生物样品的采集制备和预处理
生物样品预处理
生物样品预处理的应用与发 展趋势
第六章
生物样品预处理的应用领域
医学领域：用于疾病诊断、治疗和 药物研发
环境监测领域：用于水质、空气和 土壤等环境因素的监测
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农业领域：用于农产品质量检测、 育种和病虫害防治
食品安全领域：用于食品添加剂、 农药残留和重金属等检测
生物样品预处理的发展趋势与展望
对于不同种类的生物样品，要分别 处理，避免交叉污染。
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在操作过程中，要遵循无菌操作原 则，避免微生物、细菌等污染样品。
在处理过程中，要定期对操作台、 器具等进行清洁和消毒，保持清洁 卫生。
保证操作的安全性
生物样品具有潜在危险，操作时应佩戴个人防护装备 遵循实验室安全规定，确保工作环境安全 避免交叉污染，确保生物样品处理过程中的安全 正确使用和处理化学品，确保操作的安全性
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实验要求：严格遵守操作规程，保 证实验结果的准确性和可靠性
实验步骤：按照操作规程进行实验， 记录实验数据并进行分析
检测方法与仪器
检测方法：生物样品预处理的方法应根 据检测目的和要求选择，常用的检测方 法包括光谱分析、色谱分析、质谱分析 等。
仪器选择：根据检测方法和生物样品的特 性，选择合适的仪器进行预处理，如离心 机、过滤器、萃取装置等。
仪器精度：仪器的精度对预处理结果的影 响较大，应选择精度高、稳定性好的仪器。
仪器维护：仪器的维护和保养也是影响 预处理效果的重要因素，应定期进行维 护和保养，确保仪器的正常运行和使用 效果。
操作人员技能与素质
生物样品预处理
三、常用的处理方法-除蛋白法
A.溶剂解法-参加与水相混溶的有机溶剂
操作步骤：
a.水溶性有机溶剂与血浆或血清按一定比例 混合
b.离心别离，采用超速离心机〔10000r／
min〕离
将蛋白质粘牢在
管底，便于吸取
心1～2min。〔使用具塞上塑清液料尖底管〕
c.取上清液作为样品。
三、常用的处理方法-除蛋白法
111
0.87 沸点过高，调节极性用
55
0.74 含过氧化物
68
0.73 含过氧化物
35
0.71 含过氧化物
61
1.5 肝脏毒性，致癌作用
83
1.26
116
0.8
沸点过高，调节极性用
77
0.9
118
0.81 沸点过高，调节极性用
83
0.79
四、别离、浓集、纯化-液液萃取法
影响萃取的因素
2.有机溶剂相和水相的体积 a.有机相与水相〔体液样品〕容积比为1:1或
三、常用的处理方法-缀合物的水解
特点：多用于尿中药物或其代谢物；缀合物极性 较大，不易被有机溶剂提取。
常用方法：
a.酸水解：适量盐酸〔条件因药而异〕
b.酶水解：常用葡萄糖醛酸苷酶或硫酸酯酶或两者 的混合酶，一般控制pH值在～， 37℃培育数小时。
三、常用的处理方法-缀合物的水解
b.酶水解法
温和
专属性强
性盐 蛋白质沉淀
强酸
溶剂解 参加中
参加
三、常用的处理方法-除蛋白法
A.溶剂解法-参加与水相混溶的有机溶剂 参加水溶性的有机溶剂，可使蛋白质分子内 及分子 间的氢键发生变化而使蛋白质凝聚，使与蛋 白质结 合的药物释放出来。 常用的水溶性有机溶剂有：乙腈、甲醇、乙 醇、丙 醇、丙酮、四氢呋喃等。含药物的血浆或血 清与水 溶性有机溶剂的体积比为1：〔1～3〕时， 就可以将
生物样品预处理的方法
生物样品预处理的方法一、生物样品预处理的重要性。
1.1 生物样品的复杂性。
生物样品那可是相当复杂的呀。
就拿血液来说吧，里面有各种各样的成分，像血细胞、血浆蛋白、各种离子、代谢产物等等。
这些成分混在一起就像一锅大杂烩，如果不进行预处理，想要准确分析其中特定的物质，那简直就是大海捞针，难上加难。
1.2 提高分析准确性。
预处理就像是给我们的分析工作打基础。
如果不把那些干扰的成分去除或者分离，分析仪器可能就会被误导。
比如说在检测血液中的某种药物成分时，如果血浆蛋白没有处理好，蛋白可能会包裹药物，导致检测到的药物含量比实际的少很多，这就会得出错误的结论。
所以预处理是让我们的分析结果更靠谱的关键一步。
二、常见的生物样品预处理方法。
2.1 蛋白质沉淀法。
这是一种比较简单粗暴但很有效的方法。
就像把混在沙子里的石子挑出来一样，我们通过加入一些试剂，像有机溶剂（如甲醇、乙腈）或者酸，让蛋白质沉淀下来。
这就好比给蛋白质使了个“定身术”，让它们从溶液里分离出来。
这样一来，那些被蛋白质包裹或者干扰的目标物质就能够更好地被检测到。
不过这种方法也有缺点，有时候会把一些小分子的目标物质也一起沉淀了，就像打扫卫生的时候不小心把有用的小物件也扫走了一样。
2.2 液液萃取法。
这就有点像油和水分离的感觉。
我们利用目标物质在两种互不相溶的溶剂中的溶解度差异，把目标物质从生物样品所在的溶剂中转移到另一种溶剂里。
比如说，我们要从血液的水溶液中提取一种脂溶性的药物，就可以加入一种有机溶剂，像氯仿，药物就会跑到氯仿层里，就像孩子找妈妈一样，然后我们把氯仿层分离出来，就得到了相对纯净的含有目标药物的溶液。
但是这个方法操作起来有点麻烦，就像走迷宫一样，要小心翼翼地确保每一步都准确。
2.3 固相萃取法。
这个方法可以说是比较高端大气上档次的。
我们把一种特殊的吸附剂装在一个小柱子里，然后让生物样品溶液通过这个柱子。
目标物质就像被磁石吸引一样，吸附在柱子里的吸附剂上，而那些杂质就流走了。
第二章 样品的采集、制备处理及保存
第二章 食品样品的采集与处理
图2-2 萃取操作示意 1-三角瓶；2-导管；3-冷 凝器；4-欲萃取相
图2-3 常压蒸馏装置
3、盐析法：溶液中加入某种盐类，降低了 某溶质在溶液中的溶解度，使 之从溶液中分离出来的方法。
4、超临界萃取法（SFE） Supercritical Fluid Extraction
超临界流体及其性质 a.流体是非液非气的,具有气体较强的穿透 能力和液体较大的密度及溶解度,有较大 的吸附能力,流动性好. b.萃取速度快
什么物质适合于二氧化碳超临界萃取 二氧化碳超临界萃取的优点
a. 接近常温, 对物质没有变解作用. b. 易达到Pc和Tc c. 化学稳定性好, 无毒, 无色, 无味, 无污染 d. 萃取时间短 e. 费用低 f. 适用热敏感样品 g. 有防氧化和抑菌作用
然后层从的样四品角堆和放中
的不心同点部用位双，套按回
采样转件取数样确器定各具取
体采少样量袋样(品桶，、得
箱)检，样再，用再双按套上回
转取法样处管理采得样平。均
将取样样品管。插入包
装中，回转180。
取出样品，每一
包装须由上、中、
下三层取出三份
检样；把许多检
样综合起来成为
原始样品：用
“四分法”
这类物料不易充 分混匀，可先 按 总件数/ 2 确 定采样件(桶、 罐)数。启开 包装，用采样 器从各桶(罐) 中分层(一般 分上、中、
特点：简便快速，破坏彻底，减少 金属挥发。酸气刺激性大， 腐蚀性大。
第二章 食品样品的采集与处理
（1）硫酸-硝酸法 如图2-1所示。
（2）高氯酸-硝酸-硫酸法
（3）高氯酸（过氧化氢）-硫 酸法
（4）硝酸-高氯酸法
微生物日常工作流程
微生物日常工作流程
微生物实验室的日常工作流程包括样品采集、样品准备、细菌培养、菌落计数、细菌鉴定等步骤。
1. 样品采集
根据实验目的,从不同的源头采集样品,如空气、水、食物、患者等。
采集时要注意无菌操作,避免样品被外源污染。
2. 样品准备
将采集的样品进行留取、稀释等预处理,配制成适合微生物培养的状态。
3. 细菌培养
将处理后的样品接种到培养基上,置于恒温培养箱进行培养。
控制培养条件如温度、湿度等,为微生物生长创造最佳环境。
4. 菌落计数
培养结束后,观察培养皿上菌落的数量、大小、颜色等,进行定量记录。
5. 细菌鉴定
通过菌落形态特征、生化试验等方法,鉴定培养皿上生长的细菌属种。
6. 数据记录
将实验过程和结果详细记录,以便后期分析。
以上是微生物实验室的基本日常工作流程。
根据不同实验目的,流程中可能还包括抗生素敏感性测试、致病性检测等步骤。
采样、样品制备和预处理
复检样品：在对检验结果有争议或分歧时作
复检用 保留样品：需封存保留一段时间（通常一个
月），以备有争议时再作验证，但易变质 食品不作保留。
4.采样的一般方法
随机抽样
代表性取样
按照随机原则，从大批 初料中抽取部分样品。
所有初料的各个部分都 有被抽到的机会
用系统抽样法进行采样，根据 样品随空间（位置）、时间变 化的规律，采集能代表其相应 部分的组成和质量的样品。 （如分层取样、随生产过程流 动定时取样、按组批取样、定 期抽取货架商品等 ）
10）感官不合格产品不必进行理化检验，直接判为 不合格产品。
二、样品制备
（一）样品制备
按采样规程采取的样品往往数量过多，颗粒太大， 组成不均匀。
必须对样品进行粉碎、混匀、缩分——样品制备
1.样品制备的总原则
要防止易挥发性成分的逸散 、避免样品组成和 理化性质发生变化 ；
做微生物检验的样品，要按照无菌操作规程制 备
（8）超声波辅助萃取（Ultrasonic Assisted Extraction，UAE）
超声波发生器能发出高频振荡讯号，通过换 能器可以转换成高频机械振荡而传播到介质 中，超声波在介质中疏密相间地向前辐射， 使介质流动而产生数以万计的微小气泡，由 空化效应而形成超过1000个大气压的瞬间 高压，从而加速了溶剂萃取过程。
亚临界水与常温常压下的水在性质上有 较大差别，它类似于有机溶剂
水在250℃时介电常数为27，介于常温 常压下乙醇(ε=24)和甲醇(ε=33)之间
对中等极性和非极性有机物具有一定的 溶解能力
适用：处理各种固体和半固体样品中的 挥发性和半挥发性有机物
静态SBWE主要是通过控制加热的温度， 压力和时间等因素来到达最优萃取条件。
生物实验样品预处理
样品预处理4.1.5.1准备工作若必要时将冷冻样在冰箱（-2-4C）中放置过夜，使部分解冻以便切片。
用合成洗涤剂清洗塑料刀、碟、镊子、塑料板及尺和称重塑料膜，用蒸馏水或清洁海水漂洗干净。
工作台用洗净的塑料膜罩上。
用合成洗涤剂(4.1.2-2)仔细地洗手，后用蒸馏水或漂洗干净。
PF一胸鳍；DF一脊鳍，虚线表示刀切位置图3鱼体简图中小型鱼样制备4.1.5.4.1单个体样品：测量鱼的叉长，并于聚乙烯称样膜上称重。
记下叉长和体重。
用蒸馏水或清洁表层海水（4.1.2.1)洗涤鱼样，将它放在工作台上，用塑料刀切除胸鳍并切开背鳍附近自头至尾部的鱼皮（图3),在鳃附近和尾部，横过鱼体各切一刀；在腹部，鳃和尾部两侧各切一刀。
四刀只切在鱼体一侧，且不得切太深，以免切开内脏，沾污肉片。
最好在切片时，由另一人帮助按住鱼的头尾。
用镊子将鱼皮与肉片分离，谨防外表皮沾污肉片。
用另一把塑料刀将肌肉与脊椎分离，并用镊子取下肌肉。
将组织盛于塑料容器中，称重并记录重量。
若一侧的肌肉量不能满足分析用量，取另一侧肌肉补充。
盖紧容器，贴上标签或记号，记录各所有数据，于低温冰箱中保存。
鉴定性腺性别。
4.1.5.4.2多个体试样：制备方法如下。
仔细记下各个体体长、鲜重、肌肉重。
鉴定性别。
个体数不应少于6个，且性别应相同，大小相近。
用匀浆器匀化鱼组织，将匀浆转入已知重量的塑料容器中，盖紧，贴上标签并称重，记下匀浆重和其他数据。
置于低温冰箱中存放。
干样制备将部分新鲜试样按4.1.6.1或4.1.6.2步骤烘干，计算干／湿比，以校正水分含量。
干燥后的样品用玛脑研钵磨碎，全部筛过80-100目（尼龙筛），供痕量元素分析用。
4.1．6干重测定41.6.1烘干半开称量瓶的磨口盖，放入105℃烘箱中。
2h后，取出称量瓶，置于干燥器中冷却30min. 盖好瓶盖，用分析天平称重，记下重量。
取5^10g生物制备样（4.1.5)于称量瓶中，盖好瓶盖，再称重（士0.5mg）并记下重量。
第3章 生物样品与样品制备
硅烷化：R-OH；R-COOH；R-NH-R´等极性基团药物
酰化：R-OH；R-NH2；R-NH-R´等极性基团药物
烷基化：R-OH；R-COOH；R-NH-R´等极性基团药物
生成非对应异构体衍生化法：具有光学异构体的药R（-）与 （+），用不对称试剂使其生成非对应异构体衍生物，GC分析 B:HPLC法中的化学衍生化法 使极性药物变成非极性的、易挥 目的：提高灵敏度；提高分离度
2.待测样品的浓度范围
A:生物样本中药物浓度个体差异大 地高辛1-2ng/ml；水杨酸
盐20-100μg/ml。
B:浓度高的对样品与处理要求低，低的要求高
3.药物测定的目
A:急性中毒病例 B:大部分的体内药物分析，均需要进行全面的样品与处理研究
4.选用的生物样本类型
A:血浆、血清出蛋白后处理 B:唾液通过离心除蛋白后萃取
D:分析物的洗脱和收集 重要，用水-有机溶剂（5:95）洗脱
E:收集的样直接进样，或浓集 4）其他萃取技术
A:固相微萃取技术
B:膜萃及位微透析技术取技术 C:超临界流体萃取技术
4.化学衍生化
1）光谱技术 （1）紫外分光光度法 紫外没有吸收或吸收小的药物 （2）荧光光度法 不具天然荧光的药物 （3）色谱分析法 极性大、挥发性低、热不稳定、检测灵敏度 不够 A:GC法中的化学衍生化法 使极性药物变成非极性的、易挥发 法的药物；增加药物稳定性；提高光学异构体的分离能力 主要衍生化反应
C:制备全血
D:血浆和血清的区别 抗凝剂；血浆量（50-60%），血清 量（20-40%）；纤维蛋白原；C血浆=C血清
E:用全血分析 测定细胞内、外液的浓度；血浆中药物浓
度波动大；血浆中药物浓度低而细胞内药物浓度高
第2章 生物样品制备技术
5、用以收集细胞，细胞器，生物大分子等
6、分离条件温和 ，但是温度需要控制
.
（二）等电点沉淀法
等电点沉淀法利用蛋白质是具不同等电点的两性电解质
，在达到电中性时溶解度最低，易发生沉淀，从而实现分离 的方法 。 由于许多蛋白质的等电点十分接近，而且带有水膜的 蛋白质等生物大分子仍有一定的溶解度，因此单独使用此
价格昂贵 为小分子多肽，在双向电 泳结果中出现 抑肽素pepstatin在pH9时 不能发挥其抑制作用
1 mM EDTA ， 1 mM EGTA
抑制金属蛋白酶
除去影响双向电泳的污染物 :
污染物
样品制备过程中带来的盐、残留缓冲液和 其它带电小分子
除杂技术
1、 透 析 2、 旋 转 透 析 3 、凝胶过滤 4 、沉淀 / 重悬法 1、DNase-l RNase-A 2、 超 速 离 心 3、 超 声 TCAI 丙酮沉淀法 离心
蛋白质样品处理中经常使用的添加剂:
1、变性剂 (尿素，打开氢键、增溶)
2、去垢剂 (CHAPS ，SDS等，消除疏水基团之间的相互
作用，增强蛋白质在其pI值处的溶解性)
3、两性电解质 (减少蛋白聚合，维持其溶解性)
4、还原剂 (DDT ，二硫苏糖醇，用于打开二硫键) 5、炕基化-SH (保护其不被再氧化)
由于样品可含有数千种乃至上万种生物分子同处于一个 体系中，因此不可能有一个适合于各类分子的固定的一劳永
逸的分离程序，但很多基本手段是相同的。为了避免盲目性
，节省实验探索时间，要认真参考和借鉴前人的经验 。
常用的分离纯化方法和技术有: 离心法、沉淀法(包括:
盐析、有机溶剂沉淀、选择性沉淀等)、透析法、色谱法、 等电聚焦制备电泳法等。
生物样品的制备与提取
第二章生物样品的制备§2. 1 生物分析化学分析对象的复杂性生物样品往往是一种具有高度复杂性的体系，这种复杂性表现在组成、含量、动力学范围、时空依存性等各个方面，这使得生物样品的处理有很大的难度。
因此，与经典分析化学的样品制备相比，生物分析化学的样品制备有以下特点：（1）生物样品的组成极其复杂，常常包含有数百种乃至几千种化合物。
如人类血浆蛋白质组学的阶段性研究结果表明，正常人血浆中的蛋白质至2005 年时已鉴定了3020 种。
有的生物分子在分离过程中还在不断的代谢，所以生物分子的分离纯化方法差别极大，想找到一种适合各种生物大分子分离制备的标准方法是很困难的。
（2）许多生物分子在生物材料中的含量极微，只有万分之一、几十万分之一，甚至几百万分之一。
分离纯化的步骤繁多，流程长，有的目的产物要经过十几步、几十步的操作才能达到所需纯度的要求。
（3）生物分子往往有很宽的动力学浓度范围。
如不同的蛋白质在细胞内的浓度分布范围相差106〜1010倍，而同一种蛋白质在不同的生理或病理状态下浓度相差有时也很大。
（4）许多生物分子一旦离开了生物体内的环境时就极易失活，因此分离过程中如何防止其失活，就是生物分子提取制备最困难之处。
过酸、过碱、高温、剧烈的搅拌、强辐射及本身的自溶等都会使生物大分子变性而失活。
（5）生物分子的分离和制备几乎都是在溶液中进行的，很难准确估计和判断温度、pH 值、离子强度等各种参数对溶液中各种成分的综合影响，因而实验结果常常带有很大的经验成份，实验的重复性较差，分析仪器、分析方法学、乃至个人的实验技术水平和经验对实验结果会有较大的影响。
制备生物分子的基本原则是：以尽可能少的步骤、尽可能短的时间，获得尽可能多的目标产品。
通常包括以下步骤：①确定要制备的生物分子的目的和要求；②通过文献调研和预备性实验，掌握目标产物的物理、化学以及生物学性质；③生物材料的破碎和预处理；④分离纯化方案的选择和探索；⑤选择相应的、可靠的分析技术，建立鉴定生物分子制备物的均一性（即纯度）的方法；⑥产物的浓缩、干燥和保存。
生物样品的预处理
监 测 槽
呼 吸 信 号
放
大
器
吸鱼 信类
监 测 仪
理 化 分 析
拟、
器呼
2.人工河流 3.光合作用室 4.利用激光自动鉴定硅藻种类
界面莱塞计算机系统
感谢观看，欢迎批评指正
中药青蒿的植物来源《中华人民共和国药典》一九七七年
微核的变化、Ames试验
3.生理生化法 通过生物的行为，生长、发育以及生
理生化变化为指标来监测环境污染状况。
（1） 细菌学方法 （2） 酶的活性 （3） 种子发芽率 （4） 鱼的呼吸强度 （5） 鱼的回避
4.生物化学成分分析法（残毒测定法）
通过测定生物体内污染物的含量， 来估测环境污染程度。
二、国外生物监测动态
2.2.3 微生物物质的提取制备
各种发酵产品，由于菌种不同和发酵液特性不同，其 预处理方法的选择也有所不同。
有的发酵产物存在于发酵液中，也有的产物存在于菌 体中，或发酵液和菌体中都含有。
对于胞外产物，经预处理应尽可能使目的产物转移到 液相，然后经固液分离除去固相；
2.2.2 动物组织预处理注意事项
匀浆前的预处理 (冷冻) 提取缓冲液的选择(缓冲物质、pH、离子强度) 蛋白酶抑制剂的添加
蛋白酶分为丝氨酸蛋白酶（如弹性蛋白酶，凝血酶， 枯草杆菌蛋白酶，胰蛋白酶等），天冬氨酸蛋白酶，半 胱氨酸蛋白酶和金属蛋白酶四个家族，各有对应的抑制 剂，如常用的苯甲基磺酰氟（PMSF）是丝氨酸蛋白酶 的抑制剂 保护剂的添加(β-巯基乙醇、EDTA、辅酶等) 提取液的澄清 (高速离心、沉淀、吸附等)
生物样品的预处理
2 生物样品的预处理
概述 不同来源样品分离的预处理 细胞的破碎与分离 沉淀技术
生物样品的采集、储存和预处理的SOP
生物样品的采集、储存和预处理的SOP1. 生物样品的采集：服药前取空白血样，服药后取样点应包括吸收相，分布相，消除相；药浓度峰值前至少有4个点，峰后取6个点或6个以上点，峰时间附近应有足够的取样点。
总取样点不少于11个，取样应持续到3 ～ 5个半衰的1/10 ～1/20。
具体可依据文献报道及预试验结果确定具体采血时期，或Cmax间点。
于服药前（0 h）和各时间点，取前臂静脉血5mL，处理后，离心10 min ( 3000r.p.m)，分离血浆或血清样品置试管中。
2. 生物样品的储存:血浆、血清样品，尽快分离（24h内），冷冻保存；短期内分析，可置4℃冰箱内冷藏。
长期分析，于－ 20℃冰箱内冷冻保存。
3. 生物样品的预处理:依据药物的理化性质，其酸碱性（pKa）、分子的亲脂性、挥发性、稳定性及可能的生物转化途径，制定相应的预处理方法。
a. 沉淀蛋白法生成不溶性沉淀:酸性试剂（三氯醋酸、高氯酸、钨酸、焦磷酸）重金属盐类（锌盐、铜盐、银盐、汞盐）盐析、脱水:硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等中性盐。
甲醇、乙腈、丙酮等可与水混溶的有机试剂。
各种沉淀试剂使用情况表b. 液-液萃取法水相pH：碱性药物最佳pH应高于其p Ka 2 ～ 3个单位酸性药物最佳pH应低于其p Ka 2 ～ 3个单位常用的有机溶剂：正己烷、异辛烷、环己烷、四氯化碳、甲苯、乙醚、苯、1，2-二氯乙烷、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯（极性由依次小至大）。
有机溶剂与水相容积比一般为 1：1或2：1。
选择提取溶剂的原则：对被测物有较大的亲和力；与水不互溶，极性较小；沸点适宜；不影响紫外检测；价廉、无毒、不易燃烧；化学性质稳定。
体内药物分析 第三章 生物样品与样品制备
22
（二） 去除蛋白质
2、加入中性盐
常用中性盐（置换蛋白结合的水，使蛋白 脱水而沉淀）：
饱和硫酸铵、硫酸钠、镁盐、磷酸盐、枸 橼酸盐
比例：1：2 90％去除 方法：超速离心（10000r/min）
23
（二） 去除蛋白质
3、加入强酸
常用溶剂（与蛋白质阳离子形成不溶性盐沉淀）： 10％三氯醋酸、6％高氯酸、硫酸－钨酸混合液 、5％偏磷酸
完，不能反复冷冻→解冻→冷冻(FTC)；样品应以小 体积分装存放。
15
第二节 生物样品的预处理与制备
16
一、预处理目的
（一）药物从缀合物中释放，测定总浓度 （二）纯化、富集药物 （三）适应和满足测定方法要求的灵敏度 （四）防止对分析仪器的污染和劣化
17
二、样品制备时应考虑的问题
（一）药物的理化性质、存在形式和浓度范围 （二）药物测定的目的 （三）生物样品种类和杂质干扰类型 （四）样品的化学组成 （五）药物的蛋白结合率 （六）被测组分在预处理过程中的稳定性 （七）样品在收集、储存等过程中容器的污染 （八）样品的预处理过程要求简便 （九）预处理的最后一步应富集被测组分 （十）对分析方法的要求
离子对提取法：是一种用有机溶剂提取离子型药物的 方法。
原理：一些酸性或碱性的有机药物在体液中呈离子状 态，成为强亲水性的带电荷离子，不易被提取出来 。当加入与药物呈相反电荷的反离子物质时，即可 成为具有一定脂溶性的离子对，用有机溶剂可萃取 出来。
34
碱性药物：庚烷磺酸、辛烷磺酸、己烷磺酸等 酸性药物：四丁基铵、四乙基铵、四辛基铵 提取溶剂：氯仿、二氯甲烷
48
SPE的缺点：
1、价格昂贵 2、技术要求高 3、小柱各批之间有差异 4、主子容易堵塞，影响分离效果
样品采集、制备、前处理
样品采集任务实施
4、样品的保存 将缩分后的样品分别保存在洁净的样品瓶中，做好标识，分别为检验样品，
复验样品，保留样品。 5、采样单的填写
知识拓展
1、正确采样的原则 （1）代表性原则：采集的样品能真正反映被采样品的总体水平，也就
是通过对具体代表性样品的监测能客观推测食品的质量。采集的样品要
均匀，有代表性，能反映全部被检测食品的组成，质量和卫生状况。 （2）典型性原则：采集能充分说明达到监测目的典型样品，包括污染 或怀疑污染的食品、掺假或怀疑掺假的食品、中毒或怀疑中毒的食品等。 （3）适时性原则：因为不少被检物质总是随时间发生变化的，为了保 证得到正确结论应尽快检测。 （4）适量性原则：样品采集数量应满足检验要求，同时不应造成浪费。 （5）不污染原则：所采集样品应尽可能保持食品原有的品质及包装型 态。所采集的样品不得掺入防腐剂、不得被其他物质或致病因素所污染。
样品采集任务实施
（2） 四分法： 将样品倒在光滑平坦的桌面上或玻璃板上，用两块分样板将样品摊成正方
形，然后从样品左右两边铲起样品约10cm高，对准中心同时倒落，再换一个方 向同样操作（中心点不动），如 此反复混合四、五次，将样品摊成等厚的正方 形，用分样板在样品上划两条对角线，分成四个三角形，取出其中两个对顶三 角形的样品，剩下的样品再按上述方法反复分取，直至最后剩下的两个对顶三 角形的样品接近所需试样重量为止。
流水作业线上的货批通常指一个工作班生产的产品。要检验该货批的质量是否 达标，在制定好抽样量后，取样位点一般都设在作业线上的一定位置(如罐头生产线 的封盖前点，又如码头散装货输送线上抓斗前)，每隔一定时间，从该位置取出流经 此位置的一件或一定量的样品作为检样，然后将一定时间范围(例如一个工作时等) 内的检样合并，就形成样品中一个检样的原始样品。
生物样品的样品制备技术
生物样品的样品制备技术生物样品的样品制备技术是一项复杂的过程，它可以影响数据的准确性和可重复性。
生物样本包括血液、组织、血清、唾液、尿液等等。
生物医学研究和临床实践都需要对这些生物样品进行定量、定性、分析和诊断，因此，在样品的制备过程中，需要考虑样品的种类、处理方法、仪器设备和操作技巧等因素。
本文将对生物样品的样品制备技术进行讨论。
一、生物样品的收集和保存样品的质量和稳定性对最终的结果至关重要。
因此，在样品的收集和保存过程中，需要注意以下几点：（1）准确记录样品的信息包括样品编号、收集日期、收集地点、样品类型、收集量等信息。
这些信息对于后续的分析和研究非常重要。
（2）样品的收集采用适宜的采集管或容器进行收集，避免污染和损伤。
例如，血样的采集需要用无菌针头和无菌采血管，并且需要严格按照标准操作程序进行采血。
（3）样品的处理样品的预处理可以移除杂质、保护样品、提高分析灵敏度等目的，简化后续的操作流程。
如，将血样进行离心分离血浆和血细胞。
（4）样品保存根据不同的样品种类，选择合适的保存方法，避免样品的降解和变质。
例如，血样和组织样品应该保存在低温和冷冻条件下。
二、生物样品的样品制备流程生物样品的样品制备流程包括样品的处理、分离、纯化等步骤。
这些步骤可以提取感兴趣的化合物、分子、生物标志物等，从而实现对样品的定量、定性、分析和诊断。
（1）样品的处理样品的处理包括前处理、蛋白质去除、核酸去除等步骤。
前处理可以清洗或降解杂质，保护目标样品，如血液样品的前处理可以去除氯仿、磷酸钾等浓度高的化合物。
蛋白质去除可以通常使用抗体、酶等进行。
核酸去除可以使用RNAase或DNase酶。
（2）样品的分离样品的分离包括离心分离、柱层析分离、电泳分离、毛细管电泳等步骤。
这些方法根据样品类型和杂质特征进行选择。
离心分离可以分离细胞、血浆等物质。
柱层析分离可以根据物质的大小、电性、化学性等特征进行分离。
电泳分离主要用于分离DNA、RNA、蛋白质等。
生物样品处理与准备技术
生物样品处理与准备技术生物样品处理与准备技术是生物分析领域中至关重要的一个环节。
准确、高效的生物样品处理和准备能够保证实验结果的可靠性和科学性。
本文将从样品的采集、处理、保存、运输等方面，阐述生物样品处理与准备技术的重要性以及常见的技术方法。
一、样品采集1. 血样采集血样是临床诊断和分子生物学研究中常用的生物样品之一。
采集前，需对患者进行详细询问，了解患者的基本信息和特殊情况，如用药史、饮食状况、疾病史、妊娠状况等。
采集血样应选用无菌一次性采集器，在采集时注意消毒，避免污染。
不同的研究需要采集不同的血液，如血清、血浆、全血等，在采集时要根据实验需求选择。
2. 尿样采集尿样是体内代谢产物的主要排泄途径之一，通常可反映出人体内代谢情况和某些疾病的发生。
尿样采集的时候，需避免与外界污染，彻底清洗外阴部，利用干净的尿杯采集中段尿标本，最后尽量避免采集尿废液。
3. 组织样本采集组织样本采集是分子生物学和生物医学研究中常用的方法之一。
组织样本采集涉及到手术切除、活体穿刺等操作，需遵循医学伦理规范，在手术过程中严格按照规定进行操作，最大程度地减少对病人的损害。
二、样品处理1. 血液处理血液的处理方法根据实验需求不同而有所差异。
如需采集血清和血浆，则需将采集到的血液置于无菌试管中， allow the blood samples to clot (at least 30 minutes) before centrifuging and separating the layered components of the blood.血小板在血液中的浓度很高，若需分离出血清和血浆，则需将血液存放在4℃以下进行预处理。
2. 细胞处理细胞是高度特异性结构和机能的小型独立体，处理细胞样本时需要注意样本数量、细胞纯度和细胞处理的顺序。
分离细胞时可通过培养物法、悬液细胞法等方法，若需测定细胞内的某些物质，则需迅速离心剩余的胞体并彻底洗涤胞体，以免干扰实验结果。
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生物样品的采集制备和预处理生物样品的采集制备和预处理
一、生物样品采集
1、植物样品的采集
（1）采集的植物样品要具有代表性、典型性、适时性。
（2）布点方法
常采纳梅花形五点取样法或交叉间隔取样法。
（3）采样方法
①采样前应预先准备好采样工具。
②依据实际情况确定样品采样量。
③选择优势莳植物在采样区内按梅花形五点或交叉间隔取样方式采集5－10处的植株混合构成一个代表样品。
④将采好的样品装入布口袋或聚乙烯塑料袋中，贴好标签，并填写采样登记表。
2、动物样品的采集
（1）尿的采集
定性检测尿液成分时应采集晨尿。
定量检测尿液成分时一般采集24h总排尿量。
（2）血液的采集
一般用注射器抽取10mL血样冷藏备用。
常用于分析血液中所含
金属毒物及非金属毒物。
（3）毛发和指甲的采集
采集和保存较为便利，重要用于汞、砷等含量的测定。
（4）组织和脏器采集
二、生物样品的制备
对于液体状态的动物样品常无需制备，对动物组织和脏器重要
是采纳捣碎的方法制成浆状鲜样备用，而对植物样常依据不怜悯况，利用不同方式进行样品制备。
植物样品的制备
（一）平均样的获得
四分法、切成块的1/4－1/8混合
（二）分析试样的制备
1、鲜样
2、风干样：60－70摄氏度低温真空干燥箱中烘干（匀浆、小片）
3、水分含量测定（100－105摄氏度烘干/真空干燥/低温烘干）
三、生物样品的预处理
常用的预处理方法有湿法消解法、灰化法、提取、分别和浓缩法等。
1、湿化消解法
利用强酸等与生物样品共同煮沸，将样品中有机物分解成二氧化碳和水除去。
常用的消解试剂体系有浓硝酸－高氯酸、浓硝酸－浓硫酸、浓硫酸－过氧化氢等。
2、灰化法
利用坩埚或氧燃烧瓶，使样品在高温条件下分解，并用适当的溶液溶解或汲取分解产物，制成分析试液。
3、提取法
整个过程包括提取、分别、浓缩三个步骤。
（1）提取
应依据样品的特点、待测组分的性质、存在形态和数量、分析方法等因素选择，常用方法有：
1、振荡提取法
2、组织捣碎提取法
3、脂肪提取器提取
4、直接球磨提取法
（2）分别
用提取剂从生物样品中提取欲测组分的同时，不可避开的会将
其他相关组分提取出来，因此，在测定之前，还必需将上述杂质分
别出去。
常用的分别方法有：液－液萃取法、层析法、磺化法、低
温冷冻法、吹蒸法、液上空间法等。
（3）浓缩
当生物样品的提取液经过分别净化后，其中的污染物浓度往往
仍达不到分析方法的要求，需要进行浓缩和富集，常用方法有：蒸
馏或减压蒸馏法、K—D浓缩器浓缩法、蒸发法、真空冷冻干燥法等。