第四章抗微生物药物和敏感性试验3
抗菌药物敏感试验+细菌耐药性检测
稀释法的特点
? 定量的药敏试验，测定MIC 、MBC 。 ? 方法比较繁琐，手工操作一般不作为常规试验，常
用于调查罕见耐药。 ? 自动微生物鉴定药敏分析系统采用微量稀释法检测
MIC 。
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二、纸片扩散法（ disc diffusion test)
原理：
（Kirby-Bauer 法）
? 将浸有抗菌药物的纸片贴在涂有测试菌的琼脂平板上。 抗菌药物向琼脂四周扩散形成递减的梯度浓度。
5
6
CLSI 标准 治疗浓度的上限 即表中的 R
治疗浓度
治疗浓度的下限 即表中的 S
耐药
中介耐药 敏感
MIC
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第一节、抗菌药物敏感性试验方法
需氧和兼性厌氧菌
8
需氧和兼性厌氧菌药敏试验的方法
? 稀释法 ? 肉汤稀释法（试管稀释法） ? 琼脂稀释法（平板稀释法）
? 纸片扩散法（纸片法） ? E-试验 ? 联合药物敏感试验
的效果之和； 20％～25％
? 相加作用：它们联用时的效果 等于单用两种抗生素效果
之和； 60％～70％
? 无关作用： 两种抗生素联用的效果， 仅相当于其中一种 具有较强作用的抗生素的效果；
3
血药浓度与 MIC之间的关系
耐药
上限
中介耐药
下限
敏感
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敏感和耐药的概念
抗菌药物的治疗浓度与MIC 的关系：
? 若MIC 小于治疗浓度， 则为“敏感”（Sensitive , S ），推荐使用。
? 若MIC 大于治疗浓度， 则为“耐药”（ Resistant , R ）；
? 若MIC 介于治疗浓度的上下限之间 ， 则为“中度耐药”（ Intermediate , I ）或中度敏感
第4章细菌药敏试验及其耐药表型检测
推测其他药物的敏感性
青霉素 氨苄西林，美洛西林
替卡西林
头孢噻吩
肠杆菌科
头孢拉定，头孢氨苄 头孢克罗
奈啶酸 万古霉素
2019/1/28
肠杆菌科 所有
所有氟喹诺酮类 替考拉宁
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药敏试验-稀释法
以一定浓度的抗菌药物与含有被试菌株的培养基进
行一系列不同倍数稀释（通常为双倍稀释），经培 养后观察其最低抑菌浓度。
2
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不同国家的判定折点 －可能不同
原因：
用药剂量不同，服药的间隔不同
用常规用量治疗有效 常规用药时达到的平均血药浓度超过细菌的
MIC 5倍以上。
耐药（Resistance）
用常规用量治疗不能抑制细菌的生长 MIC高于药物在血、体液中可能达到的浓度
敏感性分类（2）
中介 (Intermediate)
MIC接近血、体液中药物的浓度，治
疗反应率低于敏感株
药物生理浓集部位有效 (尿-FQ) 加大用药剂量可能有效
围绕试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交 点的刻度浓度即为抗菌药物抑制细菌的最小抑菌浓度。
E test 法
细菌生长 区
E test 塑料 条
256 128
椭圆形 细菌生长 抑制区 判读抑菌浓度 （MIC ug/ml)
微生物实验 药物敏感实验
微生物药物敏感实验
⏹一、实验目的
⏹1、熟悉和掌握圆纸片扩散法检测细菌对抗菌药物敏感性的操作程序和结果判断方
法。
⏹2、了解药敏试验在实际生产中的重要意义
二、实验原理
⏹将含有定量抗菌药物的纸片（药敏纸片）贴在已接种待检菌的琼脂平板表面特定部
位。
药物借其分子的扩散力向周围琼脂中扩散，形成了随着离纸片距离加大，琼脂中的药物浓度逐渐减少的梯度浓度。
其纸片周围一定区域琼脂内的药物浓度高于抑制待检菌所需浓度时，则该区域内细胞不能生长，形成透明抑制圈。
抑菌圈的大小可以反映待检对测定药物的敏感程度，抑菌圈愈大，说明该菌对此药物越敏感三、实验器材
⏹1．菌种大肠埃希菌。
⏹2．培养基牛肉膏蛋白胨培养基。
⏹3．试剂无菌生理盐水，抗菌药物纸片：
包括青霉素、氨苄西林、土霉素、链霉素等。
⏹4．其他无菌棉拭子、镊子、毫米尺、接种环。
四、实验方法和步骤
⏹1．菌液制备
菌浓合适，一般为106
⏹2．接种
细菌悬液制备后15min内接种至倒好的牛肉膏蛋白胨培养基平板中，接种量0.1-0.2mL。
涂布均匀。
⏹3．贴药敏纸片
⏹涂布后的平板在室温下干燥3~5min，用纸片分配器或无菌镊子将纸片贴于琼脂表面
并轻压，使纸片与琼脂表面完成接触。
各纸片中心相距应大于24mm，纸片贴上后就不能再移动位置。
⏹4．培养
⏹将平板倒置放入37℃培养箱培养，16~18h读取结果。
五、实验结果
六、思考题
⏹ 1.圆纸片药敏试验操作时应注意什么事项？
⏹ 2. 试述药敏试验的意义。
抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt生物技术实验教学中心课件
8.联合药物敏感试验
1）方法很多，其中纸片法最为常用。先将试验菌均 匀涂布于培养基表面，盖好平皿，放置5分钟，待 平板表面水分吸收后，将两种含药纸片贴于平板 上，两纸片中心距离2--4mm左右。然后35℃ 孵育 过夜，取出观察结果。
2）结果判断 联合药物敏感试验可出现四种结果： A.无关作用： 甲+乙=甲单或乙单 B.拮抗作用： 甲+乙＜甲单或乙单 C.相加作用： 甲+乙=甲单+乙单 D.协同作用： 甲+乙＞甲单+乙单
三、实验操作步骤
（一）纸片扩散法：
1. M-H平板：直径为90mm，厚度 4mm。 2. 菌悬液制备：无菌挑取菌落于无菌生理盐水中，校
正浊度至0.5 麦氏。 3. 用无菌棉签浸入细菌悬液中，将棉签在试管壁上轻
轻挤压以挤去过多的菌液，用棉签以连续划线的方 式均匀涂抹琼脂平板表面三次（每次转60℃）使 菌液均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。盖上 平板的盖子，放置3~10min。
一、实验目的：
1. 掌握纸片扩散法（K-B法）的原理、操作方法、结 果的判读及临床意义。
2. 了解各种稀释法抗生素敏感性试验的原理、操作 方法、结果判读和临床意义。
3. 掌握纸片扩散法的质量控制，了解稀释法的质量 控制。
二、实验原理
1. 抗菌药物敏感性试验是测定抗生素或其他抗 微生物制剂在体外抑制细菌生长的能力。这 种能力可以通过稀释或扩散方法来测定。
六、影响因素：
1. 培养基：厚度，PH，离子浓度，成份，添加剂； 2. 抗菌药物的配制方法，纸片的含量，大小，
渗透性，保存方式等； 3. 细菌的接种量； 4. 培养的环境，温度与时间； 5. 结果的判断及解释标准等。
4.每个孔加入100ul浓度为105菌悬液（大肠或金 葡），混匀，胶布封口，37°C培养。
医院抗菌药物敏感性试验的技术要求(2022年版)
(2022年版)1范围 (2)2 术语和定义 (2)3 常规药敏试验的药物选择和报告 (4)4 药敏试验方法 (7)5 各种属细菌药敏试验 (12)6 质量控制(Quality control, QC) (17)7 商品化药敏试验检测系统的性能验证 (19)附录 A (资料性附录) 临床各种属细菌的药敏试验方法和试验条件 (23)附录 B (资料性附录) 不常见苛养菌和非苛养菌药敏试验折点 (27)1 范围本标准规定了临床抗菌药物敏感性试验的技术要求，包括常规药敏试验的药物选择和报告、药敏试验方法、各种属细菌药敏试验、常见菌特殊耐药表型检测、药敏试验的质量控制、商品化药敏试验检测系统的性能验证。
本标准合用于开展临床微生物学检验的各级临床实验室。
2 术语和定义下列术语和定义合用于本文件。
2.1抗微生物药物敏感性试验 Antimicrobial susceptibility testing指检测微生物(本行业标准特指细菌)对抗微生物药物(本行业标准特指抗菌药物)的体外敏感性，以指导临床合理选用药物的微生物学试验，简称药敏试验。
2.2最低抑菌浓度 Minimal inhibitory concentration；MIC指在琼脂或者肉汤稀释法药物敏感性检测试验中能抑制肉眼可见的微生物生长的最低抗菌药物浓度。
2.3折点 Breakpoint能预测临床治疗效果，用以判断敏感、中介、剂量依赖型敏感、耐药、非敏感的最低抑菌浓度(MIC)或者抑菌圈直径(mm)的数值。
2.3.1敏感 Susceptible；S当抗菌药物对分离株的MIC值或者抑菌圈直径处于敏感范围时，使用推荐剂量进行治疗，该药在感染部位通常达到的浓度可抑制被测菌的生长，临床治疗可能有效。
2.3.2中介 Intermediate； I当菌株的MIC值或者抑菌圈直径处于中介时，该数值接近药物在血液和组织中达到的浓度，从而治疗反应率低于敏感菌群。
该分类意味着采用高于常规剂量治疗时或者在药物生理浓集的部位，临床治疗可能有效。
抗微生物药物和敏感性试验-精品医学课件
菌落数（CFU）/ cm2 = 菌落数/ 采样面积
2.压印法
用直径5cm的特制平皿（Rodac平皿），倾注于16.5ml琼 脂后可使培养基高出平皿口1~2mm，凝固后将平皿上的琼 脂直接压贴于物体表面10~20s，接触面积为19.63平方厘米。
2.对居住环境、特殊病房、实验室、无菌车间等场所空气质量 的细菌学评价。
实验目的
掌握医院感染的微生物监测方法
目的与要求
器材与试剂
器材与试剂
普通琼脂平板（直径90mm及60mm)、无菌生理盐水、无菌 棉拭子等。
步骤与方法
一、空气中细菌含量的检测
1.检测对象：医院各个科室的空气，手术室、新生儿室、产房、 烧伤病房、重症监护室等空气污染的检测，应成为医院感染 管理中特别关注的重点。
2. 用无菌棉拭子蘸取菌液,在管内壁将多余菌液旋转 挤去后在琼脂表面均匀涂布接种3次,每次旋转平板 60度,最后沿平板内缘涂抹1周。
3. 平板置室温下3-5分种后，用纸片分离器或无菌镊 将含药纸片贴于琼脂表面,各纸片中心相距应大于 24mm,纸片距平板内缘应大于15mm。（纸片选 择参照实验书p39）
药敏实验与医院感染的检测
一、抗菌药物敏感试验
抗菌药物敏感性试验
纸片琼脂扩散法
经世界卫生组织推荐,目前各国临床微生物学实验 室广泛采用的标准纸片扩散法是由Kirby和Bauer 所建立的纸片琼脂法,即Kirby-Bauer法(K-B法纸 片琼脂扩散法)
实验原理
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板 上,纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向纸片 周围扩散形成递减的梯度浓度,在纸片周围抑菌浓度范围内 测试菌的生长被抑制,从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌 圈.抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。
实验三药物敏感试验和消毒灭菌
浸泡法 侵泡法是将物品洗净、擦干后，浸没在消毒液中进行消毒灭菌的方法。
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熏蒸法 熏蒸法是将消毒剂加热或加人氧化剂，使其产生气体来进行消毒灭菌的方法。
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喷雾法 喷雾法是利用喷雾器将消毒剂变成微粒气雾弥散在空气中．对空气和物品表面进行消毒灭菌的方法。
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化学消毒剂的使用方法
化学消毒剂的使用方法
消毒与灭菌技术 化学消毒剂作用机制
促进菌体蛋白质变性凝固（酚、醇、醛、酸碱类等）
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干扰细菌酶系统和代谢（氧化剂、重金属盐类等）
损伤细菌细胞膜，增加其通透性（表面活性剂、脂溶剂等）
菌体成分氧化、水解或结构改变（氧化剂、卤素、醛、酚等）
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消毒剂类别
名称
浓度(%)
用途
长期使用抗生素的病人应该怎样做药敏试验？
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细菌L型－细胞壁缺陷细菌
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灭菌－杀灭或除去所有微生物的繁殖体和芽胞。 消毒－杀灭或除去病原微生物。 防腐－抑制微生物的生长与繁殖。抑菌剂或防腐剂。 除菌:用冲洗、过滤等机械手段除去微生物的方法 化疗：用对病原菌有毒力但对机体无害的化学物质杀灭或抑制机体内病原微生物的方法 消毒与灭菌技术 基本概念
用于流行病学调查及院内感染的监控，减少耐药菌株的流行。
三、什么情况下需要做培养+药敏？
*
感染原因无法确定。
病人对可用药物过敏，需要检测其他药物的耐药性。
病人个体情况要求对某些药物精确用药，需要测定其最低抑菌浓度（MIC）。
四、常用抗菌药物敏感性试验与耐药检测方法介绍 其原理： 体外测定抗生素药物抑菌或杀菌的能力。可帮助临床对感染性疾病选择最佳用药，还可进行流行病学调查，了解某些致病菌耐药性变异情况。 纸片扩散法（Kirby-Bauer test） 稀释法（dilution test） E试验法（E test） 联合药物敏感试验 特殊耐药菌及耐药酶的表型检测 耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的检测 β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶检测等
抗菌药物敏感试验
操作方法：1.抗菌药物的稀释和融解
2.抗菌药物母液的稀释
3.在微量聚乙烯微板孔中加各种不同浓度的抗生素 100μl，从低浓度往高浓度加样，不需要更换吸管。
4.挑选18~24小时的菌落置M-H肉汤增菌4~6小时。
5.制备0.5麦氏比浊管，然后1:200稀释，使之最终 浓度105 CFU/ml。
除肺炎链球菌外的其他链球菌：红霉素、青霉素、克 林霉素、万古霉素、头孢曲松、左氧氟沙星。
7.用无菌镊子或纸片分配器将抗菌纸片粘贴于M-H琼脂 的表面，一旦纸片贴上，不能移动；各抗菌纸片中 心距离应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm。
8.经过35℃16～24h孵育。
9.取抑菌环直径，根据 CLSI（clinical and laboratory standards institute ）标准，报 告细菌对该抗生素 敏感(susceptible,S)、 耐药(resistant,R)、 中介(intermediate,I)。
纸片扩散法（KirbyBauer法）
原理：
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测 试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼 脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减 的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试 菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈 即为抑菌圈。
抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏 感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。
第四章 抗菌药物的敏感性试验
药敏试验的意义
1、可预测抗菌治疗的效果 2、指导临床抗菌药物的使用 3、发现或提示细菌耐药机制，帮助临床医生合理使 用抗菌药物 4、监测细菌的耐用性，分析耐药菌的变化，预防和 控制耐药菌感染的发生和流行
抗菌药物的敏感性试验
常用方法：
抗菌药物的敏感性试验及报告解读
明确提出在二级以上医院设立感染科与感染临床药师（第12、
13条），及临床微生物室（第14条）
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Company name
概况和制定过程
第一章 总则
第六章 附则 第五章 法律责任
共六章 53条
第二章 组织机 构和职责
• 组织医院管理、临床、药学 、微生物检验、感染等方面 专家起草《抗菌药物临床应 用管理办法》
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Company name
培养条件（一）
需氧菌： 35℃ ±2 ℃ ，16-18小时 嗜麦芽窄食单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌：20-24小时 葡萄球菌：33-35 ℃ ，OXA、MET、NAF、VAN24小时 肠球菌：VAN 24小时 溶血性链球菌、肺炎链球菌、奈瑟氏菌属等：20-24小时
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Company name
操作：
无菌棉签蘸取菌液，在管壁内将多余菌液旋 转挤去后，在琼脂表面均匀涂布接种3次， 每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹1 周。 室温干燥或35℃干燥5-15分钟 用纸片分配器或无菌镊子将药物纸片紧贴于 琼脂表面 纸片间距 20mm 纸片离平板内缘 15mm
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Company name
抗生素药敏试验质控
• 4月11日起征求全国意见
• 制定《抗菌药物临床应用分
第三章 抗菌药物 级管理目录》
临床应用管理
• 4月15日期征求全国意见
第四章 监督管理
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Company name
第三章 抗菌药物临床应用管理
• 三级医院 不得超过50种，二级医院 不得超过35种 • 同一通用名称药品的品种，注射剂型和口服剂型各不得超过2种，处方组成
葡萄球菌属 Mueller-Hinton（MH）琼脂
抗微生物药物和敏感性试验
临床常用抗生素
青霉素类 头孢菌素类 其他β-内酰胺类抗生素 其他 内酰胺类抗生素 氨基糖苷类 喹诺酮类 大环内酯类 四环素、 四环素、氯霉素和林可霉素类 糖肽类 磺胺类 其他合成抗菌药物
临床常用抗生素
注： 抗微生物新药不断涌现,给感染性疾病的治疗带来福 音。 抗菌药物的使用不当可促进耐药菌在病人体内和医 院环境中定殖繁衍导致交叉感染和内源性感染。 合理使用抗菌药物的前提是重视感染病原学的实验 室检查和监控抗感染治疗的药物选择.
（二）分类：1.液体稀释法 分类： 液体稀释法
2.琼脂稀释法 琼脂稀释法
抗菌药物敏感性试验
其他
1.结核杆菌的药敏试验 结核杆菌的药敏试验 2.厌氧菌的药物敏感试验 厌氧菌的药物敏感试验 3.真菌的药物敏感试验 真菌的药物敏感试验
抗菌药物敏感性试验
特殊耐药菌检测 （一）耐甲氧西林葡萄球菌检测
金葡菌： 苯唑西林抑菌圈 苯唑西林抑菌圈≦ 金葡菌：1ug苯唑西林抑菌圈≦10mm或MIC≧0.4ug/ml 或 ≧ 凝固酶阴性葡萄球菌： 苯唑西林抑菌圈≦ 凝固酶阴性葡萄球菌： 1ug苯唑西林抑菌圈≦17mm 苯唑西林抑菌圈
抗菌药物敏感性试验
(七) 质量控制 七
采用标准菌株金葡菌ATCC25923,大肠埃希菌 大肠埃希菌ATCC25922 采用标准菌株金葡菌 大肠埃希菌 和铜绿假单胞菌ATCC27853等与测试菌在同一条件下做药 和铜绿假单胞菌 等与测试菌在同一条件下做药 敏试验 标准菌株的抑菌圈应落在预期范围内.如果超出范围 如果超出范围,则不应 标准菌株的抑菌圈应落在预期范围内 如果超出范围 则不应 发出报告,及时检查原因 予以纠正 发出报告 及时检查原因,予以纠正 及时检查原因 每日标准菌株的测定结果应以抑菌圈直径为纵坐标,天数为 每日标准菌株的测定结果应以抑菌圈直径为纵坐标 天数为 横坐标绘制室内质控图,要求每天抑菌圈变化数不得超过 横坐标绘制室内质控图 要求每天抑菌圈变化数不得超过 2mm 标准菌株应每周在MH琼脂上传代一次 ℃保存 琼脂上传代一次,4℃ 标准菌株应每周在 琼脂上传代一次
抗微生物药物和敏感性试验
（3）分子试验 PCR直接检测mecA基因 （4）酶试验 Nitrocefin、ESBL检测
精选ppt
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（五）结果的解释和报告
▪ R、I、S、MIC ▪ 时间依赖性：β-内酰胺类，缩短投药间隔 ▪ 浓度依赖性：氨基糖苷类，日剂量1次应用
精选ppt
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（一）实验原理
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的 琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分 溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度， 在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制， 从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。
抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程 度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。
未经解释、就事论事的报告经过解释、全面的报告
表型的检测耐药机制的检测、耐药流行病学分析
临床用药
Medical choice Bacteriological choice精选ppt17
二、AST的意义***
▪ 可预测抗菌药物治疗的效果，即AST实验“敏感”时，
治疗可能有效；实验结果为耐药时，使用该药物治疗 肯定失败；
精选ppt
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三要素 药物、机体、病原菌
相关性 体外和体内，抑菌和杀菌，单独和联合
预测性 耐药表型(个体)→耐药机制→耐药表型(同类)
(预测药物)
(同类药物)
重点监测的耐药菌株：MRS, PRP, VRE, ESBL
发出有选择、有解释的报告，与医师直接对话
精选ppt
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小结
药敏试验
ASTART，用体外试验预测体内结果
精选ppt
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(二）苛养菌药敏试验抗生素的选用
微生物抗药性耐药性
微生物对抗微生物药的敏感性和耐药性微生物对抗微生物药的敏感性和耐药性【抗微生物敏感性】细菌为常见的重要病原微生物，各种病原菌对不同的抗菌药物有不同的敏感性。
测定敏感性的方法称为药物敏感试验，即在体外通过被检测药液的稀释（试管法、微量法、平板法）或扩散（纸片法），测定抗菌药物对病原微生物有无抑制或杀灭作用。
在试管法中以抑制细菌生长为评定标准时可用最低抑菌浓度( Minimal Inhibitorv Concentra-tion，MIC)表示，在一批实验中能抑制50%或90%受试菌所需MIC，分别称为MICso 和MIC90。
以杀灭细菌，使活菌总数减少99%或99 .9%以上为评定标准时，称为最低杀菌浓度(MinimalBactericidal Concentration，MBC)。
其单位均为/ig/mL或mg/L。
通常根据抗菌药物对某一细菌的MIC．结合该药的常用剂量所能达到的血药浓度划定细菌对各种抗菌药物敏感或耐药的界限。
其标准是当一种细菌引起的感染用某种药物的常用量治疗有效，即常规用药时达到的平均血药浓度超过MIC5倍以上者为高度敏感；当细菌引起的感染仅在应用高剂量药物时才有效，即常规用药时达到的平均血浓度相当于或略高于MIC为中度敏感；低于MIC或细菌能产生灭活抗菌药物的酶时均判定该菌对该药为耐药。
纸片法操作较简单，适用于生长较快的需氧菌和兼性厌氧菌的药敏测定。
细菌对抗菌药物的敏感度以纸片周围抑菌圈直径大小为标准，其直径与药物对细菌的MIC成反比，抑菌圈越大，说明细菌对该抗菌药物愈敏感，一般的判定标准为：抑菌圈直径> 20mm 为极度敏感，15.1 - 20mm为高度敏感。
10 - 15mm为中度敏感，<lOmm为耐药。
抗菌药物一般按常用量在血液和组织中的药物浓度所具备的杀菌或抑菌性能，分为杀菌剂和抑菌剂两类。
前者MBC约等于其MIC，包括青霉素类、头孢菌素类、氨基糖苷类、多黏菌素类等；后者的MBC远大于其MIC，包括四环素类、大环内酯类、磺胺类等。
微生物药敏实验报告
微生物药敏实验报告本实验旨在检测微生物对不同抗菌药物的敏感性，以指导临床合理用药，提高治疗效果。
药敏实验是通过测量抗菌药物在体外对微生物的抑制作用，评估药物对病原菌的抗菌活性。
本实验采用纸片扩散法，将含有不同抗菌药物的药敏纸片放置在培养基上，观察细菌生长情况，计算抑菌圈直径，从而判断细菌对药物的敏感性。
细菌接种：将待测细菌接种于固体培养基上，用无菌棉签均匀涂抹。
药敏纸片放置：选择合适药敏纸片，用无菌镊子将其放置在培养基上，间距至少24mm。
培养：将培养皿置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
结果分析：根据抑菌圈直径判断细菌对药物的敏感性，如敏感、中介或耐药。
青霉素、阿莫西林、头孢拉定对细菌具有较好的抗菌活性，可作为首选药物。
环丙沙星具有较强的抗菌作用，可作为备选药物。
红霉素、四环素、庆大霉素和克林霉素的抗菌效果较弱，可作为辅助治疗药物。
克林霉素和复方磺胺甲噁唑对细菌不敏感，应避免使用。
根据药敏实验结果，建议使用青霉素、阿莫西林、头孢拉定和环丙沙星治疗该细菌感染。
在使用过程中，应注意观察患者反应情况，及时调整用药方案。
同时，应进行定期药敏实验复查，以避免耐药性的产生。
微生物在自然界中广泛存在，而临床微生物鉴定与药敏试验对于诊断和治疗感染性疾病具有重要意义。
本文将介绍临床微生物鉴定的方法和药敏试验的基本原理及其在感染性疾病治疗中的重要性。
临床微生物鉴定是指通过一系列实验方法对临床标本中分离出的微生物进行种类鉴别和抗菌药物敏感性的测定。
这有助于医生正确选择抗菌药物，提高感染性疾病的治疗效果。
细菌鉴定是通过对细菌的形态、染色特性、生化反应、血清学试验等进行测定，以确定细菌的种类。
例如，革兰染色可以将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌，而血清学试验则可以用于鉴定链球菌、肺炎球菌等。
病毒鉴定是通过病毒的分离培养、抗原抗体检测、分子生物学等方法确定病毒的种类。
例如，分离培养可以用于检测水痘-带状疱疹病毒，而抗原抗体检测可以用于检测乙型肝炎病毒等。
(整理)各种微生物生化试验方法原理.
各种微生物生化试验方法原理通常利用生化试验的方法，检测细菌对各种物质的代谢作用及其代谢产物，称为细菌的生化反应，常用于细菌的鉴别。
1、糖类分解产物（1）糖发酵试验（carbohydrate fermentation test）不同种类的细菌对糖的分解利用能力不同，一般以能否分解某种糖，是否产酸产气等现象来鉴别。
例如大肠杆菌能分解葡萄糖和乳糖，产酸且产气；而伤寒杆菌只分解葡萄糖产酸不产气，且不分解乳糖。
这是因为大肠杆菌分解葡萄糖等产生甲酸，经甲酸解氢酶的作用生成H2和CO2。
而伤寒杆菌无此酶，故分解葡萄糖只产酸不产气。
（2）VP试验（V oges-Proskauer test）产气杆菌将分解葡萄糖产生的两分子丙酮酸脱羧，生成一分子乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中氧气氧化，生成二乙酰，二乙酰可与培养液中含胍基的化合物（如蛋白胨中的精氨酸）反应，生成红色的化合物，此为VP试验阳性。
大肠杆菌分解葡萄糖不生成乙酰甲基甲醇，故VP试验阴性。
（3）甲基红试验（methyl red test）大肠杆菌和产气杆菌均属G-短杆菌，且都能分解葡萄糖、乳糖产酸产气，二者不易区别。
但两者所产生的酸类和总酸量不一：大肠杆菌可产生甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸等，而产气杆菌只产生甲酸、乙醇及乙酰甲基甲醇。
故大肠杆菌培养液PH在4.5以下，加入甲基红指示剂呈红色，为甲基红试验阳性；产气杆菌培养液PH在5.4以上，加入甲基红后呈桔黄色，为甲基红试验阴性。
（4）枸橼酸盐利用试验(citrate utilization test）产气杆菌在以枸橼酸盐为唯一碳源的培养基上生长，分解枸橼酸盐产生CO2，并转变为碳酸盐，使培养基由中性变为碱性，含溴麝香草酚蓝（BTB）指示剂的培养基由淡绿色变为深兰色，此为枸橼酸盐利用试验阳性。
大肠杆菌不能利用枸橼酸盐，故在此培养基上不能生长，培养基仍为绿色。
2、蛋白质及氨基酸的分解产物（1）硫化氢试验（hydrogen sulfide test）有些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、甲硫氨酸等）产生H2S，如遇醋酸铅或硫酸亚铁，能生成黑色的硫化物，为硫化氢试验阳性。
临床医学检验：抗微生物药物和敏感性试药真题及答案一
临床医学检验：抗微生物药物和敏感性试药真题及答案一1、判断题A群链球菌对杆菌肽的敏感率几乎100%，所以一旦试验结果敏感即可确认该链球菌为A群，敏感判定标准为抑菌环直径＞10mm。
()正确答案：对2、单选（江南博哥）目前最强的抗绿脓杆菌抗生素是（）A.普鲁卡因青霉素B.羧苄青霉素C.先锋霉素ⅣD.头孢他啶E.头孢呋辛正确答案：D3、多选关于抗菌药物敏感试验，说法正确的是()A．监测耐药性B．提供所选择药物的依据C．其结果总与体内用药结果相一致D．可预测抗菌治疗的效果E．指导医师选择使用抗生素正确答案：A, B, D, E4、单选下列药物中哪种抗铜绿假单胞菌作用最强（）A.羧苄西林B.替卡西林C.阿莫西林D.呋苄西林E.双氯西林正确答案：D5、单选液体稀释法不适合做药敏试验的是()A．头孢噻肟B．磺胺C．氧氟沙星D．万古霉素E．红霉素正确答案：B6、单选对革兰阳性菌作用弱，对革兰阴性菌包括绿脓杆菌作用强的药物是（）A.第一代头孢菌素B.第二代头孢菌素C.第三代头孢菌素D.第四代头孢菌素E.碳青霉烯类抗生素正确答案：C7、问答?患者刘某，女，40岁，尿频、尿急、尿痛1周，体检：体温38.5℃，明显肾区叩痛，双下肢无水肿。
实验室检查：尿WBC3(+)/HP，偶见白细胞管型。
中段尿培养为大肠埃希菌＞10万CFU/L，纸片扩散法药敏试验结果为头孢噻肟6mm，头孢噻肟/棒酸26mm，头孢他啶21mm，头孢他啶/棒酸27mm，呋喃妥因25mm(中介判定值为15～16mm)。
根据题目中所给出的药敏实验结果，可判断此株菌存在哪种耐药机制，由于这种耐药机制的存在，临床抗生素应用方面应注意哪些问题?正确答案：根据头孢噻肟和头孢他啶加棒酸后比不加棒酸的抑菌环直径均＞5mm，确定此株菌产生超广谱β-内酰胺酶(ESBL)。
临床抗生素应用方应避免使用青霉素类、头孢菌素类和氨曲南，即使这些药物的体外实验显示敏感，临床上也可能治疗无效。
抗微生物药物敏感性试验执行标准
抗微生物药物敏感性试验执行标准抗微生物药物敏感性试验是评价抗菌药物对微生物的作用和微生物对抗菌药物的敏感性的重要手段。
正确执行抗微生物药物敏感性试验，对于指导临床用药、控制细菌耐药性具有重要意义。
本文将详细介绍抗微生物药物敏感性试验的执行标准。
1. 试验菌株的选取。
试验菌株的选取是抗微生物药物敏感性试验的第一步。
应根据临床感染的部位和病原菌的种类，选择相应的菌株进行试验。
同时，应注意菌株的来源、保存和传代方式，以保证试验结果的准确性和可重复性。
2. 试验方法的选择。
根据不同的抗菌药物和微生物，选择合适的试验方法进行抗微生物药物敏感性试验。
常用的试验方法包括纸片扩散法、微量稀释法等。
在选择试验方法时，应考虑到试验的灵敏度、特异性和操作的简便性，并严格按照相关标准进行操作。
3. 试验条件的控制。
试验过程中，应严格控制试验条件，包括温度、湿度、培养基的配制和质量等。
试验操作人员应具备良好的实验操作技能，严格按照操作规程进行操作，避免外界因素对试验结果的影响。
4. 试验结果的解读。
试验结束后，根据试验结果进行解读。
应根据相关标准和临床实际，判断微生物对抗菌药物的敏感性，确定抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）等参数。
同时，应注意对试验结果的统计学分析，确保结果的科学性和可靠性。
5. 结果报告和数据保存。
试验结果应及时进行报告，包括试验方法、试验菌株、试验条件、试验结果等内容。
同时，应将试验过程中的原始数据进行保存，以备查验。
在报告中应注明试验人员、试验时间、试验地点等信息，确保结果的可追溯性和可信度。
6. 质量控制和质量保证。
在抗微生物药物敏感性试验过程中，应严格执行相关质量控制和质量保证程序。
包括对试验菌株的鉴定、对试验方法的验证、对试验条件的控制等方面进行严格管理，确保试验结果的准确性和可靠性。
7. 相关标准和法规的遵守。
在执行抗微生物药物敏感性试验时，应严格遵守相关的标准和法规，包括药典规定、临床实验室质量管理规范等。
微生物药敏实验报告
总结词
该文献探讨了敏感性分析在临床诊断中 的价值，并举例说明了其在不同疾病诊 断中的应用。
VS
详细描述
该文献首先介绍了敏感性分析的基本概念 和原理，然后通过具体案例详细阐述了敏 感性分析在临床诊断中的应用，如感染性 疾病、肿瘤等。同时，该文献还对敏感性 分析的优缺点进行了评价，为临床医生提 供了有益的参考。
文献二：耐药性分析方法与应用
总结词
该文献重点介绍了耐药性分析的方法及其在临床实践中的应用。
详细描述
该文献详细介绍了耐药性分析的方法，包括微生物药敏实验、基因测序等，并探讨了这些方法在临床实践中的应 用。同时，该文献还对耐药性产生的机制进行了深入探讨，为临床医生提供了耐药性分析方面的参考。
文献三：敏感性分析在临床诊断中的价值
THANKS
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优势菌种分析
根据药敏实验结果，分析优势菌种，为临床用药提供参考。
04
结论与建议
结论总结
抗生素敏感性
实验结果显示，所测试的微生物对多种抗生 素具有敏感性或耐药性。
耐药性趋势
近年来，某些常见病原菌的耐药性呈上升趋 势，需引起关注。
病菌种类差异
不同病菌对同一种抗生素的敏感性存在差异 。
临床性分析
耐药性
实验结果显示，部分菌株对 某些抗生素产生了耐药性， 如大肠杆菌对青霉素的耐药 率为70%，金黄色葡萄球菌 对红霉素的耐药率为60%。
耐药机制
这些耐药菌株可能通过产生 灭活酶、改变药物作用靶点 或增加外排等方式，对抗生
素产生抵抗力。
耐药趋势
近年来，随着抗生素的广泛 使用，耐药菌株的数量和种 类不断增加，给临床治疗带 来了挑战。
药敏试验结果解读
解读原则
抗微生物药物和敏感性试验
小结
1.培养基 MH 肉汤 2.药物稀释 原液配制 稀释抗菌药物的制备 3.菌种接种 4.结果判断 MIC
（二） 琼脂稀释法
将不同浓度抗菌药物分别混匀于琼脂培 养基中，配制出含各种浓度药物的平板， 使用微量多头接种仪接种细菌，孵育后 观察细菌在含不同浓度药物的平板上的 生长情况，以抑制细菌生长的平板所含 的药物浓度测得最低抑菌浓度（MIC）。
四、E 试验（Epsilometer test）
是一种结合了稀释法和扩散法的原理和特 点测定细菌对抗菌药物的敏感度的定量技 术。
（一）原理
E试条是一条5mm×50mm无孔试剂载体， 一面固定有一系列预先制备的浓度呈连续 指数增长稀释抗菌药物，另一面有读数和 判别的刻度。
抗菌药物的梯度可覆盖有20个MIC对倍稀 释浓度的宽度范围。
4.挑选18~24h的菌落置M-H肉汤增 菌4~6h。
5.制备0.5麦氏比浊管，然后 1:200稀释，使之最终浓度105 CFU/ml。
6.用微量加样器接种 100μ l菌液到96孔中，盖 上盖板。
同时作阳性、阴性对照。
7.手工看浊度或仪器自动 判读。 按照CLSI标准报告细菌 对某抗菌药物为敏感、 耐药和中介。
量 对某些耐药细菌引起的严重感染，联合用
药比单一用药时效果更好。
2.抗菌药物联合用药可出 现4种结果
无关作用 拮抗作用 累加作用 协同作用
(二)联合抑菌试验
棋盘稀释法
第四节 分枝杆菌的药物敏感性试验
第五节厌氧菌体外药物敏感性试验
从左到右依次为常见菌、苛养菌、厌氧菌、酵母菌和其他霉菌的 E 试验结果
五、联合药物敏感性试验
联合药物敏感试验意义 联合抑菌试验 最低杀菌浓度测定
抗微生物药物敏感试验
1. β ～内酰胺酶检测
1）碘淀粉法
原理 ：
β -内酰胺酶能裂解青霉素的β -内酰胺酶环形成青霉 素噻唑酸，它与淀粉竞争游离碘，破坏了碘和淀粉的蓝色 复合物，使蓝色变为无色。
结果判定：
当含青霉素培养基内的待测菌加入可溶性淀粉和碘液 后，10分钟内能使蓝色完全消退的待测检为产β -内酰胺 酶阳性株。
2）临床意义 MRS不论其体外药敏试检结果， 所有的β -内酰胺类药物和β -内酰胺抑制剂均无临 床疗效；绝大多数的MRS常示多重耐药，包括氨基 糖苷类、大环内脂类、四环素类。
31
3.耐青霉素肺炎链球菌检测 1)定义 当对1μg苯唑西林纸片的抑菌圈直径
＜20mm或MIC＞0.06应视为耐青霉素肺炎 链球菌（vancomycin resistant enteroccoccus, VRE）
2）微量稀释法（microdilution broth method） 采用微量稀释孔（0.1ml肉汤）
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结果判定
以在试管内或小孔内完全抑制细菌生长 的最低药物浓度为MIC（μ g/ml）。微量稀 释法时，常借助于比浊计判别是否细菌生 长。
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临床意义
临床上较为广泛使用的定量耐药性检测 方法。尤其是微量稀释法，已有商品化的 微量稀释板。
菌种的鉴定，并作为医院流行病学调查的 手段之一。
4
体外药敏试验的抗菌药物选择： 结合
本单位、本地区常用的抗菌药物 常见病原菌的耐药现状
确定体外药敏试验抗菌药物的品种。
5
抑菌试验
（一）.纸片扩散法 K-B纸片琼脂扩散法 :是目前各国临床微生物实验
室广泛采用的标准纸片扩散法。
1）原理 ：将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接
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（一）NCCLS关于临床实验室进行结核分枝 杆菌体外抗菌药物敏感试验的指征 （二）体外药敏试验抗分枝杆菌药物的选择
(三) 结核分枝杆菌体外药敏试验方法
Байду номын сангаас
比例法，绝对浓度法和耐药率法
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• 抗菌药物是指具
有杀菌或抑菌活 性的抗生素和化 学合成药物。
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抗菌素抑菌杀菌作用
抑制细胞壁合成 抑制细菌蛋白质 合成 破坏细胞膜 抑制DNA复制
L1
第五节 抗分枝杆菌药物敏感性试 验
第六节 厌氧菌体外抑菌试验
第七节 抗真菌药物敏感性试验
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第六节 抗菌药物治疗效果观察
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一、 临床效果
（一） 患者临床症状与体征 （二） 患者实验室检查
二、 细菌学效果
（一）病原菌清除的测定 （二）细菌耐药性
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自学
一、厌氧菌的体外抗菌药物敏感试验 二、结核分枝杆菌药物敏感试验
6
四、特殊耐药菌检测
（一）耐甲氧西林葡萄球菌的检测 （二）耐青霉素肺炎链球菌检测 （三）耐万古霉素肠球菌检测 （四）超广谱β-内酰氨酶肠杆菌科细菌检测
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β-内酰胺酶的分类及特征
结构分类 功能分类 名称 来源 (Ambler) ( Bush) 丝氨酸-Lam C 1 头孢菌素酶 染色体 A 2a 青霉素酶 质粒 2b 广谱酶 质粒 2be 超广谱酶（ESBLs） 质粒 2∽6 2br 耐酶抑制剂广谱酶(IRTs) 质粒 2c 羧苄酶 质粒 2e 头孢菌素酶 染色体 2f 非金属碳青霉烯酶 染色体 D 2d 氯唑西林酶 质粒 4 青霉素酶 染色体 Zinc-Lam B 3 金属酶 染色体 代表酶 AmpC PC1 TEM-1，2 、 SHV-1 TEM-3∽29, SHVTEM30-41,TRC-1 PSE-1、 CARB-3 Cxase IMI-1,NMC-A、Sme-1 OXA-1,PSE-2
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3
4
二、β -内酰胺酶检测
• 碘淀粉测定法（iodometric test）
• 头孢色原菌素纸片法（nitrocefin test）
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三、 耐药基因检测
（一）常用耐药基因 （二）抗生素耐药基因检测方法
PCR 扩增
PCR-RFLP分析
PCR-SSCP 分析 PCR-线性探针分析 生物芯片技术 自动DNA测序
第四节 细菌耐药性检测方法
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一、 细菌耐药表型检测 二、β -内酰胺酶检测
• 碘淀粉测定法（iodometric test） • 头孢色原菌素纸片法（nitrocefin test）
三、 耐药基因检测 四、特殊耐药菌检测
2
一、 细菌耐药表型检测
（一）琼脂筛选试验 （二）折点敏感试验 （三）双相纸片试验 （四）自动化仪器