岛津LC-20AP型高效液相色谱仪SOP

岛津LC-20AP型高效液相色谱仪SOP

一、系统配置

系统组成：本系统由2个LC-20A溶剂输送泵分为A,B泵、手动进样器、C18填料色谱柱、SPD-20A 紫外－可见检测器、LC工作站LC Solution等组成。

二、准备工作

1、流动相准备：根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（水使用双蒸水，其他有机溶剂要求色谱纯，无机盐缓冲液浓度一般低于20mmol/L）用合适的0.45μm滤膜过滤（有机相和水相分别选用各自的专用滤膜，有机相用尼龙，水相用纤维素），超声脱气30min以上待用。

2、色谱柱准备：根据待检测样品的需要选用合适的色谱柱，柱进出口方向应与流动相流向一致（检查柱上“FLOW”流向）。

3、样品溶液配置：配置样品和标准溶液（也可在平衡系统时配），用合适0.45μm的样品过滤器过滤后待用。如检测中发现检测峰拖尾严重，可稀释后使用。严禁使用未经处理的浑浊溶液进样。

4、检查仪器各种部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

三、开机、参数设定及平衡系统

1、接通电源，依次开启稳压电源、A泵、B泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开电脑显示器、主机，启动工作站软件。

2、排气泡或更换流动相的操作方法（操作时虑头必须全部浸入流动相中，否则可能带入气泡。更换流动相时，须先把泵关掉，等柱压为零再拿出滤头更换）。

2.1. 将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；

2.2. 逆时针转动A/B泵的排液阀180o，

，打开排液阀；

2.3. 按A/B泵的 [purge] 键，pump指示灯亮，泵大约以9.9 ml/min的流速冲洗，3 min（可设定）后自动停止；

2.4. 将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀(泵运行状态，绝对不能关闭排液阀)。

2.5. 如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。

2.6. 如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，按[pump]键，冲洗 3 min后再按[pump]键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。

3、参数设定

3.1. 确保在【LC实时分析】窗口的状态显示区域中，显示了【就绪】。

3.2. 在【仪器参数视图】中，设置要在分析中使用的仪器参数。单击【正常】显示一个标签，可以在其中输入分析条件，例如采集时间、泵流速、检测器波长和柱温箱温度等。

3.2. 参数设定完成后，单击【下载】将设置保存到仪器系统中。

4、平衡系统

4.1. 打开“LC工作站LC Solution”软件，输入实验信息并设定各项方法参数。

4.2. 等度洗脱方式

4.2.1 按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。

4.2.2.检查各管路连接处是否漏夜，如漏液应予以排除。

4.2.3.观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，进行气泡排除操作。

4.2.4.观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min,噪声为<0.001mV时，可认为系统已经达到平衡状态，可以进样。

4.3. 梯度洗脱方式

4.3.1 以检查方法规定的梯度初始条件，按4.2.2项以下方法平衡系统。

4.3.2在进样前运行1~2次空白梯度。

4.4．如果使用前色谱柱中保存的流动相为纯甲醇或纯乙睛，而新流动相中含有缓冲盐时，应先用纯水冲洗色谱柱十分钟左右再使用流动相，以免盐析出损坏系统。

4.5. 如系统为正相或反相交换使用，应先将所有管路用异丙醇清洗后再换新流动相使用。

四、检测

1、进样前按检测器[zero]键调零,或设置每次进样前基线归零（仪器-系统设置-检测器-勾选“自动归零”）。

2、设置单次运行程序，更改泵的限压为30 PMa,单击“单次运行”，描述样品数据。

2、用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量。

3、每次进样量要基本一致，进样针里不可有气泡，如有，及时赶去。

4、在进样阀处于“Inject”状态时，插入进样器，迅速旋转至load状态，注入样品，旋回inject 位置，进样结束。

5、至样品检测结束，在LC工作站LC Solution色谱工作站软件上计算结果。

五、清洗系统关机

1、手动进样器清洗：

用注射器吸20ml超纯水后套上冲洗头，将冲洗头轻轻顶在进样口上（不宜用力过大，否则容易损坏进样口），使进样阀保持在load位置，慢慢将水推入，水将通过注射针导入口、引导管和注射针密封圈，由样品溢出管排出。

2、色谱柱清洗：

继续以分析中使用流动相冲洗10分钟以上，待基线平稳后关闭检样器，冲洗色谱柱。

3、如果流动相不含缓冲盐或酸碱，可以用甲醇：水＝70：30（或用纯甲醇）直接冲洗30分钟以上后把流速设为零，然后关闭所有仪器设备，顺序为：先关闭D2灯，退出工作站软件，再依次关闭系统控制器、检测器、自动进样器、柱温箱、泵。

4、如流动相含缓冲盐或酸碱可先用双蒸水冲洗20～30分钟后再用甲醇：水＝70：30（或用纯甲醇）冲洗30分钟以上，同时用50ml以上双蒸水注射入泵头连接管，清洗2个泵头各2次，流速设零后再关闭仪器各部分电源，然后关闭总电源离开实验室。