痰液细菌学检查概要
痰标本的细菌学检查
痰标本的细菌学检查随着医疗技术的更新和医疗事业的不断发展，临床上采纳了很多介入性诊疗措施，以致于抗菌药物广泛应用、耐药菌株不断增多、细菌的耐药机制越发复杂和机体免疫功能下降引发感染逐渐增多，也正因此临床对于细菌学检查提出了更多、更迫切的要求。
细菌学检查所面临的最主要的问题是提供临床结果的可靠性和准确性，影响细菌检验结果可靠性的因素有很多，比如采取标本的时机、方法，标本的保存和运送方式以及分离培养方法、鉴定手段等等，临床中很多医生仅仅重视细菌标本的鉴定和培养方法，却忽略了标本的质量和采集方法。
其中痰标本的问题是最严重的，痰也是下呼吸道分泌物，在大多数情况下，采集痰标本的方式是自然咳痰，因此很容易受到上呼吸道分泌物的干扰，所以如何能够确定改为提高痰标本的治疗改为质量是十分重要的，这个问题也已经受到了国内外广大微生物工作者的重视，所以本篇文章就对痰标本的细菌学检查这一问题进行深入的探讨。
一、痰标本的现状以及存在的问题首先是痰标本的采取，目前大多数医院都对患者采取自然咳痰的方式采集清晨的第一口痰，患者在留痰前需要使用清水漱口，而且需要漱口三次，然后将痰液用力的咳出。
虽然有很多医院能够严格按照标准执行，但还有部分医院尚未按照要求去做。
其次是痰标本的运送，细菌学检查痰标本需要在留取痰标本之后立即将其送往细菌时，但是据相关数据显示，到目前位置仅有一小部分医院能够做到，绝大多数医院并没有在标本留取之后立刻送检。
尤其是对于住院的患者，医院的做法往往是将所有患者的标本集齐之后再由相关人员送往细菌室，以致于患者的标本从留取到送检之间耽搁了两至三个小时，如果痰标本在送到细菌室之后并未立进行接种或者是涂片，而是再耽搁一段时间的话，则会造成该观察的内容没有观察到，而且应该培养出来的细菌也并未培养出来。
随之而来的问题就是涂片染色显微镜检查，到目前为止，仍然有很多医院在培养痰标本之前并未进行涂片染色显微镜检查，不包括特殊检查，比如痰涂片找抗酸杆菌。
痰液标本细菌学检验的注意事项
痰液标本细菌学检验的注意事项痰液标本细菌学检验是一种常用的临床检查方法，主要用于分离和鉴定痰液中的细菌，以帮助诊断和治疗呼吸系统感染和其他相关疾病。
随着医学技术的不断发展和进步，痰液标本细菌学检验的应用范围和检测方法也在不断更新和完善。
然而，由于痰液标本细菌学检验存在一些技术难点和操作问题，容易出现误判和漏诊等情况，给临床诊疗带来一定的挑战和困难。
采集痰液标本前的准备工作是痰液标本细菌学检验中非常重要的一个环节。
如果准备工作不充分，将会影响痰液标本的质量和可靠性，甚至导致检测结果的误判和漏诊。
因此，在采集痰液标本前，应做好以下准备工作：①确认患者是否适宜进行痰液标本检测。
痰液标本检测主要适用于呼吸系统感染和其他相关疾病的诊断和治疗。
在进行痰液标本检测前，应仔细询问患者的病史，了解其病情和病程，以确认是否适宜进行该项检测。
②患者的呼吸系统状态要充分准备。
采集痰液标本时，需要患者能够充分清除呼吸道内的分泌物，以便采集到干净的痰液。
因此，患者应在采集痰液标本前充分排空呼吸道，建议在晨起后进行采集，因为此时痰液较为浓稠，容易采集到足够的样本。
③患者是否接受抗生素治疗。
抗生素治疗可能会影响痰液中细菌的生长和检测结果。
因此，需要了解患者是否接受抗生素治疗，并在采集痰液标本前停止使用抗生素一段时间，以避免影响检测结果。
④采集器材的准备。
在采集痰液标本时，需要准备相应的器材，如痰杯、痰杯盖、手套、口罩等。
要求器材干净、无菌、无异味，以避免交叉感染。
⑤给患者充分解释并获得其同意。
在采集痰液标本前，需要给患者充分解释采集的目的、方法、注意事项等信息，并获得其明确的同意。
同时，要给予患者必要的配合和安抚，以避免出现不必要的痛苦和不适。
采集痰液标本的方法主要有两种：咳痰和吸痰。
咳痰是患者主动咳出痰液，一般要求患者咳嗽力度足够，并在容器内采集痰液。
吸痰则是通过吸氧管或者吸痰管吸出痰液，需要专业人员进行操作，注意不要把口腔中的唾液混入痰液中，以免影响检测结果。
痰标本在细菌学检验中的应用分析
痰标本在细菌学检验中的应用分析摘要目的：探讨痰标本在细菌学检验中的应用价值。
方法：选择送检于检验科的300例痰标本，分别接种培养于不同的培养基上。
结果：1例标本在923tbl液体培养基浑浊，有细菌生长，在7h9l 半固体蔗糖培养基中有油煎蛋样的菌落出现，而在罗氏培养基、923tbb和7119b培养基中没有菌落生长。
结论：用高渗半固体培养基可以从临床痰标本中分离出结核分枝杆菌l型菌株，表明痰标本在细菌学检验中仍有一定的价值。
关键词痰标本细菌学检验在感染疾病的病原菌中，细菌l型是细菌细胞壁部分缺损或完全丧失而造成的，细菌胞壁的缺失可以是自发的，也可以是人工诱导的，但人工诱导的频率远比自发为高。
痰标本在琼脂培养基上，菌落呈“油煎蛋”样式[1]。
本实验旨在筛查临床痰标本中结核分枝杆菌l型细菌的存在情况，论述了痰标本在细菌学检验中的应用效果，为进一步研究结核分枝杆菌l型细菌的形成提供思路，现报告如下。
资料与方法实验对象：2009年6月～2012年5月送检于检验科的300例痰标本。
培养基配制：罗氏培养基的配制：基础液，谷氨酸钠1.8g、磷酸二氢钾1.2g，枸橼酸镁0.3g，葡萄糖0.3g，硫酸镁0.1g，丙三醇6ml、蒸馏水300ml。
上述溶液加热充分溶解，加入土豆粉6g，摇匀加热5分钟。
冷却到40～50℃时，加入500ml全卵液，加入已经高压灭菌的2%孔雀绿10ml，摇，静置后进行分装。
呈斜面放置于干燥箱85℃，1.5小时。
冷却后，培养基斜面颜色鲜艳，表面光滑无气泡，4℃保存。
痰标本的细菌培养：取痰标本，以1：3的比例加入消化液，漩涡振荡，3000转/分，离心15分钟，加入适量pbs重悬沉淀，取300ml分别接种于middlebrook mgit 7h9液体、7h9l、7h9b半同体培养基、923tbb和923tbl液体培养基中，37℃静置培养。
消化液的配制：4%naoh 50ml，2.9%枸橼酸钠50ml，n-乙酰-l-半胱氨酸0.5g当天配制，24小时内使用。
痰液细菌学检验的标准化操作程序
痰液细菌学检验的标准化操作程序1前言众所周知，传统习惯程序的痰标本细菌学检验其临床符合率并不高,其原因是多方面的。
除了痰标本采集不规范导致的不合格标本带来的培养结果与病人感染不相符外，还因为微生物和人体的相关性本身就具有复杂性：源自细菌的致病与条件致病的辨证性，如致病菌可能为正常携带，而细菌在肺通气功能异常病人的下呼吸道的可以发生单纯定植或感染，要证明培养结果与感染的相关性是医学微生物学所面临的难题，这也使得一直以来在对于痰培养的标准化进展十分缓慢，以至在各版《全国临床检验操作规程》上也未提出相应详细可行的令全国同行公认的统一规范的标准化操作程序（SOP）和完整的痰液培养的质量控制办法。
习惯程序的痰标本细菌学检验的缓慢也很不适应临床诊断治疗的迫切性。
故而，建立规范而快速的痰液细菌学检验的SOP对于提高呼吸系统感染病的诊治水平和控制抗生素的滥用等问题均有重要的作用痰培养阳性率普遍教低，临床符合率差的关键因素是痰标本采集不规范，不合格痰标本将直接导致病原菌被分离的机会降低，大量正常菌群也会抑制病原菌的生长或干扰病原菌的检出，降低了临床符合率；再有就是操作程序的不规范，不重视直接涂片，检验过程控制的不严密也是导致临床符合率低的重要原因。
我们通过SOP的临床应用情况的分析，痰培养阳性率和临床符合率均可能被提高，并且细菌分布统计结果显示本文与国外文献所报道的情况基本一致。
对于直接涂片的意义，在于判断标本中微生物有无、类型、染色特性、形态特征，标本的污染情况，还可对痰标本中可能的病原菌初步诊断(依据人体被病原菌感染后的炎性渗出包裹和白细胞吞噬反应)，判断是否存在复数菌感染，动态观察处于治疗过程中不同时期所送检的标本中病原菌情况的变化（如同种病原菌数量的增减，机体的免疫反应，菌群的交替）。
甚至可以推断临床治疗疗效和病人病情的变化和转归，医院内感染的发生等，具有重要意义。
为了满足高质量需求，对首代分离培养基应该进行严格的质量控制。
痰液检验中应引起注意的问题
痰液检验中应引起注意的问题发布时间：2021-05-26T08:10:38.891Z 来源：《健康世界》2021年3期作者：程钦友[导读] 在所有的临床检查中应用较为广泛的方式之一就是为患者行痰液检验。
多数的呼吸疾病患者在出现咳痰以及咳嗽等症状时均会去医院进行治疗，而此时医生都会建议患者行痰液检查。
那么今天咱们就来给大家科普一下有关痰液检验的相关问题，希望能够引起大家注意。
四川省凉山州越西县第一人民医院 616650在所有的临床检查中应用较为广泛的方式之一就是为患者行痰液检验。
多数的呼吸疾病患者在出现咳痰以及咳嗽等症状时均会去医院进行治疗，而此时医生都会建议患者行痰液检查。
那么今天咱们就来给大家科普一下有关痰液检验的相关问题，希望能够引起大家注意。
一、痰液的特点以及检验痰液的目的概述临床上将由支气管、气管以及肺泡所产生的分泌物定义为痰液。
一般情况下，人体不会分泌出较多的分泌物，但若出现一些情况刺激到呼吸道粘膜时，则可增多分泌物以及水样性痰液，此时并无任何临床意义。
若人处于肺部炎症、肿瘤等病理情况下且伴随痰量的增多，此时痰量组成多为炎性渗出物以及分泌物，且可伴随性状的改变，呈不透明状。
另外痰内可有鼻、咽以及唾液分泌物的混入，但并非痰的组成部分。
行痰液检验的目的主要有以下几点：（1）对慢性支气管炎、支气管扩张症以及支气管哮喘等部分的呼吸系统疾病进行辅助诊断；（2）为肺结核、肺吸虫病以及肺癌等部分的呼吸系统疾病确诊；（3）对痰液的性状变化等疗效及预后进行观察。
二、出现哪种情况的痰液应格外注意？痰液我们主要从气味以及颜色来谈。
气味：（1）血腥味痰液：支气管扩张、肺癌以及肺结核患者多可出现血腥味的痰液，味道较刺鼻，质浊而脓。
（2）粪臭味痰液：膈下脓肿穿入肺部患者多可出现粪臭味的痰液。
（3）恶臭味痰液：晚期恶性肿瘤、支气管扩张以及肺脓肿患者多可出现恶臭味的痰液。
（4）腥味痰液：哮喘后期脾肾阳虚患者多可出现腥味的痰液。
痰液与支气管肺泡灌洗液检查
鉴别病毒种类
通过对痰液或支气管肺泡灌洗液 中的病毒进行分离培养和基因检 测，可鉴别不同种类的病毒，为
临床治疗提供依据。
鉴别真菌种类
通过对痰液或支气管肺泡灌洗液 中的真菌进行分离培养和形态学 观察，可鉴别不同种类的真菌，
为临床治疗提供依据。
监测治疗效果
监测抗生素疗效
通过对痰液或支气管肺泡灌洗液中的病原菌进行药物敏感试 验，可监测抗生素的治疗效果，指导临床合理用药。
显微镜检查是通过对支气管肺泡 灌洗液进行涂片和染色，然后在 显微镜下观察细胞和微生物的一
种方法。
通过显微镜检查，医生可以了解 灌洗液中细胞成分的种类和数量， 以及是否存在异常细胞或微生物。
显微镜检查对于诊断肺部感染、 炎症、肿瘤等疾病具有重要意义，
可以为后续治疗提供依据。
支气管肺泡灌洗液的细菌学检查
对于异常结果，应进一步检查 或复查，以排除误差或假阳性 结果。
对于检查结果的解读，应由专 业医生进行，避免误判或漏诊。
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感谢灌 洗液中的微生物，以确定是否存在细 菌、真菌、结核分枝杆菌等病原体的 一种方法。
细菌学检查对于诊断肺部感染具有较 高的敏感性和特异性，尤其对于一些 难以确诊的感染病例具有重要意义。
细菌学检查通常采用定量培养法，即 对灌洗液中的微生物进行计数，并根 据计数结果判断是否存在感染。
监测病情变化
通过对痰液或支气管肺泡灌洗液中的病原菌数量和种类进行 动态监测，可了解病情的变化情况，为调整治疗方案提供依 据。
04 注意事项
适应症与禁忌症
适应症
痰液检查适用于肺部感染、肺癌等疾病的诊断；支气管肺泡灌洗液检查适用于肺 部炎症、肺泡蛋白沉积症等疾病的诊断。
痰液细菌学检查
痰液细菌学检验痰涂片镜检：选择痰标本中脓细胞成团块状分布，集中而不稠密，且周围无鳞状上皮细胞或无大量成团状分布的细菌球的区域为读片区，认真收寻视野中脓细胞聚集处的脓细胞胞浆中有无吞噬的细菌及细菌的染色排列特征.接种培养：血平板、巧克力平板、麦康凯/沙氏平板培养观察：一、G+菌：BA生长、Choc不生长、MecK不生长1、G+c菌：①葡萄球菌：淡黄色/白色，中等大小，较凸，规则圆形，β/γ溶血，较湿润，除金黄色葡萄球菌外，一般不具有临床意义；②微球菌：黄色/白色/橙色，中等大小，较凸，规则圆形，不溶血，较干燥，不易乳化较葡萄球菌生长缓慢，该菌一般无临床意义；③链球菌：白色/灰白色、凸起小菌落，β溶血为溶血型链球菌；灰白隆起中心扁平或凹陷，1.0-1.5mm大小的宽大а溶血为肺炎链球菌，该菌是最常见的肺部感染病原菌，在社区获得性感染中有重要的地位；细如针尖，白色凸起а溶血的为草绿色链球菌，自然咯痰标本中的草绿色链球菌一般不具有临床意义；④肠球菌：灰白，低凸，2.0mm左右之а溶血菌落，较湿润，但一般不具有临床意义；⑤口腔球菌：白色凸起较大菌落，不溶血，黏着，接种针挑之则整个菌落挑起，琼脂上不留痕迹。
该菌偶尔可引起肺部的严重感染，一般好发生于COPD病人和肺气肿病人；⑥孪生球菌：白色、凸起细小菌落，β溶血，生长慢48h仅0.2~0.4mm，在含羊血的MH琼脂上不生长。
该菌是上呼吸道的正常菌群组成之一，一般不导致肺部感染；2、G+ b—依靠溶血特征，菌落形态、菌落大小、菌体形态区分：①棒状杆菌：白色1.0-1.5mm左右大小，较干燥，不溶血/狭窄β溶血的为白喉或一般棒状杆菌；小而湿润，灰白/无色，半透明的为J-K棒状杆菌；灰白细小，β溶血的可能为假结核、化脓放线菌、溶血分泌杆菌；除白喉杆菌外，假结核、化脓放线菌、溶血分泌杆菌是罕见的咽喉部病源菌，棒状杆菌一般不导致肺部感染；②乳杆菌：细小，白色凸起а溶血菌落，有特殊的酸臭味，口腔正常菌群，无临床意义；③芽孢杆菌：灰白大菌落，表面粗糙如毛玻璃状、蜡状、边缘不规则，不同种类菌落形态差异巨大，宽大β溶血。
痰标本细菌学检验
痰标本细菌学检验
细菌室
一、项目申请：
1、普通细菌培养：对于病房患者选择项目名称为“病房痰培养”，对于门急诊患者选择“门诊痰培养”。
如果临床怀疑奴卡菌等特殊病原体，需要在打印出的条码上注明目的病原菌，以便实验室延长培养时间和选择适当培养方法。
2、真菌培养：选择项目名称为“真菌培养”，标本种类选择“痰”。
3、不适于培养的病原菌：厌氧菌、军团菌、衣原体、支原体等，如果有疑问请与细菌室联系询问（电话2485）。
分枝杆菌培养为我院外送检验项目。
二、标本采集：
1、采集时间：尽量在抗生素使用前，以清晨留取的标本为更佳。
2、容器要求：螺旋口无菌塑料瓶。
3、采集方法：标本采集前应充分清洁患者口腔，如：漱口、刷牙等，有假牙的病人应取下假牙。
嘱附病人深咳，将痰液直接留到无菌瓶内。
容器瓶口旋紧勿泄漏。
4、将条码贴于标本瓶上，扫描记录采集时间。
三、送检要求：
1、标本采集后应及时（2小时内）送检。
标本若冷藏保存可能会影响对温度敏感细菌的检出。
2一天送检一次即可，不需同一天内连续送检多次，多余的送检标本视为不合格。
如遇特殊情况需多次送检时，请事先与细菌室联系。
3、常规送检时间为每周一至周五8点至16点30分，节假日顺延。
在常规时间以外如有送检要求，请事先与细菌室联系说明送检原因，经确认后再送检。
四、检验流程：
五、报告发放：
1、阴性报告：普通细菌培养2-3天，真菌培养1周，特殊病原菌延长相应时间。
2、阳性报告：4天，如遇细菌生长缓慢等特殊情况则延迟发放。
临床检验基础痰液与支气管灌洗液检验
第十八章痰液与支气管灌洗液检验本章考点1.痰液检查2.支气管肺泡灌洗液检查一、痰液检查（一）标本采集与处理痰液理学检验以清晨第一口痰标本最适宜。
细胞学检验以上午9〜10时留痰最好。
做漂浮或浓集结核杆菌检验时，应采集12〜24h内的痰液。
测定24h痰量或观察分层情况时，容器可加少量石炭酸防腐。
用于细菌培养的标本，必须无菌采集，并先用无菌水漱口，以避免口腔内正常菌的污染。
为了防止痰液污染，用过的标本应灭菌后再处理。
（二）理学检查1.量：正常人无痰或仅有少量泡沫样或粘液样痰。
痰量增多常见于支气管扩张、肺脓肿、肺水肿和慢性支气管炎，有时甚至超过100ml/24h。
在疾病治疗过程中，如痰量减少，一般表示病情好转；但若发生支气管阻塞而使痰液不能排出时可见痰量减少，反而表明病情加重。
2.颜色与形状：正常人仅有少量白色或灰白色粘液痰，病理情况下痰液颜色可发生改变，但特异性较差，其颜色和形状改变见表1-18-1、1-18-2。
病理情况下常见的异物及临床意义见表1-18-3。
表表表表3.气味：正常人的新鲜痰液无特殊气味。
血腥味见于肺癌、肺结核等。
粪臭味见于膈下脓肿与肺相通时。
恶臭见于肺脓肿、晚期肺癌或支气管扩张等。
（三）显微镜检查直接涂片检验为常规方法，简便、快速，对临床诊断帮助较大。
涂片染色检验主要用于细胞学检验和细菌学检验。
正常痰液中无红细胞，有少量中性粒细胞和少量上皮细胞。
病理性痰液可见较多的红细胞、白细胞及其他有形成分，其临床意义见表1-18-4。
（四）质量控制1.标本采集：应注意：①注意标本留取时间：一般检验以早晨第一口痰为宜；做细胞学检验以上午9〜10h留痰液为好；浓缩法找结核杆菌时，则应留取24h痰液。
②留取痰液标本时，先用清水嗽口，用力咳出气管深处的痰液，注意勿混入鼻咽分泌物。
③细菌学培养时应无菌采集痰标本。
④及时送检。
2.显微镜检验的质量控制（1）检验人员：要加强责任心，掌握痰液中正常和异常有形成分形态特点、数量变化，提高阳性检出率。
痰液细菌培养的质量控制
用雾化 吸入 加温至 ４ ５℃的 １０ ｇ ０ ／ Ｌ氯化钠 注射液 ， 使痰 液易
于排 出。对难于 自然咯痰患者可用无菌吸痰管抽取气管深部 分泌物 。标 本应尽快送检 ， 不能及时送检 的标本 ， 室温保存 ≤
２ ｈ。
者身上各种细菌 的真实数量 。
表 １ 痰液细菌学检验标本涂片显微镜判断标 准
１ 材 料 与方 法
否及 时密切相关。 室温下延搁 ２ｈ会降低肺炎链球菌 、 流感嗜 血杆菌等苛养 菌的分离率 ， 而定植 于上呼 吸道 的非致病 菌以 及许 多条件致病菌如铜绿假单胞菌等革兰阴性杆菌则过度生
长。培养肺炎链球菌等苛养菌 ， 不得将标本置于冰箱 内。 对于普通细菌性肺炎 ， 痰标本每天送检 １ ， 次 连续 ２ ３ｄ － 。
能够合理选择培养环境和培养基 。呼吸道有大量的正常菌群 存在 ， 故咽试子 、 咯痰 、 吸出的分泌物厌氧菌培养无意义 。
３ 接 种
吐于无菌器皿 内， 迅速盖上器皿盖 、 送检 。注意收集浓 痰或黏 稠液而非涎液 。 咽拭 子法 ： 湿润无菌 ０９ ．％氯化钠注射液 、 润 湿 无菌拭 子 ，越 过舌根 到达 咽后壁 或悬雍 垂后 侧或 咽喉部 发 红 、 白色可疑假膜部位 ， 复涂抹数次后 小心退 出 ， 灰 反 随即置
３１ 肉眼 观 察 ．
对呼吸道标本 要 了解其受 正常 口腔 菌污染或影 响程度 。 观察 痰液 的颜 色 、 度 、 无血 丝 和是 否呈 脓性 ， 为脓 痰 黏 有 分 （ ）黏液痰 （ 、 Ｐ、 Ｍ）血痰（ 、 Ｂ）涎液痰（ ）水样痰 （ ５个级别 ， ｓ、 ｗ）
注射液 ５ｍＬ雾化 吸入约 ５ｍ ｎ ｉ 进行导 痰。 氯化钠 注射液浓 度 过高 ， 患者常常不能耐 受。气道 高反应如哮 喘患者则不宜 采 用此法 。也 可采用物理疗 法 、 体位引流 、 鼻导管抽吸等方法获
痰液细菌学检查
痰液细菌学检验痰涂片镜检：选择痰标本中脓细胞成团块状分布，集中而不稠密，且周围无鳞状上皮细胞或无大量成团状分布的细菌球的区域为读片区，认真收寻视野中脓细胞聚集处的脓细胞胞浆中有无吞噬的细菌及细菌的染色排列特征.接种培养：血平板、巧克力平板、麦康凯/沙氏平板培养观察：一、G+菌：BA生长、Choc不生长、MecK不生长1、G+c菌：①葡萄球菌：淡黄色/白色，中等大小，较凸，规则圆形，β/γ溶血，较湿润，除金黄色葡萄球菌外，一般不具有临床意义；②微球菌：黄色/白色/橙色，中等大小，较凸，规则圆形，不溶血，较干燥，不易乳化较葡萄球菌生长缓慢，该菌一般无临床意义；③链球菌：白色/灰白色、凸起小菌落，β溶血为溶血型链球菌；灰白隆起中心扁平或凹陷，1.0-1.5mm大小的宽大а溶血为肺炎链球菌，该菌是最常见的肺部感染病原菌，在社区获得性感染中有重要的地位；细如针尖，白色凸起а溶血的为草绿色链球菌，自然咯痰标本中的草绿色链球菌一般不具有临床意义；④肠球菌：灰白，低凸，2.0mm左右之а溶血菌落，较湿润，但一般不具有临床意义；⑤口腔球菌：白色凸起较大菌落，不溶血，黏着，接种针挑之则整个菌落挑起，琼脂上不留痕迹。
该菌偶尔可引起肺部的严重感染，一般好发生于COPD病人和肺气肿病人；⑥孪生球菌：白色、凸起细小菌落，β溶血，生长慢48h仅0.2~0.4mm，在含羊血的MH琼脂上不生长。
该菌是上呼吸道的正常菌群组成之一，一般不导致肺部感染；2、G+ b—依靠溶血特征，菌落形态、菌落大小、菌体形态区分：①棒状杆菌：白色1.0-1.5mm左右大小，较干燥，不溶血/狭窄β溶血的为白喉或一般棒状杆菌；小而湿润，灰白/无色，半透明的为J-K棒状杆菌；灰白细小，β溶血的可能为假结核、化脓放线菌、溶血分泌杆菌；除白喉杆菌外，假结核、化脓放线菌、溶血分泌杆菌是罕见的咽喉部病源菌，棒状杆菌一般不导致肺部感染；②乳杆菌：细小，白色凸起а溶血菌落，有特殊的酸臭味，口腔正常菌群，无临床意义；③芽孢杆菌：灰白大菌落，表面粗糙如毛玻璃状、蜡状、边缘不规则，不同种类菌落形态差异巨大，宽大β溶血。
临床诊断学 痰液显微镜检查简介
[项⽬名称]痰液显微镜检查
[参考值]正常⼈仅有少量痰液和少量⽩细胞
[临床意义]痰液显微镜检查可以直接发现病原体或提⽰呼吸系统疾病的性质。
痰中见到红细胞表⽰肺或⽓管有出⾎，少量⽩细胞出现是正常现象，⼤量⽩细胞表⽰有化脓性炎症。
⽼年慢性⽀⽓管炎时痰内可见多量变形和坏死的柱状上⽪细胞。
痰中还可见到⼼⼒衰竭细胞，弹⼒纤维，放线菌，夏克—雷登结晶，寄⽣⾍或⾍卵包括蛔⾍、包⾍、阿⽶巴等，在获得性免疫缺陷综合征的病⼈中或肺孢⼦⾍感染的病⼈中还可以查到肺孢⼦⾍卵囊。
[要求]以留取清晨第⼀次从⽓管深部咳出的痰。
痰标本的细菌学检验与质量控制
痰标本的细菌学检验与质量控制发表时间：2013-05-21T10:40:40.263Z 来源：《中外健康文摘》2013年第12期供稿作者：毕艳妮于立明[导读] 按阳性和阴性片分类保存近期3个月内的全部痰涂片，备上级实验室复验。
毕艳妮于立明 (山东省威海市立医院264200）【中图分类号】R915 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）12-0156-02 1 标本采集1.1采集方法：痰标本最好在应用抗菌药物之前采集，以晨痰最好。
常用采集法有自然咳痰法、支气管镜采集法、胃内采痰法等。
采集可疑烈性呼吸道患者痰标本时，应注意生物安全防护。
自然咳痰法：患者清晨起床后用清水反复漱口，用力自气管咳出第一口痰于灭菌容器内，立即送检。
对于痰量少或无痰的患者可采用雾化吸入加温至45℃的10％NaCl水溶液，使痰液易于排出。
对咳痰量少的幼儿，可轻轻压迫胸骨上部的气管，使其咳嗽，将痰收集于灭菌容器内送检。
支气管镜采集法用气管镜在肺部病灶附近用导管或者支气管刷直接取材，此法患者不易接受，故不常用[1]。
1.2标本运送与保存标本采集后应立即送检，室温保存不超过2 h；做结核分枝杆菌和真菌培养的标本不能及时送检的，可放于4℃保存，以免杂菌生长。
2 检验方法2.1 显微镜检查痰标本宜先直接涂片镜检，并于低倍镜下观察白细胞和上皮细胞数目，以确定该标本适合做什么细菌培养。
一般认为，合格的痰标本含白细胞和支气管柱状上皮细胞较多，而受污染的痰标本则是来自颊黏膜的扁平鳞状上皮细胞较多。
在低倍镜视野下，白细胞超过25个、鳞状上皮细胞不超过10个的痰标本为合格标本。
①一般细菌涂片检查：挑取标本中脓性或带血部分涂片进行革兰染色镜检，根据染色性、形态及排列等特征可发出初级报告。
②结核分枝杆菌涂片检查：挑取标本干酪样或脓性部分做抗酸染色，根据所见结果报告“找到(或未找到)抗酸杆菌”[2]。
③放线菌及奴卡菌涂片检查：将痰液用生理盐水反复洗涤数次，挑取黄色颗粒(硫黄颗粒)或不透明着色斑点，置玻片上并覆以盖玻片，轻压后置高倍镜下观察。
细菌学检测中痰培养的方法及临床意义分析
细菌学检测中痰培养的方法及临床意义分析发表时间：2018-05-04T15:23:08.757Z 来源：《医师在线》2018年2月上第3期作者：秦丽艳[导读] 临床检验痰液标本主要是采取病原菌检查，痰标本检查的结果会受到多种因素的影响，难以达到诊断治疗效果。
甘肃省定西市临洮县人民医院检验科 730500【摘要】目的分析细菌学检测当中痰培养的方法与临床意义。
方法选2016年8月至2017年10月在我院进行就诊的呼吸感染患者60例作为观察对象，对60例患者进行痰夜标本培养，观察呼吸道感染患者细菌学检测前实施痰夜培养的临床价值。
结果在60例呼吸道感染患者的痰夜标本当中，检出的菌株数为56株，病原菌分离检出阳性率为92.9%（52/56）。
结论根据正确及标准操作方法，所采集的标本能够提高痰液标本当中病原菌的阳性检出几率，临床检验痰液标本主要是采取病原菌检查，观察临床检查的效果，但是其检查的结果会受到多种因素的影响，难以达到诊断治疗效果。
【关键词】细菌学检测；痰培养；检测方法；临床效果实施痰培养的目的是通过从临床痰液标本当中将致病真菌分离，得到纯培养。
若患者咳嗽、痰液带脓、脓血、痰液有恶臭气味，多考虑患者属于支气管感染或肺部感染，需对患者进行病原学检查与药敏试验[1]。
此次就2016年8月至2017年10月在我院进行就诊的呼吸感染患者60例作为观察对象，观察细菌检测中痰液标本培养的临床效果，现分析如下：1资料与方法1.1病例资料选2016年8月至2017年10月在我院进行就诊的呼吸感染患者60例作为观察对象，60例患者当中有男性患者36例，女性患者有24例，年龄均在20至76岁之间，平均年龄为（54.8±3.4）岁。
1.2方法对60例患者均进行细菌学检测，在细菌学检测之前均实施痰液标本的培养。
采集患者早晨第一口气管的深部痰液，嘱咐患者将义齿清除，同时用清水漱口，减少正常菌群对患者口腔的污染，之后咯出气管深部痰液，并且放置在无菌的有盖痰盒之内，放置痰液混入进口腔与鼻咽腔分泌物，同时于两小时之内进行送检。
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相关疾病：
黄杆菌肺炎、鼠疫耶尔森菌肺炎、流感嗜 血杆菌肺炎、胞内分枝杆菌感染、龟分枝 杆菌感染、溃疡分枝杆菌感染、出血败血 性巴斯德菌感染、偶发分枝杆菌感染、瘰 疬分枝杆菌感染、堪萨斯分枝杆菌感染、 小螺菌感染、老年人终末期肺炎、老年人 院内获得性肺炎、老年人支气管哮喘、新 生儿肺炎、流痰、巨细胞病毒病
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相关疾病： 肺炎衣原体感染、克雷白杆菌属感染、铜 绿假单胞菌感染。
谢谢！
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简介：
人体的肺部或支气管发生细菌性感染 时，痰液量明显增加，痰液细菌培养，分 离出病原菌，有助于对下呼吸道感染性疾 病的诊断和治疗。
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临床意义：
痰液培养常见的致病菌： 革兰阳性 菌：有肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、结 核分枝杆菌、放线菌、奴卡菌、厌氧球菌、 白喉棒状杆菌等。 革兰阴性菌：卡他布 兰汉菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、 肺炎克雷伯菌、肠杆菌、假单胞菌、军团 菌等。
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正常值： 正常人下呼吸道是无菌的，应未检出
病原菌、真菌、结核杆菌。
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相关检查： 淋病细菌学检测、微丝蚴（Mf）、肠道真 菌病检测、厌氧菌检测、孢子丝菌凝集试 验、痰液常规检查。医学检验·各论：痰液细培养 >>>
相关症状： 胸膜增厚粘连、持续发烧、平卧呼吸困难、 结核中毒、无活动性结核病灶、吐白沫痰。
痰液标本细菌学检验（二）
痰液标本细菌学检验（二）痰液标本细菌学检验（二）关键词：细胞库菌株培养中心 atcc 对照品标准品北京标准物质网1．鉴定直接涂片或染色镜检的目的是推断病原菌，制定分离培养和鉴定方向。
遇危重患者或发现形态特征明显的病原菌时，可以先发出一级(初步)检验报告。
必要时可与临床医生沟通探讨，做出更具针对性的鉴定方案。
分离培养和鉴定的目的是，获得病原菌的纯培养或疑似病原菌的优势生长菌株，并在此基础获得明确的鉴定结果。
(1)形态学鉴定：对标本进行湿片观察(最好用相差显微镜)和染色镜检(革兰染色是最基本的染色，必要时进行细菌的特殊结构染色、抗酸染色、金胺“O”荧光染色等)。
例如在痰中发现了抗酸分枝杆菌，需要做出一级(初步)检验报告。
疑似放线菌，如查见中间部分的菌丝为革兰阳性，而四周放射的末端为革兰阴性，抗酸染色为非抗酸性者，则可疑似放线菌。
抗酸染色为弱阳性，则疑似诺卡菌。
分离培养生长的不同特征菌落要逐一进行染色镜检，以此验证标本培养前后观察到的细菌种类是否吻合。
(2)生理生化鉴定：在形态学检查的基础上，选择合适的分离培养方案。
获得纯培养菌株或疑似病原菌优势生长菌株后，进行系统的生理生化实验鉴定。
根据实验结果判断细菌的种类和型别。
自动化检测技水主要依据的是细菌的牛物化学反应特征。
(3)免疫学鉴定：形态学和生理生化特征可初步判断细菌的科属类别，再利用血清学实验鉴定其种和型。
敏感性较高的免疫学标记技术，如酶联免疫吸附试验(ELISA)等，可对患者的呼吸道标本或血清等体液标本中的病原菌抗原物质或特异性抗体进行检测。
(4)分子生物学鉴定：利用聚合酶链式反应(PCR)、核酸杂交、核酸测序技术和生物芯片技术等分子生物学技术，可以直接对各种取白患者的标本或分离培养后的菌株进行检测。
例如，进行16sRNA序列扩增测序，可以将病原茵鉴定到型。
(5)药物敏感试验：分离培养获得纯培养或判断出疑似致病菌菌落后，应该存第一时间进行药物敏感试验，用以指导临床用药。
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痰液细菌学检验
痰涂片镜检:
选择痰标本中脓细胞成团块状分布,集中而不稠密,且周围无鳞状上皮细胞或无大量成团状分布的细菌球的区域为读片区,认真收寻视野中脓细胞聚集处的脓细胞胞浆中有无吞噬的细菌及细菌的染色排列特征.
接种培养:血平板、巧克力平板、麦康凯/沙氏平板
培养观察:
一、G+菌:BA生长、Choc不生长、MecK不生长
1、G+c菌:
①葡萄球菌:淡黄色/白色,中等大小,较凸,规则圆形,β/γ溶血,较湿润,除金黄色葡萄球菌外,一般不具有临床意义;
②微球菌:黄色/白色/橙色,中等大小,较凸,规则圆形,不溶血,较干燥,不易乳化较葡萄球菌生长缓慢,该菌一般无临床意义;
③链球菌:白色/灰白色、凸起小菌落,β溶血为溶血型链球菌;
灰白隆起中心扁平或凹陷,1.0-1.5mm大小的宽大а溶血为肺炎链球菌,该菌是最常见的肺部感染病原菌,在社区获得性感染中有重要的地位;
细如针尖,白色凸起а溶血的为草绿色链球菌,自然咯痰标本中的草绿色链球菌一般不具有临床意义;
④肠球菌:灰白,低凸,2.0mm左右之а溶血菌落,较湿润,但一般不具有临床意义;
⑤口腔球菌:白色凸起较大菌落,不溶血,黏着,接种针挑之则整个菌落挑起,琼脂上不留痕迹。
该菌偶尔可引起肺部的严重感染,一般好发生于COPD病人和肺气肿病人;
⑥孪生球菌:白色、凸起细小菌落,β溶血,生长慢48h仅0.2~0.4mm,在含羊血的MH琼脂上不生长。
该菌是上呼吸道的正常菌群组成之一,一般不导致肺部感染;
2、G+ b—依靠溶血特征,菌落形态、菌落大小、菌体形态区分:
①棒状杆菌:白色1.0-1.5mm左右大小,较干燥,不溶血/狭窄β溶血的为白喉或一般棒状杆菌;小而湿润,灰白/无色,半透明的为J-K棒状杆菌;灰白细小,β溶血的可能为假结核、化脓放线菌、溶血分泌杆菌;除白喉杆菌外,假结核、化脓放线菌、溶血分泌杆菌是罕见的咽喉部病源菌,棒状杆菌一般不导致肺部感染;
②乳杆菌:细小,白色凸起а溶血菌落,有特殊的酸臭味,口腔正常菌群,无临床意义;
③芽孢杆菌:灰白大菌落,表面粗糙如毛玻璃状、蜡状、边缘不规则,不同种类菌落形态差异巨大,宽大β溶血。
延长培养时间,菌落从湿润变得干燥,边缘呈放射状扩散,形成叶状、掌状、雪花状、齿轮状等,常常为痰培养的污染菌;
根据形态分为G- b(革兰阴性杆菌、G-co(革兰阴性球菌、以及根据对特殊营养的需求对苛养性G- b进一步分类,常见的如嗜血杆菌,军团菌等:
BA生长、Choc生长、MecK生长,——Gram染色:G- b—氧化酶、分科琼脂颜色
肠杆菌:氧化酶(-,分科琼脂上黄色湿润大菌落;
弧菌:氧化酶(+,分科琼脂上淡黄色扁平大菌落;
非发酵菌:氧化酶(+/-,分科琼脂上蓝色/无色透明小菌落—鲍曼不动杆菌为中等大小,菌落聚集处产不扩散黄色色素,分离菌落为兰色;
BA生长、Choc生长、MecK不生长,——Gram染色:G-co—氧化酶(+、触
酶(+
奈瑟菌:白色/黄色中等大小菌落,该类细菌为口腔常见正常菌群,该菌在痰培养中含量的高低反应了标本采集状态的合格程度,大量出现提示培养结果将是不可信的;
卡他莫拉菌:白色小菌落(24h内,菌落有脆性,用接种环推之可移,是儿科和老年病人常见的下呼吸道病原菌;
BA不生长/细小、Choc生长、MecK不生长,——Gram染色:G-b、菌体细小或呈扭曲之长丝状
嗜血杆菌:灰色/无色,半透明,1.5-2.0mm的多为流感嗜血杆菌,该菌为最常见的肺部感染病原菌,可发生于各个年龄层次,其高携带与COPD发病有较强的相关性;灰色略黄,不透明,1.0-1.5mm的多为副流感嗜血杆菌。
一般副流感嗜血杆菌不导致肺部感染,大量出现提示培养结果将是不可信的;
BA不生长、Choc不生长、MecK不生长、BCYE-а生长/或在含有L-半胱氨酸、铁离子、复合抗生素选择剂的强化血琼脂上生长—Gram染色:G-b、菌体细、长丝状,提示可能为军团菌:该菌在BCYE-а上48~72 h为中等大小扁平菌落,灰白色,较粘着;该菌具有较强的生物危险性,其中嗜肺军团菌可传染;
感染性腹泻
一送检指征
1具感染性腹泻症状:包括细菌性腹泻或病毒性,如志贺菌、沙门菌、弧菌科、致病性大肠埃希菌、小肠结肠炎耶尔森菌和轮状病毒等;
2患者长期使用抗生素后的腹泻:要考虑抗生素相关性腹泻,可能引起的致病菌有念珠菌、金黄色葡萄球菌、艰难梭菌。
二标本采集和注意事项
1.标本采集:
(1粪便标本: 采集粪便中的粘液、脓血、水样部位。
(2直肠拭子: 如不能立即培养,应将标本放入运送培养基或pH7.0的磷酸盐甘油中保存运送。
(3呕吐物:
(4可疑食品。
2.注意事项:
(1采集新鲜粪便;(2在急性期采集标本;(3用药前采集标本;(4厌氧菌培养应在床边接种。
三常见肠道病原微生物的分离与鉴定
1.志贺菌:志贺菌属是引起人类细菌性腹泻的最常见病原菌之一。
以其O抗原将志贺菌属分为4个血清型,痢疾志贺菌、福氏志贺菌、鲍氏志贺菌、宋内志贺菌。
我国大部分地区以福氏志贺菌为主。
(1分离培养:取粪便的粘液或脓血部分,接种于SS琼脂和麦康凯琼脂平板
上,35℃过夜培养;
(2初步鉴定:挑选无色透明、中等大小、圆形、光滑的菌落接种于KIA和MIU 培养基上,35℃过夜培养;
(3最后鉴定:取乳糖(斜面阴性,发酵葡萄糖产酸不产气,硫化氢、动力、脲素酶阴性,吲哚阴性的菌落作生化反应和血清凝集试验;
(4非典型株的处理:对生化反应和血清凝集试验结果不符合者,可用琼脂和肉汤交替传
代,一般经5-10代后可恢复典型性状;
(5临床意义:志贺菌属的致病作用主要是侵袭力和内毒素,个别菌的某些型能产生外毒素。
2.沙门菌:
沙门菌属广泛存在于自然界中,已发现有2000多个血清型,但只有少数几个血清型对人类致病。
鼠伤寒沙门菌是常见肠道致病菌,由其引起的腹泻病和院内交叉感染居各沙门菌感染之首,尤其以免疫功能未健全的婴幼儿易感
(1分离培养:取患者的粪便(肠热症患者2周以后,胃肠炎病人早期、尿液、血液或骨髓液、其他体液、分泌物、呕吐物或食物等标本,接种增菌培养基或直接接种于SS琼脂和麦康凯琼脂平板上,35℃过夜培养;
(2初步鉴定:挑选无色透明中心呈黑色、中等大小、圆形、光滑的菌落接种于KIA和MIU培养基上,35℃过夜培养;
(3最后鉴定:取乳糖(斜面阴性,发酵葡萄糖产酸产气(伤寒沙门菌不产气,硫化氢不定,动力阳性,脲素酶、吲哚阴性的菌落作生化反应和血清凝集试验;
(4临床意义:沙门菌属对人类致病临床上表现为肠热症(伤寒和副伤寒、败血症和食物中毒(肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌和鸭沙门菌等。
3.致病性弧菌:
致病性弧菌已成为夏秋季急性流行性腹泻和食物中毒的重要、常见病原菌,包括弧菌属、气单胞菌属和邻单胞菌属。
溶血素和肠毒素是弧菌属重要的致病因子;气单胞菌能产生肠毒素、溶血素和细胞毒素等。
(1分离培养:取患者的粪便、呕吐物或食物等标本,接种增菌培养基(碱性胨水或直接接种于SS琼脂、庆大琼脂或TCBS琼脂平板上,35℃过夜培养;
(2初步鉴定:悬滴标本运动活泼(可作制动试验,革兰染色阴性,具有多型性;在选择平板上菌落形态典型;在KIA培养基上不分解乳糖,分解葡萄糖产酸不产气(个别产气,不产硫化氢;氧化酶阳性(麦氏弧菌为阴性;
(3最后鉴定:进行生化反应和血清凝集试验。
4.致腹泻大肠埃希菌(DCEC:
DCEC是引起小儿腹泻的一组重要病原微生物。
1945年Bray首次报告了大肠埃希菌引起的婴幼儿腹泻,生化反应和血清凝集试验作为DCEC的最后鉴定。
(1产肠毒素型大肠埃希菌(ETEC:ETEC有30个血清型,可产生两种肠毒素,即耐热肠毒素(ST和不耐热肠毒素(LT;
(2肠致病性大肠埃希菌(EPEC:EPEC有18个血清型,是流行性婴幼儿腹泻的病原菌,具有高度传染性。
多发生在夏秋季,临床表现:发热、呕吐、腹泻、便中多粘液无血,病程较长;
尿液细菌学检查
如何看待尿培养结果?
对尿培养结果的处理原则是:(1菌落计数,G+球菌≥104个/ml,G—杆菌≥105个/ml 时,则报告细菌培养鉴定结果和药敏结果,不再报告细菌数量;
(2培养结果小于以上规定时,则报告细菌菌落计数,通常不报告药敏,以免造成误导用药;(3如果细菌小于规定细菌数,但培养出的细菌较纯,病人又多为慢性泌尿系统感染时,则既报告细菌鉴定结果及菌落计数结果又报告药敏结果。
(4如果病人在近期多次培养的结果不一样,菌落计数均小于规定指标时,这些不稳定的细菌多为正常菌群,临床意义不大,如果病人病情不见好转,需要考虑其它微生物感染的可能性。
泌尿感染常见细菌以大肠埃希菌为首位,近年由于感染病原菌的变迁,其他肠杆菌科细菌如肠杆菌属、克雷白菌属、变形杆菌属类细菌增多,非发酵革兰氏阴性菌感染增多。
革兰氏阳性球菌如金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肠球菌也较常见,由于抗菌药的滥用导致尿路二重感染,酵母样真菌也常检出。
若疑有结核茵感染时应送检结核培养。