急性毒性试验设计ppt课件
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急性毒性试验设计
组员：程旺、高思杰、后若兰 高阳、陈刚
急性毒性试验设计
1
一、急性毒性
急性毒性指人或动物一次或24 h之 内多次接触外源化学物后，在短期内 所发生的毒性效应，包括致死效应。
急性毒性试验设计
2
一次：指瞬间给实验动物染毒，如经 口、经静脉注射染毒。 24 h之内多次：指外源化学物毒性过 低，需给予动物较大剂量。
一。因为组数过多，需要消耗较多的动物，还可
能出现较大剂量组动物死亡率低于较小剂量组；
组数过少，不能较精急性确毒性求试验出设计LD50。
18
根据公比(r)计算各组剂量 各组剂量分别为
第一组：a 第二组：a r 第三组：a r2 第四组：a r3 第五组：a r4 第六组：a r5
急性毒性试验设计
19
急性毒性试验设计
3
急性毒性效应出现的快慢和毒性反应的强度与外 源化学物的性质和染毒剂量的大小有关。
如：丙烯腈，过氧化二碳酸二环己酯
急性毒性试验设计
4
丙烯腈经口急性毒性试验设计
急性毒性试验设计
5
实验目的
• 评价丙烯腈的毒性作用，求出半数致死量LD50， 并根据LD50进行急性毒性分级，
• 掌握实验动物随机分组的方法和经口灌胃的技 术。
急性毒性试验设计
9
2、 实验动物的年龄与体重
动物
大鼠 小鼠 豚鼠 兔 犬 猫
成年年龄（周） 3 2 2 3~4 3~4 3~4
体重（克） 150 15 250 1.5kg 7~15kg 1kg
寿命（年） 2~3 2~3 6~8 4~9 15~20 10~12
急性毒性试验设计
10
3、实验动物的一般要求
随机化分组
将实验动物编号，从随机数字表上任意横行或 纵行的任意数字开始，顺序取下数字，标于每个 动物号下，然后用计划组数去除随机数字，所得 余数即为所属组别。
急性毒性试验设计
20
以20只动物的完全随机分配为例
动物编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 随即数字 54 83 80 53 90 75 53 78 93 47 72 09 54 66 95 44 68 67 67 86 除4后余数 2 3 0 1 2 3 1 2 1 3 0 1 2 2 3 0 0 3 3 2 所属组别 二 三 四 一 二 三 一 二 一 三 四 一 二 二 三 四 四 三 三 二
✓广泛查阅文献资料，估计毒性中值 ✓预试，求出待测化学物0 %~100 %或
10 %~90 %的大致致死剂量范围 ✓设计正式试验的剂量和分组
急性毒性试验设计
16
预实验：
总的原则是先用少量动物，以较大的剂
量间距染毒，求出粗略的致死剂量范围， 即确定受试动物全部致死的最小剂量（b） 和全部不致死的最大剂量（a），即求出 待测化学物0 %~100 %的大致致死剂 量范围，然后在这个剂量范围内按几何 级数的间距设计5~7个剂量组，组间剂 量呈等比级数（r），其比值为1.2~1.5。 进行正式实验。
急性毒性试验设计
24
吸量法，计算公式为：X＝
A ·V
式中：
d×1000
X——应吸取受试物的容积；
A——设计要求的受试物浓度（ mg/ml ）；
V——容量瓶容积（ml）；
d——受试化学物比重；
急性毒性试验设计
25
受试物的配制方法
（2）受试化学物的稀释 • 等浓度稀释法： • 等容量稀释法：
急性毒性试验设计
• 观察丙烯腈急性中毒症状；为后续试验提供依 据；为毒理学机制研究提供线索。
急性毒性试验设计
6
器材与试剂
• 1、实验动物 ICR小鼠（健康成年小鼠） • 2、实验器材 灌胃针、注射器、吸管、容量瓶、
烧杯、滴管、电子天平、动物体重秤、外科剪 刀、镊子 • 3、实验试剂 丙烯腈、苦味酸酒精饱和液、伊 红染液
急性毒性试验设计
21
完全随机分配后各组所属动物号
组别
动物编号
一4 7 二1 5
9 12 8 13 20 14
三 2 6 10 15 18 19
四 3 11 16 17
急性毒性试验设计
22
20只动物完全随机分配的结果
组别
Baidu Nhomakorabea动物编号
一 4 7 9 12 19
二1 三2
5 8 13 14 6 10 15 18
四 3 11 16 17 20
急性毒性试验设计
23
受试物的配制方法
（1）受试化学物的量取：
• 固体受试物用称量法，液体受试物用称量法或吸量法。
• 称量法：取一定量的受试物放入已知重量的容器内，称重，定 容，计算浓度mg/ml，备用。
• 吸量法：依设计剂量计算出应吸取液态受试物的容积，加入容 量瓶中，用溶剂加至刻度。
急性毒性试验设计
17
通过预试，找出受试化学物引起动物死亡 的大致剂量范围，以此为依据设计正式试验的剂量和 分组。
按下式设计剂量组：
r n 1 b a
式中：r—相邻两组剂量的比值，一般为1.2～
1.5，
b—最低全致死剂量量，
a—最高不致死剂量，
n—设计的组数。
分组恰当与否也是确保实验结果准确的条件之
• 动物数量：动物 • 生理与健康状况：
6组，1-5组为实验
未产未孕者、健康 动物
组，6组为蒸馏水 对照组
• 实验动物的预检 • 实验动物的给药前
• 性别：雌雄各半
禁食处理。
• 年龄：成年动物
急性毒性试验设计
11
健康动物标志
发育正常、体态丰满、外观无畸形； 被毛浓密、贴顺有光泽、不蓬乱； 胸阔宽阔、脊柱不弓不弯； 眼睛明亮； 表皮无溃疡、无结痂（注意尾巴）； 各天然孔干净、无分泌物； 行动灵活、反应敏捷。
急性毒性试验设计
7
实验方法
• 1、实验动物的选择 • 2、剂量设计及随机化分组 • 3、受试物的配制 • 4、染毒途径的选择 • 5、毒性反应的观察与LD50的计算 • 6、急性毒性的评价
急性毒性试验设计
8
一、 实验动物选择
1、物种和品系
对外源化学物毒性反应与人近似易于饲养管理 方便实验 操作易于获得 繁殖生育力强 数量较大能够保障 品系纯化，价格低廉。
急性毒性试验设计
12
实验动物的标记
染色法
编号方法：小鼠头部为1号，顺时针编 号，用苦味酸编个位数，用伊红编十位 数。
急性毒性试验设计
13
急性毒性试验设计
14
染色法
优点： 简单方便，不痛苦，无损伤。
缺点： 时间较长时，染色剂易褪色； 标记容易模糊不清。
急性毒性试验设计
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剂量选择及分组
• 剂量选择
组员：程旺、高思杰、后若兰 高阳、陈刚
急性毒性试验设计
1
一、急性毒性
急性毒性指人或动物一次或24 h之 内多次接触外源化学物后，在短期内 所发生的毒性效应，包括致死效应。
急性毒性试验设计
2
一次：指瞬间给实验动物染毒，如经 口、经静脉注射染毒。 24 h之内多次：指外源化学物毒性过 低，需给予动物较大剂量。
一。因为组数过多，需要消耗较多的动物，还可
能出现较大剂量组动物死亡率低于较小剂量组；
组数过少，不能较精急性确毒性求试验出设计LD50。
18
根据公比(r)计算各组剂量 各组剂量分别为
第一组：a 第二组：a r 第三组：a r2 第四组：a r3 第五组：a r4 第六组：a r5
急性毒性试验设计
19
急性毒性试验设计
3
急性毒性效应出现的快慢和毒性反应的强度与外 源化学物的性质和染毒剂量的大小有关。
如：丙烯腈，过氧化二碳酸二环己酯
急性毒性试验设计
4
丙烯腈经口急性毒性试验设计
急性毒性试验设计
5
实验目的
• 评价丙烯腈的毒性作用，求出半数致死量LD50， 并根据LD50进行急性毒性分级，
• 掌握实验动物随机分组的方法和经口灌胃的技 术。
急性毒性试验设计
9
2、 实验动物的年龄与体重
动物
大鼠 小鼠 豚鼠 兔 犬 猫
成年年龄（周） 3 2 2 3~4 3~4 3~4
体重（克） 150 15 250 1.5kg 7~15kg 1kg
寿命（年） 2~3 2~3 6~8 4~9 15~20 10~12
急性毒性试验设计
10
3、实验动物的一般要求
随机化分组
将实验动物编号，从随机数字表上任意横行或 纵行的任意数字开始，顺序取下数字，标于每个 动物号下，然后用计划组数去除随机数字，所得 余数即为所属组别。
急性毒性试验设计
20
以20只动物的完全随机分配为例
动物编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 随即数字 54 83 80 53 90 75 53 78 93 47 72 09 54 66 95 44 68 67 67 86 除4后余数 2 3 0 1 2 3 1 2 1 3 0 1 2 2 3 0 0 3 3 2 所属组别 二 三 四 一 二 三 一 二 一 三 四 一 二 二 三 四 四 三 三 二
✓广泛查阅文献资料，估计毒性中值 ✓预试，求出待测化学物0 %~100 %或
10 %~90 %的大致致死剂量范围 ✓设计正式试验的剂量和分组
急性毒性试验设计
16
预实验：
总的原则是先用少量动物，以较大的剂
量间距染毒，求出粗略的致死剂量范围， 即确定受试动物全部致死的最小剂量（b） 和全部不致死的最大剂量（a），即求出 待测化学物0 %~100 %的大致致死剂 量范围，然后在这个剂量范围内按几何 级数的间距设计5~7个剂量组，组间剂 量呈等比级数（r），其比值为1.2~1.5。 进行正式实验。
急性毒性试验设计
24
吸量法，计算公式为：X＝
A ·V
式中：
d×1000
X——应吸取受试物的容积；
A——设计要求的受试物浓度（ mg/ml ）；
V——容量瓶容积（ml）；
d——受试化学物比重；
急性毒性试验设计
25
受试物的配制方法
（2）受试化学物的稀释 • 等浓度稀释法： • 等容量稀释法：
急性毒性试验设计
• 观察丙烯腈急性中毒症状；为后续试验提供依 据；为毒理学机制研究提供线索。
急性毒性试验设计
6
器材与试剂
• 1、实验动物 ICR小鼠（健康成年小鼠） • 2、实验器材 灌胃针、注射器、吸管、容量瓶、
烧杯、滴管、电子天平、动物体重秤、外科剪 刀、镊子 • 3、实验试剂 丙烯腈、苦味酸酒精饱和液、伊 红染液
急性毒性试验设计
21
完全随机分配后各组所属动物号
组别
动物编号
一4 7 二1 5
9 12 8 13 20 14
三 2 6 10 15 18 19
四 3 11 16 17
急性毒性试验设计
22
20只动物完全随机分配的结果
组别
Baidu Nhomakorabea动物编号
一 4 7 9 12 19
二1 三2
5 8 13 14 6 10 15 18
四 3 11 16 17 20
急性毒性试验设计
23
受试物的配制方法
（1）受试化学物的量取：
• 固体受试物用称量法，液体受试物用称量法或吸量法。
• 称量法：取一定量的受试物放入已知重量的容器内，称重，定 容，计算浓度mg/ml，备用。
• 吸量法：依设计剂量计算出应吸取液态受试物的容积，加入容 量瓶中，用溶剂加至刻度。
急性毒性试验设计
17
通过预试，找出受试化学物引起动物死亡 的大致剂量范围，以此为依据设计正式试验的剂量和 分组。
按下式设计剂量组：
r n 1 b a
式中：r—相邻两组剂量的比值，一般为1.2～
1.5，
b—最低全致死剂量量，
a—最高不致死剂量，
n—设计的组数。
分组恰当与否也是确保实验结果准确的条件之
• 动物数量：动物 • 生理与健康状况：
6组，1-5组为实验
未产未孕者、健康 动物
组，6组为蒸馏水 对照组
• 实验动物的预检 • 实验动物的给药前
• 性别：雌雄各半
禁食处理。
• 年龄：成年动物
急性毒性试验设计
11
健康动物标志
发育正常、体态丰满、外观无畸形； 被毛浓密、贴顺有光泽、不蓬乱； 胸阔宽阔、脊柱不弓不弯； 眼睛明亮； 表皮无溃疡、无结痂（注意尾巴）； 各天然孔干净、无分泌物； 行动灵活、反应敏捷。
急性毒性试验设计
7
实验方法
• 1、实验动物的选择 • 2、剂量设计及随机化分组 • 3、受试物的配制 • 4、染毒途径的选择 • 5、毒性反应的观察与LD50的计算 • 6、急性毒性的评价
急性毒性试验设计
8
一、 实验动物选择
1、物种和品系
对外源化学物毒性反应与人近似易于饲养管理 方便实验 操作易于获得 繁殖生育力强 数量较大能够保障 品系纯化，价格低廉。
急性毒性试验设计
12
实验动物的标记
染色法
编号方法：小鼠头部为1号，顺时针编 号，用苦味酸编个位数，用伊红编十位 数。
急性毒性试验设计
13
急性毒性试验设计
14
染色法
优点： 简单方便，不痛苦，无损伤。
缺点： 时间较长时，染色剂易褪色； 标记容易模糊不清。
急性毒性试验设计
15
剂量选择及分组
• 剂量选择