食品中菌落总数的测定方法
食品中菌落总数的测定
食品中菌落总数的测定一、实验目的（1）学习和掌握测定食品中菌落总数的基本方法（2）学会菌落总数的报告方式二、实验材料1、仪器与设备：恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三角瓶、平皿、试管、试管架、酒精灯、灭菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蜡笔。
2、培养基和试剂：75%乙醇、0.85%生理盐水、琼脂培养基：胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g、蒸馏水1000mL、pH 7.0±0.23、检样：利乐包装鲜牛奶250ml三、实验方法与步骤1、检验程序菌落总数检验程序：检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2-3个适宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入46℃15-20ml营养琼脂→置36±1℃恒温箱内培养（48±2）h取出→菌落数→报告2、检样稀释及培养（1）以无菌操作，将检样包装打开，用吸管取25ml鲜牛奶，放于含有225ml灭菌生理盐水的500ml灭菌玻璃三角瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠），经充分振摇做成1：10的均匀稀释液。
（2）用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。
（3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。
（4）根据食品卫生检验标准要求和检样的菌落数量，选择3个连续适宜稀释度即10、10－1、10－2，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。
（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿15ml~20mL，并转动平皿使与稀释检样混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。
（6）等琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃恒温箱内培养（48±2）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1mL样品所含菌落总数。
国标菌落总数检测方法
国标菌落总数检测方法引言：菌落总数是指在一定的培养条件下，菌落形成的数量。
菌落总数检测是食品微生物检验中的一个重要指标，用于评估食品中微生物的污染程度和卫生质量。
本文将介绍国标菌落总数检测方法的步骤和原理。
一、国标菌落总数检测方法的步骤国标菌落总数检测方法主要包括样品制备、平板计数和结果计算三个步骤。
1. 样品制备需要准备好待测样品。
样品通常是食品、水或其他物质，可以是液体或固体。
将样品称取一定的量，然后按照一定的比例与适量的生理盐水进行稀释，以降低样品中菌落的数量，使其适合于后续的菌落计数。
2. 平板计数将制备好的样品溶液均匀地倒入已经凝固的琼脂平板中，然后用无菌铲子或无菌玻璃棒将溶液均匀涂抹在琼脂平板表面。
待琼脂凝固后，将平板倒置放置在恒温培养箱中，以利于菌落的生长。
根据不同的样品特点和需求，可以选择适当的培养温度和时间。
3. 结果计算在菌落生长适宜的条件下，菌落会在琼脂平板上形成。
在菌落形成后，使用计数器或目视观察，对菌落进行计数。
计数时需要遵循一定的规则，如避免重复计数、避免边缘菌落等。
最后，根据计数结果和样品的稀释倍数，计算出菌落总数。
二、国标菌落总数检测方法的原理国标菌落总数检测方法基于微生物在适宜的培养条件下形成可见的菌落的特性进行。
其原理主要包括稀释平板法和菌落计数法。
1. 稀释平板法稀释平板法是菌落总数检测的一种常用方法。
通过将样品与一定量的生理盐水进行稀释，使菌落的数量适于计数。
然后将稀释好的样品均匀涂抹在琼脂平板上，使菌落在琼脂上生长形成可见的菌落。
根据样品的稀释倍数和计数得到的菌落数量，计算出菌落总数。
2. 菌落计数法菌落计数法是国标菌落总数检测方法的关键步骤。
在菌落生长适宜的条件下，菌落会在琼脂平板上形成。
然后使用计数器或目视观察，对菌落进行计数。
计数时需要遵循一定的规则，如避免重复计数、避免边缘菌落等。
最后，根据计数结果和样品的稀释倍数，计算出菌落总数。
三、国标菌落总数检测方法的应用国标菌落总数检测方法广泛应用于食品、饮用水、药品、化妆品等领域。
食品中菌落总数的测定和不确定度分析
食品中菌落总数的测定和不确定度分析菌落总数是指在特定培养条件下，一定量的样品中培养出的所有菌落的总数。
它可以反映食品样品的微生物污染程度，是食品安全检测中常用的指标之一。
食品中菌落总数的测定方法一般采用平板计数法，但在测定过程中会受到不确定度的影响。
一、菌落总数测定方法1.取样：取适量食品样品，根据国家标准要求在不同的质量级别下取样不同的量。
2. 制备培养基和平板：按照相应的食品行业标准的要求制备好培养基，并按照制备方法制备好平板。
3. 滴接法：将样品滴于平板上，在平板上均匀涂布后置于恒温箱中培养一定时间，然后计算出每个平板上所培养出的菌落数量。
测量结果不可避免地存在误差，因此测量结果带有一定的不确定度。
菌落总数的不确定度主要涉及到两个方面：1.实验误差：包括人为误差、器材误差、操作方法等影响因素。
在实验过程中要尽可能地减少这些误差。
2.样品变异性：同一批食品样品中，不同样品可能存在微生物数量的差异，导致菌落总数的测量结果具有不确定性。
三、不确定度的分析和评估不确定度的分析和评估是检验结果可靠性的重要指标。
按照ISO/IEC 17025标准要求，制定有效的不确定度评估方案，定期进行实验验证，以确保菌落总数测定结果的可靠性。
1.不确定度的计算：应按照GB/T 16161等国家标准制定的方法进行测量误差和样品变异性的计算，并进行不确定度组成的分析和评估。
2.评估结果的有效性：对于不确定度的评估结果应进行合理的统计分析，确定合适的置信度，以提高菌落总数测定结果的可靠度和准确性。
3.改进措施：对于不确定度评估结果存在较大误差的情况，应采取相应的改进措施，以提高测量结果的准确度和可靠性。
四、总结。
食品中菌落总数的测定和不确定度分析
食品中菌落总数的测定和不确定度分析为了确保食品安全和卫生，必须对食品中的菌落总数进行测定，并进行不确定度的分析。
食品中的菌落总数是指在特定条件下，通过培养方法检测出的食品中的微生物菌落数量。
食品中菌落总数的测定方法通常采用平板计数法。
该方法主要包括以下步骤：1.准备培养基：选择适宜的培养基，如营养琼脂平板培养基。
将培养基加热溶解，然后冷却至约 45-50℃。
2.样品制备：按照一定比例将食品样品加入到培养基中，使用均匀撒布法或稀释法将菌液平铺在培养基表面。
3.培养：将制备好的培养基进行培养。
培养条件包括培养温度、时间和湿度等，根据食品样品的特性和微生物的生长特点进行合理设置。
4.统计：在菌落出现后，使用显微镜和计数器进行菌落的计数。
根据计数的结果和稀释倍数，计算出食品中的菌落总数。
测定菌落总数时，不确定度的分析是非常重要的。
不确定度是指对测量结果的估计误差。
菌落总数测定的不确定度分析主要包括以下几个方面：1.操作误差：操作人员在样品制备和培养过程中的误差。
可以通过重复测量多次来评估操作误差。
2.测量误差：使用显微镜和计数器进行菌落计数时的误差。
可以通过重复计数多次来评估测量误差。
3.稀释误差：使用稀释法进行样品制备时的误差。
可以通过重复制备多次进行评估。
4.环境误差：温度、湿度和空气质量等环境因素对菌落生长的影响。
可以通过控制环境条件和进行平行实验来评估环境误差。
评估不确定度后，可以使用统计方法来进行分析。
常用的统计方法包括平均数、标准差、方差和置信区间等。
食品中菌落总数的测定和不确定度分析是确保食品安全的重要工作。
通过合理的测定方法和不确定度评估，可以提高菌落总数检测的准确性和可靠性。
食品中菌落总数的测定和不确定度分析
食品中菌落总数的测定和不确定度分析一、引言食品中菌落总数是指在特定条件下，通过培养基培养和统计法，对食品中细菌和真菌等微生物菌落数的测定。
食品中菌落总数是评价食品卫生质量的重要指标之一，可以反映食品是否受到污染、保存条件是否良好等情况。
对食品中菌落总数进行准确测定和不确定度分析，对于食品卫生和质量控制至关重要。
二、食品中菌落总数的测定方法食品中菌落总数的测定方法通常采用菲尔氏杯平板法和薄膜法。
菲尔氏杯平板法是将食品样品稀释后均匀铺在富含寒天的琼脂培养基上，培养并统计菌落数；薄膜法是将食品样品均匀涂抹在琼脂培养基上，培养并统计菌落数。
三、食品中菌落总数的不确定度分析1. 采样不确定度：食品中菌落总数的测定首先要进行食品样品的采样和样品的制备，采样过程中可能会存在采样不均匀、采样器具的精密度等因素，引入采样不确定度。
2. 复现性不确定度：食品中菌落总数的测定通常需要进行多次重复测定，由于操作者、环境等因素的影响，可能会出现不一致的结果，引入复现性不确定度。
3. 实验条件不确定度：食品中菌落总数的测定受到实验条件的影响，如温度、湿度等条件会对微生物生长产生影响，引入实验条件不确定度。
4. 测量设备不确定度：食品中菌落总数的测定需要借助于培养箱、平板计数器等设备，设备的准确度和精度会影响测定结果，引入设备不确定度。
四、食品中菌落总数的不确定度评定食品中菌落总数的不确定度评定需要考虑上述不确定度因素的影响，并采用合适的方法进行计算评定。
不确定度评定的目的是为了确定测定结果的可靠性和准确性，提高测定结果的可信度。
1. 不确定度计算方法食品中菌落总数的不确定度可以采用GUM不确定度评定方法，通过不确定度传递法和不确定度组分法计算总的不确定度。
在实际计算中，需要考虑到各种不确定度来源的具体数值和权重，综合计算得出总的不确定度值。
2. 不确定度控制方法为了减小不确定度的影响，可以采取以下控制方法：（1）采样不确定度的控制：采用合适的采样方法和器具，确保样品的均匀性和代表性；（2）复现性不确定度的控制：严格控制实验条件和培养操作流程，尽量减小操作者和环境的影响；（3）实验条件不确定度的控制：控制实验条件的稳定性和准确性，进行实验前后的环境监测和校准；（4）测量设备不确定度的控制：对测量设备进行定期维护和校准，确保设备的准确度和精度。
食品中菌落总数测定方案(菌落总数测试片)
食品中菌落总数测定方案菌落总数测试片1.操作步骤1.1 样品的稀释1.1.1 称取25g样品（剪碎）置盛有225ml无菌生理盐水的三角瓶中，充分振摇混匀，制成1:10的样品匀液。
1.1.2 用1ml微量移液器吸取1:10的样品匀液1ml，沿管壁缓慢注入盛有9ml无菌生理盐水的无菌试管中（注意吸头尖端不要触及稀释液面），充分振摇混匀，制成1:100的样品匀液。
1.1.3 用1ml微量移液器吸取1:100的样品匀液1ml，沿管壁缓慢注入盛有9ml无菌生理盐水的无菌试管中（注意吸头尖端不要触及稀释液面），充分振摇混匀，制成1:1000的样品匀液。
1.2 样品的接种揭开菌落总数测试片上层膜，用1ml微量移液器分别吸取1:10、1:100、1:1000的样品匀液1ml慢慢均匀地滴加到纸片上，然后将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固（每个样品匀液做2个纸片）。
同时做一片空白阴性对照。
1.3 培养将测试片叠在一起放回原自封袋中，并封口，透明面朝上水平置于36℃±1℃培养箱内培养15～24h，堆叠片数不超过12片。
1.4 菌落计数1.3.1 细菌在测试片上生长后会显示红色斑点，可用肉眼观察,必要时用放大镜,记录稀释倍数和相应的菌落数量。
菌落计数以菌落形成单位(CFU)表示。
1.3.2 选取菌落数在30CFU—300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。
低于30CFU的纸片记录具体菌落数,大于300CFU的可记录为多不可计。
每个稀释度的菌落数应采用两个纸片的平均数。
1.3.3 其中一个纸片有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的纸片作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到纸片的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个纸片后乘以2,代表一个纸片菌落数。
1.3.4 当纸片上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。
—1 —— 2 —1.5 结果与报告1.5.1 菌落总数的计算方法1.5.1.1 若只有一个稀释度纸片上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个纸片菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每g 样品中菌落总数结果。
菌落总数 标准
菌落总数标准一、菌落总数定义菌落总数是指食品经过处理，在一定条件下培养后，所得每克（每毫升）检样中所生长出来的细菌菌落总数。
它是一种反映食品卫生状况的重要指标，用以判定食品被污染的程度。
二、菌落总数测定方法1. 按照国家标准方法，将样品进行稀释，取一定量稀释液接种到培养基上，置于恒温箱中培养。
2. 观察每个培养基上的菌落数量，并记录。
3. 根据稀释倍数和培养基上的菌落数量，计算出每克（每毫升）样品中的菌落总数。
三、菌落总数卫生标准根据国家卫生部门的规定，食品中的菌落总数应符合以下标准：1. 饮料、饮用水：≤100cfu/ml。
2. 植物性食品、罐头食品：≤1000cfu/g。
3. 肉制品、乳制品：≤50000cfu/g。
4. 调味品、粮谷类食品：≤1000cfu/g。
5. 冷饮食品：≤2000cfu/g。
四、菌落总数食品卫生要求1. 食品生产过程中，应采取有效措施控制菌落总数的污染，确保食品的安全卫生。
2. 生产过程中使用的原料、水源、容器等应符合卫生要求，避免污染。
3. 食品加工设备、器具、管道等应定期清洁消毒，保持良好的卫生状况。
4. 成品储存应避免污染，严格控制温度、湿度等条件，确保菌落总数不超标。
五、菌落总数环境卫生要求1. 生产场所应保持清洁卫生，定期进行清洁消毒，保持良好的卫生状况。
2. 生产场所的通风、照明等设施应符合卫生要求，防止细菌滋生。
3. 生产过程中产生的废弃物、污水等应及时处理，防止污染环境。
六、菌落总数检验规则1. 按照国家规定的标准方法进行检验，确保数据的准确性。
2. 检验时应选取具有代表性的样品，确保样品的代表性。
3. 对于不合格的样品，应进行复检，以确认数据的可靠性。
4. 对于批量生产的食品，应按比例抽样检验，确保整批产品的质量。
七、菌落总数标识、储存、运输要求1. 标识：产品标签上应注明菌落总数指标，以提示消费者注意食品的卫生质量。
2. 储存：食品应储存在清洁卫生的环境中，避免污染。
食品中菌落总数的测定和不确定度分析
食品中菌落总数的测定和不确定度分析一、引言食品中的微生物污染是导致食品质量问题的重要原因之一。
食品中菌落总数是评价食品卫生状况的指标之一，它可以反映食品中的微生物污染程度。
准确测定食品中的菌落总数并分析其不确定度，对于保证食品安全和卫生具有重要意义。
二、理论基础菌落总数是指在一定条件下生长发育的微生物形成的菌落的总数。
通常使用平皿计数法来测定食品中的菌落总数，该方法主要包括以下几个步骤：1、样品制备：将食品样品精确称重，并加入合适的培养基中。
2、培养：将加入样品的培养基倒入培养皿中，倒平并让其凝固。
3、孵育：将培养皿放入恒温箱中，在适宜的温度条件下孵育一定时间。
4、计数：取出培养皿，使用显微镜观察并计数菌落的数量。
不确定度是测量结果与所测量实际值之间的偏差的度量，通常用标准偏差表示。
计算不确定度需要考虑到样品制备、培养、孵育过程中的误差以及人为误差等因素。
三、实验方法2、制备菌落计数平皿：将无菌琼脂糖培养基熔化，并冷却到45-50℃左右，加入适量的样品，充分混合后倒入培养皿中。
3、培养和孵育：将培养皿倒平，并在无菌条件下放置一段时间，直到琼脂糖凝固。
4、计数：将培养好的平皿放置在显微镜下，使用透明计数器或格子计数器对菌落进行计数，并记录结果。
四、结果分析根据平皿计数法所测得的菌落总数结果，计算菌落总数的平均值、标准偏差和不确定度。
标准偏差的计算公式为：s = \sqrt{\frac{\Sigma(x_i-\overline{x})^2}{n-1}}x_i为单次测量结果，\overline{x}为平均值，n为测量次数，\Sigma表示求和。
不确定度的计算公式为：U = k \times sU为不确定度，k为覆盖因子，可以参考标准不确定度表格进行选择。
五、结论通过实验测定了食品中的菌落总数，并对测量结果进行了不确定度分析。
根据实验结果，可以评估食品中的微生物污染程度，为食品安全和卫生提供科学依据。
测定结果的不确定度分析可以评价测量结果的可靠性，并为后续食品质量控制提供参考。
食品中菌落总数的测定
任务四 平板制备
选择适宜的稀释样液根据对标本情况的估计,选择 3个 适宜稀释度,吸取该稀释度1mL稀释液于空平皿内。
待培养基冷却至46℃左右，以无菌操作倒入无菌培养 皿中。每个平皿倒入约15-20mL培养基，并转动平皿使其 混合均匀。放至水平面上自然冷却凝固，切勿随意晃动而 使培养基表面不平整影响涂布操作。
从样品稀释到平板 制备要求在15min 内 完成。
任务五、培养计数
待琼脂凝固后,倒置平板,置36±1℃温箱内培养48+2h。 平板取出,计算平板内菌落数目,乘以稀释倍数,即得每
g(或mL)样品所含菌落总数。 菌落计数以平板内菌落形成单位（CFU）表示。
恒平 温板 培计 养数
食品中菌落总数的测定
检测依据
GB 4789.2-2010
任务一 仪器试剂准备
• 所用器具干净、烘干、灭菌，既不能存在活菌也不能存在 抑菌物质。
• 应注意无菌操作。
任务二 仪器试剂灭菌
玻璃器皿
----干热灭菌160-170℃ 1-2h
平皿可以用牛皮纸或 双层报纸包扎成捆， 或放入金属筒内再灭 菌。
在吸管粗头顶端约 0.5cm处，塞上一 小段棉花，后用45cm宽的报纸将其 包好。
内部框架 带盖外筒பைடு நூலகம்
电热恒温干燥箱
培养基、生理盐水-----湿热灭菌121 ℃ 15-30min
任务三 样品稀释制备
全过程遵循无菌操作程序
⑴检样处理 以无菌操作取经过充分摇 匀的检样25mL，放入含有225mL灭菌 生理盐水的灭菌广口瓶内做成1:10的均 匀稀释液。
⑵样品稀释 用1mL灭菌吸管,吸取1:10 稀释液1mL,沿管壁徐徐注入含有9mL灭 菌生理盐水或其他稀释液的试管内（注 意吸管尖端不要触及管内稀释液),充分 振摇试管，使之混合均匀,制备成1:100 的稀释液。另取1mL灭菌吸管,按上项操 作顺序，作10倍递增稀释液,如此每递增 稀释一次,即换用1支1mL灭菌吸管。
菌落总数 国家标准
菌落总数国家标准菌落总数是指在一定条件下，菌落在培养基上生长形成的可见的单个或聚集的菌体。
菌落总数是评价食品、水产品卫生质量的重要指标之一，也是评价环境卫生质量的重要指标。
国家标准对菌落总数的要求是非常严格的，严格控制菌落总数对于保障食品安全和环境卫生至关重要。
根据国家标准，菌落总数的测定方法主要有两种，平板计数法和膜过滤法。
平板计数法是将待测样品加入培养基后，将培养基倒入培养皿中，培养一定时间后，通过肉眼观察计数来确定菌落总数。
膜过滤法是将待测样品通过特定的膜过滤装置，将过滤后的膜放置在含有培养基的培养皿上，培养一定时间后，通过显微镜观察计数来确定菌落总数。
这两种方法各有优缺点，可以根据实际情况选择合适的方法进行测定。
在国家标准中，对不同食品、水产品和环境样品的菌落总数限量要求是不同的。
比如，对于食品中的菌落总数，国家标准规定了具体的限量标准，如生鲜乳的菌落总数不得超过1×10^5CFU/mL，鲜肉的菌落总数不得超过1×10^6CFU/g，果蔬制品的菌落总数不得超过1×10^7CFU/g等。
这些限量标准是根据食品的种类、保存方式、加工工艺等因素制定的，旨在保证食品的卫生安全。
除了食品外，国家标准也对水产品和环境样品的菌落总数进行了限量要求。
比如，国家标准规定了饮用水中的菌落总数不得超过100CFU/mL，游泳池水中的菌落总数不得超过200CFU/100mL，空气中的菌落总数不得超过200CFU/m³等。
这些限量标准是为了保证水产品和环境的卫生安全，防止细菌、霉菌等微生物对人体健康造成危害。
菌落总数的国家标准的制定和执行，对于保障食品安全和环境卫生起着至关重要的作用。
严格控制菌落总数，可以有效预防食品中细菌、霉菌等微生物的污染，保证食品的卫生安全。
同时，也可以减少环境中的微生物污染，保护人们的健康。
因此，各个单位和个人在生产、加工、储存食品和使用水产品时，都应该严格按照国家标准的要求进行操作，保证菌落总数在合格范围内。
食品菌落总数检测标准
食品菌落总数检测标准食品安全一直是人们关注的焦点，而食品中的菌落总数是评价食品卫生质量的重要指标之一。
菌落总数是指在一定条件下，菌落在寄主（通常是琼脂培养基）上生长并形成可见菌落的数量。
食品中的菌落总数一般反映了食品是否受到了污染，以及食品是否在生产、加工、储存和运输过程中得到了适当的处理和保护。
根据《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数的测定 GB 4789.2-2010》，食品中的菌落总数检测应该遵循以下步骤和标准：1. 样品的准备。
在进行菌落总数检测之前，首先需要准备好样品。
样品的准备应该符合相应的标准，避免样品受到二次污染或者样品本身就存在菌落过多的情况。
2. 菌落总数的测定方法。
菌落总数的测定方法一般采用平板计数法。
具体操作包括在琼脂培养基上平铺待测样品，然后在适当的温度下培养一定时间，再进行菌落的计数。
在进行菌落总数检测时，需要注意培养基的选择、温度的控制、培养时间等因素，以保证检测结果的准确性。
3. 结果的判定。
根据国家标准，食品中的菌落总数应该符合相应的标准要求。
一般来说，菌落总数超过一定的标准值就属于不合格。
对于不同类型的食品，其菌落总数的标准值也有所不同。
因此，在进行菌落总数检测时，需要参照相应的标准进行判定。
4. 结果的记录和报告。
检测结果应该及时记录并形成检测报告。
检测报告应包括样品的信息、检测方法、检测结果以及判定结果等内容。
检测报告应该保存一定的时间，并且在需要时能够提供给相关部门或者客户查阅。
总之，食品中的菌落总数检测是保障食品安全的重要环节，严格按照国家标准进行检测是确保食品质量的关键。
只有加强对食品菌落总数的检测，才能更好地保障人们的饮食安全，促进食品行业的健康发展。
菌落总数五组法判定
菌落总数五组法判定
摘要：
1.菌落总数的概念
2.五组法的定义
3.五组法的判定标准
4.五组法的操作步骤
5.五组法在食品卫生检测中的应用
正文：
一、菌落总数的概念
菌落总数是指在一定的培养基、培养条件和培养时间下，某一样品中形成的菌落数。
它是食品卫生检测中常用的一个微生物学指标，可以反映食品中的微生物污染状况。
二、五组法的定义
五组法，又称为5M 法，是一种常用的菌落计数方法。
它是通过在五个不同浓度的菌液中分别培养，根据形成的菌落数来推算原始菌液的菌落总数。
三、五组法的判定标准
五组法的判定标准主要依据GB/T 4789.2-2003《食品卫生微生物学检验菌落总数测定》。
该标准规定，当五组法中的最低浓度组（L 组）的菌落数在10-100 之间时，可以判定为合格；当L 组的菌落数小于10 或者大于100 时，需要重新取样检测。
四、五组法的操作步骤
1.制备系列浓度的菌液：将原始菌液进行一系列的稀释，一般选择五个浓度，分别为10^1、10^2、10^3、10^4、10^5。
2.分别在五个浓度的菌液中进行培养：将五个浓度的菌液分别接种到五个平板上，然后在适当的条件下进行培养。
3.计数：在培养结束后，对五个平板上的菌落数进行计数，一般以形成的菌落数在30-300 之间的平板为准。
4.计算原始菌液的菌落总数：根据五组法的计算公式，推算出原始菌液的菌落总数。
五、五组法在食品卫生检测中的应用
五组法作为菌落总数的测定方法，被广泛应用于食品卫生检测中。
通过对食品中的菌落总数进行检测，可以有效地评估食品的卫生状况，保障食品安全。
食品中菌落总数的测定和不确定度分析
食品中菌落总数的测定和不确定度分析一、引言食品是人们日常生活中必不可少的营养来源，食品中的菌落总数是衡量食品安全和卫生质量的重要指标之一。
菌落总数是指在一定温度下，某一食品中可增殖的微生物数量。
准确地测定食品中的菌落总数对于评估食品的卫生安全性具有重要意义。
二、菌落总数的测定方法测定食品中的菌落总数通常采用菌落计数法。
菌落计数法是将一定体积的食品样品悬浮液平铺在含有富养分的琼脂培养基上，经过一定时间的培养，计算营养基上的菌落总数。
该方法的优点是操作简单、准确度高，能够鉴定不同菌种的存在以及确定其数量。
具体操作步骤如下：1. 准备琼脂平板培养基和试样。
2. 将试样加入适量的生理盐水中，均匀悬浮后称取一定体积的悬浮液。
3. 将悬浮液倒入琼脂平板上，快速回旋使样品均匀分布。
4. 等待琼脂培养基凝固后，将琼脂平板倒置在合适的温度下培养一定时间。
5. 将培养好的琼脂平板取出，利用菌落计数器计数。
三、不确定度的分析不确定度是对测量结果表示确定性程度的度量。
菌落总数的测定结果可能会受到多种因素的影响，如操作误差、样品不均匀性、环境条件等。
在进行菌落总数测定时需要对不确定度进行分析，以评估测定结果的可靠性。
菌落总数测定中的主要误差来源包括：1. 体积取样误差：由于液体量取操作的不准确性，导致取样体积与实际需要的体积有偏差。
2. 稀释误差：菌液的稀释过程中，由于混匀不均，导致样品中菌落总数的测定值与真实值存在一定误差。
3. 环境条件误差：培养环境的温度、湿度等因素可能会对微生物的生长产生影响，从而影响菌落总数的测定结果。
在测定菌落总数时，需要进行一系列的质量控制措施，如需要使用标准菌株进行培养，以评估菌落计数法的准确性和可重复性。
菌落总数测定的不确定度可以通过重复测定同一样品来评估。
在进行菌落计数时，可以选取多个琼脂平板进行测定，然后计算平均值和标准偏差。
标准偏差可以作为不确定度的一个估计值，表示测定值的离散程度，其数值越小说明数据的分散性越小，表示测定结果的可靠性越高。
食品中菌落总数的测定方法
食品微生物学检验菌落总数测定1范围本标准规定了食品中菌落总数的测定方法。
本标准适于食品中菌落总数的测定方法。
2术语和定义菌落总数：指食品检样经过处理，在一定条件下培养后(如培基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等),所得1mL(g)检样中所含菌落的总数3设备和材料恒温培养箱：36±1℃30±1℃；冰箱：2～5℃；恒温水浴：46±1℃；天平：感量为0.1g；均质器；震荡器；无菌吸管1mL、10mL或微量移液器及吸头；无菌锥形瓶：250 mL；500 mL；无菌培养皿：直径90mm；pH计或pH比色管或精密pH试纸；放大镜、菌落计数器4培养基和试剂4.1平板计数琼脂培养基4.1.1成分4.1.2制法将上述成分加入到蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。
分装试管和锥形瓶，121℃高压灭菌15min。
4.2磷酸盐缓冲液4.2.1成分4.2.2制法贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L 的氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。
稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15min。
4.3无菌生理盐水4.3.1成分4.3.2称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，，121℃高压灭菌15min。
5检验程序菌落总数的检验程序如下：检样25g（或25mL）样品+225mL稀释液，均质↓10倍系列稀释↓选择2～3个适宜样品匀液，各取1mL分别加入无菌培养皿内↓每皿中加入15 ～20mL平板计数琼脂培养基，混匀↓培养36℃±1℃↓48 h±2 h计算各平板菌落数↓计算菌落总数↓报告6操作步骤6.1 样品的稀释6.1.1 固体和半固体样品：称取25g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8 000r/min～10 000r/min 均质1 min～2 min ，或放人盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min ，制成1：10 的样品匀液。
3种方法检测食品中菌落总数的比较研究
分析检测Analysis and Testingdoi:10.16736/41-1434/ts.2020.10.0733种方法检测食品中菌落总数的比较研究A Comparative Study of Three Methods to Detect the Total Number of Colonies in Food◎ 张 芬（上海城建职业学院，上海 200000）Zhang Fen(Shanghai Construction Vocational College, Shanghai 200000, China)摘 要：为测定AOAC 3M TM Petrifilm TM菌落总数测试片法、国家标准法（4789.2-2016）与ISO（4833-1:2013）法在食品菌落总数测定方面的相关性及等效性，本文按照ISO 16140-2:2016标准方法测定了香料类辣椒面、坚果类花生和面粉类小麦粉自然样品中的菌落总数对GB法、AOAC法与ISO法分别对实验结果进行标准差分析、线性回归以及Bland-Altman分析法汇总分析。
结果表明，与ISO法比较，国标法标准差S D=0.039，相关系数R2=0.95，Bland-Altman分析中测量结果有一个均位95% LoA外。
与ISO法比较，AOAC 3M TM Petrifilm TM菌落总数测试片法中，标准差S D=0.037，相关系数R2=0.96，Bland-Altman分析中测量结果中有一个结果位于95% LoA外。
结果表明：菌落总数测试片法检测食品中的菌落总数、食品微生物学检验菌落总数测定的国家标准方法（4789.2-2016）与ISO（4833-1:2013）方法具有一致性，故在在实际样品测定时，可以根据环境及耗材需要，选定相应的菌落总数的测定方法。
关键词：菌落总数；国家标准法；测试纸片法；平板计数法Abstract：To determine the correlation and equivalence between the AOAC 3M TM Petrifilm TM colony total test sheet method, the national standard method (4789.2-2016) and the ISO(4833-1:2013) method in the determination of the total number of food colonies, we determined the total number of colonies in natural samples of spice pepper flour, nut peanut and flour wheat flour according to the ISO 16140-2:2016 standard method. The standard deviation analysis, linear regression and Bland-Altman analysis were carried out by GB method, AOAC method and ISO method. The results show that compared with the ISO method, the standard deviation of GB method S D=0.039, and the correlation coefficient R2=0.95, and the measurement results in Bland-Altman analysis have an average position of 95%. AOAC 3M TM Petrifilm TM standard deviation S D=0.037 and the correlation coefficient R2=0.96 in the total colony count test sheet method compared with the ISO method, one of the measured results in the analysis was located outside 95% LoA. According to the results, the national standard method (4789.2-2016) for the determination of colony count in food and food microbiology was consistent with the ISO (4833-1:2013) method. Therefore, the corresponding method for the determination of colony count can be selected according to the needs of environment and consumables.Key words：Total number of colonies; National standard; Test paper method; Plate counting中图分类号：TS207.4在食品卫生检测中，菌落总数是食品卫生检验中最基本、最常见的微生物检测项目。
菌落总数测定的方法
菌落总数测定的方法
菌落总数测定是一种常见的微生物检测方法，用于检验食品、水、药物、化妆品等样品中微生物的数量。
其测定步骤如下：
1. 准备好样品。
2. 将样品按一定比例加入培养基中，使得微生物得以繁殖。
3. 将培养基混匀后，将其倒入培养皿中，使得培养基均匀分布。
4. 使用平板法、斜板法或混合法等方法将培养皿中的培养基表面均匀涂布。
可根据样品中微生物的预估数量选择相应的涂布方式。
平板法适用于样品量较小的场合，斜板法适用于样品数量较大且需要进行质粘分析的场合，混合法适用于样品中微生物数量较低的情况。
5. 使用孔气道计数器或无菌的计数棒对培养皿进行计数，并计算得到菌落总数。
菌落总数可以根据前述涂布方式和培养时间进行调整。
通常，气道计数器需要在24-48小时内完成计数，而计数棒测定则需要在3-5天后进行。
6. 记录测定结果和样品信息，并分析评估菌落总数是否符合卫生标准。
菌落总数和大肠菌群测定方法
菌落总数和大肠菌群测定方法菌落总数和大肠菌群的测定方法如下：一、菌落总数的测定方法菌落总数是指食品样品在一定条件下培养后，得到的1克或1毫升样品中所含的活菌个数。
它反映了食品在生产过程中的卫生状况，是判定食品质量的重要指标之一。
1.样品处理：根据样品是固体或液体，采用不同的处理方法。
对于固体样品，先进行均质化处理，将其粉碎并混匀。
对于液体样品，直接进行摇匀。
2.稀释：根据样品的污染程度，将样品稀释至适当浓度。
通常采用系列稀释的方法，即先将样品稀释10倍，再稀释10倍，直到适合接种。
3.接种：将稀释后的样品接种到培养基上，可以采用倾注法或涂布法。
倾注法是将稀释后的样品倒入培养皿中，摇匀后倾注培养基；涂布法是将稀释后的样品均匀涂布在培养基表面。
4.培养：将接种后的培养皿放在适宜的温度和湿度下培养，一般培养时间为24-48小时。
5.计数：观察培养后的菌落数量，并计算每克或每毫升样品中的菌落总数。
二、大肠菌群的测定方法大肠菌群是指一群能在30℃-37℃的伊红美蓝琼脂平板上生长并产生深紫色素的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
它主要来源于肠道，是人类肠道中的主要菌群之一。
大肠菌群的测定对于食品卫生质量的控制具有重要意义。
1.样品处理：与菌落总数测定类似，将固体或液体样品进行均质化处理和稀释。
2.接种：将稀释后的样品接种到伊红美蓝琼脂平板上，可以采用倾注法或涂布法。
3.培养：将接种后的平板放在适宜的温度和湿度下培养，一般培养时间为24-48小时。
在培养过程中，大肠菌群会在伊红美蓝琼脂平板上形成深紫色的菌落。
4.验证试验：为了确保结果的准确性，需要进行验证试验。
可以采用革兰氏染色法对可疑菌落进行染色，以便确认是否为大肠菌群。
5.计数：观察培养后的菌落数量，并计算每克或每毫升样品中的大肠菌群数。
需要注意的是，上述方法仅供参考，具体操作步骤可能会因不同的检测机构或标准而有所差异。
在实际操作中，应根据具体情况进行调整和修改。
另外，为了保证检测结果的准确性和可靠性，需要注意实验室的卫生条件、仪器的校准、试剂的质量以及操作人员的专业素质等方面的因素。
食品中菌落总数的测定方法
食品中菌落总数的测定一、实验目的（1）学习与掌握测定食品中菌落总数的基本方法（2）学会菌落总数的报告方式二、实验材料1、仪器与设备:恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三角瓶、平皿、试管、试管架、酒精灯、灭菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蜡笔。
2、培养基与试剂:75%乙醇、0、85%生理盐水、琼脂培养基:胰蛋白胨5、0g、酵母浸膏2、5g、葡萄糖1、0g、琼脂15、0g、蒸馏水1000mL、pH 7、0±0、23、检样:利乐包装鲜牛奶250ml三、实验方法与步骤1、检验程序菌落总数检验程序:检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2-3个适宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入46℃15-20ml营养琼脂→置36±1℃恒温箱内培养(48±2)h取出→菌落数→报告2、检样稀释及培养(1)以无菌操作,将检样包装打开,用吸管取25ml鲜牛奶,放于含有225ml灭菌生理盐水的500ml灭菌玻璃三角瓶内(瓶内预先置适当数量的玻璃珠),经充分振摇做成1:10的均匀稀释液。
(2)用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml,沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液,下同),振摇试管混合均匀,做成1:100的稀释液。
(3)另取1ml的灭菌吸管,按上项操作顺序作10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,即换用1支1ml灭菌吸管。
(4)根据食品卫生检验标准要求与检样的菌落数量,选择3个连续适宜稀释度即10、10－1、10－2,分别在作10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度作两个平皿。
(5)稀释液移入平皿后,应及时将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿15ml~20mL,并转动平皿使与稀释检样混合均匀,同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液(不含样品)的灭菌平皿内作空白对照。
(6)等琼脂凝固后,翻转平板,置36±1℃恒温箱内培养(48±2)h取出,计算平板内菌落数目乘以倍数,即得1mL样品所含菌落总数。
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食品中菌落总数的测定
一、实验目的
（1）学习和掌握测定食品中菌落总数的基本方法
（2）学会菌落总数的报告方式
二、实验材料
1、仪器与设备：恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三角瓶、平皿、试管、试管架、酒精灯、灭菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蜡笔。
2、培养基和试剂：75%乙醇、0.85%生理盐水、琼脂培养基：胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、
琼脂15.0g、蒸馏水1000mL、pH 7.0±0.2
3、检样：利乐包装鲜牛奶250ml
三、实验方法与步骤
1、检验程序
菌落总数检验程序：
检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2-3个适宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入46℃15-20ml营养琼脂→置36±1℃恒温箱内培养（48±2）h取出→菌落数→报告
2、检样稀释及培养
（1）以无菌操作，将检样包装打开，用吸管取25ml鲜牛奶，放于含有225ml灭菌生理盐水的500ml灭菌玻璃三角瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠），经充分振摇做成1：10的均匀稀释液。
（2）用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。
（3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。
（4）根据食品卫生检验标准要求和检样的菌落数量，选择3个连续适宜稀释度即10、10－1、10－2，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。
（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿15ml~20mL，并转动平皿使与稀释检样混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。
（6）等琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃恒温箱内培养（48±2）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1mL样品所含菌落总数。
四、检样中细菌菌落总数的计算与报告
1、菌落计算方法
（1）菌落计数方法
做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。
在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
（2）菌落计数的报告
①平板菌落数的选择
选取菌落数在30～300 CFU之间的平板作为菌落总数测定标准。
一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，
②稀释度的选择
应选择平均菌落数在30～300 CFU之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。
若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，按以下公式计算：
N = 样品中菌落数
ΣC = 含适宜范围CFU 的平板菌落数之和
n 1 = 第一稀释度（低稀释度）平板个数
n 2 = 第二稀释度（高稀释度）平板个数
d = 稀释因子（第一稀释度）
若所有稀释度的平均菌落数均大于300 CFU ，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之， 若所有稀释度的平均菌落数均小于30 CFU ，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告
若所有稀释度及样品原液均无菌落生长，则以小于l 乘以最低稀释倍数报告之，若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300 CFU 之间，其中一部分大于300 CFU 或小于30 CFU 时，则以最接近30 CFU 或300 CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
③菌落数的报告
菌落数小于100 CFU 时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。
菌落数大于或等于100 CFU 时，第3 位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2 位数字，后面用0 代替位数；也可用10 的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。
若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。
若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。
称重取样以CFU/g 为单位报告，体积取样以CFU/mL 为单位报告。
3、实验结果与记录 10 10－1 10－2 报告数
1
2
稀释液对照皿
空白皿
判定所检测样品菌落总数是否符合国家标准
稀
释 度
菌 落 数 皿 号
Phibro is required to respond to the FDA that Jianmin:
·Is Prepared to add the following tests; light absorbing impurities, related substances and particle size to their OTC COA;
·Will provide a COA as evidence that these tests have been conducted and added to the COA;
·Will update VMF 6023 to include the data and report to support validation or verification of the methods used to analyze the tests cited above; and
·Will provide us with a report or a statement to confirm that they have performed appropriate validation or verification of the methods.
如有问题，请随时沟通。