提高抗体亲和力
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提高抗体亲和力
提高抗体亲和力
简 介
Synopsis
亲和力成熟：在体内初次反应产生的抗体亲和力较低，在随后 的抗原的刺激下，抗体可变区基因发生体细胞突变，造成亲和 力的改变，亲和力提高的变种具有选择优势，最后形成产生高 亲和力抗体的B克隆细胞。 在体外可以模拟体内亲和力成熟过程，提高抗体亲和力。 其要点是：①对初次选择得到的地亲和力抗体克隆进行可变区 基因高突变，产生高亲和力变种；②对高亲和力克隆的优势选 择。
提高抗体亲和力 突变策略
内 容
Content
体内二次反应时抗体可变区可以发生局部高频突变，在体外一 般用一下方法： 1、PCR错配（不定向突变）； 2、利用致突变株大肠杆菌在细胞内进行突变（不定向突变）
一些大肠杆菌由于遗传上的缺陷而具有较高的亲和力。举例：mutD5菌 株，由于DNA复制中的错配修复功能的缺陷和聚合酶Ⅲ缺乏3’→5‘外切酶 活性，导致突变率较正常菌株高1000倍以上。
西北师范大学生命科学学院 2009级生物技术1班 zcx
提高抗体亲和力
总 结
Summary
亲和力是抗体的重 要生物学参数，高
体内亲和力成熟所
能达到的程度是有 限的，体外可以定 向的进行菌株的突 变，选择性更高， 选出抗体的亲和力 更强。
实验显示，抗体与
抗原结合能力巨大， 远超过体内的选择 能力，同时通过体 外亲和力成熟可获 得极高亲和力的抗 体，应用广阔。
西北师范大学生命科学学院 2009级生物技术1班 zcx
提高抗体亲和力 突变策略
4、链替换
内 容
Content
以亲本抗体的一条链（如轻链）与另一条链（如重链）的
文库组合，构建抗体库，筛选亲和力增高的克隆，在固定其重
链，用同样的方法选择具有更高亲和力的轻链。
西北师范大学生命科学学院 2009级生物技术1班 zcx
西北师范大学生命科学学院 2009级生物技术1班 zcx
提高抗体亲和力 高亲和力克隆的选择
3、改变洗脱条件
内 容
Content
为了筛选得到高亲和力的抗体，可以提高洗脱液的洗脱能 力，如降低PH值。举例：不同浓度的硫氰酸盐具有不同能力 的洗脱能力，被用于测定抗体的相对亲和力。在噬菌体抗体筛 选中，用不同浓度的硫氰酸盐溶液在抗体库筛选中作为洗脱液， 这样可以洗脱不同亲和力的抗体，由此可以选择出高亲和力抗 体。
源自文库
西北师范大学生命科学学院 2009级生物技术1班 zcx
11
Li
提高抗体亲和力 突变策略
3、人工合成寡核苷酸（定向突变）
内 容
Content
用人工合成寡核苷酸的方法，在与抗原结合的关键部位有目的地引入突 变可以提高突变效率这些突变通常局限于CDR区。其有两种类型： ①在选定的位置上完全随机，每个位置4个碱基出现的几率相等。 ②通过改进DNA合成的程序，是合成的寡核苷酸在欲导入突变的区段内 含有一定比例的突变。
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提高抗体亲和力 框 架
Scheme
突变的策略：PCR错配；利用致突变株大肠杆菌在
细胞内进行突变；人工合成寡核苷酸；链替换
高亲和力克隆的选择：利用抗原—抗体结合解离的
动力学规律；利用解离速度选择；改变洗脱条件
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提高抗体亲和力 高亲和力克隆的选择
1、利用抗原—抗体结合解离的动力学规律
内 容
Content
使用生物素化的抗原在液相体系中进行筛选，通过限制生
物素化抗原的浓度来区分不同亲和力的抗体。 用生物素化的抗原在液相体系中进行筛选，通过限制生物素化 抗原的浓度区分不同亲和力抗体。
西北师范大学生命科学学院 2009级生物技术1班 zcx
亲和力抗体在生物
技术领域有更高的 使用价值，因此发 展出在体外提高抗 体亲和力方法。
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Thank You!
提高抗体亲和力 高亲和力克隆的选择
2、利用解离速度选择
内 容
Content
抗原抗体结合是一个动态平衡过程，亲和高的抗体具有具 有较慢的解离速率，在生物素化抗原的筛选体系中，当抗原抗 原体系达到平衡后，将反应体系稀释扩大。加入过量非生物素 化游离抗原，可以捕捉解离的亲和力较低的抗体，由此增加高 亲和力抗体的选择。
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亲和力成熟：在体内初次反应产生的抗体亲和力较低，在随后 的抗原的刺激下，抗体可变区基因发生体细胞突变，造成亲和 力的改变，亲和力提高的变种具有选择优势，最后形成产生高 亲和力抗体的B克隆细胞。 在体外可以模拟体内亲和力成熟过程，提高抗体亲和力。 其要点是：①对初次选择得到的地亲和力抗体克隆进行可变区 基因高突变，产生高亲和力变种；②对高亲和力克隆的优势选 择。
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体内二次反应时抗体可变区可以发生局部高频突变，在体外一 般用一下方法： 1、PCR错配（不定向突变）； 2、利用致突变株大肠杆菌在细胞内进行突变（不定向突变）
一些大肠杆菌由于遗传上的缺陷而具有较高的亲和力。举例：mutD5菌 株，由于DNA复制中的错配修复功能的缺陷和聚合酶Ⅲ缺乏3’→5‘外切酶 活性，导致突变率较正常菌株高1000倍以上。
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Summary
亲和力是抗体的重 要生物学参数，高
体内亲和力成熟所
能达到的程度是有 限的，体外可以定 向的进行菌株的突 变，选择性更高， 选出抗体的亲和力 更强。
实验显示，抗体与
抗原结合能力巨大， 远超过体内的选择 能力，同时通过体 外亲和力成熟可获 得极高亲和力的抗 体，应用广阔。
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4、链替换
内 容
Content
以亲本抗体的一条链（如轻链）与另一条链（如重链）的
文库组合，构建抗体库，筛选亲和力增高的克隆，在固定其重
链，用同样的方法选择具有更高亲和力的轻链。
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提高抗体亲和力 高亲和力克隆的选择
3、改变洗脱条件
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Content
为了筛选得到高亲和力的抗体，可以提高洗脱液的洗脱能 力，如降低PH值。举例：不同浓度的硫氰酸盐具有不同能力 的洗脱能力，被用于测定抗体的相对亲和力。在噬菌体抗体筛 选中，用不同浓度的硫氰酸盐溶液在抗体库筛选中作为洗脱液， 这样可以洗脱不同亲和力的抗体，由此可以选择出高亲和力抗 体。
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3、人工合成寡核苷酸（定向突变）
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Content
用人工合成寡核苷酸的方法，在与抗原结合的关键部位有目的地引入突 变可以提高突变效率这些突变通常局限于CDR区。其有两种类型： ①在选定的位置上完全随机，每个位置4个碱基出现的几率相等。 ②通过改进DNA合成的程序，是合成的寡核苷酸在欲导入突变的区段内 含有一定比例的突变。
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提高抗体亲和力 框 架
Scheme
突变的策略：PCR错配；利用致突变株大肠杆菌在
细胞内进行突变；人工合成寡核苷酸；链替换
高亲和力克隆的选择：利用抗原—抗体结合解离的
动力学规律；利用解离速度选择；改变洗脱条件
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提高抗体亲和力 高亲和力克隆的选择
1、利用抗原—抗体结合解离的动力学规律
内 容
Content
使用生物素化的抗原在液相体系中进行筛选，通过限制生
物素化抗原的浓度来区分不同亲和力的抗体。 用生物素化的抗原在液相体系中进行筛选，通过限制生物素化 抗原的浓度区分不同亲和力抗体。
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亲和力抗体在生物
技术领域有更高的 使用价值，因此发 展出在体外提高抗 体亲和力方法。
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提高抗体亲和力 高亲和力克隆的选择
2、利用解离速度选择
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抗原抗体结合是一个动态平衡过程，亲和高的抗体具有具 有较慢的解离速率，在生物素化抗原的筛选体系中，当抗原抗 原体系达到平衡后，将反应体系稀释扩大。加入过量非生物素 化游离抗原，可以捕捉解离的亲和力较低的抗体，由此增加高 亲和力抗体的选择。