丁基苯酞研发的实践体验--冯亦璞
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Arteriole diameter(% of baseline)
140 120
***
Vehicle
* *** ** *** *
dl-25
Nim 0.3
*** *** *** *** *** *** * *** *** ***
100
*
**
80
Drug
*
*
ischemia
60 40 20 0
norm 5
抑制谷氨酸释放
丁基苯酞抗脑缺血损伤的多种 作用机制(二)
增加内皮细胞 NO,eNOS,PGI2, (与增加rCBF有关) 降低[Ca2+]i (抑制细胞内钙库释放)
抑制炎症,抑制粘连分子
保护神经细胞（高K+，低糖低氧，NMDA，H2O2，Aβ）
脑保护作用是通过多种作用机制，以干预脑损伤的多个病理环节。
1.改善脑血流的药物
溶栓药:
rt-PA(重组组织型纤溶酶原激活剂) FDA批准,时间窗3h内,颅内出血6.4% 溶栓效果优于尿激酶 尿激酶,6h内, “九五”攻关随机双盲研究 初步结果(+) 原尿激酶,链激酶(-)
降纤药:
降纤酶、巴曲酶
可改善急性患者近期神经功能及日常生活能力 （需注意出血倾向）
及制剂高技术产业化示范工程”项目资助(计高技
[2002]2269号)。 4. 国家“十五”863重大科技专项“创新药物与中药现 代化”项目的支持(2002AA2Z3101, 2002,11～)
丁苯酞开发的背景和依据
脑卒中流行病学
死亡率和致残率很高 经济负担和社会负担 脑卒中的防治已成为医药卫生 工作中的重要课题
**
30
60
90
120
150
180
T im e after M C A O (m in)
(用氢清除法，将氫电极插入纹状体, 缺血后10min 给药)
BFV(% of baseline)
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
-20 0
Vehicle dl
50 40
**
30
*** ***
***
20 10 0 control Asp control L-NBP 3mg/kg 10mg/kg dl-NBP
*** ***
d-NBP 100mg/kg Ticlopi
30mg/kg
丁基苯酞能明显抑制ADP引起的血小板聚集
80
.
70
* * ** *** *** *** *** *** *** *** *** *** *** ***
治疗药物现况
溶栓药 rt-PA（组织型纤溶酶原激活剂），
治疗时间窗（3小时）使95%以上的患者无 法得到治疗，且有颅内出血高的风险。 脑保护药 (-) 因此临床上急需一种安全有效、治疗窗较
宽的药物用于脑卒中的治疗。
丁基苯酞的研制
芹菜（Apium Graveolens Linn.）民间用于降
压等。国内外对芹菜的化学成分研究有一些报 道，但未见在治疗脑血管疾病方面的研究。
5.0
Vehicle 5 mg/kg
# #
10 mg/kg
4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 Normal
*
* *
Is-1h
Re-3h
Re-6h
Mit.
Effect of d-, l-, dl-NBP on the decrease of mitochondrial membrane potential in fetal neuronal cells subjected to 3h- hypoxia /hypoglycemia. n=4.
Normal Vehicle 5 mg/kg 10 mg/kg
Complex IV activity (mmol/mg prot/min)
**
*
## 0 3 6
reperfusion time after 1h-MCAO (h)
Respi.
Effect of dl-NBP on mitochondrial membrane fluidity in MCAO rat brain. MeanSD, n=4.
靶点)，最主要的是通过增加缺血区脑血流，改善脑微循
环，达到挽救半暗带的目的，这与国内外同类药物作用于 单一靶点不同，这种独特的作用机制在国内外药物中属首 创。
与国内外同类药物比较
国内外脑缺血药物研究近况
对脑卒中病灶的治疗 改善脑血循环 – 溶栓 – 降纤 – 抗凝 – 抗血小板 – 其他：中药制剂 脑保护
丁基苯酞能明显改善大脑中动脉阻断(MCAO)大鼠
纹状体血流。
70
Vehicle N B P40 mg /kg N B P80m g /kg
rC BF (m l/m in/100g)
60 50 40 30 20 10 0 0
= = = =
***
***
*** **
*** **
***
***
*
**
**
创新药丁基苯酞的研制
正式品名：丁苯酞 商 品 名：恩必普 化 学 名：dl-3-正丁基苯酞 英文名称： Butylphthalide或 Dinbente 结 构 式：
丁基苯酞研究历程:
1987年开始脑缺血研究。
1993年申请了发明专利保护。
1993完成临床前研究。
1994年通过北京市卫生局审批。
北京协和医院主持,全国13个医院参与,共560例，按我 国药审中心的办法要求进行严格评价疗效。 有效率:(基本痊愈+显著进步): 治疗组70.3 % 对照组40.4% ;
丁基苯酞 IV期临床试验
北京协和医院主持,全国有83家医院参与,共2000例. 为降低不良反应,服药剂量由原来的800 mg/日 降低 到400mg/日. 现总结2000例疗效如下； 有效率 为75.1%,与II,III期的临床疗效相似。 不良反应降低: 肝转氨酶(ALT,AST)升高由原来的
1995.5--1996.5 通过卫生部药政管理局审批。 1996.6--1999.9 由北京协和医院神经科完成 I 期临 床试验和Ⅱ期临床预试验(60例), 用药组有效率 85％,安慰剂组有效率59％。
1999.12--2002.3 以北京协和医院为组长单位，会
同全国12家著名的临床药理基地，完成了治疗中度 急性缺血性脑卒中的Ⅱ、III期临床试验，恩必普的 有效率分别为70.3%和63.9%,。安慰剂组为40.0% 2002.9 获得SFDA颁发的新药证书和试生产文号批件 2003.8至今，以北京协和医院为组长单位，全国83 家三甲医院参加的IV期临床试验已完成。 2005.2 获“准”字号批文，恩必普已上市。
项目基金
1. 国家科委1035工程重大项目基金“抗脑缺血药丁基
苯酞的研究” (№94-ZD-01, 1995～2001)
2. 国家自然科学基金重大项目子课题 “光学活性丁 基苯酞及其衍生物的化学和生物活性研 究”(№29790122, 1997～2001年)
3. 国家发展计划委员会的 “国家一类新药丁苯酞原料
18％和7.5% 降为4.7％和1.44%, 且停药后可恢复.
丁基苯酞抗脑缺血损伤的多种 作用机制(一)
改善线粒体功能: 线粒体控制细 胞存亡 起 关键作用。它构成了死亡控制中心。(呼吸链 复合酶IV活性, 膜流动性,膜电位,ATPase, Bcl-2, 细胞色素 c, MDA,抗氧化酶如 SOD,GSH-Px等) 抑制细胞凋亡
10 15 30 45 60
0
5
10 15 30 45 60 75 90
Time after ischemia(min)
Time after drugs(min)
丁基苯酞能明显抑制花生四烯酸引起的血小板聚集
*
80 70
* ** ** *** *** ** * * ***
Rate of platelet aggegation(%)
35 30
0.1
##
1
* * * *
10
** * **
MMP (Fluorescence)
25 20 15 10 5 0
Normal Vehicle
d-NBP
l-NBP
dl-NBP
Cell apoptosis
Death stimuli
[Ca2+]i,ROS, ceramide )
Mitochondrial dysfunction Cytochrome c release
Diameter(% of baseline)
100
**
80
***
***
*** ** *
*
*
20 0
40
60
ischemia
-20
0
5
10
15
30
45
60
75
90
Time after drugs (min)
Change of pial arteriole diameter in MCAO rats with NBP pretreatment
蚓激酶等， Ancord 需要进一步临床研究
抗凝药:
低分子量肝素, 有争议，一般用于辅助治疗肝素,
要注意颅内出血
抗血小板药:
阿司匹林 (IST、CAST)， Abciximab GP IIb-IIIa受体等
改善毛细血管血流:
Pentoxifylline
2.保护脑组织的药物 (一)
钙阻断剂 钙螯合剂 自由剂清除剂 尼莫地平，氟桂嗪等 DP-b99 Ebselen , Tirilazad
Apoptosis
( DNA fragmentation )
Caspase 3
Caspase substrates (PARP etc.)
Effects of NBP on PGI2 production of BAEC(牛主动脉内皮细胞) and BCEC (牛脑微动脉内皮细胞)
PGI2 production(ng/well/24h)
苯酞可能对脑缺血有治疗作用，
丁基苯酞是源自天然食药两用的芹菜,易被患者
接受。 经10余年系统研究, 完成丁苯酞的临床前研究。 发现丁基苯酞有独特的治疗脑卒中的作用。
一类创新药丁基苯酞的研究内容
一、丁基苯酞(NBP)的药效学
改善脑能量代谢。
缩小脑缺血动物脑梗塞体积。
能減轻脑水肿。 改善缺血区脑血流和脑微循环。 能抗血小板聚集和抗血栓的作用等。
40 35 30 25 20 15 10 5 0
Asp
* ** **
m
BAEC
BCEC
* *
*
Asp
* #
#
veh dl-NBP d-NBP l-NBP veh
dl-NBP d-NBP
l-NBP
小
结
应用现代先进科技手段，在整体动物、细胞、分子生物学 水平上的研究表明：恩必普具有多种作用机制(通过多个
Nim 0.3
BFV(% of baseline)
60 50 40 30 20 10 0
drugs
-60
0
5
10
15
30
45
60
75
90
Time after ischemia(min)
Effect of NBP on pial arteriolar diameter in MCAO rats
Sham Vehicle dl-12.5 dl-25 (mg/kg,ip)
Ra te o f p la te let a gg ega ti on (%)
60
50
40
30
20
10
0 control Asp L-NBP dl-NBP d-NBP Ticlo
control
3mg/kg
10mg/kg
30mg/kg
100mg/kg
临床试验
丁基苯酞 II,III, 期临床试验
dl-12.5 Nim-0.3
5
10
15
30
45
60
75
90
Time after drugs(min)
Effect of post-treatment with NBP on blood flow velocity of pial arteriole in tMCAO rats
70
Vehicle
dl-25
左旋丁基苯酞（即芹菜甲素）是芹菜及其籽中
的有效成分之一。从芹菜籽中分离出左旋丁基
苯酞，由于直接提取药源有限, 后来合成消旋
正丁基苯酞, 它的化学结构与芹菜中所含的芹 菜甲素相同,均用作抗惊药研究。
但毒性剂量和有效剂量接近，治疗指数小，无法 开发成抗癫痫药物。
脑缺血和癫痫在病理上有某些共同之处，推测丁
Effect of dl-NBP on the activity of complex IV of respiratory chain in MCAO rats brain (n=4-6). dl-NBP was administrated 10 min before ischemia.
0.25 0.23 0.21 0.19 0.17 0.15 0.13 0.11 0.09 0.07 0.05
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dl-25
Nim 0.3
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Drug
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ischemia
60 40 20 0
norm 5
抑制谷氨酸释放
丁基苯酞抗脑缺血损伤的多种 作用机制(二)
增加内皮细胞 NO,eNOS,PGI2, (与增加rCBF有关) 降低[Ca2+]i (抑制细胞内钙库释放)
抑制炎症,抑制粘连分子
保护神经细胞（高K+，低糖低氧，NMDA，H2O2，Aβ）
脑保护作用是通过多种作用机制，以干预脑损伤的多个病理环节。
1.改善脑血流的药物
溶栓药:
rt-PA(重组组织型纤溶酶原激活剂) FDA批准,时间窗3h内,颅内出血6.4% 溶栓效果优于尿激酶 尿激酶,6h内, “九五”攻关随机双盲研究 初步结果(+) 原尿激酶,链激酶(-)
降纤药:
降纤酶、巴曲酶
可改善急性患者近期神经功能及日常生活能力 （需注意出血倾向）
及制剂高技术产业化示范工程”项目资助(计高技
[2002]2269号)。 4. 国家“十五”863重大科技专项“创新药物与中药现 代化”项目的支持(2002AA2Z3101, 2002,11～)
丁苯酞开发的背景和依据
脑卒中流行病学
死亡率和致残率很高 经济负担和社会负担 脑卒中的防治已成为医药卫生 工作中的重要课题
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T im e after M C A O (m in)
(用氢清除法，将氫电极插入纹状体, 缺血后10min 给药)
BFV(% of baseline)
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Vehicle dl
50 40
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30mg/kg
丁基苯酞能明显抑制ADP引起的血小板聚集
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治疗药物现况
溶栓药 rt-PA（组织型纤溶酶原激活剂），
治疗时间窗（3小时）使95%以上的患者无 法得到治疗，且有颅内出血高的风险。 脑保护药 (-) 因此临床上急需一种安全有效、治疗窗较
宽的药物用于脑卒中的治疗。
丁基苯酞的研制
芹菜（Apium Graveolens Linn.）民间用于降
压等。国内外对芹菜的化学成分研究有一些报 道，但未见在治疗脑血管疾病方面的研究。
5.0
Vehicle 5 mg/kg
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10 mg/kg
4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 Normal
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Re-3h
Re-6h
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Effect of d-, l-, dl-NBP on the decrease of mitochondrial membrane potential in fetal neuronal cells subjected to 3h- hypoxia /hypoglycemia. n=4.
Normal Vehicle 5 mg/kg 10 mg/kg
Complex IV activity (mmol/mg prot/min)
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## 0 3 6
reperfusion time after 1h-MCAO (h)
Respi.
Effect of dl-NBP on mitochondrial membrane fluidity in MCAO rat brain. MeanSD, n=4.
靶点)，最主要的是通过增加缺血区脑血流，改善脑微循
环，达到挽救半暗带的目的，这与国内外同类药物作用于 单一靶点不同，这种独特的作用机制在国内外药物中属首 创。
与国内外同类药物比较
国内外脑缺血药物研究近况
对脑卒中病灶的治疗 改善脑血循环 – 溶栓 – 降纤 – 抗凝 – 抗血小板 – 其他：中药制剂 脑保护
丁基苯酞能明显改善大脑中动脉阻断(MCAO)大鼠
纹状体血流。
70
Vehicle N B P40 mg /kg N B P80m g /kg
rC BF (m l/m in/100g)
60 50 40 30 20 10 0 0
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创新药丁基苯酞的研制
正式品名：丁苯酞 商 品 名：恩必普 化 学 名：dl-3-正丁基苯酞 英文名称： Butylphthalide或 Dinbente 结 构 式：
丁基苯酞研究历程:
1987年开始脑缺血研究。
1993年申请了发明专利保护。
1993完成临床前研究。
1994年通过北京市卫生局审批。
北京协和医院主持,全国13个医院参与,共560例，按我 国药审中心的办法要求进行严格评价疗效。 有效率:(基本痊愈+显著进步): 治疗组70.3 % 对照组40.4% ;
丁基苯酞 IV期临床试验
北京协和医院主持,全国有83家医院参与,共2000例. 为降低不良反应,服药剂量由原来的800 mg/日 降低 到400mg/日. 现总结2000例疗效如下； 有效率 为75.1%,与II,III期的临床疗效相似。 不良反应降低: 肝转氨酶(ALT,AST)升高由原来的
1995.5--1996.5 通过卫生部药政管理局审批。 1996.6--1999.9 由北京协和医院神经科完成 I 期临 床试验和Ⅱ期临床预试验(60例), 用药组有效率 85％,安慰剂组有效率59％。
1999.12--2002.3 以北京协和医院为组长单位，会
同全国12家著名的临床药理基地，完成了治疗中度 急性缺血性脑卒中的Ⅱ、III期临床试验，恩必普的 有效率分别为70.3%和63.9%,。安慰剂组为40.0% 2002.9 获得SFDA颁发的新药证书和试生产文号批件 2003.8至今，以北京协和医院为组长单位，全国83 家三甲医院参加的IV期临床试验已完成。 2005.2 获“准”字号批文，恩必普已上市。
项目基金
1. 国家科委1035工程重大项目基金“抗脑缺血药丁基
苯酞的研究” (№94-ZD-01, 1995～2001)
2. 国家自然科学基金重大项目子课题 “光学活性丁 基苯酞及其衍生物的化学和生物活性研 究”(№29790122, 1997～2001年)
3. 国家发展计划委员会的 “国家一类新药丁苯酞原料
18％和7.5% 降为4.7％和1.44%, 且停药后可恢复.
丁基苯酞抗脑缺血损伤的多种 作用机制(一)
改善线粒体功能: 线粒体控制细 胞存亡 起 关键作用。它构成了死亡控制中心。(呼吸链 复合酶IV活性, 膜流动性,膜电位,ATPase, Bcl-2, 细胞色素 c, MDA,抗氧化酶如 SOD,GSH-Px等) 抑制细胞凋亡
10 15 30 45 60
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Time after ischemia(min)
Time after drugs(min)
丁基苯酞能明显抑制花生四烯酸引起的血小板聚集
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Rate of platelet aggegation(%)
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MMP (Fluorescence)
25 20 15 10 5 0
Normal Vehicle
d-NBP
l-NBP
dl-NBP
Cell apoptosis
Death stimuli
[Ca2+]i,ROS, ceramide )
Mitochondrial dysfunction Cytochrome c release
Diameter(% of baseline)
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Time after drugs (min)
Change of pial arteriole diameter in MCAO rats with NBP pretreatment
蚓激酶等， Ancord 需要进一步临床研究
抗凝药:
低分子量肝素, 有争议，一般用于辅助治疗肝素,
要注意颅内出血
抗血小板药:
阿司匹林 (IST、CAST)， Abciximab GP IIb-IIIa受体等
改善毛细血管血流:
Pentoxifylline
2.保护脑组织的药物 (一)
钙阻断剂 钙螯合剂 自由剂清除剂 尼莫地平，氟桂嗪等 DP-b99 Ebselen , Tirilazad
Apoptosis
( DNA fragmentation )
Caspase 3
Caspase substrates (PARP etc.)
Effects of NBP on PGI2 production of BAEC(牛主动脉内皮细胞) and BCEC (牛脑微动脉内皮细胞)
PGI2 production(ng/well/24h)
苯酞可能对脑缺血有治疗作用，
丁基苯酞是源自天然食药两用的芹菜,易被患者
接受。 经10余年系统研究, 完成丁苯酞的临床前研究。 发现丁基苯酞有独特的治疗脑卒中的作用。
一类创新药丁基苯酞的研究内容
一、丁基苯酞(NBP)的药效学
改善脑能量代谢。
缩小脑缺血动物脑梗塞体积。
能減轻脑水肿。 改善缺血区脑血流和脑微循环。 能抗血小板聚集和抗血栓的作用等。
40 35 30 25 20 15 10 5 0
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BAEC
BCEC
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veh dl-NBP d-NBP l-NBP veh
dl-NBP d-NBP
l-NBP
小
结
应用现代先进科技手段，在整体动物、细胞、分子生物学 水平上的研究表明：恩必普具有多种作用机制(通过多个
Nim 0.3
BFV(% of baseline)
60 50 40 30 20 10 0
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Time after ischemia(min)
Effect of NBP on pial arteriolar diameter in MCAO rats
Sham Vehicle dl-12.5 dl-25 (mg/kg,ip)
Ra te o f p la te let a gg ega ti on (%)
60
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3mg/kg
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100mg/kg
临床试验
丁基苯酞 II,III, 期临床试验
dl-12.5 Nim-0.3
5
10
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Time after drugs(min)
Effect of post-treatment with NBP on blood flow velocity of pial arteriole in tMCAO rats
70
Vehicle
dl-25
左旋丁基苯酞（即芹菜甲素）是芹菜及其籽中
的有效成分之一。从芹菜籽中分离出左旋丁基
苯酞，由于直接提取药源有限, 后来合成消旋
正丁基苯酞, 它的化学结构与芹菜中所含的芹 菜甲素相同,均用作抗惊药研究。
但毒性剂量和有效剂量接近，治疗指数小，无法 开发成抗癫痫药物。
脑缺血和癫痫在病理上有某些共同之处，推测丁
Effect of dl-NBP on the activity of complex IV of respiratory chain in MCAO rats brain (n=4-6). dl-NBP was administrated 10 min before ischemia.
0.25 0.23 0.21 0.19 0.17 0.15 0.13 0.11 0.09 0.07 0.05