支气管肺泡灌洗液相关实验室操作

BALF标本病原体实 验室检测
抗酸染色： 用于检测分枝杆菌，弱抗酸染色可用于检测奴卡菌。
氢氧化钾(KOH)压片： 用于真菌，特别是丝状真菌的形态学观察。
墨汁染色： 用于隐球菌的检测。
六胺银染色： 常用于肺孢子菌的检测。
免疫荧光显微镜： 可用于军团菌、肺孢子菌及病毒的检测。
BALF标本病原体实 验一室般细检菌测培养（定量培养）：
核酸检测： 用于病毒、军团菌、肺孢子菌或分枝杆菌等的检
测。 真菌抗原：
半乳甘露聚糖试验（GM试验）主要用于曲霉的检 测；目前有关BALF检测隐球菌荚膜抗原的研究证据较 少，可考虑作为诊断的补充手段。
BALF标本病原体实 验室检测
BALF
涡旋震荡30～60 s
接种10μl BALF
适量BALF标本600~1 000r/min离 心10~20 min
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支气管肺泡灌洗液相关实验室操作
目录
CONTENTS
1 BALF标本保存运送 2 形态学检查 3 病原学检查
BALF是通过支气管镜向支气管肺泡 内注入生理盐水并进行抽吸，收集肺泡 表面液体，通过检查细胞成分、可溶性 物质和感染性病原体，诊断肺部相关疾 病、评价疗效和预后。
BALF标本病原体实 验一室般细检菌测培养（定量培养）：
（4）结果判定：分别对不同形态的菌落进行计数，乘 上稀释倍数即为此细菌的菌落数。菌落计数BALF≥104 CFU/ml或无菌防污染BALF≥103CFU/ml时认为是可能的 病原菌，但不能机械使用该阈值，还要结合患者的实 际情况及有无使用抗菌药物等因素综合判断。
BALF标本病原体实 验室检测
真菌培养：
BALF标本1500～1800×g，离心15～20min，沉淀
物混匀后接种于沙保平板上，30℃和35℃孵育7d，怀 疑双相真菌时应使用带螺帽的培养基，孵育6周。 特殊病原菌培养：
BALF离心后的沉淀物还可用于分枝杆菌、军团菌 及病毒等的培养。
BALF标本病原体实 验室检测
➢ 嗜酸粒细胞比例增高为主时，见于嗜酸粒细胞浸润 症、支气管哮喘等。
病原学检查
BALF标本病原体实 验室检测
显微镜检查
革兰染色及BALF质量评价：建议使用细胞离心机 制片，取适量BALF标本600～1 000 r/min离心10～20 min,进行革兰染色。低倍镜下若鳞状上皮细胞占全部 细胞比例>1%，提示标本被上呼吸道分泌物污染；柱状 上皮细胞>5%时,提示BALF并非来自于远端气腔。观察 革兰染色结果及白细胞情况，如果见到噬菌现象，须 报告吞噬细菌的中性粒细胞占或全部中性粒细胞的比 例，通常数值为5%时可作为肺炎诊断的阈值。
真菌抗原： 半乳甘露聚糖 隐球菌荚膜多糖抗原
临床意义
➢ 微生物学涂片检查：BALF中的沉淀物进行革兰染色、抗酸染 色及真菌的特殊染色，对细菌、分枝杆菌、真菌及寄生虫的 检出有较大意义。
➢ 微生物学培养：在严格无菌操作下采集的BALF进行直接接种 培养或取其沉淀物进行培养，对检测细菌及真菌具有较大的 临床意义，BALF细菌培养计数≥104CFU/ml或无菌防污染 BALF≥103CFU/ml时具有临床诊断意义。
➢ 灌洗液中GM测定：取5~10ml灌洗液置于无菌容器中，4 h内 送检；对于早期快速诊断侵袭性肺曲霉病，特别是气道曲霉 感染的患者具有重要的临床价值。
墨汁染色 真菌培养 隐球菌荚膜多糖抗原
涂片抗酸染色(萋-尼染色、荧光染色) 分枝杆菌培养 核酸检测（Xpert MTB/RIF）
核酸检测 病毒抗原检测（DFA、胶体金法） 分离培养
直接镜检 核酸检测 抗原检测（ELISA、ICT）
BALF标本运送与保存
➢ 室温条件下2h内送至实验室。 ➢ 若延迟送检，可将标本放置于2～8℃保存，但不可
➢送检量至少5毫升（10-20毫升最佳）。
检测目的 细菌 奴卡菌
转运条件 无菌容器，室温，≤2h
ห้องสมุดไป่ตู้
军团菌 真菌 曲霉 肺孢子菌
无菌容器，室温，≤2 h
隐球菌
分枝杆菌
无菌容器，室温，≤2 h
保存条件 4℃，≤24h
4℃，≤24 h 4℃，≤24 h
病毒
病毒转运培养基，室温，≤2 h
4℃，≤5 d；-70℃，˃5 d
寄生虫
无菌容器，室温，≤2 h
4℃，≤24 h
检测方法
革兰染色 定量培养
革兰染色 弱抗酸染色 培养
培养（BCYE营养培养基、GVPC及MWY筛选培养基） 核酸检测 抗原检测（DFA）
KOH压片、荧光白染色 真菌培养
KOH压片或荧光白染色 真菌培养 半乳甘露聚糖抗原试验（GM）
六胺银染色 核酸检测 抗原检测
定量培养
革兰染色 标本质量评估
剩余的BALF标本1 500～1 800×g 离心15～20 min
沉淀物混匀后
上清液
显微镜检查： 不染色镜检 革兰染色 抗酸染色 弱抗酸染色 六胺银染色 墨汁染色 KOH压片 免疫荧光染色
特殊病原菌培养： 分枝杆菌 真菌 军团菌 病毒等
核酸检测： 病毒 军团菌 肺孢子菌 分枝杆菌等
超过24h。
BALF临床应用
BALF诊断的疾病
1
肺部感染 弥漫性间质性肺病 职业性肺部疾病 肺部肿瘤 儿科肺部疾病
形态学检查（细胞分类）
淋巴、中性粒细胞 高倍
纤毛上皮细胞 油镜
细胞学分类的临床 意义
➢ 中性粒细胞比例增高为主时，见于各种细菌或真菌 等感染；
➢ 淋巴细胞比例增高为主时，见于病毒性肺炎、结节 病或过敏性肺炎。
标本包括：BALF和保护性毛刷（PSB）
适应症
➢肺部感染，特别是免疫受损患者肺部机会性感染的 病原体诊断。
➢肺部不明原因阴影、疑似肺部感染或需与其他疾病 鉴别。
BALF采集
➢BALF收集：由专科医生采集。用于病原学分析的标 本需用无菌容器收集；细胞学分析需选择塑料容器 或硅化的玻璃容器以减少细胞的黏附。
（1）涡旋震荡BALF标本30～60s。 （2）定量接种：用经校准的加样器（或定量接种环） 取10μl 的BALF标本，分别点种于血平板和巧克力平 板上且密集划线，有条件时最好采用灭菌L型玻棒涂布 平板。还可取100μlBALF接种于麦康凯或中国蓝培养 基。 （3）孵育：将接种的平板放在二氧化碳培养箱（5%～ 10%CO2）中，35℃培养48 h。