氯霉素眼药水的高效液相色谱分析法.ppt
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曲线上查得相应的浓度，并计算标示量的百分含量。
四 注意事项
1. HPLC使用的流动相必须经滤膜过滤及脱气处理。 2. 严格防止气泡进入色谱系统。 3. 色谱分析完成后，必须马上清洗柱子。本实验的流动相中含有醋酸盐缓冲液， 故测定完毕后，要先用水冲洗柱子至基线平稳（约0~60min以上），再用含水的 甲醇溶液或纯甲醇溶液冲洗30~60min。 4. 标准贮备液的配制应精密称定重量，先用少量甲醇溶解后，再用甲醇稀释至刻 度，否则因部分未溶导致浓度不准确。
精密称取对硝基苯酚约200mg置l00 mL量瓶中，以甲醇溶解，并稀释至 刻度，摇匀，即得。
三 操作方法
(三) 内标法测定氯霉素的含量 1. 相对校正因子的测定
分别精密加入氯霉素标准贮备液1，2，3，4，5 mL，置5个l0 mL容量 瓶中，再分别精密吸取对硝基苯酚标准贮备液各2.5 mL用甲醇稀释至刻度， 摇匀。待色谱仪基线平稳后，分别进样20 μL，得色谱图。测量对硝基苯酚 及氯霉素峰面积或峰高，按公式计算相对校正因子，本实验中，由于峰形较 窄，可采用峰高法。
三 操作方法
(三) 内标法测定氯霉素的含量
2. 样品含量测定 精密吸取眼药水适量 (约相当于氯霉素500 mg，标示量为2.5 mg/ mL)，
置l0 mL容量瓶中，并加入对硝基苯酚的贮备液2.5 mL，用甲醇稀释至刻度， 摇匀，进样20 μL，得色谱图。按下式计算标示量的百分含量
三 操作方法
(四) 外标法测定氯霉素的含量 1. 标准曲线的绘制
分别吸取氯霉素标准贮备液1、2、3、4、5 mL，置5个l0 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，各进样20 μL，以峰面 积或峰高对浓度作图，得标准曲线。
Leabharlann Baidu
三 操作方法
(四) 外标法测定氯霉素的含量 2. 样品的测定
精密吸取眼药水适量(约相当于氯霉素2.5 mg)，置l0 mL容量瓶中，用 甲醇稀释至刻度，摇匀，进样20 μL，得色谱图，根据峰面积或峰高从标准
在绝对校正因子法( )中：
在相对校正因子（ ）法中：
当峰形对称，峰窄时还可以用峰高代替峰面积来定量。 内标法可以消除仪器与操作或制备样本时带来的误差。
三 实验原理
2. 外标法 又称校正法或定量进样法。该法要求能准确地定量进样。其方法
是配制一系列已知浓度的标准液，在同一操作条件下，取相同量注入 色谱仪，测量其峰面积(或峰高)，作峰面积(或峰高)与浓度的标准曲 线。然后在相同条件下，注入同量样品溶液，测量待测组分的峰面积( 或峰高)，根据标准曲线，计算样品中待测组分的浓度。
五 思考题
1. 怎样选择流动相？ 2. 内标物应具备哪些条件？ 3. 变换溶剂时，直接将一种互不相溶的溶剂替换前一种溶剂，对色谱行为有 何影响?如何消除这种影响?
谢 谢！
氯霉素眼药水 高效液相色谱分析法
课程：药品检验技术
一 实验目的
1.学习掌握内标法测定组分含量的原理与操作方法； 2.熟悉外标法在测定组分的含量中的应用； 3.学习高效液相色谱仪的结构及正确使用方法； 4.了解氯霉素眼药水的含量测定方法。
二仪器与试药
1.仪器
容量瓶，移液管，高效液相色谱仪。
2. 试药
四 操作方法
（一）实验条件 色谱仪 高效液相色谱仪 色谱柱 反相C18柱 温度 室温 流动相 内标法 甲醇: 水(60: 40)
外标法 甲醇: 水(80: 20) 流速 0.7 mL/min 检测器 UV检测器
三 操作方法
（二）标准贮备液的制备 1. 1mg / mL氯霉素标准贮备液的配制
精密称取氯霉素约100 mg置100 mL容量瓶中，以甲醇溶解，并稀释至刻 度，摇匀，即得。 2. 2mg/ mL对硝基苯酚 (内标)标准贮备液的配制
原料名称
规格
对硝基苯酚
AR
氯霉素
AR
甲醇
GR
氯霉素眼药水
普通市售
用量 200 mg 100 mg 适量
1支
三实验原理
1. 内标法 其方法是精密称取一定量的样品和内标物，制成适当溶液后进样分析，根据样品和
内标物的重量及其相应的峰面积（或峰高），求出某组分的含量。原理如下： 根据物质的重量与其峰面积（或峰高）成正比，有
四 注意事项
1. HPLC使用的流动相必须经滤膜过滤及脱气处理。 2. 严格防止气泡进入色谱系统。 3. 色谱分析完成后，必须马上清洗柱子。本实验的流动相中含有醋酸盐缓冲液， 故测定完毕后，要先用水冲洗柱子至基线平稳（约0~60min以上），再用含水的 甲醇溶液或纯甲醇溶液冲洗30~60min。 4. 标准贮备液的配制应精密称定重量，先用少量甲醇溶解后，再用甲醇稀释至刻 度，否则因部分未溶导致浓度不准确。
精密称取对硝基苯酚约200mg置l00 mL量瓶中，以甲醇溶解，并稀释至 刻度，摇匀，即得。
三 操作方法
(三) 内标法测定氯霉素的含量 1. 相对校正因子的测定
分别精密加入氯霉素标准贮备液1，2，3，4，5 mL，置5个l0 mL容量 瓶中，再分别精密吸取对硝基苯酚标准贮备液各2.5 mL用甲醇稀释至刻度， 摇匀。待色谱仪基线平稳后，分别进样20 μL，得色谱图。测量对硝基苯酚 及氯霉素峰面积或峰高，按公式计算相对校正因子，本实验中，由于峰形较 窄，可采用峰高法。
三 操作方法
(三) 内标法测定氯霉素的含量
2. 样品含量测定 精密吸取眼药水适量 (约相当于氯霉素500 mg，标示量为2.5 mg/ mL)，
置l0 mL容量瓶中，并加入对硝基苯酚的贮备液2.5 mL，用甲醇稀释至刻度， 摇匀，进样20 μL，得色谱图。按下式计算标示量的百分含量
三 操作方法
(四) 外标法测定氯霉素的含量 1. 标准曲线的绘制
分别吸取氯霉素标准贮备液1、2、3、4、5 mL，置5个l0 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，各进样20 μL，以峰面 积或峰高对浓度作图，得标准曲线。
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三 操作方法
(四) 外标法测定氯霉素的含量 2. 样品的测定
精密吸取眼药水适量(约相当于氯霉素2.5 mg)，置l0 mL容量瓶中，用 甲醇稀释至刻度，摇匀，进样20 μL，得色谱图，根据峰面积或峰高从标准
在绝对校正因子法( )中：
在相对校正因子（ ）法中：
当峰形对称，峰窄时还可以用峰高代替峰面积来定量。 内标法可以消除仪器与操作或制备样本时带来的误差。
三 实验原理
2. 外标法 又称校正法或定量进样法。该法要求能准确地定量进样。其方法
是配制一系列已知浓度的标准液，在同一操作条件下，取相同量注入 色谱仪，测量其峰面积(或峰高)，作峰面积(或峰高)与浓度的标准曲 线。然后在相同条件下，注入同量样品溶液，测量待测组分的峰面积( 或峰高)，根据标准曲线，计算样品中待测组分的浓度。
五 思考题
1. 怎样选择流动相？ 2. 内标物应具备哪些条件？ 3. 变换溶剂时，直接将一种互不相溶的溶剂替换前一种溶剂，对色谱行为有 何影响?如何消除这种影响?
谢 谢！
氯霉素眼药水 高效液相色谱分析法
课程：药品检验技术
一 实验目的
1.学习掌握内标法测定组分含量的原理与操作方法； 2.熟悉外标法在测定组分的含量中的应用； 3.学习高效液相色谱仪的结构及正确使用方法； 4.了解氯霉素眼药水的含量测定方法。
二仪器与试药
1.仪器
容量瓶，移液管，高效液相色谱仪。
2. 试药
四 操作方法
（一）实验条件 色谱仪 高效液相色谱仪 色谱柱 反相C18柱 温度 室温 流动相 内标法 甲醇: 水(60: 40)
外标法 甲醇: 水(80: 20) 流速 0.7 mL/min 检测器 UV检测器
三 操作方法
（二）标准贮备液的制备 1. 1mg / mL氯霉素标准贮备液的配制
精密称取氯霉素约100 mg置100 mL容量瓶中，以甲醇溶解，并稀释至刻 度，摇匀，即得。 2. 2mg/ mL对硝基苯酚 (内标)标准贮备液的配制
原料名称
规格
对硝基苯酚
AR
氯霉素
AR
甲醇
GR
氯霉素眼药水
普通市售
用量 200 mg 100 mg 适量
1支
三实验原理
1. 内标法 其方法是精密称取一定量的样品和内标物，制成适当溶液后进样分析，根据样品和
内标物的重量及其相应的峰面积（或峰高），求出某组分的含量。原理如下： 根据物质的重量与其峰面积（或峰高）成正比，有