丁基苯酞研发的实践体验--冯亦璞

**
30
60
90
120
150
180
T im e after M C A O (m in)
(用氢清除法，将氫电极插入纹状体, 缺血后10min 给药)
BFV(% of baseline)
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
-20 0
Vehicle dl-25 mg/kg ip
1995.5--1996.5 通过卫生部药政管理局审批。 1996.6--1999.9 由北京协和医院神经科完成 I 期临 床试验和Ⅱ期临床预试验(60例), 用药组有效率 85％,安慰剂组有效率59％。
1999.12--2002.3 以北京协和医院为组长单位，会
同全国12家著名的临床药理基地，完成了治疗中度 急性缺血性脑卒中的Ⅱ、III期临床试验，恩必普的 有效率分别为70.3%和63.9%,。安慰剂组为40.0% 2002.9 获得SFDA颁发的新药证书和试生产文号批件 2003.8至今，以北京协和医院为组长单位，全国83 家三甲医院参加的IV期临床试验已完成。 2005.2 获“准”字号批文，恩必普已上市。
18％和7.5% 降为4.7％和1.44%, 且停药后可恢复.
丁基苯酞抗脑缺血损伤的多种 作用机制(一)
改善线粒体功能: 线粒体控制细 胞存亡 起 关键作用。它构成了死亡控制中心。(呼吸链 复合酶IV活性, 膜流动性,膜电位,ATPase, Bcl-2, 细胞色素 c, MDA,抗氧化酶如 SOD,GSH-Px等) 抑制细胞凋亡
抑制谷氨酸释放
丁基苯酞抗脑缺血损伤的多种 作用机制(二)
增加内皮细胞 NO,eNOS,PGI2, (与增加rCBF有关) 降低[Ca2+]i (抑制细胞内钙库释放)
抑制炎症,抑制粘连分子
保护神经细胞（高K+，低糖低氧，NMDA，H2O2，Aβ）
脑保护作用是通过多种作用机制，以干预脑损伤的多个病理环节。
Diameter(% of baseline)
100
**
80
***
***
*** ** *
*
*
20 0
40
60
ischemia
-20
0
5
10
15
30
45
60
75
90
Time after drugs (min)
Change of pial arteriole diameter in MCAO rats with NBP pretreatment
苯酞可能对脑缺血有治疗作用，
丁基苯酞是源自天然食药两用的芹菜,易被患者
接受。 经10余年系统研究, 完成丁苯酞的临床前研究。 发现丁基苯酞有独特的治疗脑卒中的作用。
一类创新药丁基苯酞的研究内容
一、丁基苯酞(NBP)的药效学
改善脑能量代谢。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
缩小脑缺血动物脑梗塞体积。
能減轻脑水肿。 改善缺血区脑血流和脑微循环。 能抗血小板聚集和抗血栓的作用等。
治疗药物现况
溶栓药 rt-PA（组织型纤溶酶原激活剂），
治疗时间窗（3小时）使95%以上的患者无 法得到治疗，且有颅内出血高的风险。 脑保护药 (-) 因此临床上急需一种安全有效、治疗窗较
宽的药物用于脑卒中的治疗。
丁基苯酞的研制
芹菜（Apium Graveolens Linn.）民间用于降
压等。国内外对芹菜的化学成分研究有一些报 道，但未见在治疗脑血管疾病方面的研究。
Effect of dl-NBP on the activity of complex IV of respiratory chain in MCAO rats brain (n=4-6). dl-NBP was administrated 10 min before ischemia.
0.25 0.23 0.21 0.19 0.17 0.15 0.13 0.11 0.09 0.07 0.05
dl-12.5 Nim-0.3
5
10
15
30
45
60
75
90
Time after drugs(min)
Effect of post-treatment with NBP on blood flow velocity of pial arteriole in tMCAO rats
70
Vehicle
dl-25
Apoptosis
( DNA fragmentation )
Caspase 3
Caspase substrates (PARP etc.)
Effects of NBP on PGI2 production of BAEC(牛主动脉内皮细胞) and BCEC (牛脑微动脉内皮细胞)
PGI2 production(ng/well/24h)
35 30
0.1
##
1
* * * *
10
** * **
MMP (Fluorescence)
25 20 15 10 5 0
Normal Vehicle
d-NBP
l-NBP
dl-NBP
Cell apoptosis
Death stimuli
[Ca2+]i,ROS, ceramide )
Mitochondrial dysfunction Cytochrome c release
丁基苯酞能明显改善大脑中动脉阻断(MCAO)大鼠
纹状体血流。
70
Vehicle N B P40 mg /kg N B P80m g /kg
rC BF (m l/m in/100g)
60 50 40 30 20 10 0 0
= = = =
***
***
*** **
*** **
***
***
*
**
**
Nim 0.3
BFV(% of baseline)
60 50 40 30 20 10 0
drugs
-60
0
5
10
15
30
45
60
75
90
Time after ischemia(min)
Effect of NBP on pial arteriolar diameter in MCAO rats
Sham Vehicle dl-12.5 dl-25 (mg/kg,ip)
.
60
**
50 40
**
30
*** ***
***
20 10 0 control Asp control L-NBP 3mg/kg 10mg/kg dl-NBP
*** ***
d-NBP 100mg/kg Ticlopi
30mg/kg
丁基苯酞能明显抑制ADP引起的血小板聚集
80
.
70
* * ** *** *** *** *** *** *** *** *** *** *** ***
Ra te o f p la te let a gg ega ti on (%)
60
50
40
30
20
10
0 control Asp L-NBP dl-NBP d-NBP Ticlo
control
3mg/kg
10mg/kg
30mg/kg
100mg/kg
临床试验
丁基苯酞 II,III, 期临床试验
创新药丁基苯酞的研制
正式品名：丁苯酞 商 品 名：恩必普 化 学 名：dl-3-正丁基苯酞 英文名称： Butylphthalide或 Dinbente 结 构 式：
丁基苯酞研究历程:
1987年开始脑缺血研究。
1993年申请了发明专利保护。
1993完成临床前研究。
1994年通过北京市卫生局审批。
项目基金
1. 国家科委1035工程重大项目基金“抗脑缺血药丁基
苯酞的研究” (№94-ZD-01, 1995～2001)
2. 国家自然科学基金重大项目子课题 “光学活性丁 基苯酞及其衍生物的化学和生物活性研 究”(№29790122, 1997～2001年)
3. 国家发展计划委员会的 “国家一类新药丁苯酞原料
5.0
Vehicle 5 mg/kg
# #
10 mg/kg
4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 Normal
*
* *
Is-1h
Re-3h
Re-6h
Mit.
Effect of d-, l-, dl-NBP on the decrease of mitochondrial membrane potential in fetal neuronal cells subjected to 3h- hypoxia /hypoglycemia. n=4.
1.改善脑血流的药物
溶栓药:
rt-PA(重组组织型纤溶酶原激活剂) FDA批准,时间窗3h内,颅内出血6.4% 溶栓效果优于尿激酶 尿激酶,6h内, “九五”攻关随机双盲研究 初步结果(+) 原尿激酶,链激酶(-)
降纤药:
降纤酶、巴曲酶
可改善急性患者近期神经功能及日常生活能力 （需注意出血倾向）
40 35 30 25 20 15 10 5 0
Asp



* ** **
m
BAEC
BCEC
* *
*
Asp
* #
#
veh dl-NBP d-NBP l-NBP veh
dl-NBP d-NBP
l-NBP
小
结
应用现代先进科技手段，在整体动物、细胞、分子生物学 水平上的研究表明：恩必普具有多种作用机制(通过多个
左旋丁基苯酞（即芹菜甲素）是芹菜及其籽中
的有效成分之一。从芹菜籽中分离出左旋丁基
苯酞，由于直接提取药源有限, 后来合成消旋
正丁基苯酞, 它的化学结构与芹菜中所含的芹 菜甲素相同,均用作抗惊药研究。
但毒性剂量和有效剂量接近，治疗指数小，无法 开发成抗癫痫药物。
脑缺血和癫痫在病理上有某些共同之处，推测丁
蚓激酶等， Ancord 需要进一步临床研究
抗凝药:
低分子量肝素, 有争议，一般用于辅助治疗肝素,
要注意颅内出血
抗血小板药:
阿司匹林 (IST、CAST)， Abciximab GP IIb-IIIa受体等
改善毛细血管血流:
Pentoxifylline
2.保护脑组织的药物 (一)
钙阻断剂 钙螯合剂 自由剂清除剂 尼莫地平，氟桂嗪等 DP-b99 Ebselen , Tirilazad
10 15 30 45 60
0
5
10 15 30 45 60 75 90
Time after ischemia(min)
Time after drugs(min)
丁基苯酞能明显抑制花生四烯酸引起的血小板聚集
*
80 70
* ** ** *** *** ** * * ***
Rate of platelet aggegation(%)
靶点)，最主要的是通过增加缺血区脑血流，改善脑微循
环，达到挽救半暗带的目的，这与国内外同类药物作用于 单一靶点不同，这种独特的作用机制在国内外药物中属首 创。
与国内外同类药物比较
国内外脑缺血药物研究近况
对脑卒中病灶的治疗 改善脑血循环 – 溶栓 – 降纤 – 抗凝 – 抗血小板 – 其他：中药制剂 脑保护
Normal Vehicle 5 mg/kg 10 mg/kg
Complex IV activity (mmol/mg prot/min)
**
*
## 0 3 6
reperfusion time after 1h-MCAO (h)
Respi.
Effect of dl-NBP on mitochondrial membrane fluidity in MCAO rat brain. MeanSD, n=4.
及制剂高技术产业化示范工程”项目资助(计高技
[2002]2269号)。 4. 国家“十五”863重大科技专项“创新药物与中药现 代化”项目的支持(2002AA2Z3101, 2002,11～)
丁苯酞开发的背景和依据
脑卒中流行病学
死亡率和致残率很高 经济负担和社会负担 脑卒中的防治已成为医药卫生 工作中的重要课题
北京协和医院主持,全国13个医院参与,共560例，按我 国药审中心的办法要求进行严格评价疗效。 有效率:(基本痊愈+显著进步): 治疗组70.3 % 对照组40.4% ;

丁基苯酞 IV期临床试验
北京协和医院主持,全国有83家医院参与,共2000例. 为降低不良反应,服药剂量由原来的800 mg/日 降低 到400mg/日. 现总结2000例疗效如下； 有效率 为75.1%,与II,III期的临床疗效相似。 不良反应降低: 肝转氨酶(ALT,AST)升高由原来的
Arteriole diameter(% of baseline)
140 120
***
Vehicle
* *** ** *** *
dl-25
Nim 0.3
*** *** *** *** *** *** * *** *** ***
100
*
**
80
Drug
*
*
ischemia
60 40 20 0
norm 5