生物制品无菌检验 操作及其的注意事项共15页
医疗器械产品无菌检验操作规程
医疗器械产品无菌检验操作规程在医疗领域，无菌检验是确保手术器械和医疗用品的无菌性的重要程序。
无菌检验的目的是保证医疗器械产品在使用过程中不会引发感染，从而保障病患的安全。
正确的操作规程对于无菌检验至关重要，下面将介绍一套涵盖多个方面的医疗器械产品无菌检验操作规程。
首先，在进行无菌检验之前，操作人员应当做好个人防护。
这包括正确佩戴防护手套、口罩、帽子和无尘服等。
这些措施旨在有效防止潜在的污染源对待检器械产生影响。
同时，操作人员要做到洁净双手，勤洗勤消毒。
其次，在检验过程中，操作人员应该严格执行消毒程序，确保工作环境的洁净度。
在操作过程中，应避免过多的谈话，减少细菌的传播。
同时，操作台面、工作区域和操作的器械等都应该进行定期的清洁和消毒。
只有保持良好的消毒环境，才能确保检验结果的准确性。
在实施无菌检验时，操作人员需要注意选择合适的检测方法。
根据医疗器械产品的特点和使用领域的不同，选择合适的指标和试验方法是十分重要的。
例如，一些高级手术器械需要进行生物指示器试验来检验其灭菌效果，而一些常用的医疗用品则可以通过物理指标进行检测，例如斯特林试验等。
在实施无菌检验时，操作人员也需要关注器械本身的无菌特性。
比如，要确保手术器械在运输过程中没有受到损坏或者污染。
同时，要保证器械的包装完好无损，防止任何尘土或异物进入包装内部。
另外，操作人员在进行无菌检验时，需要严格遵守操作规范，确保操作的严密性和准确性。
例如，在打开包装之前，要先检查包装是否完好，如发现有任何不正常情况，必须重新选择无菌包装进行检验。
在打开包装后，操作人员应在洁净工作台上进行操作，避免接触任何非无菌区域。
操作人员还需要关注无菌实验室的环境条件。
实验室的通风、温度和湿度等环境因素都会对无菌检验的结果产生影响。
因此，操作人员需要确保实验室的环境符合规范要求，并按照规程进行工作。
实验室设备也需要经过严格的校准和维护，确保其正常运行。
在无菌检验的过程中，操作人员还应该保持耐心和细心，遵守操作步骤，确保每一步都得到正确执行。
无菌试验操作检验规程
1 范围适用于本规程规定的医疗器械的无菌试验方法。
无菌检查法系用于检杳要求无菌的医疗器械、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
本试验系将医疗器械或其浸提液接种于培养基内，以检验供试品是否有细菌和真菌污染。
2 引用标准GB/T 14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法。
第2部分:生物学试验方法。
《中华人民共和国药典（2015年版）》菌片标准按生物菌片供应商提供的方法进行3器材及试剂3.1器材:a)试管b)酒精灯c)75%乙醇棉d)灭菌刻度吸管(1mL)e)灭菌平皿(9cm)f）勺锥形瓶g)三角烧瓶h)灭菌剪刀、镊子i)恒温培养箱j)生化培养箱k)高压蒸汽灭菌器l)电热千燥箱3.2培养基及试剂:a)流体硫乙醇酸盐培养基b)改良马丁培养基c)营养琼脂培养基3.3稀释液、冲洗液及其制备方法:3.3.1 质量浓度为9g/L的无菌氯化钠溶液;3.3.2 0.1%蛋白胨水溶液:取蛋白胨1.0g，加水1000mL，微温溶解，滤清，调节pH值至7.1 ± 0.2，分装、灭菌。
3.3.3 pH7.0氯化钠一蛋白陈缓冲液:取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钠7.23g,氯化钠4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000mL，微温溶解、滤清、分装、灭菌。
4实验操作:4.1实验前准备:4.1.1培养基要求:用于培养需(厌)气菌和真菌的培养基的制备、培养基灵敏度检查及其他各项要求应符合《中国药典(二部)》附录中《无菌检查法》的规定。
培养基可按药典的处方制备，也可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。
制备后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境。
培养基若保存于非密闭容器中，一般在三周内使用;若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
4.1.2器具灭菌:与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸气灭菌器内121℃30min,或置电热干燥箱内160℃——2h。
无菌检验隔离器安全操作及保养规程
无菌检验隔离器安全操作及保养规程一、前言无菌检验隔离器（Sterility Testing Isolator，简称STI）是一种广泛应用于生物制品无菌检测的设备，用于防止样品受到外界污染和保护操作人员免受生物制品的暴露。
本文档旨在规范STI的使用和保养，避免不必要的设备事故和样品污染，旨在更好地维护生产环境的卫生和健康。
二、 STI的安全操作1. 人员要求使用STI的操作人员应通过相关培训并持有相关的证件或资格证书。
被安排操作STI的人员应定期接受相关技能培训，只有在完全掌握专业知识和具备必要的操作技能后，才可使用该设备进行实验操作。
2. 操作前准备在操作STI前，应先确认STI的密封性和过滤系统的正常工作状态。
对于密封性检查，可以将压力计置于STI内口并进行检查。
对于过滤系统的检查，可以通过紫外线灯对过滤效率进行检测。
同时需要在STI 内部放置无菌工作台准备好所需的操作设备和材料。
3. 操作过程在进行操作STI实验前，必须先穿戴好必要的个人防护装备。
在操作过程中要特别注意防止STI内部与外部环境之间的污染，提高对样本的保护和实验的精度。
当实验结束后，还需在设备内进行过渡残留物和样品的删除、设备内部的消毒和清洁。
4. 操作注意事项•禁止在STI内部进行磕碰等激烈操作；•禁止在STI内部使用含有粉尘的物品；•避免使用含有重金属的物质；•禁止在STI内部使用化学物品，如酸、碱等强腐蚀性物质；•对样品进行采样时需注意气压平衡；•切勿在STI内吸烟或进食；•确保操作过程中无人将手指伸入STI内部或放入其他设备。
三、 STI的保养1. 定期保养STI应按厂家要求定期进行保养和进行相关部件的更换。
通常可根据操作手册要求在实验后对设备进行排查和检测，及时更换个部件，检查起动装置和出料装置等各项设备的工作状态。
2. 日常维护日常维护包括使用完毕后要对STI进行清理、洗涤和消毒。
并要检查后可以启动对设备的LED灯、过滤系统和压力计等进行检查。
无菌检验操作规程.
医疗器械产品无菌检验操作规程1目的通过无菌检验,确保灭菌后产品能够达到无菌的要求。
2适用范围适用于灭菌后医疗器械产品的无菌检验。
3检验依据《中国药典》 (2005年版GB14233.2-2005医用输液、输血、注射器具检验方法第二部分:生物试验方法GB15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准4仪器、设备超净工作台、电热干燥箱、电热恒温培养箱、霉菌培养箱、压力蒸汽灭菌器、集菌仪(器、电子天平、 PH 计、冰箱、恒温水浴锅、酒精灯、三角烧瓶,接种环、无菌棉签、镊子,试管架,大试管若干等。
5无菌检验室的环境要求5.1无菌检验应在环境洁净度 10000级下的局部百级的单向流空气区域内进行。
5.2缓冲区与外界环境、无菌检验室与缓冲区之间空气应保持正压,阳性对照室与缓冲区之间空气应保持负压。
无菌检验室与室外大气之间静压差应大于 10Pa 。
无菌检验室的室温应保持 18~26℃,相对湿度:45~65%。
5.3无菌检验室的单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室(区悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的监测。
每年至少检测一次。
5.4无菌检验过程中应同时检查超净工作台单向流空气中的菌落数:每次操作时在层流空气所及台面的左中右置 3个营养琼脂平板,暴露 30min ,于 30~35℃培养 48小时,菌落数平均应不超过 1CFU/平板。
6无菌检验前的准备6.1器具灭菌、消毒6.1.1灭菌:试验过程中与供试品接触的所有器具必须采用可靠方法灭菌。
可经电热干燥箱 160℃以上干烤 2小时,或置压力蒸汽灭菌器内 121℃蒸汽灭菌 30分钟后使用(根据灭菌效果验证决定灭菌参数。
所有的灭菌物品不应超过 2周即用毕, 否则应重新灭菌。
6.1.2消毒:凡检验中使用的器材无法灭菌处理的,使用前必须经消毒处理。
如无菌检验室的试管架、电子天平、工作台面、工作人员的手、橡胶吸头等。
兽用生物制品无菌检验操作规程
一、目的：规范无菌检验操作。
二、适用范围：适用于无菌检验操作。
三、职责：进行该项检验的检验员应严格按规程进行操作。
四、内容：1 抽样应随机取样并注意代表性。
1.1 制造疫苗用的各种原毒液和其他配苗组织乳剂、稳定剂及半成品的无菌检验，应每瓶（罐）分别进行，抽样量为2~10ml。
1.2 成品的无菌检验应按每批或每个亚批进行，每批按瓶数的百分之一抽样，但不应少于5瓶，最多不超过10瓶，每瓶分别进行检验。
2 检验用培养基2.1 无菌检验2.1.1 硫乙醇酸盐流体培养基（TG）用于厌氧性及需氧性细菌的检验。
2.1.2 胰酪大豆胨液体培养基（TSB）用于真菌及需氧菌检验。
3 检验方法及结果判定3.1 病毒原毒液和其他配苗组织乳剂、稳定剂及半成品的无菌检验取样品接种TG小管2支，每支0.2ml，1支置35~37℃培养，1支置23~25℃培养，另取0.2ml，接种1支TSB小管，置23~25℃培养，均培养7日，应无菌生长。
3.2 灭活病毒液的无菌检验病毒液灭活后，接种TG小管2支，每支0.2ml，1支置35~37℃培养，1支置23~25℃培养，另取0.2ml，接种一支TSB小管，置23~25℃培养，均培养7日，应无菌生长。
3.3 类毒素的无菌检验毒素脱毒过滤后，接种TG小管2支，每支0.2ml，1支置35~37℃培养，1支置23~25℃培养，另取0.2ml，接种一支TSB小管，置23~25℃培养，均培养7日，应无菌生长。
3.6 成品的无菌检验样品（原）装量大于1.0ml的，取处理好的样品1.0ml，样品（原）装量小于1.0ml 的，取其处理好的样品的全部内容物，接种50ml TG培养基，置35~37℃培养，3日后吸取培养物，接种TG小管2支，每支0.2ml，1支置35~37℃培养，1支置23~25℃培养，另取0.2ml，接种一支TSB小管，置23~25℃培养，均培养7日，应无菌生长。
如果允许制品中含有一定数量的非病原菌，应进一步做杂菌计数和病原性鉴定。
微生物实验操作注意事项
微生物实验注意事项一、无菌操作要求1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。
2.进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。
应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。
3.接种食品样品时，4.进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。
5.从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。
6.接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。
7.接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。
8.吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。
二、无菌间使用要求1.无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7m2的小窗，以备进入无菌间后传递物品。
2.无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。
打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W3.无菌间使用前后应将门关紧，紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。
4.处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。
5.在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置三、消毒灭菌要求微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。
（一）干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法1．灭菌前准备（1）所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。
生物制品无菌检验规程
生物制品无菌试验规程生物制品不得含有杂菌（有专门规定者除外），灭活菌苗、疫苗不得含有活的本菌、本毒。
在制造过程中应由制造部门按各制品制造及检定规程规定进行无菌试验，分装后的制品须经质量检定部门做最后检定。
各种生物制品的无菌试验除有专门规定者外，均应按照本规程的规定进行。
1抽样1.1原液及半成品原液及半成品应每瓶分别进行无菌试验，其抽样量应至少为0.1%，但不得少于1.0ml。
1.1.1大罐稀释的制品抽样数量不得少于10ml。
1.1.2原液及半成品每开瓶一次，应如上法抽验。
1.2成品每亚批均应进行无菌试验，样品应随机抽取，应具有代表性（包括分装过程的前、中、后样品）。
1.2.1分装量在100支（瓶）或以下者抽检不少于5支，101～500支（瓶）者抽检不少于10支（瓶），501～100支（瓶）者抽检不少于20支（瓶，10001支（瓶）以上者抽检40支（瓶）。
1.2.2每瓶装量20ml以上的冻干血液制品，每柜冻干200瓶以下者抽检2瓶，200瓶及以上者抽检4瓶。
6～20ml抽检量加倍。
5ml和5ml以下者按1.2.1项抽检。
1.3凡规定需作支原体检查的制品，均应在半成品时按亚批进行检查，成品可不再做。
2无菌试验用培养基（培养基处方可附录1）2.1检查制品中本菌是否存活应采用适于本菌发育生长的培养基（在半成品时检查，有专门规定者除外）。
2.2检查需氧性和厌氧性杂菌应采用硫乙醇酸盐培养基。
检查不含汞类防腐剂制品中的需氧性和厌氧性杂菌时，该培养基中可不加硫乙醇酸盐。
检查霉菌和腐生菌应采用改良xx培养基。
检查混浊制品可采用不含琼脂的硫乙醇酸盐培养基。
检查活菌苗时可加大琼脂含量，做成斜面。
2.3检查支原体应采用猪胃消化液半固体或牛心消化液半固体培养基。
2.4生物制品无菌试验用培养基亦可用经检定合格的干燥培养基配制。
2.5无菌试验培养基的灵敏度，乙型溶血性链球菌（32210株）应达到10-8，短芽胞杆菌（7316株）和生孢子梭状芽胞杆菌（64941株）应达到10-7，白色念珠菌（ATCc 10231）和腊叶芽枝霉应达到10-6。
无菌检查法标准操作规程
瓶（支），测PH值为：
。
灭菌温度及时间：
配制培养基批号：
灭菌后培养基数量：
指示带：
配制人：
灭菌人：
复核人：
日期：
培养基领用使用
日期 入库数量 领用数量 剩余数量 领用人 保管人 备注
（瓶/ 支）
（瓶/ 支）
（瓶/ 支）
1.3.1若每袋供试品装量按规定足够接种两份培养基，则应分别按下表进 行培养基接种：
中国药典
欧洲药典
硫乙醇酸盐流体培养基 硫乙醇酸盐流体培养基
改良马丁培养基
大豆酪蛋白消环境洁净度C级下的局部洁净度A级的单向流空气区 域。
3.实验前准备
3.1 紫外灯和空气净化系统：空气净化装置在实验前1小时开启，紫外 灯在实验前至少1个小时开启。 3.2 供试品
批出厂产品最少检验数量
供试品
柜产量 N（袋）
接种每种培养基所需的 最少检验数量
≤100
10%或4袋（取较多者）
注射剂
100＜N≤500 10袋
大体积注射剂（＞ 100ml）
＞500
2%或20袋（取较少者） 2%或10袋（取较少者）
1.3 检验量指一次试验所用供试品总量（g或ml）。采用薄膜过滤法时， 检验量不应少于直接接种法供试品的总量，只要供试品的特性允 许，应将所有容器内的全部内容物过滤。1000ml及以下规格产品， 容器的内容物全部过滤。1000ml以上，半量过滤。
无菌检查法标准操作程序要点
1目的建立一个无菌检查法标准操作程序，保证实验的准确性、可靠性。
2范围适用于原料、辅料及成品的无菌检查。
3职责微生物检验员遵照执行。
4内容无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检查的要求，检验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
4.1 培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌的培养；胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。
4.1.1 培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基或成品培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2?25°C、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在 3 周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
硫乙酵酸盐流体培养基4.1.1.1胰酪胨15. 0g 氯化钠 2. 5g酵母浸出粉 5. 0g 新配制的0. 1 % 刃天无水葡萄糖 5.0g 青溶液 1.0mlL-胱氨酸0. 5g 琼脂0. 75g硫乙醇酸钠0.5g 水1000ml(或硫乙醇酸）（0.3ml)除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节p H 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节p H , 使灭菌后在25℃的p H 值为7.1 土0.2。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色)不超过培养基深度的1/2。
(完整版)微生物实验注意事项
微生物实验注意事项1.实验过程中要及时详细标清除产物和日期，实验做完以后要对以前的过度产品做个清理，以免东西积累过多。
2.实验后的DNA和RNA要及时放回冰箱，以免时间长降解，特别是用水溶解的时候。
3.要及时甘油保存你鉴定出的细菌，每个细菌保存两份，存放在-80度冰箱里。
4.实验用的酶类虽然在室温下放一段时间也没什么问题，但还是要及时放回冰箱，以免活性降低。
5.要及时清理实验台面，保持干净，整洁，有序。
6.无菌操作台用后及时清理干净，操作真菌和细菌等最好不要交叉使用。
7.培养基使用的时候要注意无菌操作，移液器不要插入培养基中，之准许无菌枪头进入瓶子腔体，如培养基较少，可以倾斜瓶子，移液器取液体最好不要用到最大量程，以免吸液过猛导致与移液器接触。
8.灭好的培养基标签一定要写好，包括名称，日期，是否加抗生素，是否加抗生素非常重要，特别是在共用培养基的实验室。
9.实验用过的试剂盖子一定要盖好，以免挥发。
特别是有毒的物品，如氯仿，苯酚等，用完后的瓶子及时拿出实验室。
10.带手套接触有毒物品后，要及时处理掉手套。
不管是否接触过有毒物品，，不要戴着手套乱接触其他东西，如开窗等。
11.做实验过程中不要接电话，说话，考虑其他事情。
特别是3CR和配溶液的时候。
做PCR和配溶液的时候要把所用的试剂找全，一字排开，加完一种东西就把这种东西放到一边，可防止自己少加错东西。
12.同时作几个实验的时候一定要有定时器，防止自己忘记，特别是在煮东西，加热溶化溶液等危险操作的时候，切忌。
13.饭前，有活动前不要做实验，这时候匆匆忙忙非常容易出错，特别是作有危险的实验更要注意。
14.作好试验记录，不管有没有结果，一定要坚持。
还有点用图片，测序结果等，如果不清楚记录东西多了，就乱了，混了。
这个一定要认真做好。
15.要随时写下自己的想法，因为有些想法稍纵即逝。
微生物实验注意事项一、无菌操作要求1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。
2.进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。
生物制品无菌检验 操作及其注意事项
猪瘟冻干苗等，如若不污染苗在24-48h 观察时，管底有乳白絮状小量沉淀，上 透明。如若污染上部混浊，混浊度与污 染苗多少、种类而异。 （3）纯粹检验瓶管判定较难，更须仔细 观察，由于菌苗种类不同表现也有所不 同。 A . 炭疽Ⅱ苗：在普通琼脂上生长很 快，检验时可以从正面和背面进行观察 一般24h可全面生长，灰白色半透明的， 较干燥的菌苔，表面平坦，上部边缘较 薄，3-5天在菌苔表面形成，密集的
五．鉴定：
发现可疑菌落时，可按下列原则鉴定。 （1） 镜检：将可疑菌落或可疑管，在 无菌的条件下涂片，一般用革兰氏染色 后镜检。 （2） 移植：将可疑菌落或瓶管，移植 于同种或适于生长的培养基内进行观察。 （3）分离：将可疑菌落或瓶管，根据生 长情况，用马丁琼脂平板，普通琼脂平 板，或血平板进行划线分离培养。
(1) 在检验前两天，将所用的培养基按 规程规定的种类、数量准备妥当，而且 须经48h以上的培养鉴定。 (2) 培养基如发现混浊，污染或其它异常 现象时均不得使用。 (3) 工作服、鞋帽必须经高压灭菌或甲醛 熏蒸灭菌。 (4) 检验用的器具必须高压两次，这些 工作均须在前一天准备妥当。
(3) 全部接种完后，熄灭酒精灯，将 肉汤，厌气大管，用原纸帽盖好，除霉 菌培养置25℃恒温培养箱培养外，其它 所有培养物送入37℃温室培养3-5天。 (4) 根据规程规定的天数进行移植，要 领同上，并通过无菌火焰后，吸取培养 物约1ml，而后接种逐管。
三．清场处理
① 将用过的注射器煮沸消毒，一般煮沸 开锅后30分钟。 ② 无菌室内所有用具整理好，放回原位， 而后全面整理如初，无菌室用的工作服， 鞋帽等脱掉放回原处。 ③ 将把消毒好的注射器等用具清洗干净 包好送高压灭菌备用。
无菌检查法检技术与方法
无菌检查法检技术与方法
无菌检查法是一种常用的微生物检测方法，用于确定物体或环境是否存在可生长的微生物。
以下是无菌检查法的一般技术与方法：
1. 准备工作：在进行无菌检查之前，需要准备无菌培养基、培养器具（如平皿、试管等）以及所需的无菌工具（如火焰灭菌器、无菌棉签等）。
2. 灭菌操作：使用火焰灭菌器将培养器具和工具进行灭菌处理，以确保无菌状态。
3. 取样：将待检物体或环境样品采集到无菌容器中，避免外界微生物的污染。
4. 培养基接种：将采集到的样品通过无菌棉签或无菌工具划取，均匀涂布于无菌培养基的表面。
5. 培养：将涂布好的培养基平皿或试管密封好，放入恒温培养箱中，以适当的温度和时间进行培养。
6. 观察和计数：在培养一定时间后，观察培养基表面是否有生长的微生物，如菌落的形成。
可以使用显微镜观察细菌的形态。
7. 结果分析：根据观察到的菌落形态、颜色、大小等特征，结合相关标准和文献，确定是否存在可生长的微生物。
需要注意的是，无菌检查法的具体步骤和条件可能因检测对象的不同而有所变化。
同时，为了确保检测结果的准确性，无菌
操作、培养条件和培养基的选择都至关重要。
在进行无菌检查时，应严格遵守相关的操作规范和实验室安全要求。
无菌检查法标准操作程序要点
1目的建立一个无菌检查法标准操作程序，保证实验的准确性、可靠性。
2范围适用于原料、辅料及成品的无菌检查。
3职责微生物检验员遵照执行。
4内容无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检查的要求，检验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
4.1 培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌的培养；胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。
4.1.1 培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基或成品培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2?25°C、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在 3 周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
4.1.1.1 硫乙酵酸盐流体培养基页11 共页1 第胰酪胨15. 0g 氯化钠 2. 5g酵母浸出粉 5. 0g 新配制的0. 1 % 刃天无水葡萄糖 5.0g 青溶液 1.0mlL-胱氨酸0. 5g 琼脂0. 75g硫乙醇酸钠0.5g 水1000ml(或硫乙醇酸）（0.3ml)除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节p H 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节p H , 使灭菌后在25℃的p H 值为7.1 土0.2。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色)不超过培养基深度的1/2。
无菌检查和微生物限度检查操作规范
无菌检查和微生物限度检查操作规范（中国药品生物制品检定所）一、无菌室的要求：无菌室是无菌检查、微生物限度检查的重要设备，面积不小于6平米，高度2.4-2.8m为宜。
建筑材料要光洁，不吸潮，无凸起，耐腐蚀，易清洗。
无菌室内部应六面光滑，无缝隙，里面连接处应呈凹凸形，不留死角。
操作间和缓冲间的门不应直对，缓冲间两个。
无菌室内采光面积要大，照明灯应镶嵌在天花板内，光照应分布均匀，光照度不低于300lux，电源开关应设在室外。
无菌室、缓冲间和操作间均应设置紫外线杀菌灯，每立方米2-2.5瓦，距实验台高度不超过1米，并应定期检查辐射强度，距1米处应不低于70微瓦/平方厘米，无菌室内应安装空气除菌过滤层流装置及调温装置，控制温度18-26℃，相对湿度40%-60%，操作间或净化工作台的洁净空气应保持与相临环境形成正压，不低于4.9帕。
操作区洁净度100级，操作间洁净度10000级，洁净度定期检查。
无菌室及缓冲间不得存放其他杂物，如培养箱。
用消毒液清洁无菌室操作台面，开启无菌室紫外灯和层流空气过滤30分钟以上。
无菌室的无菌程度，常用的沉降菌测定方法为：取营养肉汤琼脂平板3个，置无菌室的操作区台面左、中、右位置上，开盖暴露30分钟，在30-35℃培养2天后，计算菌落数。
用于无菌检查的无菌室或微生物限度检查的无菌室，细菌总数应小于3个，浮游菌每立方米应小于5个，否则，不能用于无菌检查和微生物限度检查。
二、培养基的准备1、培养基的制备：配制培养基的蒸馏水或去离子水应符合规定。
再称取需气菌、厌气菌培养基、真菌培养基的干燥培养基，加水溶化后，调节PH值，使灭菌后需气菌、厌气菌培养基的PH值为7.0-7.3，真菌培养基的PH值为6.2-6.6，分装、盖塞、灭菌，待用。
2、培养基灵敏度试验：培养基是无菌试验的基准物质，关系到无菌试验结果的科学、准确、可信度，因此，培养基灵敏度试验是无菌试验的重要组成部分。
只有使用灵敏度试验合格的培养基，才能保证无菌试验结果准确、可靠。
生物制品及其质量控制要点ppt课件
“活毒”与“死毒”的生产场所、生产设备及器 材，须严格分开。
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3．“脱毒前”与“脱毒后”
“脱毒前”系指破伤风梭状菌、白喉杆菌繁 殖培养时，生产大量破伤风毒素及白喉毒素， 对人体有致病性，这一阶段为“脱毒前”。 “脱毒后”系指毒素中加入一定量甲醛或适 宜脱毒剂，将毒素去掉毒性，不再具有致病 性，仍保留其抗原性和免疫原性，称之为 “脱毒后”。 “脱毒前”与“脱毒后”的生产场所、生产 设备及器材须严格分开。
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细胞因子和重组DNA产品
——由健康人血细胞增值、分离、提纯或 由重组技术制成的多肽类或蛋白类制 剂。 主要产品：干扰素(IFN) 白细胞介素(IL) 集落刺激因子(CSF) 红细胞生成素 (EPO)等
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诊断制品
体外诊断制品 ——由特定抗原、抗体或有关生 物物质制成的用于体外诊断疾病的试剂或试 剂盒，如伤寒、副伤寒等细菌的诊断菌液， 沙门氏菌属诊断血清，HBsAg诊断试剂盒等。
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菌种筛选#
PCR组份１ PCR组份２
组装
PCR组份３
阳性对照*
100 000 级
隔离区
无菌检验操作规程.
医疗器械产品无菌检验操作规程1目的通过无菌检验,确保灭菌后产品能够达到无菌的要求。
2适用范围适用于灭菌后医疗器械产品的无菌检验。
3检验依据《中国药典》 (2005年版GB14233.2-2005医用输液、输血、注射器具检验方法第二部分:生物试验方法GB15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准4仪器、设备超净工作台、电热干燥箱、电热恒温培养箱、霉菌培养箱、压力蒸汽灭菌器、集菌仪(器、电子天平、 PH 计、冰箱、恒温水浴锅、酒精灯、三角烧瓶,接种环、无菌棉签、镊子,试管架,大试管若干等。
5无菌检验室的环境要求5.1无菌检验应在环境洁净度 10000级下的局部百级的单向流空气区域内进行。
5.2缓冲区与外界环境、无菌检验室与缓冲区之间空气应保持正压,阳性对照室与缓冲区之间空气应保持负压。
无菌检验室与室外大气之间静压差应大于 10Pa 。
无菌检验室的室温应保持 18~26℃,相对湿度:45~65%。
5.3无菌检验室的单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室(区悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的监测。
每年至少检测一次。
5.4无菌检验过程中应同时检查超净工作台单向流空气中的菌落数:每次操作时在层流空气所及台面的左中右置 3个营养琼脂平板,暴露 30min ,于 30~35℃培养 48小时,菌落数平均应不超过 1CFU/平板。
6无菌检验前的准备6.1器具灭菌、消毒6.1.1灭菌:试验过程中与供试品接触的所有器具必须采用可靠方法灭菌。
可经电热干燥箱 160℃以上干烤 2小时,或置压力蒸汽灭菌器内 121℃蒸汽灭菌 30分钟后使用(根据灭菌效果验证决定灭菌参数。
所有的灭菌物品不应超过 2周即用毕, 否则应重新灭菌。
6.1.2消毒:凡检验中使用的器材无法灭菌处理的,使用前必须经消毒处理。
如无菌检验室的试管架、电子天平、工作台面、工作人员的手、橡胶吸头等。
无菌检查法标准操作程序要点
1目的建立一个无菌检查法标准操作程序，保证实验的准确性、可靠性。
2范围适用于原料、辅料及成品的无菌检查。
3职责微生物检验员遵照执行。
4内容无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检查的要求，检验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
4.1 培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌的培养；胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。
4.1.1 培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基或成品培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2〜25°C、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3 周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
4.1.1.1 硫乙酵酸盐流体培养基胰酪胨15. 0g 氯化钠 2. 5g酵母浸出粉 5. 0g 新配制的0. 1 % 刃天无水葡萄糖 5.0g 青溶液 1.0mlL-胱氨酸0. 5g 琼脂0. 75g硫乙醇酸钠0.5g 水1000ml(或硫乙醇酸）（0.3ml)除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节p H 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节p H , 使灭菌后在25℃的p H 值为7.1 土0.2。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色)不超过培养基深度的1/2。