尼氏染色步骤
尼氏Nissl染色
尼氏(Nissl)染色液产品简介：碧云天生产的尼氏(Nissl)染色液(Nissl Staining Solution)是神经生物学家广泛使用的一种Nissl染色液，用于石蜡或冰冻切片神经元细胞浆中的尼氏小体(Nissl body)染色。
Nissl染色是以德国的精神病学家和神经病理学家Franz Nissl的名字命名的。
Nissl染色液染色后呈蓝紫色，常用于显示脑或脊髓的基本神经结构。
Nissl小体大而数量多，说明神经细胞合成蛋白质的功能较强；相反在神经细胞受到损伤时，Nissl小体的数量会减少甚至消失。
本Nissl染色液染色的有效成分是Cresyl violet。
Cresyl violet可以和RNA或DNA结合，可以染色粗面型内质网上的核糖体，也可以染色细胞核。
染色后使细胞体呈现斑驳的(mottled)蓝紫色染色。
一个包装的本染色液至少可以染色200个样品。
保存条件：室温避光保存，至少一年有效。
注意事项：特别注意：Nissl染色液的染色能力很强，并且染色后很难去除，请注意勿使染色液沾染皮肤和衣物等。
需自备4%多聚甲醛、70%乙醇和95%乙醇。
如果需要脱水、透明和封片处理，还需自备二甲苯，中性树胶或其它封片剂。
如果样品是石蜡切片，需自备90％乙醇，无水乙醇以及二甲苯。
样品数量较多时，可以使用碧云天生产的染色架和染色缸，便于操作。
第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：1. 样品处理a) 对于石蜡切片：二甲苯中脱蜡5-10分钟，共三次。
注：脱蜡不充分会导致染色不均匀。
无水乙醇5分钟。
90%乙醇2分钟。
70%乙醇2分钟。
蒸馏水2分钟。
b) 对于冰冻切片：蒸馏水2分钟。
c) 对于培养细胞：用4%多聚甲醛固定10分钟以上。
蒸馏水洗涤2分钟。
换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2分钟。
2. 尼氏(Nissl)染色对于上述处理好的样品：尼氏(Nissl)染色液染色染色3-10分钟(可以根据染色结果和要求调整时间，染色时温度提高到37-50℃对于25-50微米等较厚的切片可以使染色更均匀）。
尼氏染色方法
尼氏染色方法嘿，你有没有想过，在我们肉眼看不到的微观世界里，科学家们是怎么去研究那些小小的细胞的呢？今天啊，我就来给你讲讲一种超级有趣又特别重要的方法——尼氏染色方法。
我有个朋友叫小李，他就在实验室里捣鼓这些东西。
有一次我去他的实验室，看到那些瓶瓶罐罐，还有显微镜下奇奇怪怪的图像，我就像个丈二和尚摸不着头脑。
我就问他：“小李啊，你整天对着这些小玩意儿，到底在干啥呢？”他就兴奋地拉着我到一台显微镜前，说：“你看，这就是经过尼氏染色后的细胞，漂亮吧！”我凑近一看，妈呀，那些细胞就像被施了魔法一样，有着清晰的结构，和旁边没染色的细胞比起来，简直就是丑小鸭和白天鹅的区别啊。
那这个尼氏染色方法到底是怎么回事呢？其实啊，它是一种专门用来对神经元细胞进行染色的技术。
神经元细胞可是我们身体里非常重要的细胞呢，就像一个个小小的信息传递员，在我们的神经系统里跑来跑去传递信号。
如果把我们的身体比作一个超级大的城市，那神经元细胞就像城市里的邮递员，负责把各种信息送到各个角落。
尼氏染色所用的染色剂啊，就像是一把神奇的钥匙，能够打开细胞结构展示的大门。
它主要是和神经元细胞里的尼氏体结合。
这尼氏体呢，就像是神经元细胞的小仓库，里面储存着很多东西，像蛋白质之类的。
染色剂和尼氏体一结合，就好比是给小仓库贴上了彩色的标签，这样我们就能清楚地看到它们啦。
我又好奇地问小李：“这染色的过程是不是很复杂啊？”小李笑了笑说：“也不算太复杂啦，但是得特别细心。
”他告诉我，首先得把要染色的组织样本处理好。
这就像做饭前得把食材洗干净切好一样重要。
组织样本得固定住，就像把调皮的小动物关进笼子里一样，这样它才不会乱跑乱动，在染色的时候才能好好配合。
然后呢，要经过一系列的处理步骤，就像给这个样本做一场特殊的“SPA”。
这个过程可不能马虎，要是哪个步骤出了错，就像做菜少放了盐一样，最后的结果可就不对味喽。
在染色的时候，那更是得小心翼翼。
染色剂的浓度得调配得刚刚好，多了不行，少了也不行。
尼氏染色步骤
尼氏染色步骤
尼氏染色法，又称尼氏显色法或尼氏酸性显色法，是一种常用的微生物学染色方法。
它能够有效地检测出体内的细菌，以及对病原体的检测和鉴定，它的应用非常广泛，是现代细菌学中不可缺少的重要技术手段。
尼氏染色法是一种酸性染色法，它利用了细菌与细菌杆菌体内含有高浓度的酸性脂肪酸而形成的细菌染色体的特殊性，将其酸性染料与细菌染色体结合起来，使细菌染色体呈色，从而使细菌染色体可见，进而诊断出病原体。
一般情况下，尼氏染色步骤如下：
1.准备标本
通常情况下，从被检样品中提取的细菌，用培养基悬浮液作为染色标本，然后将其涂在载玻片上，形成薄膜，即可进行尼氏染色。
2.加入染料
将尼氏染料溶于0.8%的盐酸中，然后将其滴加在载玻片上，盖上盖玻片，放置20分钟左右，使染料与细菌染色体结合起来，使细菌染色体变色，从而可见细菌染色体。
3.洗涤
将染色好的载玻片放入10%的盐酸中洗涤，洗涤时间约为15-30分钟，使多余的染料从细菌染色体中除去，以便观察细菌染色体。
4.染色结果观察
观察染色结果，细菌染色体可见，呈蓝色或蓝绿色，从而实现病原体的检测和鉴定。
尼氏染色法是一种快速、准确、经济的检测病原体的方法，由于它简单易行，因此深受细菌学家和微生物医学家的青睐。
近年来，随着各种新型抗菌药物的开发，尼氏染色法也受到了更多的关注，它不仅能够检测出体内的细菌，而且还可以检测出病原体的抗药性，为新型抗菌药物的开发奠定了基础。
几种常用的染色方法
几种常用的染色方法一、美兰染色法在已染色、固定好的抹片上，滴加适量的（足够覆盖涂抹点即可）美兰染色掖，经1—2分钟，水洗，干燥（可用吸水纸吸干，或自然干燥，但不能烤干），镜检。
二、革兰氏染色法1、在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色掖，经1—2分钟，水洗。
2、加革兰氏碘溶液于抹片上媒染，作用1—3分钟，水洗。
3、加95%酒精于抹片上脱色，约30秒至1分钟，水洗。
4、加稀释石炭酸复红（或沙黄水溶液）复染10—30秒，水洗。
5、吸干或自然干燥，镜检。
革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。
三、抗酸染色法1、萋—尼氏抗酸染色法：首先在已干燥、固定好的抹片上，滴加较多量的石炭酸复红染色液，在玻片下以酒精灯火焰微微加热至发生蒸气为度（不要煮沸），维持微微发生蒸气，经3—5分钟，水洗。
然后用3%盐酸酒精脱色，至标本无色脱出为止，充分水洗。
再用碱性美兰染色液复染约1分钟，水洗。
最后吸干，镜检。
抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌呈蓝色。
2、又法之一：滴加石炭酸复红液于抹片（在已干燥固定过的）上染1分钟，水洗；再用1%美蓝酒精溶液复染20秒，水洗，干燥，镜检。
抗酸菌红色。
镜检前对光检查染色片，标本片务必全呈蓝色，如标本片呈现红色或棕色，表示复染不足，应在作复染5—10秒，再观察，如仍未全呈蓝色时，仍可反复复染，至符合要求为止。
四、瑞特氏染色法1、抹片自然干燥后，滴加瑞特氏染色液于其上，为了避免很快变干，染色液可多加些，或者看情况补充滴加；经1—3分钟，再加约与染液等量的中性蒸馏水或缓冲液，轻轻晃动玻片，使与染液混匀，经5分钟左右，直接用水冲洗（不可先将染液倾去），吸干或烘干，镜检。
细菌染成蓝色，组织、细胞等物呈其他颜色。
2、另一染色法：抹片自然干燥后，按涂抹点大小，盖上一块略大的清洁滤纸片，在其上轻轻滴加染色液，至略浸过滤纸，并看情况补滴，维持不使变干；染色3—5分钟，直接以水冲洗，吸干或烘干，镜检。
此法的染色液经滤纸滤过，可大大避免沉渣粘附抹片上而影响镜检观察。
生物素染色及尼氏染色方法
● PBS缓冲液配制：0.01%，1000ml，pH值7.4NaCl 8gKCl 0.2gNa2HPO41.150gKH2PO40.2g●多聚甲醛溶液配制：4%，100ml多聚甲醛PBS溶液100ml● Triton-X溶液配制：0.5%PBS溶液200mlTriton-X 1ml●无水酒精75%酒精、95%酒精也由无水酒精与蒸馏水按体积比配制● DAB显色试剂盒武汉博士德生物工程有限公司，产品编号：AR1022试剂盒组成：显色剂A：DAB×20倍浓缩液，3ml显色剂B：H2O2×20倍浓缩液，3ml显色剂C：×20倍TBS浓缩缓冲液，3ml ● SABC试剂盒武汉博士德生物工程有限公司，产品编号：SA1025●二甲苯●中性树脂（用二甲苯溶解后使用）●镀膜载玻片（自制镀膜）镀膜用铬矾明胶(即配即用)配制：每100ml明胶1g蒸馏水100ml铬矾（硫酸铬钾）0.1g（水浴搅拌溶化）★溶解后需要过滤再用①载玻片在放有洗涤剂的沸水中，沸腾1小时；②冲洗晾干后，放入重铬酸钾溶液中过夜；③用蒸馏水冲洗后，浸入无水酒精过夜；④取出后用烘箱烘干；⑤浸润铬矾明胶，用烘箱烘干；⑥重复⑤，完成备用。
(一) 生物素染色①脑片放入4%多聚甲醛中过夜，固定，4℃；②换入PBS中过夜，4℃；③放入0.5%Triton溶液中1小时；④ PBS漂洗3次，每次5分钟；⑤脑片放入SABC溶液中处理12-16小时，4℃；⑥ PBS漂洗3次，每次5分钟；⑦脑片放入DAB液（取1ml双蒸水，先后加入DAB试剂盒中的TBS浓缩液和DAB浓缩液，加入后均需充分混匀）中处理10分钟；⑧滴入DAB试剂盒中的H2O2浓缩液，视脑片的颜色适时以PBS稀释停止反应，一般为1分钟左右；⑨将脑片按电生理标记时的位置，呈上下镜像放置到玻片上，吸去多余水分，然后让其自然风干，完全贴合在玻片表面；10：风干后，浸入75%酒精3分钟；11 ：换入95%酒精3分钟；12 ：无水酒精脱水3次，每次1分钟；13 ：二甲苯透明2次，每次5分钟；14 ：滴上少许用二甲苯溶解的树脂，盖上盖玻片，风干后制成永久封片。
尼氏染色法的原理和应用
尼氏染色法的原理和应用1. 原理尼氏染色法是一种常用的细胞染色技术，用来染色显示细胞核。
它是以尼氏酸为染色剂，可以与细胞核内的核蛋白质结合，使细胞核显色，从而方便观察细胞核形态和核染色质的结构。
尼氏染色法的原理主要包括以下几个步骤：1.细胞固定：首先，需要将待染细胞固定在载玻片上，一般使用甲醛等化学物质进行固定。
固定后的细胞可以保持形态和结构的完整性。
2.脱水：固定后的细胞需要经过脱水处理，即将细胞质内的水分逐渐脱除，以便后续的染色和显微观察。
一般用乙醇进行脱水处理。
3.染色：在脱水后的细胞上滴加尼氏酸染色剂，尼氏酸可以与细胞核内的核蛋白质结合，从而显色细胞核。
一般情况下，染色时间为几分钟至数十分钟。
4.水洗：尼氏染色完成后，需要用水充分洗去多余的染色剂，以防止染色过深。
5.固定：洗净后，可以用碘或碘酒溶液进行固定处理，同时也有助于增强染色效果。
2. 应用尼氏染色法在生物学和医学领域有广泛的应用，主要用于以下方面：2.1 细胞学研究尼氏染色法可以染色显示细胞核的形态和结构，对于研究细胞学过程以及细胞功能起着重要的作用。
通过尼氏染色，可以观察到细胞核的大小、形态以及染色质的状态，进而对细胞的生理状态和变化进行分析和研究。
2.2 病理学诊断在病理学中，尼氏染色法可用于诊断各种组织细胞核变化引起的疾病。
例如，在肿瘤病理学中，可以通过尼氏染色观察肿瘤细胞核的异常形态和结构，以便进行病理诊断和鉴定。
2.3 医学教学尼氏染色法是一种简单、易于操作的细胞染色技术，因此在医学教学中非常常用。
通过尼氏染色，可以展示细胞核的结构和变化，帮助学生更好地理解和掌握细胞学的基本知识和技术。
2.4 生物科研在生物科研中，尼氏染色法也是一种重要的实验手段。
通过染色显示细胞核的形态和结构，可以对细胞内基因组的组织和分布进行观察和研究，从而揭示细胞核的功能和调控机制。
3. 优点和注意事项尼氏染色法具有以下优点：•显色清晰：尼氏酸染色剂与核蛋白质结合后，显色效果清晰，细胞核易于观察和分析。
尼氏染色-全面
4、将脑组织用502胶水固定，在振荡切片机上切片， 厚度为25μm。 5、将切好的脑片浸于0.5%的明胶中，用毛刷将脑片贴 到预先用明胶处理的载玻片上，然后自然风干。 6、切片染色：将脑片置于0.5%甲苯胺蓝（母液：甲苯 胺蓝1g，无水乙醇100ml。使用时按1:1比例与新 鲜的0.1%NaCl溶液混合成工作液）或焦油紫（焦 油紫0.1g；蒸馏水99ml；1%冰醋酸1ml）中室温下 染色30min；
尼氏染色法的优势何在？ 尼氏染色法的优势何在？
以往显示神经元中尼氏体多采用苏木精-伊红染色方法,此 法虽然也能观察到胞质中嗜碱性颗粒,但结构不甚清晰,胞 核、核仁、尼氏体颗粒模糊,分界不清,轴突、树突难以辨 认。 在尼氏染色中尼氏体清晰可辨,核、核仁也非常清晰,而且 很容易区分轴突和树突,收到了既可辨认器官又可同时观 察细胞质特殊结构的效果。
பைடு நூலகம்
7、切片用蒸馏水冲洗3次； 8、切片依次浸入75%、80%、95%的酒精中，每次约1min； 9、切片入特殊分色液中分色，约15s； 10、切片浸入100%酒精I，II，各1min； 11、切片浸入二甲苯I，II中透明，各5min； 12、中性树胶封片。 13、显微镜下观察照相并对尼氏染色阳性神经元进行计数。
三、注意事项
Nissl染色液的染色能力很强，并且染色 后很难去除，请注意勿使染色液沾染皮肤和衣 物等。
四、思考题
除了尼氏染色法以外，你知道还有哪些方 法可以对神经元进行特殊的染色，并详述其原 理和步骤。
用尼氏染色法观察小鼠海马及 皮层中神经元的分布情况
神经生物学实验室
一、实验原理
尼氏染色法（Nissl staining）是德国病理学家 F.Nissl（1860-1919）于1892年创立的，碱性染料染色 后发现了神经元胞体中的尼氏体。 神经元是神经系统的结构和功能单位,尼氏体是神经元 的特征性结构之一,尼氏体（Nissl body）又称虎斑,广 泛存在于神经元胞体和树突内,具有嗜碱性的特点。
尼氏染色全面
7、切片用蒸馏水冲洗3次； 8、切片依次浸入75%、80%、95%的酒精中，每次约1min； 9、切片入特殊分色液中分色，约15s； 10、切片浸入100%酒精I，II，各1min； 11、切片浸入二甲苯I，II中透明，各5min； 12、中性树胶封片。 13、显微镜下观察照相并对尼氏染色阳性神经元进行计数。
用尼氏染色法观察小鼠海马及 皮层中神经元的分布情况
神经生物l staining）是德国病理学家 F.Nissl（1860-1919）于1892年创立的，碱性染料染色 后发现了神经元胞体中的尼氏体。
神经元是神经系统的结构和功能单位,尼氏体是神经元 的特征性结构之一,尼氏体（Nissl body）又称虎斑,广 泛存在于神经元胞体和树突内,具有嗜碱性的特点。
在生理情况下, Nissl小体大而数 量多，说明神经细胞合成蛋白质 的功能较强；相反在神经细胞受 到损伤时，Nissl小体的数量会减 少甚至消失。
用于尼氏染色的常用染料有：焦油紫（cresyl violet）、硫堇（thionine）和甲苯胺蓝 (toluidine blue)。
二、实验步骤
3、待充分固定后，剪下小鼠头部并开颅取脑，再浸入4% 多聚甲醛1d。
4、将脑组织用502胶水固定，在振荡切片机上切片， 厚度为25μm。
5、将切好的脑片浸于0.5%的明胶中，用毛刷将脑片贴 到预先用明胶处理的载玻片上，然后自然风干。
6、切片染色：将脑片置于0.5%甲苯胺蓝（母液：甲苯 胺蓝1g，无水乙醇100ml。使用时按1:1比例与新 鲜的0.1%NaCl溶液混合成工作液）或焦油紫（焦 油紫0.1g；蒸馏水99ml；1%冰醋酸1ml）中室温下 染色30min；
1、昆明小鼠以0.48%的戊巴比妥钠0.02ml/g腹腔注射麻醉， 待其麻醉后，迅速用手术剪刀及镊子剪开肚皮使其心脏 暴露，将针头从右心房插入，并用动脉夹夹住，剪破静 脉窦。
应用硫堇染色法对神经元尼氏体进行染色
循环样液体积增大 ,单位时间内循环次数下降 ,因此还原 效率 P 下降 ,为了保证还原效率 P 达到 98 %以上 ,需加加循 环时间 。循环样液体积减小 ,单位时间内循环次数增多 ,因此 还原效率 P 提高 ,为了节省分析时间 ,可减少循环时间 。从表 2 可以看出 ,循环时间选取 3 min 可达到较高的还原效率 。从 理论上计算 ,若每次流过镉柱的还原效率为 p ,循环 n 次总还 原效率 P = 1 - (1 - p) n 。最重要的特点是柱还原效率低于 50 %也不影响分析结果 。 4 乳品中硝酸盐的测定方法 4. 1 样品处理 称取 2. 000 g 乳粉于 25 ml 烧杯中 ,加2. 5 ml 硼砂饱和溶液 ,搅拌均匀 ,以 70 ℃左右的水约 50 ml 将样品全 部洗入 100 ml 比色管中 ,置沸水浴中加热 15 min ,取出后冷 却至室温 ,加入 1 ml 亚铁氰化钾溶液 ,混匀 ,再加入 1 ml 乙酸 锌溶液 ,加水至刻度 ,混匀 ,放置 0. 5 h 。将滤纸折成锥形 ,放 在 25 ml 小烧杯上 ,上清液用于过滤 ,弃去初滤液 5 ml ,其余 15 ml 滤液备用 。 4. 2 吸取 8. 00 ml 滤液 ,加入至 8 号的 10 ml 比色管中 ,用于 测定亚硝酸钠 。 4. 3 测定硝酸钠 加入 4 滴氨缓冲液至加 样 杯 中 , 吸 取 2. 00 ml滤液加入至循环镉柱的加样杯中 ,挂勾挂在加样杯的 壁上 ,开动泵开关 ,样液经镉柱内循环后滴入加样杯的液面上 端 。循环 2 min 后 ,将出挂勾挂在 9 号 10 ml 比色管壁上 ,收 集被还原的溶液 ,将蒸馏水少量多次地加入加样杯中冲洗镉 柱 ,冲洗液并入 9 号比色管中 ,定容至 10 ml 。 4. 4 配制标准工作曲线被测液 准备 9 支 10 ml 比色管 ,按 表 3 配制 。 1 号至 8 号管中加入 4 滴氨缓冲液 ,加水至 10. 00 ml 。1 号至 9 号管中各加入 0. 50 ml 显色剂 ,混匀 ,静置 15 min 后用 1 cm 比色杯 ,以 1 号空白管调零点 ,于波长 538 nm 处测各管
尼氏(Nissl)染色液说明书
尼氏(Nissl)染色液 产品编号产品名称包装sC0117 尼氏(Nissl)染色液 100ml产品简介：碧云天生产的尼氏(Nissl)染色液(Nissl Staining Solution)是神经生物学家广泛使用的一种Nissl 染色液，用于石蜡或冰冻切片神经元细胞浆中的尼氏小体(Nissl body)染色。
Nissl 染色是以德国的精神病学家和神经病理学家Franz Nissl 的名字命名的。
Nissl 染色液染色后呈蓝紫色，常用于显示脑或脊髓的基本神经结构。
Nissl 小体大而数量多，说明神经细胞合成蛋白质的功能较强；相反在神经细胞受到损伤时，Nissl 小体的数量会减少甚至消失。
本Nissl 染色液染色的有效成分是Cresyl violet 。
Cresyl violet 可以和RNA 或DNA 结合，可以染色粗面型内质网上的核糖体，也可以染色细胞核。
染色后使细胞体呈现斑驳的(mottled)蓝紫色染色。
一个包装的本染色液至少可以染色200个样品。
包装清单：产品编号产品名称 包装 C0117尼氏(Nissl)染色液 100ml — 说明书 1份保存条件：室温避光保存，至少一年有效。
注意事项：特别注意：Nissl 染色液的染色能力很强，并且染色后很难去除，请注意勿使染色液沾染皮肤和衣物等。
需自备4%多聚甲醛、70%乙醇和95%乙醇。
如果需要脱水、透明和封片处理，还需自备二甲苯，中性树胶或其它封片剂。
如果样品是石蜡切片，需自备90%乙醇，无水乙醇以及二甲苯。
样品数量较多时，可以使用碧云天生产的染色架和染色缸，便于操作。
第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：1. 样品处理 a. 对于石蜡切片：二甲苯中脱蜡5-10分钟，共三次。
尼氏染色结果描述
尼氏染色结果描述
【最新版】
目录
1.尼氏染色的定义和原理
2.尼氏染色的步骤
3.尼氏染色结果的描述
4.尼氏染色在医学诊断中的应用
正文
尼氏染色是一种常用的细胞学染色方法，其原理是利用尼古拉夫试剂与细胞内的 DNA 结合，形成蓝色染色体，从而实现对细胞结构的观察。
这种方法广泛应用于生物学研究和医学诊断领域。
尼氏染色的步骤主要包括以下几个：首先是制片，将待观察的细胞样本制作成玻片；其次是水解，用氢氧化钠溶液将细胞膜和细胞器破坏，以便尼古拉夫试剂更好地进入细胞；接着是染色，将尼古拉夫试剂滴在玻片上，让试剂与 DNA 结合；最后是冲洗和封片，将多余的试剂冲洗干净，并在玻片上覆盖一片盖片，以便于观察。
尼氏染色结果的描述通常包括以下几个方面：染色体的形态、数量、大小和排列方式。
正常情况下，染色体应该呈现出清晰的蓝色，排列在细胞的中央区域。
在某些病理情况下，染色体的形态和数量可能会发生改变，比如在肿瘤细胞中，染色体可能会增多或者排列紊乱。
尼氏染色在医学诊断中的应用非常广泛，尤其是对于肿瘤的诊断。
通过观察肿瘤细胞中的染色体形态和数量，医生可以初步判断肿瘤的性质和恶性程度，从而为治疗方案的制定提供重要的依据。
此外，尼氏染色还可以用于对遗传病的诊断和研究，以及对基因突变和染色体畸变的分析。
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改进尼氏染色法
作业二4.目前各种技术资料上登载的各种硫堇染色法，均存在标本染色逐渐消退的问题。
请设计合理的方法，使硫堇着染的神经细胞（尼氏染色）不褪色。
一、尼氏染色原理：神经元细胞体包括一个具有皱褶核膜的大细胞核、稀疏的染色质和一个明显的核仁。
在细胞体中细胞质是尼氏颗粒，即能够代表粗面内质网并在很多神经元中产生特异的斑点状嗜碱性表现的嗜碱性颗粒。
尼氏颗粒可以用很多染色来显示如中性红、亚甲基蓝、甲苯胺蓝和甲基紫等。
染色的变异、pH和分化的时间使一些染色既可以仅突出尼氏物质，也可以显示神经元的细胞核和神经胶质。
各种神经细胞内都含有尼氏体，但其形状、数量、分布位置常常不同，形状有大有小，如三角形，有的为椭圆形。
尼氏体主要分布于神经细胞的浆中，也存在于树突中，但不在于轴突和包体的轴丘。
尼氏体会因为生理状态的变化而变化，尼氏体是神经元内合成蛋白质合成的重要部位，当神经元受到刺激后，包体内的尼氏体会明显减少。
通常尼氏能被碱性染料如硫堇、亚甲蓝、甲苯胺蓝和焦油紫等染料染成紫蓝色。
二、一般步骤：1. 样品处理a) 对于石蜡切片：二甲苯中脱蜡5-10分钟，共三次。
注：脱蜡不充分会导致染色不均匀。
无水乙醇5分钟。
90%乙醇2分钟。
70%乙醇2分钟。
蒸馏水2分钟2. 尼氏(Nissl)染色对于上述处理好的样品：尼氏(Nissl)染色液染色染色3-10分钟(可以根据染色结果和要求调整时间，染色时温度提高到37-50℃对于25-50微米等较厚的切片可以使染色更均匀）。
蒸馏水洗涤2次(每次数秒钟即可)。
95%乙醇约5秒。
此时，如果需要直接观察，可以用70%乙醇洗涤2次。
如需脱水、透明后封片按后续步骤进行，70%乙醇洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。
注：如果用于免疫组化等染色后的复染，可以参考上述步骤在其它染色完成后直接进行尼氏(Nissl)染色。
3. 脱水、透明、封片或进行其它染色a) 脱水、透明、封片：95%乙醇脱水2分钟。
尼氏染色步骤
小鼠脑冰冻切片后，想做尼氏染色，用焦油紫，具体步骤是什么？焦油紫的溶液该如何配制？焦油紫染液的配制：焦油紫/0.1g蒸馏水/99ml1%冰醋酸1ml冰冻切片氯仿中1分钟；无水酒精中1分钟；95%酒精、70%酒精各1分钟，蒸馏水洗片刻；进入焦油紫染液染色30分钟（37度温箱中染色10分钟），蒸馏水洗涤；95%酒精分色；常规脱水、透明、封片。
尼氏体呈紫色，细胞核呈淡紫色，胶质细胞呈淡紫色。
研究脊椎动物中枢神经系统的细胞构筑学,最常用的方法是神经细胞染色,也称尼氏染色.虽然碱性染料都可用于中枢神经系统染色,但常用的有以下几种: 焦油紫,甲苯胺蓝、硫堇.甲苯胺蓝属于人工合成的醌亚胺类碱性染料，有两个发色团，一个是亚胺基(- N =), 另一个是醌基，同类的有硫堇、亚甲兰，次甲基紫、中性红、焦油紫等；因为是碱性燃料，多作为细胞核染色剂－－细胞核中的核酸含有酸性物质对碱性燃料有亲和力，称之为“嗜碱性”。
硫堇染液(工作液)①干液(硫堇)：硫堇1g或2g溶于100mL 50%乙醇中，溶解后过滤备用；②醋酸钠缓冲液：醋酸钠·3H2O 9.7g，巴比妥钠14.7g，溶于500mL蒸馏水中；③0.1 mol／L盐酸；按①：②：③=40：28：32比例配成混合液，调pH5.7±0.2，即得硫堇工作液。
尼氏体又称虎斑,是神经细胞的一种特殊结构,具有嗜碱性的特点易被碱性染料,如焦油紫,甲苯胺蓝、硫堇等着染.受染后呈块状(形如虎斑)或粒状.尼氏体分布在神经细胞除轴突之外的细胞质中,核周围颗粒较大 , 近边缘处较小而细长.尼氏体还可因生理状态的改变而变化,如在生理情况下,尼氏体大而数量多,反映出神经细胞旺盛的功能状态;在神经元受损伤时尼氏体的数量可减少甚至消失 .因此取材时应尽量获取新鲜材料才能制作出满意的标本.mickeyzq wrote:焦油紫染液的配制：焦油紫/0.1g蒸馏水/99ml1%冰醋酸1ml冰冻切片氯仿中1分钟；无水酒精中1分钟；95%酒精、70%酒精各1分钟，蒸馏水洗片刻；进入焦油紫染液染色30分钟（37度温箱中染色10分钟），蒸馏水洗涤；95%酒精分色；常规脱水、透明、封片。
neisser染色法
neisser染色法
Neisser染色法是一种常用于细菌学的染色技术，主要用于检测革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
该染色法是由德国医生艾米尔·冯·贝林格·内瑟（Emil von Behring Neisser）于19世纪末提出的。
Neisser染色法的步骤包括：
1. 取一张已制备的玻片，将细菌样本涂抹在玻片上。
2. 用热的石碱溶液加热玻片，使得细菌固定在玻片上。
3. 用碘溶液浸泡玻片，使得细菌变成深蓝色。
4. 在玻片上滴加酒精，使得细菌脱色。
5. 用洗净的水冲洗玻片，去除多余的染色剂。
6. 最后在玻片上滴加紫色素，使得细菌呈现紫色。
Neisser染色法的原理是利用细菌细胞壁的特性，革兰氏阳性
菌由于细胞壁含有较多的壁多糖和穿过细胞壁的穿透蛋白质，因此
在染色后呈紫色；而革兰氏阴性菌由于细胞壁含有较少的壁多糖，
染色后会被酒精脱色，再用紫色素染色后呈粉红色。
Neisser染色法的优点是简单易行，能够快速区分细菌的革兰
氏阳性和革兰氏阴性，有助于快速诊断疾病和选择合适的治疗方法。
但也存在着一些局限性，比如对某些变态菌和不易染色的菌株可能
表现不佳。
总的来说，Neisser染色法在细菌学研究和临床诊断中具有重
要的应用意义，是一种简便而有效的细菌染色技术。
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三.镜检质量控制：
取染色完毕且已干燥的玻片，痰膜向上放 置在玻片台上并以卡尺固定。首先使用40× 物镜，转动卡尺移动玻片至痰膜左端，将光 线调节至适当亮度，调节焦距至可见细胞形 态，移开40×物镜，在玻片上滴1～2滴镜油， 使用100×油镜进行细致观察。在淡蓝色背景 下，抗酸菌呈红色：其它细菌和细胞呈蓝色。 为防止AFB的交叉污染，严禁油镜镜头直接接 触玻片上的痰膜。
制片质量评价的标准
制片质量要求： 痰细胞，痰膜面积、厚薄、脱落合格率 ≥90%，染色合格率≥95%
合格与不合格涂片对比
太厚 太大、不均匀 太大、不均匀、脱色不佳 涂片不佳、不均匀 太小 脱落 脱落 太薄 不均匀、脱落、脱色不佳
三.镜检质量控制:镜检要求
（一）为防止抗酸杆菌的交叉污染，严禁油镜头 直接接触涂片上的痰膜。 • （二）仔细观察300视野，不少于10分钟。 • （三）每个工作日，一名镜检人员的涂片阅读 量不应超过25张。 • （四）连续阅读 10-12 张涂片后，应休息 20 分 钟左右。 • （五）采用自查和互查方式，至少抽查复验当 日10%涂片，并进行质控登记。
萋-尼氏染色条件：
二.萋-尼氏染色条件：
附件 9
痰涂片染色流程图
涂 痰 膜 自 然 干 燥 火 焰 固
定
碱 性 复 红 乙 醇 加 热 染 分 钟
流 水 冲 洗
盐 酸 酒 精 脱 色
流水 冲 洗
美 兰 复 染
流 水 冲 洗
自 然 干 燥 镜 检
30
秒
5
合格涂片的判断
• （一）肉眼观察染色后的痰膜应呈均匀淡 蓝色，无红色斑块。 （二）染色后的涂片放置在报纸上，如果 文字透过痰膜不能被看清，表明该涂片涂 抹的太厚。 （三）染色后的痰膜脱落部分应小于整个 涂抹面积的10%。
神经通路示踪技术 尼式染色
步骤: 二甲苯脱蜡去石蜡5分钟; 二甲苯脱蜡去石蜡5分钟; 二甲苯脱蜡去石蜡5分钟 100%的酒精去二甲苯5分钟; 100%的酒精去二甲苯5分钟 90%的酒精水化2分钟; 80%的酒精水化1分钟; 70%的酒精水化1分钟 用蒸馏水洗; (以上步骤统称为脱蜡至水) 0．5%的苏木精染色，室温5—10分钟； 水洗； 1%的盐酸酒精分色30—60秒； 水洗； 流水促蓝；
神经细胞化学性质显示方法
1．组织化学方法
（1）显示脱氧核糖核酸的孚尔根反应法(Feugen reaction) 利用schiff试剂显示细胞内DNA的经典方法， 其基本原理是组织经盐酸水解后打开DNA分子中脱氧 核糖和嘌呤碱之间的连接键，使其释放出脱氧核糖核 酸中的醛基，醛基与schiff试剂中的亚硫酸品红结合， 而在ioning)
本法是用特殊的振动切片机进行切片，振动切 片机的特点是其刀片进行横向切割运动， 故可 切割新鲜未经冰冻，末经固定的组织，切片厚 度可达10µm。常用于免疫细胞化学、免疫电 镜及电生理学脑厚片技术。
5．冷冻干燥切片(freezing drying sectioning)： 将新鲜组织放入经液氮预冷（-160℃）的异戊 烷中骤冷后，入真空内干燥，已干燥的组织块 进行真空包埋后切片。其特点是细胞在骤冷的 同时立即停止一切生物化学变化，可研究骤冷 时细胞内的物质变化状况。
1%的伊红室温染色2-5分钟； 水洗； 70%的酒精分色30—60秒； 80%的酒精脱水1分钟； 90%的酒精脱水1分钟； 100%的酒精脱水2钟； 100%的酒精脱水2钟； 二甲苯Ⅰ透明5分钟； 二甲苯Ⅱ透明5分钟； 中性树胶封片。 结果： 1． 细胞质染成红色 2． 细胞核染成蓝色
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小鼠脑冰冻切片后，想做尼氏染色，用焦油紫，具体步骤是什么？焦油紫的溶液该如何配制？
焦油紫染液的配制：
焦油紫/0.1g
蒸馏水/99ml
1%冰醋酸1ml
冰冻切片氯仿中1分钟；
无水酒精中1分钟；
95%酒精、70%酒精各1分钟，蒸馏水洗片刻；
进入焦油紫染液染色30分钟（37度温箱中染色10分钟），蒸馏水洗涤；
95%酒精分色；
常规脱水、透明、封片。
尼氏体呈紫色，细胞核呈淡紫色，胶质细胞呈淡紫色。
mickeyzq wrote:
焦油紫染液的配制：
焦油紫/0.1g
蒸馏水/99ml
1%冰醋酸1ml
冰冻切片氯仿中1分钟；
无水酒精中1分钟；
95%酒精、70%酒精各1分钟，蒸馏水洗片刻；
进入焦油紫染液染色30分钟（37度温箱中染色10分钟），蒸馏水洗涤；
95%酒精分色；
常规脱水、透明、封片。
尼氏体呈紫色，细胞核呈淡紫色，胶质细胞呈淡紫色。
你的没有经过复染，对比也可以这么鲜明啊
我用的是1％的甲苯胺蓝，具体步骤是：
常规石蜡切片，二甲苯透明，酒精梯度复水，入1％甲苯胺蓝室温下染3min，自来水冲洗，95％酒精分化，0.5％伊红复染1s，水洗，透明封片，但是结果不好，伊红复染后颜色很深，原来的蓝色被覆盖的很严重，不知道该怎么改进
换焦油紫看看,焦油紫着色比较深.
（二）神经细胞尼氏体染色
正常的神经细胞都含有一定数量的尼氏化，它们主要分布于神经细胞的浆中，形状有大有小，如三角形，有的为椭圆形。
这些物质能被大部分的蓝色染料所染色，这些染料如焦油坚牢紫（Cresyl fast violet）亚甲蓝（methylene blue）甲苯胺蓝（toluidine blue）硫董（thionin）等钭其染为蓝色。
但是，当神经细胞受伤后，胞质内的尼氏体更可发生变化，严重的可消失。
焦油坚牢紫显示尼氏体
焦油坚牢紫1g
蒸馏水100ml
*作方法：
1、切片脱蜡至水
2、用焦油坚牢紫水溶液浸染20-30分钟
3、水洗
4、用95%酒精分化
5、无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶
结果：神经细胞单位：紫-蓝色
细胞核：紫-蓝色
尼氏体：紫-深蓝色
注意：1、应用酒精分化切片，要迅速，防止过度分化，将切片上的颜色全部脱掉。
神经纤维染色
使用说明：
1. 样品处理
a) 对于石蜡切片：
二甲苯中脱蜡5-10分钟，共三次。
注：脱蜡不充分会导致染色不均匀。
无水乙醇5分钟。
90%乙醇2分钟。
70%乙醇2分钟。
蒸馏水2分钟
2. 尼氏(Nissl)染色
对于上述处理好的样品：
尼氏(Nissl)染色液染色染色3-10分钟(可以根据染色结果和要求调整时间，染色时温度提高到37-50℃对于25-50微米等较厚
的切片可以使染色更均匀）。
蒸馏水洗涤2次(每次数秒钟即可)。
95%乙醇约5秒。
此时，如果需要直接观察，可以用70%乙醇洗涤2次。
如需脱水、透明后封片按后续步骤进行，70%乙醇洗涤后仍可按照
后续步骤进行脱水、透明和封片处理。
注：如果用于免疫组化等染色后的复染，可以参考上述步骤在其它染色完成后直接进行尼氏(Nissl)染色。
3. 脱水、透明、封片或进行其它染色
a) 脱水、透明、封片：
95%乙醇脱水2分钟。
换用新鲜的95%乙醇再脱水2分钟。
二甲苯透明5分钟。
换用新鲜的二甲苯，再透明5分钟。
用中性树胶或其它封片剂封片。
显微镜下观察，细胞呈现斑驳的蓝紫色染色。
b) 进行其它染色：
如果进行免疫荧光染色，或进行Hoechst等荧光染料的染色，在Nissl染色液染色后：70％乙醇洗涤2次，每次2分钟。
PBS或生理盐水或TBS或TBST等用于免疫染色或荧光染料染色的溶液浸泡5分钟。
然后就可以进行免疫荧光染色或其它荧光染料的染色了。
1.石蜡切片厚8-10微米，切片脱蜡至水
2.蒸馏水洗
3.硫堇水溶液染色（60度温箱内浸染30-60分钟）
4.蒸馏水洗
5.乙醇分化液迅速分化
6.无水乙醇迅速脱水、透明、封固
结果：尼氏体深兰色，细胞核淡兰色。
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