效的细胞培养方法，通过遵循正确的操作步骤和注意事项，可以获得高质量的细胞。
希望本手册对您的研究工作有所帮助。
如有其他问题，请随时与我们联系。
毕赤酵母菌种培养手册
毕赤酵母菌种培养手册1. 引言本手册旨在提供毕赤酵母菌种培养的详细步骤和注意事项。
毕赤酵母（Saccharomyces cerevisiae）被广泛应用于食品工业、酿酒业和生物学研究等领域。
通过正确的菌种培养技术，可以确保毕赤酵母的活力和纯度，从而保证实验和应用的可靠性和准确性。
2. 材料和方法2.1 培养基选择适合的培养基是培养毕赤酵母的关键。
常用的培养基包括YPD培养基、SD培养基和SC培养基等。
根据具体实验需求选择合适的培养基配方，并按照相应操作说明制备。
2.2 菌种的制备和传代1. 从冰冻保存的毕赤酵母菌种中取出适量菌种转移到无菌培养基中。
2. 在适当的温度（通常为30°C）下培养菌种至对数生长期。
3. 取适量无菌培养基转移菌种，传代培养。
2.3 菌种培养1. 取适量菌种转移到含有适量无菌培养基的培养瓶中。
2. 控制培养瓶中的菌液浓度，通常为OD600=0.5。
3. 在适当的温度（通常为30°C）下培养菌种至对数生长期或其他实验所需生长期。
2.4 菌种保存菌种的保存有助于长期维持活力和纯度。
常用的保存方法包括冷冻保存和制备冻干菌种等。
3. 结果和讨论通过本手册提供的方法，可以成功培养并维持毕赤酵母菌种的活力和纯度。
在培养过程中，应注意操作的无菌性和培养条件的合适性。
此外，根据具体实验需求，可适当调整菌液的浓度和培养温度等参数。
4. 总结本手册详细介绍了毕赤酵母菌种培养的步骤和注意事项。
正确的菌种培养技术对于保证实验和应用的可靠性和准确性至关重要。
通过遵循本手册的指南和方法，可以有效地培养毕赤酵母菌种，并取得可靠的实验结果。
请注意，本手册仅提供参考，并且在使用过程中应遵守相关的实验室安全操作和法律法规要求。
人脐带间充质干细胞成脂诱导分化培养基操作手册说明书
产品描述人脐带间充质干细胞成脂诱导分化培养基操作手册产品规格：400mL产品货号：PD-019人脐带间充质干细胞成脂诱导分化培养基专门为人脐带间充质干细胞成脂诱导分化而开 发，针对人脐带间充质干细胞的特性优化分化试剂的配方，可增加人脐带间充质干细胞的成脂 分化效果。
本产品含血清成分，仅用于科研用途，不可用于诊断、治疗、临床及其他用途。
培养基组成成分●人脐带间充质干细胞成脂诱导分化培养基 ADP1：成分名称添加体积175 mL 20 mL 2 mL 2 mL 400μL 200μL 200μL 人脐带间充质干细胞成脂诱导分化诱导基础培养基 ADP1FBS谷氨酰胺 Glutamine青链霉素 Pennicillin-Streptomycin胰岛素 InsulinIBMX罗格列酮 Rosiglitazone地塞米松A Dexamethasone 200μL●人脐带间充质干细胞成脂诱导分化培养基 ADP2（维持培养基）成分名称添加体积人脐带间充质干细胞成脂诱导分化基础培养基 ADP2175 mL FBS20 mL 谷氨酰胺 Glutamine2 mL 青链霉素 Pennicillin-Streptomycin2 mL 胰岛素 Insulin 400μL油红-O 染色液 10 m L操作流程一、人脐带间充质干细胞成脂诱导分化培养基的准备注：各成分请根据试剂管上标签标示温度保存。
地塞米松A和地塞米松B浓度不同，不能混用。
染色液1.本产品为试剂盒型，使用前需将试剂盒内各成分试剂混匀。
（请勿将 ADP1 与 ADP2混淆）2.使用前，请将血清置于4℃解冻，直至血清完全溶解；待血清完全溶解后，将所有添加物置于室温溶解。
待试剂完全溶解后，轻轻摇晃使试剂混合均匀（低于 500μL 体积的试剂无需此操作）。
注：为了保证微量试剂的使用效果，请将低于 200μL 的试剂管进行短暂离心，使试剂能全部收集至管底。
3.按上述两个成分表，将表一 ADP1 中的 FBS、青链霉素、谷氨酰胺、胰岛素、IBMX、罗格列酮、地塞米松A等试剂按体积大小先后加入到诱导基础培养基中；混合均匀后做好标识，培养基即可使用。
微生物培养基配制手册大全
临床微生物培养基手册大全1、营养琼脂（普通琼脂）成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤）100毫升琼脂（视天气，琼脂质量而定）制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。
用途：作普通琼脂平皿。
2、血琼脂平板（BA）制法：取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。
用途：1．一般棉拭子均接种此培养基。
2．尿液，脓液3．分离细菌标本用。
3、基础培养基（肉膏汤BB）成份：蛋白胨10克牛肉膏5克氯化钠5克水1000毫升制法：将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至7．6，过滤分瓶，121℃高压灭菌，20分钟备用。
用途：1 作耐药试验，增菌用分装小管。
2 作普通琼脂斜面。
4、血液培养基（大管肉汤培养基）成份：1 新鲜牛肉浸液1000毫升2 PABA（对氨基苯甲酸〔相当于10mg/毫升〕）1g% 1毫升3 MgSO4 [相当于0．493/100毫升] 49．3% 1毫升4 枸椽酸钠0．3g制法：1 将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。
2 取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。
用途：作血，骨髓培养用。
5、肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂）成份：蛋白胨10克乳糖10克氯化钠5克琼脂25（22）克水1000毫升2%伊红溶液20毫升0．5%美兰溶液20毫升制法：将蛋白胨，氯化钠琼脂称好，加水1000毫升使溶解，校正PH7．4过滤，补足失水，加入2%伊红溶液20毫升，0．5%美兰溶液20毫升，（115℃高压20分钟），冷却至50℃左右倾注平板，凝固后存冰箱备用。
（高压以后方可再加乳糖）用途：用作分离沙门氏，志贺氏菌属，也作菌群调查。
16、罗文斯坦培养基成份：磷酸二氢钾2．4克硫酸镁0．24克枸椽酸钠0．6克天门冬素3．6克纯甘油（丙三醇）12毫升水600毫升马铃薯粉30克鸡蛋1000毫升（约3公斤）2%孔雀绿水溶液20毫升制法：1 除鸡蛋外（还有孔雀绿）。
HAYFLICK 肉汤培养基 产品手册说明书
1.产品描述和用途支原体是除纳米细菌外最小的微生物，由于没有细胞壁结构，它们能够通过孔径为0.2 um的滤膜，对靶向细胞壁合成的抗生素(如青霉素)不敏感，同时由于支原体不能合成胆固醇等脂类物质和核苷酸类物质，支原体培养过程中，需要添加这些外源性的成分以支持其生长，支原体无法利用葡萄糖代谢产物乳酸作为碳源，其培养过程培养液pH会快速下降至6.5。
HAYFLICK培养基被推荐用于以细胞为生产基质的生物医药产品的支原体一般检测，本培养基是根据欧洲药典(EP)的建议配方配制的。
培养基中的马血清，以提供胆固醇和其他必须脂肪酸；脱氧核糖核酸以提供嘌呤和嘧啶；酚红，作为pH指示剂，培养基应呈深红色，颜色变为黄色表明培养基pH降低，直观表明有活的支原体在生长；青霉素，能抑制其他细菌的生长。
它们的最佳生长温度在宿主温度的范围内(例如哺乳动物类细胞常规培养温度37℃)，好氧或兼性厌氧条件下均可生长。
本产品由1瓶HAYFLICK 肉汤基础培养基（84.3 mL）和1瓶HAYFLICK培养基添加剂(15.7mL)两部分组成，使用前请仔细阅读本说明书的第5条配制培养基。
2.产品灭菌方式基础培养基：121℃15min 高温湿热灭菌；培养基添加剂：过滤除菌。
3.包装规格、运输、长期存放HAYFLICK 肉汤基础培养基（Q501）包装容器：125 mL玻璃瓶装量：84.3 mL瓶盖：隔膜螺旋盖装箱：25瓶/箱运输：常温长期存放：2-25摄氏度HAYFLICK培养基添加剂(Q502)包装容器：50mLPET瓶装量：15.7 mL装箱：20瓶/箱运输：干冰长期存放：冷冻4.配方每1000mL的HAYFLICK 肉汤培养基中含有以下成分：酵母浸出分19.6 gHIB 17.7 g酚红24 mgDNA钠盐19mg马血清157 mL青霉素40 IKU5.配制培养基1）先将HAYFLICK培养基添加剂（Q502）在常温或者2~8度过夜解冻。
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培养基手册MEDIA HANDBOOK（2005）一、培养基的历史体外培养（in vitro culture）包括：组织培养（tissue culture）、细胞培养（cell culture）、器官培养（organ culture）。
顾名思义，就是将活体结构成分（如活体组织、活体细胞或者活体器官等）从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长发育的方法。
广义组织培养与体外培养同义。
体外培养已经历了约一百年的发展历史，但发展初期进程比较缓慢，没有引起很多学者的重视。
直到上世纪50年代后期，体外培养技术才广泛应用于生物学研究的各个领域，使这项技术得到飞速发展。
现在体外培养已成为细胞工程、基因工程、抗体工程的重要组成部分。
细胞培养指从生物机体取出部分组织分散成单个细胞或直接从机体取出单个细胞，也可把体外培养细胞分散成单个细胞在体外条件下培养，细胞能继续存活与增殖。
培养过程中细胞不再形成组织。
发展与完善细胞培养技术围绕防止污染、改进培养方法、设计新型培养容器、设计不同的培养液等几个方面进行。
1885年Roux温生理盐水培育鸡胚组织；1903年Jolly，1906年Beebe等发明了盖片悬滴培养；1907年Harrison培养蛙胚神经成功，开始创建盖片凹玻璃悬滴培养法；1910、1912年Carrel采用无菌操作、更新培养基、传代，完善了悬滴培养法；1924年Maximow采用双盖片悬滴培养法；1923年Carral设计创立了卡氏瓶培养法，用此法可根据需要随时更换培养液，既有利于组织不断生长，又可以运用不同种类的营养液培养不同的细胞，极大地推动了当时组织培养研究。
Earle等加以改进，使大量细胞能直接生长于玻璃瓶壁上，培养了正常细胞与肿瘤细胞的细胞株。
至此大多数研究人员都采用培养瓶培养细胞。
组织培养从二十世纪40年代起迅速发展,在培养容器、培养基和培养技术等方面出现了很多革新。
在培养容器方面, 由简单的用试管、旋转管培养，发展到多种培养瓶培养，近年来，塑料瓶、皿、多孔培养板的使用已日趋普遍。
在培养基方面，从50年代初，Parke、Eagle等设计出合成培养基后，从纯天然培养基到合成培养基、从鸡胚浸出液发展到动物血清（促细胞生长物），直至60年代设计出无血清培养基。
首先反映在设计不同种类的缓冲盐溶液，以用来培养不同的细胞和洗涤细胞。
Earle在1948年设计了含有碳酸氢钠等盐类的Earle氏盐溶液，Hank’s在1949年设计了Hank’s氏盐溶液。
在培养技术方法方面，革新进展更为迅猛，Earle、Dulbecco等于1943年创建单层细胞培养法，首建长期传代的L-细胞系。
1948年Sanford创建单细胞分离培养法，获L-细胞纯系。
1951年Gey首建人肿瘤细胞——Hela细胞系。
1961年Hayflick首建人二倍体细胞系25种，开辟了应用新方向。
从50年代末开始，组织培养技术应用进入了一个繁盛的阶段，广泛应用于生物学和医学研究各个领域。
诱变建立遗传缺陷细胞株、杂交瘤技术制备单抗、发展细胞大量培养技术、利用重组技术构建工程细胞株，已成为生物工程的重要生产手段。
在连续灌注培养工艺方面，美国Ohashi,Ryo等人2001年报道采用2L一次性生物反应器灌注培养杂交瘤细胞生产单克隆抗体，以Becton Dickenson Cell Mab+10%胎牛血清+1％聚醚F-68为培养基，最高活细胞密度超过1×107cells/ml；2001年瑞士Heine, Holger等人用带超声细胞分离器(UCS)的连续灌注搅拌罐生物反应器培养鼠杂交瘤细胞生产单克隆抗体，稳态培养时活细胞密度超过2×107cells/ml；2004年德国Thomas等人在1L搅拌罐生物反应器中培养rCHO细胞生产人MUC-1糖蛋白，采取葡萄糖浓度限制的高产率灌注工艺减少有害代谢物，代谢转向TCA循环增加，活细胞密度保持在(1～2)×107cells/ml。
在流加悬浮培养工艺方面，美国麻省理工Xie Liangzhi等人2000年报道在2L生物反应器中流加培养杂交瘤细胞，通过营养控制降低氨和乳酸的比生成速率，补充培养基包括营养成分、胎牛血清和痕量金属，最大活细胞密度达到1.7×107cells/mL。
二、细胞培养目的与用途1．科学研究（1）药物研究开发，如新药筛选，疫苗、基因工程药物、细胞工程药物研究与开发、单克隆抗体制备等。
（2）基础研究，如药物作用机理、基因功能、疾病发生机理等研究。
2．生物制药（1）疫苗生产：如病毒性疫苗(肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等)，多肽疫苗（肿瘤疫苗)等。
（2）基因工程药物生产：如EPO等。
（3）抗体药物、基因治疗药物生产。
（4）细胞工程药物生产：生物细胞内的一些生物活性多肽，生物活性物质等。
（5）利用细胞法体外测定生物活性物质的活性；并预测其在体内的药效和替代体内法检测其成品的生物活性。
三、细胞培养基的定义人工模拟细胞体内生长的营养环境，维持细胞生长的营养物质,它是提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。
包括：1．天然培养基指来自动物体液或利用组织分离提取的一些培养基，如动物血浆、胚胎浸出液、血清和人血清，水解乳蛋白等。
2．合成培养基人工设计、配制的培养基，如MEM、199、DMEM、RPMI1640等。
四、动物细胞培养技术平台动物细胞大规模培养已成为生物制药领域最重要的关键技术之一，并以其研究的深入和进展推动生物技术产业的迅速发展。
专家预言：蛋白治疗药物如糖蛋白、抗体和多肽药物仅仅只是刚刚开始进入市场，预计在下一个10年或20年会有更为快速的发展。
届时，蛋白治疗药物的迅速增长和市场需求将远远超过全世界的生产能力。
动物细胞规模化生产重组蛋白和抗体的工艺选择可考虑使用当前较成熟的工业化支持技术平台，以缩短产品工艺研发的时间，加快工业化进程。
当前已获FDA 批准的生物技术产品以及公开发表的生产工艺中，占有主流优势的是搅拌式生物反应器悬浮培养，工艺设计是流加或灌注培养。
其大规模细胞培养生产所面临的挑战是获得最大生产力的同时注重维持产品的质量；去除所有培养环境中外源因子的污染；更为精确有效的工艺控制手段；规模化培养中氧气的限定与溶解CO2浓度累积的控制等。
1996年1月至2002年12月美国获得成功批准的不同的治疗剂和诊断剂产品共31种，其中用哺乳动物细胞培养生产的就有21种。
动物细胞培养技术已经成为一个受到普遍信任的产业化生产技术，并逐步形成商业化操作水平。
动物细胞大规模培养技术集中在细胞系、细胞培养基和细胞生物反应容器三个方面，构成生物制品生产的必要条件。
其中细胞是病毒、蛋白的表达载体，细胞质量直接影响蛋白的表达量或病毒的滴度，故筛选、驯化优质细胞是关键。
而只有好的细胞培养基才可能筛选、驯化出优质的细胞。
细胞生物反应容器也在不断发展，以转瓶、反应器为主要细胞生产设备，配合高密度培养、微载体培养、悬浮培养技术，均需要相适应的细胞培养基以充分发挥作用,获得高表达、高产量，降低生产成本。
清大天一公司致力于动物细胞培养技术的开发和服务，跟随生物技术的发展，针对各种生物制品特点不断开发针对性培养基新产品，建立多种细胞体系的疫苗、抗体药物生产细胞培养技术平台，以提高相应细胞培养水平和生物制品表达水平，促进生物制药发展。
细胞培养技术对生物制品成本的影响1．表达量提高通过细胞培养技术的不断改进可以充分利用现有设备，大幅度提高生物制品表达量，降低生物制品的单位制造成本；同时，由于产量提高并不新增固定资产投资，也带来生物制品的单位固定成本的降低。
因此提高表达量可以有效降低生物制品的单位成本，既降低变动成本，也降低固定成本，使得制品利润率提高，市场竞争能力增强。
2．培养液成本降低在很多使用牛血清的细胞培养液中，为牛血清支付的成本远远高于培养液中的细胞培养基等其它成分，因此通过采用低血清细胞培养基，降低牛血清用量，可以降低细胞培养液总成本。
3．纯化成本低，制品安全性提高牛血清的使用量不仅增加了细胞培养液的成本，更严重的是带来动物来源成分、杂蛋白，以及不安全因素，这些成分越多，纯化的成本越高、生物制品原液损失越大，生物制品的成本越大。
因此采用低血清、无血清培养细胞可以有效降低纯化成本何损失，提高生物制品成品率和利润率。
4．综合成本降低综上所述，动物细胞培养技术是生物制品产业化的核心技术之一，在生产中，应该系统、全面的研究细胞培养技术对生物制品成本的综合影响，不断追求最佳的细胞培养技术，提高生产效率，有效降低生物制品成本，提高利润率，增强产品市场竞争力。
五、细胞生存条件1．基本营养物质（1）糖六碳糖主要能源、维持渗透压，含葡萄糖1-5%。
（2）氨基酸维持生存需12种氨基酸（精、胱、亮、异亮、赖、蛋、苯丙、苏、色、组、酪、缬）。
谷氨酰胺需量最大,缺乏时细胞生长不良。
单细胞培养或细胞量少时,所需氨基酸的种类和量增多，细胞主要利用左旋氨基酸异构体。
（3）维生素细胞大部分需水溶性B族维生素，Vitc不可少，1-10mg/100ml可促进正常细胞生长繁殖。
2．促生长因子、激素类物质3．其它物质基本元素、微量元素、促细胞贴附物质(纤粘连蛋白、层粘连蛋白laminin、IV型胶原、氨基多糖类)4．水主要成分和生存环境,要求高纯度水。
5．温度哺乳动物及人源细胞最适培养温度为35℃—37℃,对低温耐受力比高温强。
39℃以上受损→死亡；不低于0℃时（0℃-34℃），细胞能生存，但代谢降低、分裂延缓。
6．气体环境和pH需O2、CO2，通氧量过大对细胞有毒害。
CO2主要与维持pH有关，细胞培养最佳pH为7.2—7.4，通过缓冲系统和调节CO2含量，维持正常pH。
开放培养要求5%CO2环境、HEPES(羟乙基哌嗪乙硫磺酸)10—50mmol/ml 可防止pH变化。
含Earle’s缓冲系统的培养基适合于5％CO2的培养条件，Hanks’缓冲系统的培养基仅含有0.35g/L NaHCO3，不能用于5％CO2的环境，若放入CO2培养箱，溶液将迅速变酸，使用时应注意。
7．湿度和光开放培养相对湿度控制在95%。
细胞培养需避光，紫外线或可见光可造成核黄素、酪氨酸、色氨酸等产生有毒的光产物，抑制细胞生长，降低其贴壁能力。
8．影响细胞生长的其它因素接触橡胶用品、收集细胞时离心速度过大、细胞接种浓度过低等。
六、细胞培养基的基本要求1．营养成分氨基酸、单糖、维生素、无机离子与微量元素。
2．促生长因子及激素3．渗透压4．pH5．无毒、无污染七、细胞培养基组成及作用1．氨基酸组成蛋白质的基本单位。
不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。