木耳液体菌种制作规程讲解
液体菌种培训教材(十一)黑木耳栽培技术
液体菌种培训教材(节选十一)2010年4月10日第二章栽培管理技术黑木耳栽培技术一、生产季节根据我地区的自然条件，一年可以栽培两个周期（春茬和秋茬木耳），每个周期4个月，春茬2-3月生产栽培袋，4-6月划口出耳；秋茬7-8月生产栽培袋，9-11月划口出耳；稻田地黑木耳一季。
二、生物学特征及生长环境要求1、形态特征：黑木耳子实体呈胶脂状，耳片呈波浪型，黑色或褐色；鲜品是透明或半透明状，耳根收缩有弹性，外形和手感酷似人耳，也是其名称来源；干品：硬而石质，呈角质状，黑色或暗黄色，有脉络皱纹。
泡发率为1：10-15。
2、生长史：孢子——菌丝体——子实体——孢子我们栽培的过程一般是从菌丝体到子实体的过程。
从生产栽培袋到出耳结束需要3-5个月，分成两个阶段：菌丝体生长阶段和黑木耳生长阶段，其中菌丝体生长阶段需要30-45天左右。
3营养：野生的黑木耳主要生长在腐（枯）木上，分解其中的营养，供菌丝体和木耳生长，我们栽培黑木耳主要是利用木屑、玉米芯等原料，菌丝体分解纤维素、木质素的能力非常强，选择的木屑要求是硬质的阔叶树木屑为好，如：柞木、栎木、桦木等，另外需大量的氮源、维生素及矿物质，主要来源是麸皮、糠壳等，在实际生产中，为适合出菇季节，尽可能缩短生产周期并获得较理想的产量，木屑的营养成分远远不够，必须人为添加一些氮源做为补充和调整，一般以添加如麸皮、糠壳等糠壳类为好，调整C/N比在30-33：1之间，这样其料C/N比稳定、长效、不易挥发浪费，可长期提供菌丝及黑木耳的生长。
4、温度：黑木耳属于中温型的菌类，菌丝生长温度范围为5-35℃，以25-28℃为最适温度。
培养基内温度低于5℃菌丝停止生长，温度高于35℃时，细胞脱水，衰老死亡。
子实体生长阶段10-25℃均能生长。
黑木耳属于变温结实，15-25℃为最适温度（出耳床内温度），温度小于10℃时，原基分化相当的慢，黑木耳在25℃以上时生长速度非常快，木耳的品质非常的差，耳片厚度偏薄形成“流失耳”。
液体菌种制作
素才能决定。
6.酸碱度
不同种类的食用菌都有一个最适酸碱度，例如，黑木耳的
ห้องสมุดไป่ตู้
最适pH为6.0-6.5、金针菇为6.3、香菇为4.5-6.5。
7.罐压 在发酵过程中罐压通常为0.2-0.7Kg/cm。 8.泡沫控制 在发酵过程中泡沫过多不利于发酵，目前大多数是加入
0.006%的泡敌做消泡剂消除泡沫。
9.发酵特点
发酵终点是否准确，应参考产物浓度、过滤浓度、氨基酸
六、液体菌种制作的主要参数
1.菌龄 菌龄与种子的活力密切相关。通常，摇瓶种子菌龄控制在 4-10d，一级种子和二级种子菌龄为48-96H。 2.接种量 一般地，食用菌深层发酵时的接种量为10-20%。 3.温度 通常在22-30℃生长最快，得率最高。
4.通气量 食用菌深层发酵的通气量以0.2-1.5通气体积/培养液体积 /min为宜。 5.搅拌速度 食用菌深层发酵的搅拌速度一般是180-500r/min。
体的，不受季节性限制。
三、液体菌种制作的用途
1.生产液体菌种 食用菌经深层发酵2-7d的幼嫩菌丝体，可以用来作为食用 菌栽培用的原种和栽培种。
2.制备药物或提取生化制品 许多食用菌种类，其深层发酵培养的菌丝体可作为提取药 物成分或生化制品的材料。
3.制作食品或畜禽饲料
四、液体菌种制作的主要设备 1.摇床
第三节
液体菌种制作技术
一、液体菌种制作的原理
食用菌液体菌种制作是在发酵罐中，采用液
体培养基通入无菌空气并加以搅拌，增加培 养基中溶氧含量，提供食用菌菌体呼吸代谢
所需要的氧气，并控制适宜的外界条件，获
得大量的菌丝体或代谢产物。
响应面法优化黑木耳液体菌种发酵配方及条件
山西农业科学 2023，51（6）：653-662Journal of Shanxi Agricultural Sciences响应面法优化黑木耳液体菌种发酵配方及条件周超 1，马银鹏 1，包旭翔 1，戴肖东 1，孔祥辉 1，张介驰1，2（1.黑龙江省科学院 微生物研究所，黑龙江 哈尔滨 150000；2.黑龙江省科学院 高技术研究院，黑龙江 哈尔滨 150000）摘要：液体菌种已在黑木耳菌包工厂化生产中广泛应用并取得较好效果，但提高黑木耳液体菌种发酵生产效率仍是菌包生产企业的重要技术需求。
为深入探究发酵营养条件、环境条件及其交互作用对黑木耳液体菌种生产效率的影响，为黑木耳液体菌种高效生产提供有益参考。
试验以国家认定品种黑木耳2号为试验菌株，以发酵醪中菌丝量为响应值，采用经典的响应面法对液体菌种发酵过程进行研究。
结果表明，发酵基质营养与环境条件对黑木耳菌丝生物量具有显著影响，试验范围均出现影响峰值；基质营养条件中的碳源浓度、环境条件中与溶氧水平密切相关的装液量和摇床转速都与其他发酵条件有很强的交互作用。
结合单因素试验、响应面试验分析和验证试验，确定最佳配方为葡萄糖22.3 g/L 、蛋白胨2.7 g/L 、KH 2PO 4 2.0 g/L 、MgSO 4·7H 2O 1.5 g/L ，同时添加羧甲基纤维素钠3 g/L ，菌丝生物量达13.22 g/L ，与预测值13.05 g/L 相比，相对误差为1.3%；最佳发酵条件为温度30 ℃、时间7 d 、摇床转速165 r /min 、装液量105 mL （250 mL 锥形瓶），菌丝生物量达到14.32 g/L ，与预测值14.11 g/L 相比，相对误差为1.49%。
研究结果表明，此液体发酵培养基配方及调控条件有效可行、菌丝得率高。
关键词：黑木耳；液体菌种；响应面法；交互作用；发酵配方；发酵条件中图分类号：S646.6 文献标识码：A 文章编号：1002‒2481（2023）06‒0653‒10Optimization of Fermentation Formula and Conditions of Auricularia heimuerLiquid Strain by Response Surface MethodologyZHOU Chao 1，MA Yinpeng 1，BAO Xuxiang 1，DAI Xiaodong 1，KONG Xianghui 1，ZHANG Jiechi 1，2（1.Institute of Microbiology ，Heilongjiang Academy of Sciences ，Harbin 150000，China ；2.High Technology Research Institute ，Heilongjiang Academy of Sciences ，Harbin 150000，China ）Abstract ：Liquid strains have been widely used in the factory production of Auricularia heimuer , and good effects have been achieved. However, improving the fermentation efficiency of Auricularia heimuer auricularia liquid strains is still an important technical requirement for the production enterprises of Auricularia heimuer . In order to further explore the effects of fermentation nutritional conditions, environmental conditions, and their interaction on the production efficiency of Auricularia heimuer liquid strain, and provide a useful reference for the efficient production of Auricularia heimuer liquid strain, in this paper, a national recognized variety Auricularia heimuer 2 was taken as the test strain, and the amount of mycelium in the fermentation mash as the response value, and the classical response surface method was adopted to conduct experimental research on the fermentation process of Auricularia heimuer liquid strain. The results showed that the nutrient and environmental conditions of fermentation substrate had significant effects on mycelium biomass of Auricularia heimuer , and the influence peak values were found in all experimental ranges. The carbon source concentration in the substrate nutrient condition, the liquid volume closely related to the dissolved oxygen level in the environment condition and the shaker speed all had strong interaction with other fermentation conditions. Combined with single factor test, response surface test analysis, and validation test, the optimal formula was determined as glucose 22.3 g/L, peptone 2.7 g/L, KH 2PO 4 2.0 g/L, MgSO 4•7H 2O 1.5 g/L, and sodium carboxymethyl cellulose 3 g/L. The mycelial biomass reached 13.22 g/L, compared with the predicted value of 13.05 g/L, the relative error was 1.3%. The optimal fermentation conditions were as follows: temperature 30 ℃, time 7 d, shaker rotation speed 165 r/min, liquid volume 105 mL(250 mL conical flask), mycelial biomass was up to 14.32 g/L, compared with the predicted value of 14.11 g/L, the relative error was 1.49 %. The results showed that the liquid fermentation medium formula and regulation conditions were effective and feasible, and the mycelium yield was high.Key words ：Auricularia heimuer ; liquid strain; response surface method; interaction effect; fermentation formulation; fer⁃mentation conditionsdoidoi:10.3969/j.issn.1002-2481.2023.06.08收稿日期：2022-10-14基金项目：国家食用菌产业技术体系（CARS -20）；黑龙江省科学院双提雁阵特别计划（YZ202002）作者简介：周 超（1996-），男，河南安阳人，在读硕士，研究方向：黑木耳栽培与遗传育种。
(完整)食用菌液体菌种的制作
食用菌液体菌种的制作
2009—5-5 8：23:26
在无菌的条件下把菌种投放到培养基里。
安装通气管后用输氧机给培养基输入氧气。
把培养基放置在摇床机上进行振荡培养.
食用菌液体菌种具有生产周期短、菌龄整齐一致、接种方便、发酵快、适宜于工厂化生产等优点。
食用菌液体菌种的生产方式一般可分为电磁搅拌法、摇瓶机法、简易深层发酵（吹氧)法、发酵罐法。
据省农科院食用菌站工作人员介绍，摇瓶机法不仅接种简单，管理方便，而且生产量根据机器的设定而不同，投资20 00～3000元即可。
配制液体培养基先把马铃薯煮到熟而不烂时提取上清液，然后配制3％葡萄糖、1%玉米粉、0。
05%硫酸镁、0。
1％磷酸二氢钾，最后将马铃薯上清液和上述溶液及水混合即可。
液体培养基适用于多种食用菌菌种的培养.
摇瓶振荡培养液体培养基配制好后,装入容量为500毫升的三角烧瓶中，每瓶装入100毫升，并加入1～15粒小玻璃珠，瓶口用棉塞、牛皮纸密封,在1.5千克/平方厘米压强下灭菌30分钟。
然后投入一块约2平方厘米的斜面菌种，于2 3℃～25℃下静置培养24小时。
待菌丝萌发时再放置在往复式摇床上振荡培养，振荡频率为每分钟80～100次，振幅为6～10厘米。
摇床室的温度控制在24℃～2 5℃,培养时间因菌类不同而异，一般是5天左右。
将振荡好的培养基倒入大容器里，经过扩容后，在无菌条件下安装通气管，用输氧机通入适量氧气后培养48小
时.培养结束的标准:培养液清澈透明,其中悬浮着大量小菌丝球，并伴有各种菇类特有的香味。
培养好的液体菌种应放入培养箱中保存。
液体菌种培训教材(四)液体菌种的制作过程及方法
液体菌种培训教材(节选四)2010年4月10日三、液体菌种的制作过程及方法（一）试管种的生产：液体菌种对试管的纯度要求很高。
所以要自己会做试管种。
试管种的制作其实很简单，在我们要用种的前三个月，到市场上去看哪个菇符合要求，就买回来（也可以用自己保存的试管种均可）。
在接种箱内进行常规气雾（最好是高锰酸钾和甲醛）消毒，30分钟后，开始分离。
分离时先将用具消毒，然后用手把菇体分开，用镊子夹一小块菇肉（不同的菇取种位置不同），放到试管里。
塞上棉塞就行了。
这样的成功率一般在80%以上。
在菌丝生长阶段，要经常观察菌丝的生长情况。
对菌丝生长不整齐的，有污染的，全部淘汰。
只留下没什么问题的，长满试管后，再取特定部位进行转管（见实操）。
菌丝长到**cm时，从菌丝生长的尖端提取一小块，一般地认为，取****大小就可以了，不过从试验上看，提得**效果越好。
平菇一般提二次就可以了，提到五次，基本上与脱毒菌种效果差不多。
别的品种要多些，最多不超过五次，都可以达到提纯的目的。
（二）三角瓶专用母种生产：专用母种分固体和液体两种。
从生产技术上看，液体专用母种要难一些，是用电磁搅拌器或摇瓶机进行生产。
整个过程要4-7天时间，生产的液体种稍经加工就可以直接使用。
液体菌种专用母种的配方就是用PDA加富配方去掉琼脂。
用三角瓶盛装，在高压锅里121℃保持30分钟就行了。
待三角瓶的温度降到30℃以下时，在超净工作台或接种箱内进行接种。
马上就可以进行搅拌或摇瓶了。
固体种生产时间要长些，保存的时间也长，而且方便运输。
固体专用母种一般污染要严重一些，有的人污染率要达到20-30左右。
固体专用母种我们现在一般不用，污染率太高，而且不好发现，最糟糕的是容易堵枪。
配方是把木屑过20-40目的筛，用去掉琼脂的PDA配方拌料，在121℃高压下灭菌2小时，待温度下降到30度以下时，在超净工作台或接种箱内进行常规接种。
一般20多天可以长好。
具有运输和贮存方便等特点。
食用菌液体菌种生产技术操作规程
土 豆 ２ 、 麸 ２ 、 白 胨 ３ 、 萄 糖 Ｏ 麦 蛋 ‰ 葡
２ 、 酸二 氢钾 １ 、 酸 镁 ０ ５ 、 膏 ０ ５ 、 磷 ‰ 硫 ．‰ 石 ．‰
收 稿 日期 ： ０ １１ — ６ ２ １ －２２
一 一
上， 接种 结束 后 塞 好 棉 塞 。然 后 放 人 恒 温箱 中在
２ ℃ 的条 件 中静止 培 养 ３ 。待 接种 块在 培养 ６ —４ｄ 液 面上长 到 ｌ ｍ（ 个菌 种块 ） ｃ 单 时停止 培养 。在摇
摇床 培 养 …
一发 酵罐 的清 洗 …
一
一
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一 一
项 目来 源 ： 西 省 重 大 科 技 创 新 项 目 ， 号 ２ ０ Ｚ 陕 编 ０ ８ ＫＣ７ １ 。 — ０
李
俊 ： 用 菌 液 体 菌 种 生 产 技 术 操 作 规 程 食
对其 进 行彻 底 的清 洗之后 才 能投 料使 用 。洗 罐 主
要 是除 去罐 壁 的菌 球 、 块 料 液 及 其 它 污 物 。操 菌
用 ， 果 显 著 。为 提 高食 用 菌液 体 茵 种 生 产技 术 ， 效 结合 我 们 多年 的 生 产 实 践 经 验 ， 食 用 茵液 体 菌种 生 产技 术 将 规 程 作 以介 绍 ， 以广 大食 用 菌液 体 菌 种 生 产 者 。
关 键 词 ： 用 茵 ；液体 茵 种 ； 术规 程 食 技
质 的飞跃 。结 合 我们 这几 年 的实 际生产 液体 菌种
煮 至土 豆 熟 ， 滤定 容 ， 过 加入 其 余 的 原料 至 溶 解 。
在摇 瓶 中放一 粒转 子 ， 培养基 冷 却后 放入 摇瓶 中 ， 将瓶 口和胶皮 管 口用棉 塞塞 紧 ， 并用 牛皮 纸包 扎 。 将摇 瓶放 入高 压锅 灭 菌 中 ， 温 度 １ １ ， 在 ２ ℃ 压力 在
黑木耳液体菌种培养基配方及培养条件优化
黑木耳液体菌种培养基配方及培养条件优化摘要：黑木耳(Auriculariaauricula)作为担子菌门中重要的药食同源真菌，含有丰富的氨基酸、多糖、黑色素和维生素等成分，具有增强机体免疫功能、补血、补脑、抗衰老、抗凝血和抑制肿瘤生长等保健效果和药用功效，是维持人体健康的绝佳食材。
近年来，随着“菌粮”等新名词的出现，黑木耳在人类健康重要性中的体现越为明显。
关键词：黑木耳；液体菌种培养基配方；培养条件；优化引言木耳属(Auricularia)真菌是我国常见的野生食用菌，常生长于林间阔叶树倒木及枯死木桩，由于其特殊的生物学特性，木耳属真菌能够分解多种材料中的纤维素、半纤维素、木质素等物质提供生长所需的营养。
木耳在我国栽培历史悠久，从初期的椴木“砍花”栽培到如今的袋料菌棒培育已有1000多年历史，经过食用菌工作者的努力和研究，木耳人工栽培技术目前已经趋于成熟，多篇文献报道了菌种驯化、栽培种生产、替代基质筛选等方面的内容，为食用菌产业生产提供了较好的指导和借鉴。
1.菌丝培养将退化的黑木耳菌种接种到相应的母种培养基中(以ADA培养基为对照，不同浓度的麦麸、木屑、稻杆ADA培养基为实验组)，每个培养基接种直径3mm的黑木耳菌块，接种后置于26℃恒温箱中避光培养9d，期间注意观察菌丝的生长情况。
2.液体培养条件的优化（1）培养时间、温度、pH值、碳源、氮源、无机盐的筛选：无菌条件下分别将2种野生木耳菌种打孔为大小相同的“菌饼”（直径0.5cm），接种至不同pH值（pH值为5、6、7、8、9）、不同碳源（蔗糖、麦芽糖、果糖、淀粉、葡萄糖）、不同氮源（蛋白胨、牛肉膏、尿素、(NH4)2SO4、酵母膏）、不同无机盐（MgSO4、CaCl2、CuSO4、NaCl、KH2PO4）的基础培养基中，于25℃，160r/min条件下摇床培养10d；培养时间及温度实验将菌种接种至基础培养基中，分别于25℃，160r/min条件下培养不同天数（2、4、6、8、10d）、以及不同温度（20、25、30、35、40℃）条件下，160r/min摇床培养10天。
黑木耳液体菌种的制备工艺及质量标准
黑木耳液体菌种的制备工艺及质量标准050000摘要：黑木耳作为食药两用真菌，在我国的国民经济、人类健康中展现出巨大的开发前景。
从药用角度来讲，主要是黑木耳天然药物活性成分的提取、分离纯化以及相关药品、保健品的开发等；然而，目前市场上的相关药品甚少，部分产品只是局限于动物试验测试。
从食用角度来讲，我国是世界黑木耳产量最多、食用最多的国家。
近年来，黑木耳已成为我国栽培量第二大的食用菌品种，但各个产地生产的黑木耳品质参差不齐，具有优良性状的黑木耳新品种更是少见。
关键词：黑木耳；液体菌种；工艺；质量引言多糖是木耳属真菌中一类重要的化合物，广泛存在于木耳子实体、菌丝体等组织中，近代研究表明，包括木耳在内的多种食用菌多糖是一类具有开发价值和利用潜力的天然化合物，对调节机体免疫力、抗氧化、抗肿瘤等方面表现出了良好的活性。
例如，黑木耳中的水溶性多糖通过调节小鼠肠道微生物群落来降低由葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠结肠炎。
角质木耳、毛木耳、黑木耳胞内多糖能够显著促进细胞增殖，对抗炎和抑菌表现出了较好的活性，同时，黑木耳子实体中的吡喃糖多糖还具有调节血脂保护肝脏的作用。
以心脑血管病人为研究对象，进行不同阶段的黑木耳多糖摄入治疗，通过病人的康复自愈能力分析结果发现黑木耳多糖能够促进心脑血管人体的康复。
对黑木耳多糖进行了提取及结构解析并发现黑木耳多糖可以通过促进巨噬细胞的增殖和吞噬能力，该作用在人体免疫调节方面具有广阔的应用前景。
1.培养基固体培养基（ＣＰＤＡ）：液体母种培养基，为不添加琼脂的ＣＰＤＡ培养基；基础发酵培养基：马铃薯（去皮）２００．０ｇ／Ｌ、蛋白胨３．０ｇ／Ｌ、麦麸１０．０ｇ／Ｌ、葡萄糖２０．０ｇ／Ｌ、ＫＨ２ＰＯ４２．０ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ１．０ｇ／Ｌ，初始ｐＨ值自然。
2.母种培养基ADA培养基:马铃薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，琼脂粉20g，加水至1000ml。
1.1.3.2母种替换培养基在ADA培养基的基础上，分别用不同量的麦麸、稻杆和木屑替换ADA培养基中的马铃薯。
黑木耳菌种母种的生产技术
●食用菌栽培●黑木耳菌种母种的生产技术1母种培养基配方母种培养基用试管作培养容器，装入培养液并经过高压灭菌后摆成斜面，所以又称试管斜面培养基，常用于母种扩大培养及菌种保存。
1.1生产母种配方1.1.1马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA ）：马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂18~20克，水1000毫升。
1.1.2马铃薯葡萄糖蛋白胨琼脂培养基：马铃薯200克，蛋白胨10克，葡萄糖20克，琼脂20克，水1000毫升。
1.1.3洋葱酱油琼脂培养基：洋葱煎汁100毫升，酱油50毫升，琼脂20克，水1000毫升。
1.1.4木汁麸皮琼脂培养基：阔叶树木片500克，硫酸铵1克，麸皮或米糠100克，蔗糖20克，琼脂20克，水1000毫升。
1.1.5木屑煮汁培养基：阔叶硬杂木屑40克，马铃薯200克，蔗糖20克，琼脂18~20克，水1000毫升。
1.2保藏菌种配方1.2.1玉米粉琼脂培养基：玉米粉30克，琼脂20克，水1000毫升。
1.2.2玉米粉酵母膏葡萄糖琼脂培养基：玉米粉50克，酵母膏10克，葡萄糖10克，琼脂15~18克，蒸馏水1000毫升。
1.2.3完全培养基：葡萄糖20克，蛋白胨2克，硫酸镁0.5克，磷酸氢二钾1克，磷酸二氢钾0.5克，琼脂15克，蒸馏水1000毫升。
2培养基制作2.1称量和配制先按配方准确称取易溶物质，置于烧杯或搪瓷杯等容器内（不用铜、铁器皿，以免铜、铁锈混入培养基），加入总量1/4~1/3的清水搅成糊状。
难溶物质按配方称取后加适量清水，加热并不断搅拌使其溶解；微量元素和生长素因需要量少难以准确称取，可称取一定量先溶解调成高浓度母液，再按比例换算后从中取出需要的用量。
去皮挖芽眼切块的马铃薯、阔叶树木片、阔叶硬杂木屑及洋葱等物质，按配方称后放入容器内，加清水1000毫升，文火煮沸20~30分钟，然后用4~6层湿纱布过滤取汁。
玉米粉称后加1000毫升清水搅拌均匀，并加热至70℃保持60分钟，再用湿纱布过滤取汁，最后补足水量至1000毫升。
合作社地栽黑木耳生产操作工艺流程
合作社地栽黑木耳生产操作工艺流程1黑木耳分早熟种和晚熟种，有单片和朵状之分，适宜本地区栽培的有黑威伴金黑峰。
母种要选择菌丝健壮，爬壁能力强的适龄菌种，到有正规的检测技术手段的大院校或科研院所去购买菌种，具体生产步骤有以下:1.1液体摇瓶制作：选取优良母种一支。
放在恒温培养箱里26C活化24小时备用。
摇瓶营养液配方：土豆200克、魏皮40克，蛋白10克，葡萄糖20克，硫酸镁2克，磷酸二氢钾1克，YB1片，水1000ml水煮。
液体过滤后备用，持其它辅料称好搅拌均匀加入液体。
装瓶选用500ml 三角瓶4支，每支装液量为250ml,用棉塞或无毒硅胶塞封住瓶口再用牛皮纸包好，以免灭菌时被蒸气打湿。
采用高压锅霉菌需在125°C,压力在0. 15Pa时40分钟即可，待压力归零时缓慢打开高压锅，取出三角瓶连同试管母种接种工具一同放在超净工作台内进行消毒降温处理，当温度降到28笆时开始接菌，接菌前接种人员需把手、接种工具、试管母种用75%酒精棉擦拭消毒，在无菌风机的保护下打开试管，用接种钳把试管前端菌丝去掉，切取0.5平方厘米的菌丝片段4块放在摇瓶里，动作越快越好以免染菌，封号瓶塞再用牛皮纸包好，静止培养48小时后，经检测无污染时放在摇床上震荡培养，摇床转数为前期每分钟120转，随着菌液粘稠度增加，摇床速度也要加快，到最后每分钟150转，这样振荡培养120小时即可培养出优质的摇瓶菌种。
1. 2发酵罐通气培养，发酵罐培养是由工业制药用来提取多糖而发展来在，形状有高、矮、胖、瘦，内降温，外降温，有单体有连体各种形状。
食用菌大多采用内降温比较适用。
培养液配方同摇瓶配方只是另加消泡剂, 按常规高压灭菌1小时，灭菌结束后用冷水冷却，当温度降到115°C,压力0. IPa以下时进行供气搅拌，待温度降到22笆时开始接菌。
选择一只培养好的摇瓶菌种，在无菌环境下用火焰保护把菌种倒进发酵罐内，之后立即封口，调整压力0. 02-0. 03Pa进行培养，温度稳定在25°c-26°c, 120小时后即可得到优质液体菌种。
黑木耳液体发酵菌种的制作技术要点
5 液体发酵菌种制作
5.1 灭菌与装罐 臭氧机臭氧环境灭菌 40 min，待臭氧耗尽后即
可操作。液体培养基任选其一，培养液无结块，打 开罐盖，装入发酵罐内，加清水定容，装液量为发酵 罐容量的 70%~ห้องสมุดไป่ตู้0%。通入空气搅拌 1~2 min，混合 均匀，密封盖口。 5.2 灭菌
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床、超净工作台、摇瓶、光学显微镜、酸度计等。发 酵罐的质量应该符合 GB 150 的规定。
3 液体培养基
①玉米粉 40 g/L，淀粉 30 g/L，牛肉膏 3 g/L，酵 母膏 3 g/L，磷酸二氢钾 2 g/L，硫酸镁 1 g/L，维生素 B15 mg/L，花生油 0.5 mL/L，pH 6.0~6.5。②玉米粉 30 g/L，淀粉 40 g/L，麸皮（煮汁）2 g/L，酵母膏 4 g/L， 磷酸二氢钾 3 g/L，硫酸镁 1.5 g/L，花生油 0.5 mL/L， pH 6.0~6.5。
1 环境条件
发 酵 菌 种 生 产 场 所 应 远 离 工 矿 业 的“ 三 废 ”及 微生物、粉尘、烟尘，至少 300 m 之内无禽畜场舍、屠 宰 场 、垃 圾 场 ，无 污 水 和 其 他 污 染 源 ；用 水 应 符 合 GB 5749 的规定。生产车间地面应防水、防渗漏、防 腐、防滑、易清洗，良好的排水系统；墙壁和天花板 应能防水、防潮、防霉、易清洗；车间入口设置缓冲 间，门窗安装防虫纱网。
继 续 通 入 无 菌 空 气 ，调 节 罐 体 排 气 阀 ，维 持 罐 压 0.01~0.03 MPa，培养温度 24~28℃，培养 8~10 d。 5.6 质量检测
食用菌液体菌种发酵培养基制作方法
食用菌液体菌种发酵培养基制作方法一、概述食用菌是一类富含营养且具有较高经济价值的真菌。
通过液体菌种发酵培养基，可以有效地培养和繁殖食用菌菌种，为食用菌的生产提供良好的基础。
二、制作原料准备1. 鲜活食用菌菌种：可选择各种常见的食用菌，如蘑菇、香菇等。
2. 培养基原料：包括淀粉、葡萄糖、酵母粉、氨基酸等。
3. 辅助原料：如蒸馏水、矿物质溶液等。
三、制作步骤1. 菌种处理：将鲜活食用菌菌种进行处理，去除不完整或有病变的部分，并将其洗净备用。
2. 培养基准备：按照一定比例将淀粉、葡萄糖、酵母粉、氨基酸等原料混合均匀。
然后加入适量的蒸馏水，搅拌至完全溶解，得到培养基液体。
3. 培养基消毒：将制好的液体培养基倒入培养瓶中，用高压蒸汽进行消毒，确保无菌。
4. 菌种接种：将处理好的食用菌菌种均匀地接种到培养瓶中的培养基上。
5. 培养条件调控：将接种好的培养瓶放入恒温培养箱中，调控温度、湿度和光照等条件，创造适宜的生长环境。
6. 培养过程管理：定期观察培养瓶内的菌丝生长情况，注意消毒和通风，防止细菌交叉感染。
7. 菌种提取：待菌丝生长到一定程度后，可将其提取出来，作为食用菌的菌种，用于后续培养和生产。
四、注意事项1. 在制作过程中要严格控制消毒条件，确保培养基和培养器具的无菌。
2. 培养箱的温度、湿度和光照等条件要根据不同食用菌的要求进行调控。
3. 培养过程中要定期观察并记录菌丝的生长情况，及时处理异常情况。
4. 制作过程中要注意卫生和安全，避免食用菌菌种污染其他物品或环境。
5. 培养完毕后，要妥善保存食用菌菌种，以备后续使用。
通过上述的制作步骤和注意事项，可以制作出适用于食用菌液体菌种发酵的培养基。
这种培养基能够为食用菌的生产提供良好的基础，促进食用菌菌种的繁殖和生长。
制作过程中需要注意无菌操作和合理的培养条件调控，以保证培养基的质量和菌种的活力。
同时，制作过程中也需要注意卫生和安全，避免污染和交叉感染的发生。
玉木耳液体菌种生产技术规程
玉木耳液体菌种生产技术规程1．液体菌种生产工艺流程摇瓶空灭→摇瓶培养基的制作→灭菌→冷却→接种→培养→摇床培养→发酵罐清洗→发酵罐空灭→发酵罐培养基的生产→灭菌→冷却→接种→菌丝培养→接栽培袋→栽培袋培养2．摇瓶液体菌种的制备（1）摇瓶空灭使用1000毫升、耐126℃高温的无色或近无色的玻璃抽滤瓶，在压力0.15兆帕，温度121℃条件下灭菌30分钟。
（2）摇瓶培养基配方配方1：去皮马铃薯300克，葡萄糖20克，蛋白胨2克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁1克，消泡剂5毫升，水1000毫升，pH自然。
配方2：去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，蛋白胨2.5克，VB11毫克，水1000毫升，pH自然。
（3）摇瓶培养基的制备按培养基配方称取原料，先将去皮马铃薯切成小块，加热至沸腾维持20～30分钟，用纱布过滤定容后，将滤液放入锅中，加入其他原材料小火加热至溶解蒸煮至溶解，待培养基冷却后分装放入摇瓶，摇瓶液体种培养基装量应为容器体积的1/4，在摇瓶中放入一粒转子。
将瓶口和胶皮管口用棉塞塞紧，棉塞外要加盖4层纱布，灭菌时纱布外加盖牛皮纸防潮。
（4）灭菌、冷却与接种将摇瓶放入高压灭菌锅中，在压力0.15兆帕，温度121℃条件下灭菌30分钟，灭菌完毕后，应自然降压，灭菌时应防止棉塞被冷凝水打湿。
待培养基冷却后接种，在接种箱或者超净工作台中接种，接种前先用75%酒精或新洁尔灭溶液进行表面擦拭消毒，然后开紫外灯灭菌30分钟，在液体培液表面接4块黄豆大的母种菌种块，使菌丝面朝上，菌种块必须漂浮在液体上，接种结束后塞紧棉塞。
（5）培养将接种后的摇瓶先放入恒温箱中在25℃下静止培养2～3天，待接种块在培养液上长到1厘米时放入摇床培养，温度26℃，转速以调至有一分钱硬币大小的旋涡为基准，摇30分钟，停10分钟，自动控制，维持3～4天。
判断标准：摇瓶摇动后菌丝挂壁，培养液浑浊度达90%以上，如有臭味，则表明有杂菌污染，不可使用。
食用菌液体菌种的制作步骤
食用菌液体菌种的制作步骤
一、液体培养基配方：葡萄糖20克蛋白胨10克硫酸镁
0.5克硫酸二氢钾1克水1000ml
二、液体培养基的制作步骤：
1、称量、溶解
按配方称量药品，将药品置于烧杯中加水，玻璃棒搅匀。
2、分装
分装三角瓶时避免培养液黏住瓶壁口，用漏斗进行分装，三角瓶装料系数60％。
3、加棉塞
棉塞大小，松紧度要适中，一般塞入3-4厘米。
4、装锅灭菌
塞好棉塞的三角瓶用双层报纸包扎好，装入灭菌锅，盖上报纸，排气后，待温度升至121℃开始计时，温度控制在121—123℃，维持50min。
5、烘棉塞
当压力降至0.05MPa时带压进入无菌室，当压力即将降至零时开始放气，打开锅盖拿出报纸，将锅盖嵌一小缝，以此来烘干棉塞，维持40—50min。
6、冷却
取出三角瓶放在超净工作台或接种箱中，冷却后进行接种。
液体菌种生产与固体培养不同，是以液体做培养基，通过多级发酵培养得到菌液，发酵菌液中含有大量的菌丝体，
可直接做液体菌种。
目前，液体菌种发酵生产的工艺流程有：一是摇瓶培养工艺，即斜面母种→一级摇瓶种子→二级摇瓶种子→三级摇瓶种子；二是深层发酵罐培养工艺，即斜面母种→种子罐→发酵罐→液体菌种。
少量可用摇瓶震荡培养，大量的用发酵罐通气培养。
木耳液体菌种制作规程
液体菌种制作规程工艺流程：斜面菌种→初级摇瓶种→二级摇瓶种→发酵罐深层发酵种→接种一、摇瓶种的制作1斜面菌种准备：马铃薯200克（去皮切块煮沸过滤取滤液），蔗糖20克，麸皮30克（煮汁过滤取滤液）二氢钾2克，硫酸镁1克，琼脂20克，VB1 10毫克，水1000毫升。
25度培养7天备用。
2、初级摇瓶制作①配方土豆200克葡萄糖20克酵母膏2克蛋白胨3克磷酸二氢钾2克硫酸镁1克V B110毫克水1000毫升。
（配方2：玉米粉4%，蔗糖3%，麸皮2%，酵母膏0.5%，2氢钾0.25%，硫酸镁0.1%，VB1 0.01%，豆油0.05%）。
②制作：土豆去皮切成薄块，煮沸后保持20分钟，四层纱布过滤后取滤液，补足1000毫升水，称取其他成份，与土豆液充分搅匀然后装入三角瓶。
初级摇瓶采用500ml三角瓶，装入200ml,放入玻璃球5粒（0.5cm 直径）用二层纱布包裹制作棉塞，塞紧棉塞后再用二层纱布外层加报纸做罩，扎紧瓶胫，防止摇动时棉塞活动。
③灭菌：把三角瓶放入立式高压锅，加足水紧好盖，开启放气阀，接通电源，有蒸汽冒出时关闭放气阀，待压力表达到0.05MPa时,断掉电源,打开放气阀,放冷空气至压力表回0，再关闭放气阀，接通电源，当压力表显示0.11 MPa，温度达到121℃后开时计时，保持45min。
断电使其自然降至0.02 MPa时放气归0，趁热微开盖，使剩余蒸汽烘干棉塞，然后出锅降温至25℃即可接种。
④接种：首先，封闭接种室，用开启紫外线灯30分钟，再用臭氧灭菌器灭菌60分钟或用烟雾剂每立方5克熏蒸30分钟，进行接种环境灭菌。
把灭菌后的三角瓶放入超净台（或接种箱）,把斜面母种、工具、酒精灯、75%的酒精棉球瓶同时放入，母种用灭过菌的报纸遮盖，打开紫外线灯和无菌风开关，保持15min后，关闭紫外线灯进行接种。
操作人员应着干净的隔离衣，带好卫生帽、口罩，手洗净，用75%酒精擦拭手、母种试管、工具，点燃酒精灯，灼烧工具及试管口20秒，在严格无菌操作程序下，把斜面菌种切割成0.5厘米小块（不带培养基），移入三角瓶中，使其浮在液面，一般接入5-6块，塞好棉塞，接完后重新封好棉塞罩，放到25℃恒温环境净置培养72小时。
木耳菌种制备方法
（一）母种的制备用试管制成斜面培养基，并接种原始试管种（保留种，并用于生产的母种即为生产母种，可用于扩接原种。
1.培养基配方配方一综合马铃薯培养基马铃薯200克葡萄糖20克磷酸氢二钾2克硫酸镁0. 5克维生素B110毫克琼脂20克水1000亳升PH值自然配方二合成培养基马铃薯20克葡萄糖20克磷酸二氢钾2克蛋口腺10克牛肉膏5克酵母膏5克硫酸镁0. 8克水1000毫升PH值自然2.培养基制作方法先将马铃薯洗净去皮切成簿片，称取200克加水1000毫升，煮沸15-20分钟, 用4层纱布过滤,取其滤液并补足水至1000毫升，加入琼脂20克,再加热，琼脂溶化后,再加入其它配方中的药品。
培养基的分装，应在培养凝固前进行（琼脂培养基40°C凝固）一般用漏斗，或分装瓶，下端连接一段软橡皮管，橡皮管下面再连接一水段玻璃管，在橡皮管上安装一个止水弹簧夹，分装时将玻璃管细口插入试管内，但不要碰到管壁，每支试管装入量为度管长度1/4o装好后塞上棉塞，每10支试管扎一捆，棉塞上用塑料纸封扎好，用线绳捆扎起来。
3.灭菌将分装后的试管扎捆好,放入高压蒸气灭菌锅，在1公斤/厘米压力下（锅入温度达121°C）灭菌20分钟，使微生物包括芽子色全部杀死。
待压力降到0度时，慢慢放出锅内气体，趁培养基没有凝固时，将试管摆成斜面。
4.接种、培养通过无菌操作方法将菌种接入试管斜面上，置28°C、3天后将温度降至24°C 继续培养,12-15天左右，菌丝长满整个试管斜面，即成（生产）母种。
（二）原种、制备母种接种到原种培养基上，进行扩大繁殖育种即为原种,原种一般采用广口瓶或袋装。
1.培养基配方配方一木屑隸皮培养基阔树木78%鉄皮20%糖1%石膏粉1%水65% PH值自然配方一•棉籽壳木屑混合培养基棉籽壳90%糖1%隸皮5%过磷酸钙3%石膏粉1% PH值自然2.拌料与装袋选用新鲜无霉变原料，根据生产所需的数量，汁算配料总量，将荻皮、石膏粉均匀的混合在培养料里，糖和过磷酸钙溶于水解后，按上述干料量加入水，比例为1:1、3拌匀,培养料含水量60%为宜，含水量以手紧握培养料指缝间有水欲滴为宜。
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液体菌种制作规程工艺流程：斜面菌种→初级摇瓶种→二级摇瓶种→发酵罐深层发酵种→接种一、摇瓶种的制作1斜面菌种准备：马铃薯200克（去皮切块煮沸过滤取滤液），蔗糖20克，麸皮30克（煮汁过滤取滤液）二氢钾2克，硫酸镁1克，琼脂20克，VB1 10毫克，水1000毫升。
25度培养7天备用。
2、初级摇瓶制作①配方土豆200克葡萄糖20克酵母膏2克蛋白胨3克磷酸二氢钾2克硫酸镁1克V B110毫克水1000毫升。
（配方2：玉米粉4%，蔗糖3%，麸皮2%，酵母膏0.5%，2氢钾0.25%，硫酸镁0.1%，VB1 0.01%，豆油0.05%）。
②制作：土豆去皮切成薄块，煮沸后保持20分钟，四层纱布过滤后取滤液，补足1000毫升水，称取其他成份，与土豆液充分搅匀然后装入三角瓶。
初级摇瓶采用500ml三角瓶，装入200ml,放入玻璃球5粒（0.5cm 直径）用二层纱布包裹制作棉塞，塞紧棉塞后再用二层纱布外层加报纸做罩，扎紧瓶胫，防止摇动时棉塞活动。
③灭菌：把三角瓶放入立式高压锅，加足水紧好盖，开启放气阀，接通电源，有蒸汽冒出时关闭放气阀，待压力表达到0.05MPa时,断掉电源,打开放气阀,放冷空气至压力表回0，再关闭放气阀，接通电源，当压力表显示0.11 MPa，温度达到121℃后开时计时，保持45min。
断电使其自然降至0.02 MPa时放气归0，趁热微开盖，使剩余蒸汽烘干棉塞，然后出锅降温至25℃即可接种。
④接种：首先，封闭接种室，用开启紫外线灯30分钟，再用臭氧灭菌器灭菌60分钟或用烟雾剂每立方5克熏蒸30分钟，进行接种环境灭菌。
把灭菌后的三角瓶放入超净台（或接种箱）,把斜面母种、工具、酒精灯、75%的酒精棉球瓶同时放入，母种用灭过菌的报纸遮盖，打开紫外线灯和无菌风开关，保持15min后，关闭紫外线灯进行接种。
操作人员应着干净的隔离衣，带好卫生帽、口罩，手洗净，用75%酒精擦拭手、母种试管、工具，点燃酒精灯，灼烧工具及试管口20秒，在严格无菌操作程序下，把斜面菌种切割成0.5厘米小块（不带培养基），移入三角瓶中，使其浮在液面，一般接入5-6块，塞好棉塞，接完后重新封好棉塞罩，放到25℃恒温环境净置培养72小时。
⑤初级摇瓶培养。
当静置培养72小时后，液面菌种长到1厘米大，无污染，即可将三角瓶放到小型摇床上，一般能放6瓶（也可使用电磁摇床），固定好三角瓶，保持培养温度25℃，启动开关，调速至140r/min，培养96小时，当菌液颜色清亮、菌球密集，占整个培养液的80%以上，瓶口处有很浓的菇香味，可作为二级摇瓶扩大培养的种子使用。
⑥二级摇瓶制作培养：二级摇瓶菌液配方与一级相同，5000ml 三角瓶装液2000ml放入玻璃球8-10粒，灭菌压力、时间同一级，接种在无菌条件下迅速将一级摇瓶种倒入二级摇瓶中，接种量10%，塞紧棉塞绑好棉塞罩，即可放到大型摇床培养，大摇床一般放入4-5瓶，保持环境温度25℃，转速140r/min，培养72--96小时。
72小时后，菌液颜色变清亮，菌球小而均匀密集，占菌液的80%以上，瓶口有明显菇香味，既为合格的液体摇瓶种，可以用于发酵罐扩大培养。
二、发酵罐深层发酵扩大培养（一）液体罐培养基配方：玉米粉4%，麸皮2%，蔗糖3%，酵母粉0.5%，磷酸二氢钾0.25%,硫酸镁0.1%,V B10.01%.豆油0.05%。
（二）制作方法：按发酵罐最高70%的容量确定需要制作的菌种量，按比例称取各种原料，用2层纱布做袋，把玉米粉和麸皮分装两袋放入煮锅中加足水，开锅沸腾后保持30min，摆动纱布袋使营养充分溶于水中，然后控水取出，最后把剩余其它成份先溶于2L水中搅匀加入煮锅内，开锅搅拌均匀，既可入罐灭菌。
（三）发酵罐的准备1、发酵罐的清洗和检查（1）、发酵罐在每次使用后或者再次使用前都必须进行彻底的清洗。
除去罐壁的菌球和菌块，料液和其他污染物，对于内壁的菌球可以用木棒包扎软布擦拭，洗罐的水从罐底排出，如果有大的菌料不能排出，可以卸下罐底的接种管线排出菌料。
（2）、发酵罐的气密性检查关闭发酵罐所有阀门，稍微打开进气阀门，开启打气泵，让发酵罐压力缓慢上升至0.1Mpa后，关闭空气进气阀门保压,用肥皂水喷洒与发酵罐上的法兰连接处、焊接处、压合密封面处，逐一检查以上的地方是否有肥皂泡吹起以确定罐体的严密性，若有漏气现象应立即排除。
（3）、发酵罐的控制柜和加热棒检查发酵罐清洗完毕后加水以超过加热管为宜（绝对禁止加热管干烧）然后启动设备，检查控制柜，加热管是否正常，各个阀门无渗漏，检查合格后方可工作。
2、发酵罐煮罐正常生产不需要煮罐，上一次生产完毕,只需要将罐洗净就可以进入下一批生产。
如果有下列情况之一的需要煮罐。
新罐，初次使用；上一次污染的发酵罐；更换生产品种的发酵罐；长时间不使用的发酵罐。
煮罐是对发酵罐进行预消毒的过程，具体操作方法：（1）、关闭发酵罐底部的接种阀门，进气阀门，把水从发酵罐口加入至视镜中线，盖上发酵罐口盖子，拧紧，打开发酵罐夹套排气阀门和发酵罐排气阀门。
（2）、启动电源，打开控制柜“灭菌”键，此时进入灭菌状态。
(3)、当温度升到100℃夹套有蒸汽冒出时,关闭夹套排气阀门的开度，保证发酵罐内冷空气排净并保证有蒸汽流通。
(4)、当控制柜显示屏幕上显示温度123℃，压力表压力达到0.12Mpa时控制柜自动倒计时，屏幕上可以显示发酵罐温度和倒计时时间，当倒计时时间显示为0时，控制柜自动报警，此时发酵罐灭菌结束。
关闭加热棒、关闭发酵罐排气阀门，闷20min后打开排气阀门和接种阀门，放掉发酵罐内压力和水，煮罐结束。
3、发酵罐空消（内胆、过滤器、管线的消毒）发酵罐空消是对发酵罐进行设备消毒灭菌的过程，对于放置一周不用的发酵罐或者是因为停电使空压机（打气泵）停止运转的发酵罐都需要进行发酵罐的空消操作，具体的操作方法：（1）、关闭发酵罐除夹套排气门外的所有阀门，拧紧发酵罐罐口盖子。
（2）、启动电源，打开控制柜“灭菌”键，此时进入灭菌状态。
（3）、当温度升到100℃夹套有蒸汽冒出时关闭夹套排气阀门，此时给夹套升温升压，当夹套压力达到0.05Mpa以上时,不要超过0.1Mpa缓慢打开夹套进过滤器阀门,打开过滤器尾阀门.（4）、当过滤器冷凝水排放完毕有蒸汽冒出后微开过滤器尾阀门，缓慢打开进气阀门尾阀门，排放空气管道内的冷凝水，冷凝水排放完毕后缓慢打开进气阀门，使得蒸汽慢慢进入罐体。
（5）、微开发酵罐排气气阀门，缓慢将发酵罐内的冷空气排放出去，在空消的整个过程中，控制发酵罐排气阀门，使得发酵罐排气阀门有少量蒸汽流通。
（6）、当控制柜温度显示接近123℃，发酵罐罐内压力接近0.12Mpa时缓慢打开接种管道尾端，将接种管道内冷凝水排放完毕后保证尾端有少量蒸汽冒出保证蒸汽流通。
（7）、当温度达到123℃，发酵罐压力达到0.12Mpa时控制柜开始时间倒计时，屏幕上显示温度和倒计时时间，当倒计时时间为0时，控制柜自动报警，此时空消结束。
（8）、空消结束后，关闭发酵罐加热棒，关闭夹套进过滤器阀门，发酵罐进气阀门，发酵罐接种阀门，接种管道尾端阀门。
微开发酵罐排气阀门、夹套排气阀门，发酵罐进气阀门尾阀门，使得夹套，发酵罐内，过滤器的压力慢慢下降，当过滤器压力即将卸完时，打开空压机（打气泵），使得空气流通过滤器，通过过滤器的空气在发酵罐进气阀门尾阀门排放掉，流过过滤器的空气对滤芯吹30min，使得吹出的空气无水分后备用。
（四）、投料投料前检查发酵罐接种阀门和发酵罐进气阀门是否关闭，确认发酵罐内压力为0。
将发酵罐口打开，将配好的培养基由罐口倒入或用泵打入发酵罐中，加入泡敌，然后加水定容，液面高度以高于视镜下边缘10厘米为宜。
拧紧发酵罐口盖子，以防漏气。
（五）、发酵罐实消1、投料结束后，打开夹套排气阀门和发酵罐排气阀门，启动电源，按下“灭菌”键，此时进入灭菌状态。
2、当温度升到100℃夹套有蒸汽冒出时关闭夹套排气阀门，发酵罐排气阀门微开，整个发酵罐实消过程中控制发酵罐排气阀门的开度，保证发酵罐罐内冷空气排净并保证有蒸汽流通。
3、当控制柜显示屏幕上显示温度123℃，压力表压力0.12 Mpa时控制柜自动倒计时，屏幕上可显示发酵罐温度和倒计时时间，当时间倒计时为0时，控制柜自动报警，打开夹套排气阀门，发酵罐排气阀门，使得夹套和发酵罐压力缓慢下降（发酵罐压力不能掉零）此时发酵罐灭菌结束。
注意：计时开始时和灭菌即将结束时需要对发酵罐进行排料操作，微开接种阀门，有少量气、料排出即可，每次排料时间3-5 min 。
排料的目的一是排出阀门处的生料，二是对阀门管路进行灭菌。
(六)、培养基冷却培养基冷却是将灭菌结束后的培养基由123℃降至25℃的过程。
可采用两种冷却方法：一是通冷水，利用循环冷却水进行冷却降温。
二是发酵罐通气，在培养料灭菌最后一次放料后，微关发酵罐进气阀门尾阀门，同时微开发酵罐进气阀门，启动空压机，操作缓慢进行，使得之前通过过滤器的无菌空气通入发酵罐内。
控制发酵罐排气阀门使发酵罐压力控制在0.04mpa(七)、发酵罐接种发酵罐接种在发酵罐的整个操作过程中尤为重要，接种操作直接影响到后期发酵罐培养工作。
接种前要准备好火圈（棉花缠紧，用纱布套上）、火机、95%工业酒精、75%消毒酒精、手套、湿抹布。
具体操作如下：1、关闭门窗以及通风设施，用消毒液喷洒后开启臭氧机灭菌，进行环境、工具工作服消毒，屏风围挡。
2、接种人员在环境消毒后进入现场，着工作服、戴口罩、卫生帽，将火圈用酒精浸泡后套入发酵罐罐口。
3、接种人员用75%消毒酒精擦拭双手以及种子瓶口后，点燃火圈。
4、火圈点燃后，关闭发酵罐进气阀门，打开发酵罐进气尾阀门，微开发酵罐排气阀门，当发酵罐罐压降至0.01Mpa以下时，关闭发酵罐排气阀门，在火焰的保护下打开发酵罐罐口，发酵罐罐口盖子移至火焰上方。
5、接种人员将种子瓶移至火焰处，一手拿瓶一手拿镊子在火焰的保护下将瓶口的棉塞旋下，棉塞要在火焰的保护区内，用火焰对种子瓶口消毒后，稳、准、快地把种子培养液倒入发酵罐内，接种量10%。
在火焰的保护下将棉塞塞住瓶口，移出火焰保护区，种子瓶备检。
6、在火焰的保护下迅速将发酵罐口盖子拧紧，迅速打开发酵罐进气阀门，关闭发酵罐进气尾阀门，使得发酵罐压迅速上升。
湿抹布将火焰扑灭。
收起火圈，去除屏风。
注意：整个接种过程禁止人员走动，禁止说话，防止空气流动，穿戴好防护用品，整个过程要快速有序。
（八）、培养接种结束后微开排气阀使罐压至0.02-0.04mpa ，并检查培养温度和空气流量，培养温度设定在25度，通气量6L/min.通气压力为0.06mpa,即可进入培养阶段，(根据发酵的品种不同，控制各个品种所需要的温度，通气量等各种参数)。
注意：罐压低于0.02 Mpa易染杂菌，高于0.04 Mpa会降低寿命，气体气泡直径变小，溶氧减少，高压时CO2溶解度大于氧气(九)、取样观察接种24h以后，每隔12h可从接种口取样1次，观察菌种萌发和生长情况。