双波长法测定安钠咖中组分含量

院系：医学检验系班级：11检验本科1班：****

双波长法测定安钠咖中组分含量

实验目的和要求

1、掌握紫外可见分光光度计的基本操作；

2、掌握双波长分光光度法测定二元混合物中待测组分含量的原理和方法；

3、掌握在物质中吸收曲线上寻找吸收点、测定波长、参比波长的方法；

4、掌握标准曲线绘制及应用；

5、了解双波长分光光度法在单光束分光光度计上的测定方式。

实验原理

每毫升安钠咖注射液中含0.12g无水咖啡因和0.13g苯甲酸钠，要求二组分的含量均应为标示量的93%~107%。在0.10mol/L盐酸溶液中，苯甲酸钠在230nm波长处有一较强吸收峰，咖啡因在272nm波长处有一较强吸收峰；二者吸收曲线重叠十分严重，直接采用吸光度进行定量测定时，相互之间有严重干扰。

根据光吸收定律，溶液吸光度应为各个组分吸光度的加合。当在230nm波长处

测定苯甲酸钠（此时把咖啡因视为干扰组分）时，测定的吸光度为： 咖啡因苯甲酸钠安钠咖230

230230A A A += 但是在咖啡因的吸收曲线可以发现，咖啡因在230nm 和257nm 两波长处得吸收相等（吸光度值相等，即等吸收点）： 咖啡因咖啡因257

230A A = 因此，通过直接测定混合物溶液在230nm 和257nm 两波长处得吸光度值，再计算二吸光度的差值，可消除咖啡因对苯甲酸钠测定的干扰： ）

（）（咖啡因苯甲酸钠咖啡因苯甲酸钠安钠咖安钠咖257257230230257230A A -A A A -A A ++==∆ 苯甲酸钠苯甲酸钠苯甲酸钠苯甲酸钠苯甲酸钠）（C b -b A -A 257230257

230εε== =KC 苯甲酸钠

可以看出，混合物溶液在230nm 和257nm 两波长处得吸光度差值仅与苯甲酸钠浓度成正比，而与咖啡因浓度无关，从而实现苯甲酸钠的定量分析。

同理，当在272nm 波长处测定咖啡因（视苯甲酸钠为干扰组分）时，可选择272nm 和253nm 两个苯甲酸钠的等吸收点波长进行测定，混合物溶液在这两个波长处得吸光度差值仅与咖啡因浓度成正比，而与苯甲酸钠浓度无关，可消除苯甲酸钠对咖啡因测定的干扰，从而实现咖啡因的定量分析：

咖啡因KC A =∆ 实验仪器与试剂

1.752Pro 型紫外可见分光光度计

2.标准咖啡因储备溶液（0.2500mg/ml ）

3.标准甲酸钠储备溶液（0.2500mg/ml ）

4.盐酸溶液（0.10mol/L ）

5.50ml 容量瓶12个

6.5ml 移液管4只

7.1cm 石英比色皿2个 8.安钠咖样品溶液 实验步骤

1.咖啡因标准系列溶液配制

按照下表配制咖啡因标准系列溶液

2.

苯甲酸钠标准系列溶液配制

按照下表配制苯甲酸钠标准系列溶液

3.标准混合溶液和样品溶液配制

按照下表配制标准混合溶液和样品溶液

4.咖啡因等吸收点波长组合

在选定的波长处，用1cm 比色皿，以0.10mol/L 盐酸溶液作为参比溶液，按

照下表测定咖3溶液在下列波长处的吸光度值，并对测定数值进行比较，选择用于苯甲酸钠定量测定的波长组合。

5.苯甲酸钠等吸收点波长组合

在选定的波长处，用1cm比色皿，以0.10mol/L盐酸溶液作为参比溶液，按照下表测定苯3溶液在下列波长处的吸光度值，并对测定数值进行比较，选择用于咖啡因定量测定的波长组合。

6.系列标准溶液及样品溶液的测定

在选定的组合波长处，用1cm比色皿，以0.10mol/L盐酸溶液作为参比溶液，按照下表分别测定系列标准溶液、标准混合溶液及样品溶液的吸光度值，并计算对应的吸光度差值。

咖5 1.268 0.631 0.637 苯1 0.459 0.081 0.378

苯2 0.826 0.100 0.726

苯3 1.149 0.123 1.026

苯4 1.509 0.145 1.364

苯5 1.865 0.169 1.696

6（标混） 1.058 0.388 0.670 0.602 0.342 0.260

7（样品） 2.01 0.672 1.338 1.078 0.595 0.483 实验数据处理

1.标准曲线的绘制

根据上述测定结果，在以吸光度差值作为纵坐标，系列标准溶液的浓度作为横坐标制图，分别绘制ΔA1-苯甲酸钠系列标准溶液浓度、ΔA2-咖啡因系列标准溶液浓度两条标准曲线。

2.样品溶液中苯甲酸钠、咖啡因含量的计算

根据7号样品溶液在组合波长的吸光度差值，通过标准曲线函数式求出其中苯甲酸钠、咖啡因的浓度值，用下式计算出苯甲酸钠、咖啡因的含量：

00.50c ⨯=取读值c x

根据ΔA 1-苯甲酸钠系列标准溶液浓度标准曲线方程式y=0.0655x+0.0558可得到样品溶液中苯甲酸钠溶液浓度 ml /g 58.190655

.00558

.0-338.10655.00558.0-A c 11μ==∆=

所以ml mg /979.000.50c c 1=⨯=苯甲酸钠

根据ΔA 2-咖啡因系列标准溶液浓度两条标准曲线方程式y=0.0262x-0.0137可得样品溶液中咖啡因溶液浓度 ml g /96.180262

.00137

.0483.00262.00137.0A c 22μ=+=+∆=

所以ml mg /948.000.50c c 2=⨯=咖啡因 3.比较法计算苯甲酸钠、咖啡因标示量

分别采用下列公式计算样品溶液中苯甲酸钠、咖啡因标示量，其中120、250、130为国家药典规定的转换系数：

02.19250130250

670.0338.150130250A A %1

1=⨯⨯=⨯⨯∆∆=标混

样品

）苯甲酸钠标示量（