安图TORCH抗体亲和力检测 ppt课件
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波长读数。
结果计算:亲和力指数=解离缓冲液孔OD值/对照缓冲液孔 OD值×100%
的非共价引力与斥力之和。
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3
抗体亲和力成熟理论
初次感染产生的抗体为低亲和力抗体,随着时间的推移,体内 抗体逐渐成熟为高亲和力的抗体,一般需要3-6个月时间。
◆ 模板学说 (Template theory)
◆ 克隆选择学说 (Clonal sePPleT课ct件ion theory)
4
模板学说 (Template theory)
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Radim、Euroimmun与临床的符合率优于其他厂家,安图产品 研发以Radim为参比试剂盒。
安 图 标 杆
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弓形虫亲和力试剂盒检测结果比较
各厂家检测结果差异不大 低亲和力结果可能不是急性感染 高亲和力结果可以排除急性感染
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安图TORCH抗体亲和力检测试剂盒
第一个国产TORCH五项抗体亲和力检测试剂盒(2013年获得批准文号)
TORCH-IgG抗体亲和力检测
郑州安图生物工程股份有限公司
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1
提纲
抗体亲和力定义 TORCH抗体亲和力检测的意义 TORCH抗体亲和力检测的现状 安图TORCH抗体亲和力检测试剂盒
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2
抗体亲和力(Avidity)的定义
抗体亲和力是整个抗体分子与抗原表位之间结合
强度,即抗体的结合部位与相应抗原决定簇之间
侵入性检测:羊膜穿 刺、定量PCR 超声、MRI
低亲和力
孕期>20周 IgG亲和力检测
高亲和力
案例分析 2
高度传染性
回顾性检测前三个月样本
高度传染性
IgG-IgM- 和IgG-IgM+
可
进
一
步 检
复发 低传染性
IgG+ IgM-
Munro SC, et al.
测源自文库
高度传染性
IgG+ IgM+ 低亲和力IgG
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抗体亲和力检测方法
通过解离剂将低亲和 力抗体解离掉。
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通过中和抗原将高亲 和力抗体中和掉。
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国内获得批准文号的产品及方法
厂家及项目名称
CMV-IgG AVI RV-IgG AVI TOX-IgG AVI HSV-1IgG HSV-2IgG
安图
ELISA ELISA ELISA ELISA ELISA
IgG+ IgM-
IgG+ IgM+
无需进一步检测
IgG- IgM+ 让患者3周后再检测
孕期≤20周
IgG亲和力检测
高亲和力
无需进一步检测
母体病毒血症评估: 尿液PCR、血液PCR
胎儿健康度评估: 超声、MRI
侵入性检测:羊膜穿 刺、定量PCR 超声、MRI
低亲和力
孕期>20周 IgG亲和力检测
高亲和力
免疫系统在按照抗原(模版)来制造更高亲和力的抗体
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5
克隆选择学说 (Clonal selection theory)
免疫系统对高亲和力抗体的筛选过程
原发 感染
体细胞高频突
变
B
Y
YYYYYYYYYY
B
YYYY Y
YY B
B
B
B
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6
TORCH抗体亲和力检测的意义
胎儿出生缺陷的风险与原发感染/复发感染、感染发 生的时间、孕周密切相关
检测的临床意义,在临床上还没有得以真正运用。 国外,对TORCH IgG亲和力强弱与感染时间的关系做了许多研究工作,
雅培,索林和梅里埃等很多厂家的抗体亲和力试剂盒都获得了FDA或 CE认证,用于TORCH感染的辅助诊断。 巨细胞病毒和弓形虫抗体亲和力检测应用普遍。 各厂家试剂盒的检测结果存在差异。
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对IgM抗体阳性或可疑的样本,进行IgG抗体亲和力检测很有 价值,如果IgG抗体为低亲和力,再进行羊水穿刺PCR检测是 合适的选择。
对生殖器疱疹患者的单纯疱疹病毒IgG抗体亲和力检测可以区
分原发和复发感染。
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使用敏感方法检测TORCH IgG/IgM
IgG- IgM孕期卫生教育
高亲和力IgG
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使用敏感方法检测TORCH IgG/IgM
IgG- IgM孕期卫生教育
IgG+ IgM-
IgG+ IgM+
无需进一步检测
IgG- IgM+ 让患者3周后再检测
孕期≤20周
IgG亲和力检测
高亲和力
无需进一步检测
母体病毒血症评估: 尿液PCR、血液PCR
胎儿健康度评估: 超声、MRI
J Clin microbiol,
2005,43:4713-4718
IgG+ IgM+
无需进一步检测
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高亲和力IgG
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TORCH抗体亲和力检测现状
试剂盒检测原理:解离剂法和抗原中和法,解离剂法是主流方法。 试剂盒检测方法:酶联免疫法、自动化化学发光法,酶联免疫法较多。 国内,对TORCH亲和力研究较少,仅有少量的文献报道了IgG亲和力
DiaSorin
Roche
化学发光 /
化学发光
/
电化学发光 /
电化学发光 / /
Abbott
化学发光 /
化学发光 / /
2012年以后批准上市
Biomerieux ELISA荧光
/ ELISA荧光
/
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国外批准上市的主要厂家及方法
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巨细胞病毒亲和力试剂盒检测结果比较
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案例分析1
高度传染性
回顾性检测前三个月样本
高度传染性
IgG-IgM- 和IgG-IgM+
可
进
一
步
复发 低传染性
IgG+ IgM-
Munro SC, et al.
检
测
J Clin microbiol,
高度传染性
IgG+ IgM+ 低亲和力IgG
2005,43:4713-4718
IgG+ IgM+
无需PP进T一课步检件测
判断原发感染或复发感染 判断原发感染发生的时间 TORCH规范化检测流程的重要环节
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8
对于巨细胞病毒IgM抗体阳性的样本,需要结合IgG抗体
亲和力的结果进行分析。IgM抗体阳性,同时IgG抗体低
亲和力,有较高风险。
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美国帕洛艾尔托医疗基金会弓形 虫确认实验室,将弓形虫IgG亲和 力抗体检测列为确认方法之一, 用于排除假阳性及非急性感染。
国家十二五规划 863课题项目之一
产品设计兼顾IgG检测灵敏度和高值样本OD值不超限
产品原理:解离剂法
产品方法:ELISA
样本稀释: 1/100孔外稀释
反应模式:30分钟-10分钟-30分钟-10分钟
加样量: 稀释后样本、对照缓冲液、解离缓冲液、酶结合物均100ul/孔。
波长设置: 450/620nm双波长读数,如果样本OD值>3.0,用405/620nm双