荧光显微镜
荧光显微镜分析课件
染色体染色实验
总结词
通过荧光染色技术，观察染色体的结构和数目。
详细描述
采用荧光染料对染色体进行染色，在荧光显微镜下观察染色体的形态、数目和分布，可用于研究染色 体变异、基因定位和遗传疾病等。
荧光原位杂交实验
总结词
通过荧光原位杂交技术，检测特定基因 在染色体上的位置。
VS
详细描述
利用荧光标记的探针与染色体上的特定基 因进行杂交，在荧光显微镜下观察杂交信 号的位置和强度，可用于基因定位、染色 体变异分析和遗传疾病诊断等。
荧光显微镜分析课件
目录 CONTENTS
• 荧光显微镜简介 • 荧光显微镜的基本原理 • 荧光显微镜的操作方法 • 荧光显微镜的实验技术 • 荧光显微镜的实验案例
01
荧光显微镜简介
定义与特点
定义
荧光显微镜是一种利用特定波长 的光激发细胞内或组织内的荧光 物质，从而观察细胞或组织的结 构和功能的显微镜。
重要意义。
05
荧光显微镜的实验案例
细胞核染色实验
总结词
通过荧光染色技术，观察细胞核的结构和分布。
详细描述
采用荧光染料对细胞核进行染色，在荧光显微镜下观察细胞核的形态、大小、分 布以及染色质结构，可用于研究细胞分裂、基因表达和疾病诊断等。
线粒体染色实验
总结词
通过荧光染色技术，观察线粒体的结 构和功能。
荧光共定位技术
荧光共定位技术是一种利用两种或多种 荧光染料标记细胞内不同组分，通过观 察它们的空间位置关系来研究细胞结构
和功能的技术。
通过高分辨率的荧光显微镜观察，可以 清晰地看到不同组分在细胞内的具体位
置和相互关系。
荧光共定位技术广泛应用于生物学、医 学和化学等领域，对于研究细胞内分子 相互作用和细胞生物学特性等方面具有
荧光显微镜名词解释
荧光显微镜名词解释
荧光显微镜是一种利用荧光现象观察样品的显微镜。
它通过激发样品中的荧光标记物，然后观察并记录产生的荧光信号。
荧光显微镜相比普通显微镜具有更高的分辨率和增强对细胞和分子结构的观察能力。
在荧光显微镜中，样品通常被标记上荧光染料或与荧光特性的抗体结合，使得样品在受到特定波长的激发光照射后，能够发出特定波长范围的荧光信号。
这些信号通过荧光滤光片和物镜进入显微镜系统，然后被放大和记录。
荧光显微镜常用于细胞生物学、免疫学、神经科学等领域的研究。
它可以用于观察生物样品中的细胞器、蛋白质、核酸等分子结构的位置、表达水平和相互作用关系。
同时，荧光显微镜还广泛应用于医学诊断和药物研发等实际应用中。
荧光显微镜的原理和使用方法
• 2.1 荧光显微镜旳基本装置及其光路
•
荧光显微镜因制造厂家、型号旳不同，构造
各异，但主要构件，基本相同。
• 2.1.1光源:采用高压汞灯。汞灯能以最小旳表面 发出最大数量旳紫外光和蓝光，且光亮度大，光
度稳定。汞灯旳构件，中间为一球形石英玻璃管， 有两个钨电极，内充汞滴和少许氩氖混合气体。 汞灯装在牢固旳灯室中，有调中、聚焦和集光装 置。使用中禁止频繁启闭，点亮后欲暂停使用时，
不可切断电源，可用光阀阻断光路。当汞灯熄灭 后，不能立即点亮，经5～10min，汞灯冷却后再 通电点亮。
•
HBO200Ｗ汞灯旳发射光谱为200～600nm，
• 视场光阑旳调整使用：视场光阑位于孔径光阑 之后，亦由外露手杆操纵。视场光阑用于限定样 品表面旳照明区域，其开度一般应与孔径光阑旳 开孔相当。
• 辅助激发滤色镜滑动阀旳使用:滑动阀位于镜臂 专用槽中，可拉出或推入。有三个挡位供不同使 用。全拉出位：供常规使用；中间位：用于Ｂ激 发法，辅助滤色镜进入光路；全推入位：用作光 阀，阻断全光线．
• 某些物质经波长较短旳光线照射后，分子被激活， 吸收能量后呈激发态。其能量部分转化为热量或 用于光化学反应外，相当一部分则以波长较长旳 光能形式辐射出来，这种波长长于激发光旳可见 光称作荧光。生物体内有些物质受激发光照射后 可直接发出旳荧光，称为自发荧光（如叶绿体中 旳叶绿素分子受激发所发出旳火红色旳荧光）； 本身不发荧光，在吸收荧光染料之后所发出旳荧 光称为次生荧光。常用旳荧光染料涉及丫啶橙、 荧光素、罗丹明、GFP、PI、PE、DAPI等。
荧光显微镜的工作原理
荧光显微镜的工作原理荧光显微镜是利用特定波长的光照射被检物体产生荧光进行镜检的显微光学观测技术，主要用于研究有机物和无机物等样品，一般使用荧光和磷光来检查样品的结构组织和空间分布，较适用于研究复杂且无法在传统透射光显微镜下检查的样品。
荧光显微镜与传统显微镜的区别主要有两个方面，一种是光源类型不同，另一种是使用的滤光片元件不同。
荧光的原理是某些物质会在高强度的短波长光线照射下，会发出波长稍长的发射光（荧光）。
而我们一般都是观察被激发荧光基团所发射出来的波长稍长的发射光（荧光），但是激发的光会很强，所以我们就需要把激发的光全部滤去，这样才可以看到荧光基团的发射光（荧光）。
荧光显微镜一般都用高强度的汞灯做激发光源，使用滤色片把不需要的光滤去，只留下激发荧光集团的高强度很纯的光线。
这个单色的光线通过物镜照射到样本上之后，样本会被激发出发射光（荧光），荧光和激发光都会沿着物镜光路返回，这样就需要用一个二相色镜把激发光滤去，只让我们需要看到的荧光透过。
这个荧光沿着显微镜的光路最后到达目镜下，然后进入我们的眼睛，我们就可以看到荧光基团所发出来的荧光了。
荧光显微镜可用于生物学、生物医学和材料科学，荧光显微镜有助于准确和详细地识别细胞和亚微观细胞成分。
荧光显微镜也被广泛用于组织化学领域，以检测常规显微镜无法看到的颗粒，例如神经递质胺。
它在食品化学中用于评估产品中特定食品成分的存在、结构组织和空间分布。
还有一种荧光散斑显微镜，它是一种使用荧光标记的大分子组装体（例如细胞骨架蛋白）来研究运动和周转率的技术。
荧光显微镜染色也会在矿物学领域使用，它通常用于研究煤炭、氧化石墨烯等矿物。
它还广泛用于纺织工业来分析纤维尺寸，落射荧光显微镜有助于研究基于纤维的材料（包括纸张和纺织品），不仅如此荧光显微镜的使用还可以用于荧光染料研究陶瓷孔隙率以及半导体研究领域。
荧光显微镜的分类
荧光显微镜是一种使用荧光物质和特定波长的光源来观察样本的显微镜。
荧光显微镜可以分为以下几类：1. 荧光透射显微镜（Fluorescence Transmission Microscope）：这是最常见的荧光显微镜类型，它使用荧光染料标记样本，然后通过照射特定波长的光源来激发荧光染料，并通过透射光来观察样本。
2. 荧光反射显微镜（Fluorescence Reflection Microscope）：在这种类型的显微镜中，光源从上方照射样本，而观察是通过检测反射光中的荧光信号来进行的。
这种方法适用于厚样本或需要从不同角度观察的样本。
3. 荧光共聚焦显微镜（Fluorescence Confocal Microscope）：共聚焦显微镜使用一个或多个pinholes（小孔）来聚焦样品的光线，并只允许来自特定平面的光通过，这样可以获得清晰的、无层叠的图像。
这种显微镜非常适合观察厚样本或想要获取深层结构的样本。
4. 荧光扫描显微镜（Fluorescence Scanning Microscope）：这种显微镜通过扫描光源和探测器在样本上移动，以获取整个样本区域的荧光信息。
这种方法可以用于获取高分辨率的图像，但可能需要较长的成像时间。
5. 荧光点扫描显微镜（Fluorescence Point Scanning Microscope）：这种显微镜通过逐点扫描样本来获取图像，每个点的光源和探测器都非常接近，因此可以获得高分辨率的图像。
这种方法通常用于成像较小的样本或特定区域。
6. 实时荧光显微镜（Real-time Fluorescence Microscope）：这种显微镜可以实时观察样本的荧光变化，非常适合观察动态过程，如细胞呼吸、细胞通信等。
每种类型的荧光显微镜都有其特定的应用和优势，选择合适的荧光显微镜取决于研究的需求和样本的特性。
荧光显微镜详解
森林生物工程 黄雅婷
目录
一、荧光显微镜成像原理 二、荧光显微镜的优点及应用 三、荧光显微镜的基本构造 四、荧光显微镜的使用 五、使用荧光显微镜注意事项 六、荧光镜检样品的制作注意事项 七、荧光强度计算
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一、荧光显微镜成像原理
某些物质在一定短波长的光(如紫 外光等)的照射下吸收光能进入激发态， 从激发态回到基态时, 就能在极短的时 间内放射出比照射光波长更长的光(可 见光)，这种光就称为荧光。
荧光显微镜是利用一个高发光效
率的点光源，经过滤色系统发出一定 波长的光作为激发光，激发标本内的 荧光物质发射出各种不同颜色的荧光 后，再通过物镜和目镜的放大进行观 察。
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二、荧光显微镜的优点及应用
优点：
1.检出能力高，即使荧光很微弱也易辨认，敏感性高（放大作用） 2.对细胞的刺激小（可以活体染色） 3.能进行多重染色等
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六、荧光镜检样品的制作注意事项
1. 不能使用本身能产生荧光的药剂 2. 切片标本不能太厚 3. 因石蜡可产生青色荧光，采用石蜡制片时，脱蜡必须 彻底。切片进入水后，应充分水洗，再经荧光染料处理。 4. 最好采用萤石玻璃制成的载玻片、盖玻片。 5. 封片时可采用甘油等无荧光的封固剂。
３、检测时间每次以1h为宜，超过90min，高压汞灯发光强度逐 渐下降，荧光减弱，标本经激发15min后，荧光亦明显减弱。 标本染色后立刻观察，因存放时间太久，荧光会逐渐猝灭。 可将染好色的标本用黑纸包好，存放在聚乙烯塑料袋中，4℃ 保存，可延缓荧光的猝灭时间。
4、荧光显微镜的激发装置及高压汞灯寿命有限，标本应集中检 查，节省时间
荧光显微镜基本构造
荧光显微镜基本构造
荧光显微镜是一种特殊的显微镜，它利用物质在受到紫外光的激发后发出荧光的特性来观察样品。
其基本构造包括以下部分：
1. 光源：荧光显微镜一般使用高压水银灯或氙灯作为光源，它们能够产生波长在紫外光范围的光线，激发样品发出荧光。
2. 过滤器：荧光显微镜内置多个滤光片或滤光器，用于选择性地通过或阻挡不同波长的光线。
常用的滤光片有激发滤光片和荧光滤光片。
3. 物镜：荧光显微镜的物镜是专门设计的，能够对激发和荧光光线进行聚焦和收集，以提高图像的亮度和清晰度。
4. 激发系统：激发系统是荧光显微镜的一个重要组成部分，它包括聚光镜、凸透镜和反射镜等，用于将光源发出的紫外光线聚焦在样品上。
5. 荧光滤镜轮：荧光显微镜通常配备一个荧光滤镜轮，用于在不同的观察中选择合适的激发光和荧光光线的滤镜。
6. 荧光检测器：荧光显微镜的荧光检测器能够接收样品发出的荧光信号，并将其转化为电信号。
7. 显示器和图像采集系统：荧光显微镜通常配备显示器和图像采集系统，用于显示和记录荧光显微镜观察到的图像。
以上是荧光显微镜的基本构造，不同型号和用途的荧光显微镜可能会有一些差异。
荧光显微镜使用方法
荧光显微镜使用方法
荧光显微镜是一种常用的显微镜，用于观察样品中的荧光发射。
下面是荧光显微镜的使用方法：
1. 准备样品：将待观察的样品制备好，例如细胞、组织切片等。
2. 准备溶液：根据样品的要求，准备好适当的荧光染料或荧光探针溶液。
3. 调整显微镜：将荧光显微镜调整到合适的工作状态。
首先打开显微镜的光源，调节亮度和对比度，确保适当的照明条件。
然后根据荧光染料的激发波长，选择合适的滤光片安装在光源和物镜之间。
4. 定位样品：将样品放置在显微镜的样品台上，并使用样品台上的移动装置将样品调整到适当的位置。
5. 调节对焦：使用显微镜的焦距调节旋钮或移动装置，将样品调焦到清晰的图像。
可以使用目镜调焦，然后再使用物镜调焦，以获得更高的放大倍数。
6. 切换到荧光模式：调整显微镜的光源切换到荧光模式。
根据需要，在荧光探针激发波长的范围内选择合适的激发滤光片和荧光滤光片，并将它们安装在光源和物镜之间。
7. 观察和记录图像：通过目镜观察到样品中的荧光发射，并使用显微镜配备的相机或摄像设备拍摄或记录图像。
8. 清洁和存储：使用完毕后，关闭显微镜的光源，将样品从样品台上取下，并清洁显微镜的镜头和样品台。
然后，将显微镜保存在干燥、清洁的地方，以防止灰尘和污染。
以上是荧光显微镜的基本使用方法，根据不同的实验要求和样品特性，可能还需要进行其他调整和操作。
荧光显微镜的基本原理及应用
减弱或消失，操作时注意及时用挡板阻挡激发光照射 标本。 3 汞灯关闭后需冷却30min后再重新启动（最好不要短 时间内反复开关，标本应集中观察。）
2.药物筛选
荧光探针分布是利用信号传 导中信号分子的迁移功能，将 一荧光蛋白与信号分子相偶联， 根据荧光蛋白的分布情况即可 推断信号分子的迁移状况，并 推断该分子在迁移中的功能。 由于GFP分子量小，在活细胞 内可溶且对细胞毒性较小，因 而常用作荧光探针
八、使用注意事项
1 暗室内进行，打开汞灯5-10min稳定后再观察。
A filter set consists of two barrier filters (1 and 3) and a dichroic mirror (beam-splitting 2)
三、荧光显微镜的操作
(1)安装紫外防护罩。 (2)打开高压汞灯的电源控制箱开关。 (3)插入挡光板，中断光路。 (4)预热5—10分钟。 (5)将载有样品的载玻片放到载物台上。
(9)通过粗、细螺旋调整焦距。
(10)打开与显微镜连接的计算机，点 击数码成像系统软件，采集数码图像。
四、荧光显微镜标本制作要求
（一）载玻片
载玻片厚度应在0.8～1.2mm之间，太厚 的坡片，一方面光吸收多，另一方面不能 使激发光在标本上聚集。载玻片必须光洁， 厚度均匀，无明显自发荧光。有时需用石 英玻璃载玻片。
(6)选择接物镜(按照先低倍，后高倍需要 的分光镜组件：“O”为观察透射光时 用；“WU”为观察蓝色荧光时用(如 DAPl)；“WB”为观察绿色荧光时用(如 FITC)；“WG"为观察红色荧光时用(如 TRITC)。
(8)使用阻断滤片(目前多数阻断滤片内 置于荧光显微镜)。
荧光显微镜的分类
荧光显微镜的分类全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：荧光显微镜是一种利用荧光现象观察样品的显微镜。
它通过激发荧光染料或标记的样品发出的荧光来实现对样品的观察和分析。
荧光显微镜在生物学、医学、生物化学、物理化学、材料科学等领域都有着广泛的应用。
根据不同的工作原理和结构特点，荧光显微镜可以分为不同的分类。
一、荧光显微镜的种类分类1. 常规荧光显微镜：常规荧光显微镜是最常见的一种荧光显微镜，它通常用于标记染色的生物样品的观察。
常规荧光显微镜具有高分辨率和灵敏度，能够观察到细胞和亚细胞结构的细节。
常规荧光显微镜通常配备有激光或LED光源、荧光滤光片和荧光探测器等部件。
2. 透射式荧光显微镜：透射式荧光显微镜是一种能够观察厚样品的荧光显微镜，适用于生物样品和材料样品的观察。
透射式荧光显微镜具有较大的工作距离和透射深度，能够观察到厚样品的整体结构和荧光信号分布。
3. 共焦荧光显微镜：共焦荧光显微镜是一种具有三维荧光成像能力的高级荧光显微镜，通常用于观察生物样品的三维结构和动态过程。
共焦荧光显微镜采用共焦成像技术，能够在不同深度对样品进行扫描成像，获得高分辨率的三维荧光图像。
4. 荧光瞬时成像显微镜：荧光瞬时成像显微镜是一种用于观察快速动态过程的荧光显微镜，通常用于观察细胞内信号传导、蛋白质交互作用等过程。
荧光瞬时成像显微镜具有高速成像和高灵敏度的特点，能够实时捕捉生物样品的瞬时变化。
5. 荧光共振能量转移显微镜：荧光共振能量转移显微镜是一种用于研究蛋白质相互作用和分子结构的荧光显微镜，通过荧光共振能量转移原理实现对分子间能量传递的观察。
荧光共振能量转移显微镜能够实现高分辨率的分子成像，为分子生物学研究提供重要工具。
1. 单光子激发荧光显微镜：单光子激发荧光显微镜是一种采用单个激光光子来激发荧光的显微镜，通过控制激光光子的能量和强度实现对样品的高分辨率成像。
单光子激发荧光显微镜具有高灵敏度和较小的光损伤，适用于对活细胞和生物标记的观察。
荧光显微镜放大倍数与标尺
荧光显微镜放大倍数与标尺荧光显微镜是一种利用荧光技术观察样品的显微镜。
它的放大倍数与仪器本身的设计有关，同时也与使用的镜头、物镜、目镜等有关。
标尺是用来测量显微镜观察到的物体的大小和距离的工具。
下面是荧光显微镜放大倍数与标尺相关的内容。
一、荧光显微镜放大倍数荧光显微镜的放大倍数是指物体在显微镜下观察到的图像相对于实际尺寸的放大倍数。
放大倍数一般可以分为两种：目镜放大倍数和物镜放大倍数。
1. 目镜放大倍数：目镜是位于显微镜顶部的镜筒，通常用来放大显微镜的视场。
目镜放大倍数通常为10倍、20倍或者40倍等。
目镜放大倍数越高，观察到的物体越大。
2. 物镜放大倍数：物镜是位于显微镜底部的镜筒，用于放大被观察样品的细胞和结构。
物镜放大倍数一般有4倍、10倍、40倍、60倍、100倍等。
物镜放大倍数越高，观察到的细胞和结构越清晰、更详细。
荧光显微镜的总放大倍数等于目镜放大倍数乘以物镜放大倍数。
例如，若目镜放大倍数为10倍，物镜放大倍数为40倍，则总放大倍数为400倍。
二、标尺标尺是一种用来测量长度、宽度和距离的工具。
在荧光显微镜中，标尺常用于测量样品观察图像上的物体大小或者样品中不同物体之间的距离。
1. 目测标尺：目测标尺是一种常见的标尺，它在显微镜的视场中提供了已知长度的刻度线。
通过目测标尺能够大致估计物体的大小和距离，但精度较低。
2. 单位标尺：单位标尺是一种精确的标尺，它在显微镜的视场中提供了已知长度的刻度线，并且将刻度单位明确指示。
例如，单位标尺可以是以毫米、微米或者纳米为单位的刻度线。
使用单位标尺时，可以通过计算已知刻度和样品图像上的刻度之间的比例关系来计算样品上物体的实际大小和距离。
在使用荧光显微镜进行观察时，我们可以通过测量标尺上的刻度与观察到的物体在显微镜视场中的刻度之间的比例关系来计算物体的实际大小和距离。
这样的测量方法可以在精确定量分析和实验数据记录中提供准确的参考。
综上所述，荧光显微镜的放大倍数与目镜放大倍数和物镜放大倍数相关。
荧光显微镜和普通显微镜有何区别
荧光显微镜和普通显微镜有何区别细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。
荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别：1.照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上；2.光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜；3.有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，用以保护人目。
荧光显微镜照片（微管呈绿色、微丝红色、核蓝色）倒置荧光显微镜配置如下：用途：GFM-800 系列无限远倒置荧光显微镜是由倒置生物显微镜系统和落射荧光显微镜系统组成。
采用优良的无限远光学系统，操作性能按人机工程学要求设计，紧凑稳定的高刚性主体，充分体现了显微操作的防振要求, 旋转摆入摆出式聚光系统，使操作过程中更加舒适与轻松。
GFM-800倒置荧光显微镜配有无限远长工作距离平场消色差物镜、大视野目镜、长工作距离聚光镜、同时配有相衬装置及长工作距离平场相衬物镜可对高培养瓶或培养皿内进行无沾染培养显微观察的特点;GFM-800系列倒置荧光显微镜系统采用模块化设计理念，可以安全、快揵地调整照明系统，切换荧光滤色片组件。
特别适用于对活体细胞和组织、流质、沉淀物等进行显微研究，是生物学，细胞学，肿瘤学，遗传学，免疫学等研究工作的理想仪器。
可供科研、高校、医疗、防疫和农牧等部门使用。
成像系统简介：GFM-800P 倒置电脑型荧光显微镜GFM-800S倒置数码荧光显微镜是将精锐的光学显微镜技术、先进的光电转换技术、尖端的计算机图像处理技术完美地结合在一起而开发研制成功的一项高科技产品。
可以在计算机显示器上很方便地观察荧光图像，从而对荧光图谱进行分分析，评级等对图片进行输出、打印。
技术规格：1．目镜：大视野目镜10X(Ф22) 1对对中望远镜1个（相衬装置用）2．物镜类型放大倍数数值孔径(NA) 工作距离(mm) 盖玻片厚度(mm)平场消色差物镜PL L 10X 0.25 4.3 1.2 PL L 20X 0.40 8.0 1.2 PL L 40X 0.60 3.5 1.2相衬物镜PL L 10X 0.25 4.3 1.2 PL L 20X 0.40 8.0 1.2 PL L 40X 0.60 3.5 1.23．总放大倍数：100X~400X4．聚光镜：特长工作距离聚光镜（带相衬装置）：工作距离50mm5．固定载物台尺寸：227mmX208mm.6．移动范围：纵向77mm，横向114mm7．玻璃圆载物台板尺寸：Ф118mm.培养皿托板一内槽尺寸：86mm（宽）X129.5mm（长），可适配圆形培养皿Ф87.5mm 培养皿托板二内槽尺寸：34mm（宽）X77.5mm（长），可适配圆形培养皿Ф68.5mm 培养皿托板三内槽尺寸：57mm（宽）X82mm（长）8．调焦机构：同轴粗微动调焦系统，带限位和调节松紧装置；微动手轮格值为：0.002 mm 9．目镜筒：45˚倾斜,瞳距调节范围53~75mm.10．照明系统：A.透射照明光源6V30W 卤素灯(亮度可调) 磨砂玻璃，蓝、绿滤色片B.落射荧光光源100W 超高压直流汞灯，汞灯电源箱(110V 或220V) 11．激发滤色片组：紫光发片波长：330nm~400nm 发射片波长：425nm紫外激发片波长：395nm~415nm 发射片波长：455nm蓝光激发片波长：420nm~485nm 发射片波长：515nm绿光激发片波长：460nm~550nm 发射片波长：590nm系统配套件：电脑型倒置荧光显微镜(GFM-800P): 1.倒置荧光显微镜 2.适配镜3.摄像器(CCD)4.A/D(图像采集)5.计算机(选配)数码型倒置荧光显微镜(GFM-800S): 1、倒置荧光显微镜2、适配镜3、数码相机仪器选配件：1、分划刻度目镜10X(Ф22) 物镜：5X 60X ) 4、300万像素成像器2、超长工作距离聚光镜：工作距离70mm 5、细胞分析软件3、长工作距离聚光镜（带相衬装置）：工作距离30mm.。
荧光显微镜操作说明
荧光显微镜操作说明荧光显微镜（Fluorescence Microscope）是一种用于观察荧光标记生物分子的显微镜。
荧光显微镜具有高灵敏度和高分辨率的特点，适用于细胞生物学、分子生物学、微生物学、免疫学等领域的研究。
本操作说明将介绍荧光显微镜的基本结构、操作步骤以及一些常见的注意事项。
一、荧光显微镜的基本结构荧光显微镜主要由以下几个部分组成：1. 光源系统：荧光显微镜通常使用荧光灯作为光源，荧光灯发出的紫外光经过滤波器后被用于激发样品中的荧光发射。
2. 物镜系统：荧光显微镜使用高倍物镜进行观察，一般有10x、20x、40x、60x、100x等不同倍率的物镜，可以根据需要选择合适的物镜进行观察。
3. 荧光滤光片组：荧光滤光片组由激发滤光片、切分镜和发射滤光片组成，用于选择特定波长的激发光和荧光发射光，以增强信号和抑制背景噪音。
4. 检测系统：荧光显微镜的检测系统包括物镜、光学透镜、眼镜和CCD相机等，用于接收和记录荧光发射的图像。
二、荧光显微镜的操作步骤1. 准备样品：将待观察的样品制备好，可以是细胞、组织或标记了荧光染料的生物分子。
确保样品放置在适当的载玻片上，并加上合适的封片或封装剂。
2. 打开荧光显微镜：首先，确认荧光灯是否打开并运行正常。
然后，按下启动按钮，打开荧光显微镜的电源。
3. 调节照明：调节照明系统以获得适当的亮度和对比度。
根据样品的需要，可以调整照明强度和滤光片的位置。
4. 切换滤光片：根据样品的特点和所需的荧光发射波长，选择合适的激发滤光片、切分镜和发射滤光片。
确保滤光片的位置正确，以获得所需的荧光发射信号。
5. 调节焦距和倍率：使用适当倍率的物镜进行观察，并通过调节焦距和对焦机构以获得清晰的图像。
如果需要更高的放大倍率，可以更换为更高倍率的物镜。
6. 观察样品：将载玻片放置在显微镜的样品台上，并通过移动样品台和调整操纵旋钮来观察样品。
使用眼镜或连接到计算机的CCD相机来记录荧光发射的图像。
荧光显微镜工作原理
荧光显微镜工作原理
荧光显微镜是一种利用荧光现象观察样品结构和特性的显微镜。
其工作原理主要包括刺激和感应两个过程。
刺激过程：荧光显微镜通过激发样品中的荧光分子发射荧光。
刺激光源通常使用紫外线或蓝色光来激发样品中的荧光分子。
激发光束通过物镜系统和荧光过滤器到达样品，激发样品中的荧光分子产生激发态。
激发光束通过荧光筛选器选择性地激发特定波长范围内的荧光分子。
感应过程：感应过程是观察和记录荧光显微镜中样品发出的荧光。
样品中的激发态荧光分子会自发地回落到基态并发射出荧光。
这些荧光通过物镜系统的放大和聚焦，然后通过目镜或摄像机进行观察和记录。
在荧光显微镜中，还可以使用荧光探针来增强样品的荧光信号。
荧光探针是一种特殊的染料，可以与样品中的特定分子结合，通过改变荧光分子的环境来改变荧光信号的强度和颜色。
总的来说，荧光显微镜的工作原理是通过激发样品中的荧光分子发射荧光，并通过增强荧光信号的方式观察和记录样品的结构和特性。
荧光显微镜的性能特点是怎样的
荧光显微镜的性能特点是怎样的概述荧光显微镜是用于观察荧光物质的显微镜。
荧光显微镜将样品放在荧光显微镜下的荧光光源中照射，然后观察荧光信号。
荧光显微镜具有很多独特的性能特点，使其在生物医学领域、材料科学领域、化学领域等应用广泛。
性能特点高分辨率荧光显微镜的分辨率比普通光学显微镜高得多。
这是因为荧光显微镜允许观察非常小的物质并且可以通过激光聚焦来调整焦距，从而实现更深入的观察。
高灵敏度荧光显微镜的灵敏度比普通显微镜高得多。
荧光显微镜可以检测到非常低的荧光强度，并且可以通过模拟同样的成像条件来增加灵敏度，这使得荧光显微镜适用于生物医学中的很多应用，比如对细胞中的荧光蛋白进行研究。
立体成像能力荧光显微镜在观测细胞和生物分子时，可以达到非常高的立体分辨率，这使得荧光显微镜十分适用于三维成像和虚拟切片。
多色成像分析荧光显微镜不仅可以同时成像多种不同的荧光物质，同时，由于荧光显微镜可以通过过滤器来排除光谱交叉的问题，因此在荧光标记的同一细胞中，可以同时进行多重标记分析，这使得同时观测多个分子成为可能。
实时成像荧光显微镜可以实现高速成像和视频成像，这是一般显微镜所无法实现的。
荧光显微镜允许实时观察生物分子在特定条件下的动态过程，并可以通过时间轴显示动态过程。
这样的实时成像极大地帮助了生物类科学家的研究。
数量测量荧光显微镜具有数量测量的能力，可以通过测量荧光信号的强度来测量它所处的环境的化学浓度，以实现对分子反应及药物治疗的研究。
结论荧光显微镜是一种非常重要的显微镜，已经在生物医学等领域得到广泛应用。
不仅如此，荧光显微镜还具有很多独特的性能特点，这些特点让荧光显微镜成为一款在生物类科学家手中发挥重要作用的仪器。
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相位差显微镜
四、荧光显微镜
荧光显微镜在光学显微镜中占重要地位。它分辨率高，能直接显示细胞 内的生物化学成分，彩色效果好；易进行定性定量分析，特别是标记 荧光抗体的特异性示踪技术。 1.利用紫外光照射，使标本内荧光物质转化为各种不同颜色荧光后，来观 察标本内某物质性质和位置。 2.装置特点
含紫外光高的照明装置：常用高压汞灯或弧光灯产生光源；
普通光学显微镜结构
（二）显微镜的性能 1.显微镜的分辨率
也称为分辨力，它是指能把两个物点辨清的最小距离，分辨距离越大，则分 辨率越低。所以，分辨率是以分辨距离来表示的。 其计算公式为: D=0.61入/N· A N· A· =n · sina/2
式中D为分辨率，A为光波波长，N· A· 为物镜的数值孔径(镜口率)。
② 10X 物 镜 ④聚 光镜升 降旋钮 粗 调 松 紧 调 节 旋 钮
① 标 本
③ 孔径 ⑤ 光轴 光栏 中心调节 ③ 螺钉
视 场 光 聚 光 镜 中 心 调 节 栏
孔径光栏调节
(四)普通显微镜的保养及常见故障
1.显微镜的擦拭 是保养中的重要一环。显微镜要经常保持清洁,避免脏物及试剂沾污显微 镜的光学系统和机械装置。 2.显微镜的保管 普通生物显微镜的保管工作主要是防潮、防尘、防腐蚀、防热四个方面 ; 3.显微镜使用过程中常见故障及维修 镜筒下滑 转换器失灵 镜筒自动倾斜 反光镜脱落 透镜上出现斑点
三、光照培养箱
通常用于植物发芽、 育苗、组织培养、 微生物培养、昆虫、 小动物饲养等,是生 物遗传工程、医学、 农林业、畜牧、水 产、环保等生产和 科研较理想的试验 设备 。
智 能 光 照 培 养 箱
四、离心机
(一)原理与构造
1.是利用离心力对混合溶液进行快 速分离及沉淀的一种实验室常 备仪器。 2.离心机种类很多,有台式、高速、 超高速离心机等 ； (二)使用方法及注意事项 1.将离心机置于平稳台面上,调平、 放稳,有吸盘或吸脚者都要吸牢 台面; 2.将对称位置的离心管调平衡; 3.检查调速装置是否处于零位,容 器室盖是否盖紧,地线是否接地; 4.接通电源,打开开关。设定转速 和时间 5.运转中严禁移动位置和开盖; 6.离心完毕,将调速装置回到零位, 关闭电源开关。待其停稳后方 可开盖,取出离心管。
生物学实用技术
教学内容
第一章 第二章 第三章 第四章 第五章 第六章 第七章 常用生物学仪器使用 生物玻片标本制作技术 植物标本制作技术 动物标本制作技术 生物学教学基本技术 现代教育技术 食药用真菌的栽培技术 第九章 第十章 第十一章 第十二章 第十三章 经济动物饲养技术 组织培养技术 基因工程技术 微生物发酵技术 酶工程技术
微分干涉差显微镜
DIC显微镜其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微 镜相比，其标本可略厚一点，折射率差别更大，故影像的立体感更强。
倒置显微镜
倒置显微镜
六、电子显微镜
（一）透射电子显微镜 （TEM） 1.原理及构造 包括三大部分：
电子枪 电磁透
电子光学部分
样品室 物镜 中间镜 投影镜 观察记录系统
JEOL扫描电子显微镜
人类血细胞SEM照片
（三 ）超薄切片的制作技术
Leabharlann 取材 1mm 小，快，避免挤压 固定 Ph为7.4 2—3%戊二醛 冰箱中保存 →1% 锇酸后固定（PH7.4） 1-2h 脱水 梯度酒精 丙酮 浸泡 环氧树脂 618 、812包埋 修组织块 光学定位及切片，削成锥形小塔状， 顶面积1mm见方，切厚1μ半薄切 片→定位 超薄切片→铜网上 染色 用重金属盐（柠檬酸铅，醋酸铀等）
第二节 其他常用仪器的使用与保养
一、电热干燥箱
(一)电热干燥箱的原理与构造 由两部分组成:一部分是加热、保温装 置,是电热干燥箱的主体;另一部分 是温度控制系统。 1.主体 电热干燥箱的主体框架是由各种型号 的钢及薄钢板构成。箱内有样品室 和加热室。 2.温度控制器
电热恒温干燥箱
由感温探头(热敏电阻)、控温电桥、放 大电路、控温继电器等几部分组成。
一种介 壳虫的 染色体
三、相差显微镜
1940年，荷兰学者Zernik巧妙应用光衍射 和干涉原理创造相差显微镜。
1.利用镜中的特殊装置，即环状光栏和位 相板，将光线通过透明标本后产生的光程 差转化为振幅差的特种显微镜。 2.特殊部件：
环状光栏(聚光器下)
位相板(物镜中) 另外,还有对焦望远镜; 3.暗视野显微镜只能看清细胞外形,看不到 内部结构,而相差显微镜则不仅能看到外形, 而且还能看到内部结构及其细胞分裂等动 态变化过程; 适用于观察普通光学显微镜 看不到的或看不清的活细胞及细胞内结构。
3.放大倍数 显微镜的总放大倍数等于目镜和物镜放大倍数的乘积， 公式为: V = V1xV2
4.焦深
焦点深度: 显微镜调焦到看清标本某一点时，不仅是这一物 点 , 而且它的上下两侧也能看清楚两侧的厚度叫做焦点深度。 看到标本的全厚度，必须调节螺旋仔细地从上到下进行观察。 物镜的焦深与镜口率成反比，与放大率成反比。
3.观察后的处理工作
清洁 : 显微镜上污物 ( 如残物或灰尘 ), 用绸布或擦镜纸擦干净 , 若擦不干 净可蘸少许二甲苯进行擦拭。擦完后,把物镜转离光轴,把反光镜转到与
载物台垂直的方向 , 以减少灰尘粘落上面 , 而后罩上镜套 , 小心地放回镜
箱内,保存备用。
4.注意事项:
瞳 距 调 节
屈 光 度 调 节
（三）使用方法与注意事项 1.观察前的准备工作
观察者要养成显微镜镜检的工作习惯，观察时要双眼同时睁开，一边观 察一边进行记录或描绘。观察时所用的材料、药品和各种器具要预先准 备好。显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否完整和正常，并 对载物台、目镜、物镜以及聚光器上端透镜进行必要的清洁工作。然后
光圈失调
二、暗视野显微镜
1.以光丁达尔效应为基础，主要采用特制的集光器，即暗视野显微镜的 聚光镜中央有当光片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射 和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。 利用这种显微镜能见到小至 4-200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜 高50倍。 2.适用观察原虫、细菌鞭毛、伪足运动等，特别适用胶体微粒，在医学 检查适用观察体液中螺旋体、结晶或各种粒子、尿形管等。
2.镜口率
在物镜上，有镜口率(N.A.)的标志，也称数值孔径，它反应该镜头分辨力大 小，其数字越大，表示分辨率越高。 N· A· =n · sina/2 各物镜的镜口率如下表： 物镜 10× 40× 100× 镜口率(N.A.) 0.25 0.65 1.30 工作距离(mm) 5.40 0.39 0.11
JEM-1011 透射电子显 微镜
内质网透射电镜图（伪彩色）
莱卡超薄切片机
扫描式电子显微镜SEM
透射式电子显微镜TEM
（二）扫描电子显微镜 (SEM) 1.原理及结构 电子光学部分 电子枪、聚光镜、扫描系统、物镜等；
电子信号收集、处理显示系统
真空系统和电源系统
2. 工作原理
从电子枪阴极发射出电子束 , 在阴、阳极间加速电压的作用下 , 射向镜筒。再 经过第一二级聚光镜和物镜会聚作用 , 缩小成几十埃的电子探针 , 在物镜上部 的扫描线圈作用下,在样品表面上作光栅状扫描,并且激发出多种电子信号,这 些信号被相应的检测器捕获经过放大、转换变成电压信号,最后送入显像管的 栅极上并且控制显像管的亮度。显像管中的电子束在荧光屏上也作光栅状扫 描,并且这种扫描运动与样品表面上的电子束的扫描严格同步。这样即获得衬 度与所接收信号强度相对应的扫描电子图像 ,这种 图像就反映了样品表面形 貌或成分的特征;
高 速 冷
冻
离 心 机
五、分光光度计
不同物质具有特征吸收光谱。分光光度法 不仅适应于可见光区，同时还可扩展 至紫外光区及红外光区 。 （一）使用规则 (1)接通电源，仪器自动进入初始化。初 始化约需时10min，当显示器指示 ××nm时，表明仪器完成初始化程序， 可进入检测状态。 (2)输入参数，选择相应比色杯依次放入 比色皿架内，关上比色池盖，自动调 零。 (3)试样槽依次移至样品位置，待数据显 示稳定后按“START/STOP”键，打印 机自动打印所测数据，重复上述步骤， 直到所有样品检测完毕。 (4)检测结束后及时取出比色杯，并洗净 放回原处，同时关上电源，做好使用 情况登记。 （二）注意事项 通电预热 ；比色皿保持清洁；
一、普通光学显微镜
（一）基本结构
物镜:
是决定显微镜的质量、分辨力和放大倍数的最关键部件;
在物镜筒壁上常注有主要性能指标——放大倍数、镜口率等;
①光学
系统: 目镜: 是由上面的接目透镜和下面的会聚透镜二部分组成的,两
者之间装有一个光阑;
照明装置: 聚光器、反光镜、照明光源、滤光器等 ;
②机械装置：用于固定材料和观察方便,包括: 镜座 镜臂 载物台
721型
UV-2401 PC 紫外分 光光度计
六、电泳仪
（一）概述 1.电泳：带电质点在电场中移动的现象。 2.影响电泳速度的因素 电场强度、溶液的pH值、溶液离子强度、电渗等。 3.分类 按支持介质不同可分为：纸电泳、醋酸纤维薄膜 电泳、琼脂凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳 等 按支持介质形状不同可分为：薄层电泳、水平电 泳、柱电泳、垂直电泳等； 按使用目的命名：核酸电泳、血清蛋白电泳、制 备电泳、DNA定序电泳等； （二）电泳仪的使用方法 将电泳槽两个电极与电泳仪的直流输出端联接， 注意极性不要接反； 接通电源，缓缓旋转电压调节钮直到达到的所需 电压为止，设定终止时间，此时电泳即开始进行。 完毕后，应将各旋钮、开关旋至零位或关闭状态， 并拨出电泳插头；
进行合轴调节。
2.观察
低倍镜的观察: 高倍镜的观察:
在低倍镜下,找到要进一步观察的部位,并移至视野中心,