急性毒性试验设计ppt课件
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急性毒性试验
四、急毒试验观察指标和致死量的计算
(一)观察指标
不能把求得致死剂量看作是急性毒性实验的唯一要求。发现毒性症状及毒性反应 的靶器官同样是急毒实验非常重要的目的。给药前后应观察体重、进食、进水的状 况，密切观察异常毒性症状，特别是给药后的一、二日。以后1日至少观察1次，观 察7 日观察症状包括①行动：不安定、多动、发声；②神经系统反应：举尾、振颤、 痉挛、运动失调、姿态异常；③自主神经系统反应：眼球突出、流涎、流汨、排尿、 下泻、竖毛、皮肤变色、呼吸；④死亡。应每日记录体重、毒性反应和死亡情况， 濒死动物应单独饲养，死后及时解削进行肉眼观察和病理组织学观察。试验结束存 活动物也进行解剖，如有病变进行组织学观察。 (二}致死剂量计算 可用Bliss点斜法、简化机率法、改进寇氏序贯法等计算最小致死量或半数致死量。 Bliss法严谨精确，缺点是计算非常繁复。但近代有计算机软件，汁算方法可推荐 Bliss法。各种方法原则基本相同，如：①剂量刘数值应为等差，即剂量应按等比级 数排列；②各组动物数应相等；③死亡率应在50％上下基本对称分布等。但各种方 法还各有特殊设计要求，如有的要求Dm和Dn必须为100％和0％死亡率等，可参考有 关专著，此处不赘述。如受试物毒性低，测不出LD50，可求得最大给药量。
四、急毒试验结果评价 (一)可靠性评价 为保证急毒结果，实验条件应符合GLP的要求，供试品质量稳定， 动物合格，实验方案，实验原始记录，标准操作规程，总结报告应 符合要求。总结报告中应包括摘要、供试品、试验动物，试验环境、 给药方法、观察方法、毒性反应症状、体重变化、病理组织学变化、
雄性反应和死亡出现的时间、LD50和LD5及其可信限的计算方法、
反应症状，症状出现和消失的时间，死亡时间，第七日全部动物测量体重处 死并剖检，肉眼观察病变情况。有毒性反应、体重减轻或脏器有病变的动物 应在剖检后立即进行主要脏器的病理组织学观察。
急性毒性及其评价方法PPT课件
大鼠为5ml/只(通常用0.5－1.0ml/100g） 家兔为10ml/2kg体重，狗不超过50ml/10kg
灌胃器具制作
取l2号普通注射针头，首先将针头尖部去 掉，然后用细锉刀把去掉部分锉平、锉光， 再用沙纸磨光滑，有条件时可在针尖处点 焊成球型。加工成有20度弧度的灌胃针， 连接1ml或5ml的注射器，即成为大小鼠的 灌胃器。
2. 经呼吸道接触
在常温、常压下为气态，或在生产过程 中 和生活过程中以蒸气、气溶胶、烟、粉 尘 状态污染生产与生活环境空气，此时就 有 可能经呼吸道吸入。
吸入接触分为两种方式 ：
静式吸入 动式吸入
3. 经皮肤染毒
➢ 研究外源化学物经皮肤吸收应当尽 量选择皮肤解剖、生理与人类较近似的动 物为对象，目前多选用家兔和豚鼠
1 LgLD0
•••
2 LgLD0+i
随机性：每只动物分散到各组去的机会是均 等的，以避免成见或系统误差
实验动物的预处理
适应性饲养一周，选择生理健康的动物 凡经口染毒时，要求试验前要对动物禁食，
以保证胃内无食物，减少食物对化学物毒性 的干扰
大鼠、小鼠——隔夜进食；染毒后禁食4h 大动物——每日上午喂食前染毒 染毒后继续禁食2~4h，但在禁食时要保障饮水
2. 通过观察动物中毒作用表现、毒作用 强 度和死亡情况，初步评价毒物对机体的 毒效应特征、靶器官、剂量－反应关系和对 人体产生损害的危险性
3. 为亚慢性及慢性毒性试验研究以及 其他 毒理试验提供接触剂量和观察指标选 择的依据
4. 为毒作用机理研究提供线索，了解中 毒 效应的特征（包括症状，生理、生化与 组织病理损伤）
(二) 受试物及处理
受试物的接受、分样、保管、称重、配制 以及在此过程中严格的质量保证影响急性 毒性试验
灌胃器具制作
取l2号普通注射针头，首先将针头尖部去 掉，然后用细锉刀把去掉部分锉平、锉光， 再用沙纸磨光滑，有条件时可在针尖处点 焊成球型。加工成有20度弧度的灌胃针， 连接1ml或5ml的注射器，即成为大小鼠的 灌胃器。
2. 经呼吸道接触
在常温、常压下为气态，或在生产过程 中 和生活过程中以蒸气、气溶胶、烟、粉 尘 状态污染生产与生活环境空气，此时就 有 可能经呼吸道吸入。
吸入接触分为两种方式 ：
静式吸入 动式吸入
3. 经皮肤染毒
➢ 研究外源化学物经皮肤吸收应当尽 量选择皮肤解剖、生理与人类较近似的动 物为对象，目前多选用家兔和豚鼠
1 LgLD0
•••
2 LgLD0+i
随机性：每只动物分散到各组去的机会是均 等的，以避免成见或系统误差
实验动物的预处理
适应性饲养一周，选择生理健康的动物 凡经口染毒时，要求试验前要对动物禁食，
以保证胃内无食物，减少食物对化学物毒性 的干扰
大鼠、小鼠——隔夜进食；染毒后禁食4h 大动物——每日上午喂食前染毒 染毒后继续禁食2~4h，但在禁食时要保障饮水
2. 通过观察动物中毒作用表现、毒作用 强 度和死亡情况，初步评价毒物对机体的 毒效应特征、靶器官、剂量－反应关系和对 人体产生损害的危险性
3. 为亚慢性及慢性毒性试验研究以及 其他 毒理试验提供接触剂量和观察指标选 择的依据
4. 为毒作用机理研究提供线索，了解中 毒 效应的特征（包括症状，生理、生化与 组织病理损伤）
(二) 受试物及处理
受试物的接受、分样、保管、称重、配制 以及在此过程中严格的质量保证影响急性 毒性试验
急性毒性试验
Sx50=0.0307 logLD50及其95%可信限 =0.6329±1.96×0.0307=0.6329±0.0602 小鼠的经口LD50为4.29g/kg，其95%可信范围 为3.74~4.93g/kg
急性毒性评价
外源化学物相对毒性分级标准
急性毒性分级（WHO）
鱼类急性毒性分级
LD50的局限性
急性毒性试验方法
一、急性毒性
急性毒性指人或动物一次或24 h
之内多次接触外源化学物后，在短
期内所发生的毒性效应，包括致死 效应。
一次：指瞬间给实验动物染毒，如经
口、经静脉注射染毒。
24 h之内多次：指外源化学物毒性过 低，需给予动物较大剂量。
急性毒性效应出现的快慢和毒性反应的强 度与外源化学物的性质和染毒剂量的大小 有关。
20只动物的完全随机分配
完全随机分配后各组所属动物号
20只动物完全随机分配的结果
20只动物的完全随机分配
动物编号 随即数字 除4后余数 1 54 2 2 83 3 3 80 0 4 53 1 5 90 2 6 75 3 7 53 1 8 78 2 9 93 1 10 47 3 11 72 0 12 09 1 13 54 2 14 66 2 15 95 3 16 44 0 17 68 0 18 67 3 19 67 3 20 86 2
由急性毒性试验可得到两类毒性参数
上限参数 是以死亡为终点的毒性，包 括绝对致死量、半数致死量、最小致 死量、最大耐受量等；
下限参数 是以非致死性急性毒作用 为终点的毒性，包括急性阈剂量和无 作用剂量等。
用小动物试验可求出外源化学物对一种或几种 实验动物的急性LD50或LC50; 用 大 动 物 试 验 可 求 出 近 似 致 死 剂 量 （approximate lethal dose, ALD）; 根据LD50 （LC50 ）值可进行急性毒性分级，以 初步评价外源化学物对机体急性毒性大小和急 性毒作用的强度。
急性毒性试验PPT课件
编辑版pppt
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(二)安全性评价
(1)根据急性毒性试验结果判断供试药物毒性的强弱、类型。国内尚无统—规 定。
(2)急性毒性试验结果对临床研究有指导意义，可以为临床研究时探索安全有 效剂量避免出现急性不良反应提供依据。
但是，鉴于人体与各种动物对各类化合物的吸收、分布、代谢、排泄以及各 类型毒性反应的差异，尚无规律可循，现有化学药品统计数据表明，在进行临 床研究时，仍应根据实验结果参考文献资料报道进行由低到高的安全治疗剂量 的探索。
编辑版pppt
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三、近似致死量试验
国外近年来有采用少量动物进行近似致死量测定的方法。其中有的类似 LD50的预试验或霍恩氏法。每组用3—4只动物，设多组，详细观察并汜 录动物毒性反应井进行血液学，血液生化以及病理组织学观察。有的采用 剂量递增法即—只动物一个剂量以几何级数递增，根据前个剂量的反应， 决定下—个剂量。或采用剂量累积法，同一批动物间隔一定时间、剂量由 小到大给药，观察毒性反应，同时结合血药浓度的测定，确定动物的急性 毒性反应、靶器官、中毒或致死剂量、毒性反应时的血药浓度。剂量递增 法类似于LD50测定的阶梯法(或称序贯法、上下法)，适用小动物而且毒性 反应出现快的试验，10—20只动物即可测定。剂量累积法则适用大动物， 利用大约6只合格动物即可进行急性毒性试验的全面观察。另外，国外还 有采用固定剂量给药观察近似致死剂量，以决定药物毒性大小者。
编辑版pppt
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四、急毒试验结果评价 (一)可靠性评价
为保证急毒结果，实验条件应符合GLP的要求，供试品质量稳定， 动物合格，实验方案，实验原始记录，标准操作规程，总结报告应 符合要求。总结报告中应包括摘要、供试品、试验动物，试验环境、 给药方法、观察方法、毒性反应症状、体重变化、病理组织学变化、 雄性反应和死亡出现的时间、LD50和LD5及其可信限的计算方法、 结果讨论等。根据试验结果对急性毒性进行全面评价。
急性经口毒性实验
（四）灌胃方法：
小鼠灌胃法：左手拇指和食指捏住小鼠头部两耳后皮肤，无名指或小指将尾部紧压在手上，使小鼠腹部向上，尽量使其体位垂直，注意使动物的上消化道固定成一直线。右手持连着灌胃导针的注射器，将灌胃针由动物口腔侧插入，避牙齿，沿咽后壁缓缓滑人食管。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一旦感觉阻力消失，即深人至胃部，一般进针深度小鼠2.5～4cm，随后将受试物溶液注入。如遇动物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插入，以免穿破食管，甚至误入气管，导致动物立即死亡。小鼠一次灌胃体积为10-20ml/kg
灌胃时操作要避免损伤食道或误入气管
正确捉拿动物，防止被咬伤且避免动物损伤
防止操作者中毒。注意通风，不要把药品撒到手、脸部皮肤及身体其他部位，操作过程中要小心。
五、注意事项：
实验动物的种属。
01
实验动物体重和随机分组情况。
02
受试物的名称、性状等情况。
03
受试物的配制和溶剂。
04
描述实验观察的中毒表现和死亡情况等。
LD50的95%可信限=log-1(X + 1.96 SX )
结果评价：
根据实验动物中毒体征、死亡时间、根据得出的LD50及受试物的种类，按相应的国家标准或技术规范中的急性经口毒性分级标准（课本 215页--农药的急性毒性分级）对受试物进行毒性定级，判断受试物的毒性大小。
灌入量计算和操作要准确，否则影响结果
单击此处添加副标题
202X
急性经口毒性实验 （Acute Oral Toxicity Test）
通过本次实验掌握经口灌胃技术，半数致死剂量的意义。
通过本次实验学习半数致死剂量的计算及毒性判定。
一、实验目的：
二、测定方法：
本实验以灌胃方式测定敌敌畏DDV（80g/100ml）的半数致死量（LD50）。
小鼠灌胃法：左手拇指和食指捏住小鼠头部两耳后皮肤，无名指或小指将尾部紧压在手上，使小鼠腹部向上，尽量使其体位垂直，注意使动物的上消化道固定成一直线。右手持连着灌胃导针的注射器，将灌胃针由动物口腔侧插入，避牙齿，沿咽后壁缓缓滑人食管。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一旦感觉阻力消失，即深人至胃部，一般进针深度小鼠2.5～4cm，随后将受试物溶液注入。如遇动物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插入，以免穿破食管，甚至误入气管，导致动物立即死亡。小鼠一次灌胃体积为10-20ml/kg
灌胃时操作要避免损伤食道或误入气管
正确捉拿动物，防止被咬伤且避免动物损伤
防止操作者中毒。注意通风，不要把药品撒到手、脸部皮肤及身体其他部位，操作过程中要小心。
五、注意事项：
实验动物的种属。
01
实验动物体重和随机分组情况。
02
受试物的名称、性状等情况。
03
受试物的配制和溶剂。
04
描述实验观察的中毒表现和死亡情况等。
LD50的95%可信限=log-1(X + 1.96 SX )
结果评价：
根据实验动物中毒体征、死亡时间、根据得出的LD50及受试物的种类，按相应的国家标准或技术规范中的急性经口毒性分级标准（课本 215页--农药的急性毒性分级）对受试物进行毒性定级，判断受试物的毒性大小。
灌入量计算和操作要准确，否则影响结果
单击此处添加副标题
202X
急性经口毒性实验 （Acute Oral Toxicity Test）
通过本次实验掌握经口灌胃技术，半数致死剂量的意义。
通过本次实验学习半数致死剂量的计算及毒性判定。
一、实验目的：
二、测定方法：
本实验以灌胃方式测定敌敌畏DDV（80g/100ml）的半数致死量（LD50）。
发光细菌法急性毒性实验课件
实验目的与内容
一、实验目的
1.掌握发光细菌毒性测试的标准方法； 2.根据发光细菌发光强度的变化判断
受试化合物的毒性； 3.初步了解发光细菌毒性测试的影响因素。
二、实验内容
1.发光细菌的复苏； 2.发光细菌发光强度的测定； 3.受试化合物毒性的计算。
实验目的与内容
发光细菌是一种非致病性的普通细菌，具有发光能力，在正 常条件下经培养后能发出肉眼可见的兰绿色光，这种发光过程 是细菌体内一种新陈代谢反应，是氧化呼吸链上的一个侧支。 发光细菌的发光反应模式图(1)所示。发光细菌发光反应途径可 简单概述为:
3. 仪器： 生物发光光度计，配制2或5 ml测试管，当氯化汞标
准液浓度为0.10 mg/L时，发光细菌的相对发光度为50 ％，其误差不超过10％。2或5 ml 测试样品管，具标准 磨口塞，为制造比色管的玻璃料制作，由专业玻璃仪 器厂制造，分别适用于相应型号的生物放光光度计。 注射器(1 ml)、微量注射器(10 μl)、定量加液瓶(5 ml)、 吸管(2.10、25 ml)、试剂瓶(100 ml)、量桶(100、500 ml)、棕色容量瓶(50、250、1000 ml)、半微量滴定管 (配磨口试液瓶，全套仪器均为棕色，10 ml)等若干。
发光细菌的复苏 从冰箱内取出含有0.5 g 发光细菌冻干粉和氯化钠
溶液, 置于含有冰块的小号保温瓶, 用1 ml注射器吸取 0.5 ml冷的氯化钠2.0 g/100 ml溶液(适用于5ml的测试 管)或1 ml 冷的氯化钠2.5％溶液(适用于2 ml的测试管) 注入冻干粉中, 充分混匀。2 min后菌即复苏发光, 可在 暗室观察, 肉眼可见微光。备用。
简介
采用现代光电检测手段(生物发光光度计)的发光菌生物 毒性实验是毒理学中生物测定的方法之一。 该方法快速、 简便、灵敏、廉价,在有毒物质的筛选, 环境污染生物学评 价等方面有重要的意义, 因而备受各国有关研究者的关注。
急性毒性试验设计课件
案例四
总结词
急性毒性试验在食品添加剂安全性评价中具有重要意义，能够评估食品添加剂对 人体健康的潜在风险。
详细描述
急性毒性试验广泛应用于食品添加剂安全性评价中，通过给予实验动物单次或多 次剂量的食品添加剂，观察和记录动物的毒性反应和死亡情况，能够评估食品添 加剂对人体健康的潜在风险，为食品添加剂的安全使用提供科学依据。
数据清洗
去除异常值和缺失值，确保数据质量。
数据分析
采用合适的统计方法对数据进行分析，如均值 、标准差等。
数据可视化
使用图表展示分析结果，如折线图、柱状图等。
结果报告与结论
结果总结
概述试验结果，包括毒性反应类型、剂量效应关系等 。
结论
根据试验结果，得出结论并解释其意义。
建议
根据试验结果提出建议，如进一步研究必要性、安全 使用建议等。
染毒剂量
设置不同剂量组，确保剂量范围涵盖预期毒性反 应。
3
染毒频率
确定染毒频率，如单次或多次给药。
观察与记录
观察时间
设定观察周期，包括给药前、给药后短期、 中期和长期观察。
观察指标
列出需要观察的指标，如行为变化、生理参 数、病理学检查等。
数据记录
详细记录各组动物在各个时间点的数据表现 。
数据处理与分析
观察期的设置
总结词
观察期的设置是急性毒性试验中至关重要的一环，直接 关系到试验结果的完整性和准确性。
详细描述
观察期是指从给予动物受试物开始，直至观察到动物死 亡或恢复正常的这段时间。在试验设计中，应根据受试 物的毒性作用特点、动物的种属特性以及试验目的等因 素来确定合理的观察期。同时，还需根据观察到的症状 和体征以及死亡情况等数据进行详细记录和分析，以评 估受试物的毒性作用及其对动物的影响程度。
第十三章急性毒性试验
2020/7/1
任立群
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（一）实验动物
3.体重与年龄
同一批实验中，动物的年龄、体重应尽可能一致。
《动药物物的研初始究体技重术变指异导要求原不则超》过规平定均：体重的±20%。 幼验年 原如动则果物上一选受般用试较年物成轻拟年的用动成于物年对动儿毒物童物。或敏可感能，用急性于毒儿性童试，
建议必要啮齿时类采动用物幼的年年动龄一物般进为行7试~9验周。龄，
对人可能致死的估计量
g/kg体重
﹤0.05
g/60kg体重
0.1
0.05~
3
0.5~
30
5~
250
﹥15
﹥1000
在临床，药物有毒药、剧药、普通药之分，有人认为 可参考药物的LD50值加毒以、划剧分药。的划分
毒药 剧药 普通药
口服 ﹤30 ﹤300 ﹥300
小鼠LD50（mg/kg体重） 皮下注射 静脉或腹腔注射
(mg/kg)
(x)
(只)
(只)
（%） （Y）
(mg/kg)
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任立群
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二、急性毒性评价的基本要求
各国药政部门对急性毒性试验的基本要求有所不同。
各国对急性毒性试验的基本要求
FDA 日本 美国 英国 前西德 欧共体 前苏联 WHO 瑞士
动物 3-4 2 3 2 2
2
2
3
2
种类
给药 1 3 3 2 2
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任立群
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（二）剂量水平的选择
剂量水平的选择应是以测定 LD50 及剂量—反应 曲线的斜率为目的。
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任立群
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（一）实验动物
急性毒性试验
三、给药方法
(一)动物禁食
动物购入后应在实验室观察1星期，口服给药前，为减少吸收差异和大容量 给药造成胃急性扩张，小鼠和大鼠至少应停食4 -6h，要求一夜停食(不停水)， 投药后再停食3-4h。
(二)给药途径
中药新药除临床给药途径外，—、二类新药还希望其他给药途径，水溶性 药
物应同时采用静脉给药途径，其他如油剂，混悬剂之类可采用皮下给药途径。 腹腔汁射在人体极少用，中药粗制剂成分复杂，动物毒性试验中也尽可能少 用，以避免腹腔刺激性的干扰。
(一)观察指标
不能把求得致死剂量看作是急性毒性实验的唯一要求。发现毒性症状及毒性反应 的靶器官同样是急毒实验非常重要的目的。给药前后应观察体重、进食、进水的状 况，密切观察异常毒性症状，特别是给药后的一、二日。以后1日至少观察1次，观 察7 日观察症状包括①行动：不安定、多动、发声；②神经系统反应：举尾、振颤、 痉挛、运动失调、姿态异常；③自主神经系统反应：眼球突出、流涎、流汨、排尿、 下泻、竖毛、皮肤变色、呼吸；④死亡。应每日记录体重、毒性反应和死亡情况， 濒死动物应单独饲养，死后及时解削进行肉眼观察和病理组织学观察。试验结束存 活动物也进行解剖，如有病变进行组织学观察。
(二}致死剂量计算
可用Bliss点斜法、简化机率法、改进寇氏序贯法等计算最小致死量或半数致死量。 Bliss法严谨精确，缺点是计算非常繁复。但近代有计算机软件，汁算方法可推荐 Bliss法。各种方法原则基本相同，如：①剂量刘数值应为等差，即剂量应按等比级 数排列；②各组动物数应相等；③死亡率应在50％上下基本对称分布等。但各种方 法还各有特殊设计要求，如有的要求Dm和Dn必须为100％和0％死亡率等，可参考有 关专著，此处不赘述。如受试物毒性低，测不出LD50，可求得最大给药量。
急性毒性试验设计
取必要的安全措施。
实验动物安全
确保实验动物在实验过程中得 到妥善照顾，避免不必要的痛 苦和伤害。
实验室安全
确保实验室安全，采取必要的 安全措施，如防火、防爆、防 毒等。
废弃物处理
按照相关规定处理实验废弃物 ，确保环境安全。
数据分析与解释
描述性统计分析
对数据进行描述性统计分析，如计算均值、中位数、标准差等，以 了解数据的分布情况。
推断性统计分析
根据实验目的和假设，选择合适的统计方法进行推断性统计分析， 如t检验、方差分析、回归分析等。
解释与推论
基于统计分析的结果，对实验结果进行解释和推论，探讨可能的机制 和原因。
结果表达与报告
摄食量
记录动物每日摄食量，分析摄食量与药物摄入量 的关系。
观察指标与记录
血液学指标
检测红细胞、白细胞等 指标，评估药物对血液
系统的影响。
生化指标
检测肝功能、肾功能等 指标，评估药物对内脏
器官的影响。
病理学检查
对动物进行尸检，观察 内脏器官的病理变化。
死亡情况
记录动物的死亡时间和 数量，分析药物的毒性
急性毒性试验设计
汇报人：可编辑 2024-01-11
目录
CONTENTS
• 急性毒性试验概述 • 实验动物与操作规范 • 急性毒性试验设计 • 数据处理与分析 • 急性毒性试验的注意事项与伦理考虑
01 急性毒性试验概述
定义与目的
定义
急性毒性试验是在短时间内对实验动物给予一定剂量的受试物，观察受试物对 实验动物产生的毒性作用和死亡情况，以评价受试物的毒性作用和安全性的试 验。
02 实验动物与操作规范
实验动物选择
实验动物种类
实验动物安全
确保实验动物在实验过程中得 到妥善照顾，避免不必要的痛 苦和伤害。
实验室安全
确保实验室安全，采取必要的 安全措施，如防火、防爆、防 毒等。
废弃物处理
按照相关规定处理实验废弃物 ，确保环境安全。
数据分析与解释
描述性统计分析
对数据进行描述性统计分析，如计算均值、中位数、标准差等，以 了解数据的分布情况。
推断性统计分析
根据实验目的和假设，选择合适的统计方法进行推断性统计分析， 如t检验、方差分析、回归分析等。
解释与推论
基于统计分析的结果，对实验结果进行解释和推论，探讨可能的机制 和原因。
结果表达与报告
摄食量
记录动物每日摄食量，分析摄食量与药物摄入量 的关系。
观察指标与记录
血液学指标
检测红细胞、白细胞等 指标，评估药物对血液
系统的影响。
生化指标
检测肝功能、肾功能等 指标，评估药物对内脏
器官的影响。
病理学检查
对动物进行尸检，观察 内脏器官的病理变化。
死亡情况
记录动物的死亡时间和 数量，分析药物的毒性
急性毒性试验设计
汇报人：可编辑 2024-01-11
目录
CONTENTS
• 急性毒性试验概述 • 实验动物与操作规范 • 急性毒性试验设计 • 数据处理与分析 • 急性毒性试验的注意事项与伦理考虑
01 急性毒性试验概述
定义与目的
定义
急性毒性试验是在短时间内对实验动物给予一定剂量的受试物，观察受试物对 实验动物产生的毒性作用和死亡情况，以评价受试物的毒性作用和安全性的试 验。
02 实验动物与操作规范
实验动物选择
实验动物种类
经典急性致死性毒性试验
物种选择
以选择哺乳动物为主。目前实际应用中以大鼠和小 鼠为主，尤以大鼠使用很多。需指出大鼠并非对外来 化合物都最敏感。家兔常用于研究化合物的皮肤毒性， 包括对粘膜的刺激。猫、狗也用于急性毒性试验，但 因价贵不易于大量使用。猪为杂食动物，对一些化合 物的生物效应表现与人有相似之处，尤其是皮肤结构 与人较近似。但因体大、价贵，不便大量使用。
化合物急性毒性研究选择实验动物的原则
（1）基本原则
➢ 选择对受试物敏感的物种 ➢ 在代谢、生理和对受试物毒理学特征与人相近的物种 ➢ 遗传背景明确、个体特征清楚的物种 ➢ 经济并易于获得、饲养的物种
（2）种的选择
➢动物试验结果 ➢化合物对人的潜在危害
（3）个体选择
➢健康状况、年龄、体重、性别、生理状况
② 动式吸入：是指实验动物处于空气流动的染毒柜中， 染毒柜装置备有新鲜空气补入与含受试化合物空气排出的动 力系统和随时补充受试化合物的配气系统。动式吸入接触方 式一般来讲优于静式吸入接触，但其装置复杂，消耗受试化 合物的量大，易于污染操作室环境。
3.经皮肤接触
液态、粉尘态和气态外来化合物匀有接触皮肤的机会。有的化合物 不仅能与外露皮肤接触并吸收，还有的化合物可以穿透衣服而经皮 肤吸收。
(1) 经皮肤吸收 研究外来化合物经皮肤吸收应当尽量选择皮肤解 剖、生理与人类较近似的动物为对象，目前多选用家兔和豚鼠。但 由于研究化合物经皮肤吸收的毒性(求经皮LD50)所需的实验动物较 多，使用家兔、豚鼠不够经济，也常用大鼠代替。
定性试验：为考察一个外来化合物能否经皮吸收引起中毒，可先 进行定性试验。小鼠或大鼠的浸尾试验是常用的定性试验方法。
(2) 吞咽胶囊: 将一定剂量受试化合物装入药用胶囊内，强制放到 动物的舌后后咽部迫使动物咽下。此种方式剂量准确，尤其适用于易 挥发、易水解和有异味的化合物。家兔及猫、狗等大动物可用此法。
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急性毒性试验设计
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实验方法
• 1、实验动物的选择 • 2、剂量设计及随机化分组 • 3、受试物的配制 • 4、染毒途径的选择 • 5、毒性反应的观察与LD50的计算 • 6、急性毒性的评价
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一、 实验动物选择
1、物种和品系
对外源化学物毒性反应与人近似易于饲养管理 方便实验 操作易于获得 繁殖生育力强 数量较大能够保障 品系纯化，价格低廉。
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实验动物的标记
染色法
编号方法：小鼠头部为1号，顺时针编 号，用苦味酸编个位数，用伊红编十位 数。
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染色法
优点： 简单方便，不痛苦，无损伤。
缺点： 时间较长时，染色剂易褪色； 标记容易模糊不清。
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剂量选择及分组
• 剂量选择
四 3 11 16 17 20
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受试物的配制方法
（1）受试化学物的量取：
• 固体受试物用称量法，液体受试物用称量法或吸量法。
• 称量法：取一定量的受试物放入已知重量的容器内，称重，定 容，计算浓度mg/ml，备用。
• 吸量法：依设计剂量计算出应吸取液态受试物的容积，加入容 量瓶中，用溶剂加至刻度。
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通过预试，找出受试化学物引起动物死亡 的大致剂量范围，以此为依据设计正式试验的剂量和 分组。
按下式设计剂量组：
r n 1 b a
式中：r—相邻两组剂量的比值，一般为1.2～
1.5，
b—最低全致死剂量量，
a—最高不致死剂量，
n—设计的组数。
分组恰当与否也是确保实验结果准确的条件之
• 动物数量：动物 • 生理与健康状况：
6组，1-5组为实验
未产未孕者、健康 动物
组，6组为蒸馏水 对照组
• 实验动物的预检 • 实验动物的给药前
• 性别：雌雄各半
禁食处理。
• 年龄：成年动物
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健康动物标志
发育正常、体态丰满、外观无畸形； 被毛浓密、贴顺有光泽、不蓬乱； 胸阔宽阔、脊柱不弓不弯； 眼睛明亮； 表皮无溃疡、无结痂（注意尾巴）； 各天然孔干净、无分泌物； 行动灵活、反应敏捷。
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组员：程旺、高思杰、后若兰 高阳、陈刚
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一、急性毒性
急性毒性指人或动物一次或24 h之 内多次接触外源化学物后，在短期内 所发生的毒性效应，包括致死效应。
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一次：指瞬间给实验动物染毒，如经 口、经静脉注射染毒。 24 h之内多次：指外源化学物毒性过 低，需给予动物较大剂量。
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2、 实验动物的年龄与体重
动物
大鼠 小鼠 豚鼠 兔 犬 猫
成年年龄（周） 3 2 2 3~4 3~4 3~4
体重（克） 150 15 250 1.5kg 7~15kg 1kg
寿命（年） 2~3 2~3 6~8 4~9 15~20 10~12
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3、实验动物的一般要求
一。因为组数过多，需要消耗较多的动物，还可
能出现较大剂量组动物死亡率低于较小剂量组；
组数过少，不能较精急性确毒性求试验出设计LD50。
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根据公比(r)计算各组剂量 各组剂量分别为
第一组：a 第二组：a r 第三组：a r2 第四组：a r3 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ五组：a r4 第六组：a r5
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吸量法，计算公式为：X＝
A ·V
式中：
d×1000
X——应吸取受试物的容积；
A——设计要求的受试物浓度（ mg/ml ）；
V——容量瓶容积（ml）；
d——受试化学物比重；
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受试物的配制方法
（2）受试化学物的稀释 • 等浓度稀释法： • 等容量稀释法：
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完全随机分配后各组所属动物号
组别
动物编号
一4 7 二1 5
9 12 8 13 20 14
三 2 6 10 15 18 19
四 3 11 16 17
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20只动物完全随机分配的结果
组别
动物编号
一 4 7 9 12 19
二1 三2
5 8 13 14 6 10 15 18
随机化分组
将实验动物编号，从随机数字表上任意横行或 纵行的任意数字开始，顺序取下数字，标于每个 动物号下，然后用计划组数去除随机数字，所得 余数即为所属组别。
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以20只动物的完全随机分配为例
动物编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 随即数字 54 83 80 53 90 75 53 78 93 47 72 09 54 66 95 44 68 67 67 86 除4后余数 2 3 0 1 2 3 1 2 1 3 0 1 2 2 3 0 0 3 3 2 所属组别 二 三 四 一 二 三 一 二 一 三 四 一 二 二 三 四 四 三 三 二
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急性毒性效应出现的快慢和毒性反应的强度与外 源化学物的性质和染毒剂量的大小有关。
如：丙烯腈，过氧化二碳酸二环己酯
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丙烯腈经口急性毒性试验设计
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5
实验目的
• 评价丙烯腈的毒性作用，求出半数致死量LD50， 并根据LD50进行急性毒性分级，
• 掌握实验动物随机分组的方法和经口灌胃的技 术。
• 观察丙烯腈急性中毒症状；为后续试验提供依 据；为毒理学机制研究提供线索。
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器材与试剂
• 1、实验动物 ICR小鼠（健康成年小鼠） • 2、实验器材 灌胃针、注射器、吸管、容量瓶、
烧杯、滴管、电子天平、动物体重秤、外科剪 刀、镊子 • 3、实验试剂 丙烯腈、苦味酸酒精饱和液、伊 红染液
✓广泛查阅文献资料，估计毒性中值 ✓预试，求出待测化学物0 %~100 %或
10 %~90 %的大致致死剂量范围 ✓设计正式试验的剂量和分组
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预实验：
总的原则是先用少量动物，以较大的剂
量间距染毒，求出粗略的致死剂量范围， 即确定受试动物全部致死的最小剂量（b） 和全部不致死的最大剂量（a），即求出 待测化学物0 %~100 %的大致致死剂 量范围，然后在这个剂量范围内按几何 级数的间距设计5~7个剂量组，组间剂 量呈等比级数（r），其比值为1.2~1.5。 进行正式实验。