木耳液体菌种制作规程讲解

液体菌种制作规程

工艺流程：斜面菌种→初级摇瓶种→二级摇瓶种→发酵罐深层发酵种→接种

一、摇瓶种的制作

1斜面菌种准备：马铃薯200克（去皮切块煮沸过滤取滤液），蔗糖20克，麸皮30克（煮汁过滤取滤液）二氢钾2克，硫酸镁1克，琼脂20克，VB1 10毫克，水1000毫升。25度培养7天备用。

2、初级摇瓶制作①配方土豆200克葡萄糖20克

酵母膏2克蛋白胨3克磷酸二氢钾2克硫酸镁1克

V B110毫克水1000毫升。（配方2：玉米粉4%，蔗糖3%，麸皮2%，酵母膏0.5%，2氢钾0.25%，硫酸镁0.1%，VB1 0.01%，豆油0.05%）。

②制作：土豆去皮切成薄块，煮沸后保持20分钟，四层纱布过滤后取滤液，补足1000毫升水，称取其他成份，与土豆液充分搅匀然后装入三角瓶。

初级摇瓶采用500ml三角瓶，装入200ml,放入玻璃球5粒（0.5cm 直径）用二层纱布包裹制作棉塞，塞紧棉塞后再用二层纱布外层加报纸做罩，扎紧瓶胫，防止摇动时棉塞活动。

③灭菌：把三角瓶放入立式高压锅，加足水紧好盖，开启放气阀，接通电源，有蒸汽冒出时关闭放气阀，待压力表达到0.05MPa时,断掉电源,打开放气阀,放冷空气至压力表回0，再关闭放气阀，接通电

源，当压力表显示0.11 MPa，温度达到121℃后开时计时，保持45min。断电使其自然降至0.02 MPa时放气归0，趁热微开盖，使剩余蒸汽烘干棉塞，然后出锅降温至25℃即可接种。

④接种：首先，封闭接种室，用开启紫外线灯30分钟，再用臭氧灭菌器灭菌60分钟或用烟雾剂每立方5克熏蒸30分钟，进行接种环境灭菌。把灭菌后的三角瓶放入超净台（或接种箱）,把斜面母种、工具、酒精灯、75%的酒精棉球瓶同时放入，母种用灭过菌的报纸遮盖，打开紫外线灯和无菌风开关，保持15min后，关闭紫外线灯进行接种。操作人员应着干净的隔离衣，带好卫生帽、口罩，手洗净，用75%酒精擦拭手、母种试管、工具，点燃酒精灯，灼烧工具及试管口20秒，在严格无菌操作程序下，把斜面菌种切割成0.5厘米小块（不带培养基），移入三角瓶中，使其浮在液面，一般接入5-6块，塞好棉塞，接完后重新封好棉塞罩，放到25℃恒温环境净置培养72小时。

⑤初级摇瓶培养。当静置培养72小时后，液面菌种长到1厘米大，无污染，即可将三角瓶放到小型摇床上，一般能放6瓶（也可使用电磁摇床），固定好三角瓶，保持培养温度25℃，启动开关，调速至140r/min，培养96小时，当菌液颜色清亮、菌球密集，占整个培养液的80%以上，瓶口处有很浓的菇香味，可作为二级摇瓶扩大培养的种子使用。

⑥二级摇瓶制作培养：二级摇瓶菌液配方与一级相同，5000ml 三角瓶装液2000ml放入玻璃球8-10粒，灭菌压力、时间同一级，接种在无菌条件下迅速将一级摇瓶种倒入二级摇瓶中，接种量10%，塞

紧棉塞绑好棉塞罩，即可放到大型摇床培养，大摇床一般放入4-5瓶，保持环境温度25℃，转速140r/min，培养72--96小时。

72小时后，菌液颜色变清亮，菌球小而均匀密集，占菌液的80%以上，瓶口有明显菇香味，既为合格的液体摇瓶种，可以用于发酵罐扩大培养。

二、发酵罐深层发酵扩大培养

（一）液体罐培养基配方：玉米粉4%，麸皮2%，蔗糖3%，酵母粉0.5%，磷酸二氢钾0.25%,硫酸镁0.1%,V B10.01%.豆油0.05%。

（二）制作方法：按发酵罐最高70%的容量确定需要制作的菌种量，按比例称取各种原料，用2层纱布做袋，把玉米粉和麸皮分装两袋放入煮锅中加足水，开锅沸腾后保持30min，摆动纱布袋使营养充分溶于水中，然后控水取出，最后把剩余其它成份先溶于2L水中搅匀加入煮锅内，开锅搅拌均匀，既可入罐灭菌。

（三）发酵罐的准备

1、发酵罐的清洗和检查

（1）、发酵罐在每次使用后或者再次使用前都必须进行彻底的清洗。除去罐壁的菌球和菌块，料液和其他污染物，对于内壁的菌球可以用木棒包扎软布擦拭，洗罐的水从罐底排出，如果有大的菌料不能排出，可以卸下罐底的接种管线排出菌料。

（2）、发酵罐的气密性检查

关闭发酵罐所有阀门，稍微打开进气阀门，开启打气泵，让发酵罐压力缓慢上升至0.1Mpa后，关闭空气进气阀门保压,用肥皂水喷洒

与发酵罐上的法兰连接处、焊接处、压合密封面处，逐一检查以上的地方是否有肥皂泡吹起以确定罐体的严密性，若有漏气现象应立即排除。

（3）、发酵罐的控制柜和加热棒检查

发酵罐清洗完毕后加水以超过加热管为宜（绝对禁止加热管干烧）然后启动设备，检查控制柜，加热管是否正常，各个阀门无渗漏，检查合格后方可工作。

2、发酵罐煮罐

正常生产不需要煮罐，上一次生产完毕,只需要将罐洗净就可以进入下一批生产。如果有下列情况之一的需要煮罐。

新罐，初次使用；上一次污染的发酵罐；更换生产品种的发酵罐；长时间不使用的发酵罐。

煮罐是对发酵罐进行预消毒的过程，具体操作方法：

（1）、关闭发酵罐底部的接种阀门，进气阀门，把水从发酵罐口加入至视镜中线，盖上发酵罐口盖子，拧紧，打开发酵罐夹套排气阀门和发酵罐排气阀门。

（2）、启动电源，打开控制柜“灭菌”键，此时进入灭菌状态。

(3)、当温度升到100℃夹套有蒸汽冒出时,关闭夹套排气阀门的开度，保证发酵罐内冷空气排净并保证有蒸汽流通。

(4)、当控制柜显示屏幕上显示温度123℃，压力表压力达到0.12Mpa时控制柜自动倒计时，屏幕上可以显示发酵罐温度和倒计时时间，当倒计时时间显示为0时，控制柜自动报警，此时发酵罐灭菌

结束。关闭加热棒、关闭发酵罐排气阀门，闷20min后打开排气阀门和接种阀门，放掉发酵罐内压力和水，煮罐结束。

3、发酵罐空消（内胆、过滤器、管线的消毒）

发酵罐空消是对发酵罐进行设备消毒灭菌的过程，对于放置一周不用的发酵罐或者是因为停电使空压机（打气泵）停止运转的发酵罐都需要进行发酵罐的空消操作，具体的操作方法：

（1）、关闭发酵罐除夹套排气门外的所有阀门，拧紧发酵罐罐口盖子。

（2）、启动电源，打开控制柜“灭菌”键，此时进入灭菌状态。

（3）、当温度升到100℃夹套有蒸汽冒出时关闭夹套排气阀门，此时给夹套升温升压，当夹套压力达到0.05Mpa以上时,不要超过0.1Mpa缓慢打开夹套进过滤器阀门,打开过滤器尾阀门.

（4）、当过滤器冷凝水排放完毕有蒸汽冒出后微开过滤器尾阀门，缓慢打开进气阀门尾阀门，排放空气管道内的冷凝水，冷凝水排放完毕后缓慢打开进气阀门，使得蒸汽慢慢进入罐体。

（5）、微开发酵罐排气气阀门，缓慢将发酵罐内的冷空气排放出去，在空消的整个过程中，控制发酵罐排气阀门，使得发酵罐排气阀门有少量蒸汽流通。

（6）、当控制柜温度显示接近123℃，发酵罐罐内压力接近0.12Mpa时缓慢打开接种管道尾端，将接种管道内冷凝水排放完毕后保证尾端有少量蒸汽冒出保证蒸汽流通。

（7）、当温度达到123℃，发酵罐压力达到0.12Mpa时控制柜开