食品中菌落总数的测定方法
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食品中菌落总数的测定
一、实验目的
(1)学习和掌握测定食品中菌落总数的基本方法
(2)学会菌落总数的报告方式
二、实验材料
1、仪器与设备:恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三角瓶、平皿、试管、试管架、酒精灯、灭菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蜡笔。
2、培养基和试剂:75%乙醇、0.85%生理盐水、琼脂培养基:胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、
琼脂15.0g、蒸馏水1000mL、pH 7.0±0.2
3、检样:利乐包装鲜牛奶250ml
三、实验方法与步骤
1、检验程序
菌落总数检验程序:
检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2-3个适宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入46℃15-20ml营养琼脂→置36±1℃恒温箱内培养(48±2)h取出→菌落数→报告
2、检样稀释及培养
(1)以无菌操作,将检样包装打开,用吸管取25ml鲜牛奶,放于含有225ml灭菌生理盐水的500ml灭菌玻璃三角瓶内(瓶内预先置适当数量的玻璃珠),经充分振摇做成1:10的均匀稀释液。
(2)用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml,沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液,下同),振摇试管混合均匀,做成1:100的稀释液。
(3)另取1ml的灭菌吸管,按上项操作顺序作10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,即换用1支1ml灭菌吸管。
(4)根据食品卫生检验标准要求和检样的菌落数量,选择3个连续适宜稀释度即10、10-1、10-2,分别在作10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度作两个平皿。(5)稀释液移入平皿后,应及时将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿15ml~20mL,并转动平皿使与稀释检样混合均匀,同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液(不含样品)的灭菌平皿内作空白对照。
(6)等琼脂凝固后,翻转平板,置36±1℃恒温箱内培养(48±2)h取出,计算平板内菌落数目乘以倍数,即得1mL样品所含菌落总数。
四、检样中细菌菌落总数的计算与报告
1、菌落计算方法
(1)菌落计数方法
做平板菌落计数时,可用肉眼观查,必要时用放大镜检查,以防遗漏。在记下各平板的菌落数后,求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
(2)菌落计数的报告
①平板菌落数的选择
选取菌落数在30~300 CFU之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板,应采用两个平板平均数,
②稀释度的选择
应选择平均菌落数在30~300 CFU之间的稀释度,乘以稀释倍数报告之。
若有两个稀释度,其生长的菌落数均在30~300之间,按以下公式计算:
N = 样品中菌落数
ΣC = 含适宜范围CFU 的平板菌落数之和
n 1 = 第一稀释度(低稀释度)平板个数
n 2 = 第二稀释度(高稀释度)平板个数
d = 稀释因子(第一稀释度)
若所有稀释度的平均菌落数均大于300 CFU ,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之, 若所有稀释度的平均菌落数均小于30 CFU ,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告
若所有稀释度及样品原液均无菌落生长,则以小于l 乘以最低稀释倍数报告之,若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300 CFU 之间,其中一部分大于300 CFU 或小于30 CFU 时,则以最接近30 CFU 或300 CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
③菌落数的报告
菌落数小于100 CFU 时,按“四舍五入”原则修约,以整数报告。
菌落数大于或等于100 CFU 时,第3 位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前2 位数字,后面用0 代替位数;也可用10 的指数形式来表示,按“四舍五入”原则修约后,采用两位有效数字。
若所有平板上为蔓延菌落而无法计数,则报告菌落蔓延。
若空白对照上有菌落生长,则此次检测结果无效。
称重取样以CFU/g 为单位报告,体积取样以CFU/mL 为单位报告。
3、实验结果与记录 10 10-1 10-2 报告数
1
2
稀释液对照皿
空白皿
判定所检测样品菌落总数是否符合国家标准
稀
释 度
菌 落 数 皿 号
Phibro is required to respond to the FDA that Jianmin:
·Is Prepared to add the following tests; light absorbing impurities, related substances and particle size to their OTC COA;
·Will provide a COA as evidence that these tests have been conducted and added to the COA;
·Will update VMF 6023 to include the data and report to support validation or verification of the methods used to analyze the tests cited above; and
·Will provide us with a report or a statement to confirm that they have performed appropriate validation or verification of the methods.
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