肠道杆菌及检验
肠道杆菌及检验
(四)抗原构造: 有O、H和 K三种
O 抗原是血清学分型的基础,约170种。
H 抗原大于56种
血清型的表示式:O:K:H ,
如: O111:K58:H2;
O157:H7
(五)抵抗力:
自然界水中存活数周或数月。
胆盐、煌绿可抑制其生长,
对氯霉素、链、庆大酶素敏感。
易产生耐药性:
出现了产超广谱β-内酰胺酶(Extended-Spectrum β-lactamase : ESBLs)菌株,则对第三代头孢菌素(头孢 噻肟、头孢他定、头孢哌酮、头孢曲松等)耐药。
氯化钠
5g
琼脂
20-25g
蒸馏水
1000ml
乳糖
10g
1%中性红水溶液
5ml
胆盐
5g (或牛胆
酸钠 4g与去氧胆酸钠1g)
中国蓝琼脂
肉膏汤琼脂(pH7.4) 乳糖 1%中国蓝水溶液(灭菌) 1%玫瑰红酸乙醇溶液
100ml 1g
0.5-1ml 1ml
[注]1.中国蓝与玫瑰红酸在酸碱溶液中的反应(见表);此培养基pH约为7.4,制好后应
第二节 埃希菌属
分布及种类:
埃希菌属
(Escherichia)
大肠埃希菌(E.coli) 蟑螂埃希菌(E.blattae) 格森埃希菌(E.fergusonii) 赫尔曼埃希菌(E.hermannii) 伤口埃希菌(E.vulneris)
一、生物学性状
(一)形态染色:革兰阴性短杆菌、大多有周鞭毛, 菌毛,少数有微荚膜。
肠毒素致大量分泌 液体、电解质
粘附、破坏上皮细胞
侵袭和破坏肠粘膜 上皮细胞
溶原性噬菌体编码SLTI或II中断肠黏膜上皮细 胞蛋白质合成
肠杆菌科的分类与鉴定
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粘质沙雷菌在营养琼脂平板上的菌落特征（18—24h）
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40
4、 哈夫尼亚菌属的分类鉴定
该菌属只有一个种,即:蜂房哈夫尼亚菌。其 特点是;不分解乳糖;发酵葡萄糖产酸产气; 动力“+”;I “—” ;V-P “+”;C “+”;赖 氨酸“+” ;鸟氨酸“+” ;H2S “—” ;山梨 醇“—” ;棉籽糖“—” 。
约克纳菌属 Yokenella 肠道菌 58 群 Enteric group 58 肠道菌 59 群 Enteric group 98 肠道菌 60 群 Enteric group 60 肠道菌 63 群 Enteric group 63 肠道菌 64 群 Enteric group 64 肠道菌 68 群 Enteric group 68 肠道菌 69 群 Enteric group 69 肠道菌 137 群 Enteric group 137
沙雷氏菌属中具有临床意义的有三个种,即:粘质 沙雷氏菌、液化沙雷氏菌、深红色沙雷氏菌。
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生化反应 山梨醇 阿拉伯糖
粘质沙雷氏菌 + —
液化沙雷氏菌 + +
深红色沙雷氏菌 — +
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+ —
粘质沙雷氏菌
沙雷氏菌属
山梨醇
+ 阿拉伯糖
—
+
+
液化沙雷氏菌
深红色沙雷氏菌
肠杆菌科的分类与鉴定
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1
肠杆菌科是临床上最常见的一类革兰氏 阴性杆菌,它主要存在于人或动物的肠道 以及自然界的水源、土壤中。在正常情 况下,多数肠杆菌科细菌对人是无害的,有 些菌种还是人体所必需的,这是因为肠杆 菌科在正常寄生部位和正常寄生数量的 条件下对人体具有重要的生理作用:
肠杆菌科的检验 微生物实验
实验三：肠杆菌科的检验一、接种细菌：MAC培养基接种大肠埃希菌和变形杆菌，SS培养基接种福氏志贺菌和乙型副伤寒沙门菌，采用分区划线法，放在35℃温箱中培养18—24h。
二、观察肠道杆菌在MAC和SS平板上的菌落形态。
1、SS平板：1）福氏志贺菌形成无色、半透明、光滑、湿润、突起、直径为1—2mm大小的菌落；2）乙型副伤寒沙门菌为中心带黑褐色，其余部分为半透明、光滑、湿润、突起的小菌落2、MAC平板：1）大肠埃希菌形成红色、圆形、凸起、边缘整齐、多数为光滑型的菌落。
中等大小。
2）变形杆菌为圆形、扁平、无色、半透明的菌落。
三、涂片、革兰染色将玻片分为四个区域，并分别标记，将四种肠道杆菌分别在四个区域内的生理盐水中研磨，待其自然干燥后固定，采用“改良快速法”进行染色，结果如图所示：福氏志贺菌乙型副伤寒沙门菌变形杆菌大肠埃希菌G-杆菌G-直杆菌，较细长G- 杆菌G-直短杆状显微镜检查特征为革兰阴性杆菌，肠杆菌科多数细菌的形态及染色性相似，根据形态及染色性难以相互鉴别。
四、生化试验：1、氧化酶试验（纸片法）：在滤纸条上滴一滴氧化酶试剂，用无菌接种环挑取待测菌落在滤纸条上滴了试剂的部位研磨，；滤纸变为红色则为阳性，不变色为阴性，结果表明，以上四种肠道杆菌的氧化酶试验均为阴性。
2、接种KIA、MIU上。
五、2、微量生化：六、沙门菌、志贺菌的血清学鉴定：1、在洁净载玻片上两端分别滴加一滴志贺菌四种多价血清和福氏四价血清，各取一环志贺菌在两种血清上研磨10S，观察两组结果均出现肉眼可见的凝集物，提示该菌为福氏志贺菌。
2、采用同上方法，在洁净玻片上分别在其两端滴加一滴沙门菌多价O（A—F）和Hd血清，各取一环待测菌与之混合，研磨10S，几分钟后观察两组结果，出现肉眼可见的颗粒状凝聚物表示该菌为乙型副伤寒沙门菌。
七、讨论：1、做生化试验时，有些细菌为致病菌，故实验时要保护好自己，且实验废弃物要妥善处理，以免发生有害菌的感染。
肠杆菌科的分类与鉴定
志贺氏 菌属
— — —/+ — — — — —
沙门氏 菌属
+ + — +/— +/— —
+ +/—
枸橼酸 杆菌属
+ + —/+
+ +/— +/— —
+
爱德华 氏菌属
+/—
+ + —
+ —
+ —
小肠结肠炎 耶尔森氏菌
—
+ +/— +/— —
+ — +/—
苯丙氨酸脱氨酶试验阴性；葡萄糖酸盐利用试验阴性菌群
四、苯丙氨酸脱氨酶试验阳性 菌群的分类鉴定
苯丙氨酸脱氨酶试验阳性菌群共包括三 个菌属，即：变形杆菌属、摩尔根氏菌 属、普罗维登斯菌属。
生化反应 H2S 鸟氨酸脱羧酶 枸橼酸盐利用 尿素酶 迁徙生长
变形杆菌属 摩尔根氏菌属 普罗维登斯菌属
+
—
—
+/—
+
—
+
—
+
+
—
+/—
+
—
—
苯丙氨酸脱氨酶试验阳性菌群
4、 生物拮抗作用：
肠杆菌科的生物拮抗作用主要靠与病原菌争夺 营养和占据空间位置来实现。此外，大肠埃希 氏菌还产生大肠菌素和酸性物质，抑制志贺氏 菌和金葡菌的生长。
由此可见，肠杆菌科在正常寄生部位和正常寄 生数量的情况下，不仅对人体无害，并且有益， 但如果其寄生部位和寄生数量发生变化，同样 可引起机体的各类病变。因此，肠杆菌科的多 数细菌又被称为“条件致病菌”。
肠道杆菌
原理与结果判断
• 用已知抗原检测未知抗体的试管凝集 反应。 • 以出现 ++ 凝集的血清最高稀释倍数为 该血清抗体效价 • H≥1:160 、O ≥ 1: 80； H甲或H乙≥ 1: 80 有诊断意义
H抗体与O抗体的性质及意义
H抗体 — IgG 出现晚，维持时间较长；
O抗体 — IgM出现早，维持时间较短。
形 态 实 验 学
--肠道杆菌
实验内容
1. 录象：肠道杆菌 2. 肠道杆菌的鉴定程序及示教物 3. 操作：肥达反应
肠道杆菌（enteric bacilli）
是一大群寄居在人
和动物肠道中生物
学形状近似的G－杆
菌。如：
• 非肠道致病菌
（大肠杆菌）
• 肠道致病菌
（伤寒杆菌、痢疾杆菌、变形杆菌等）
肠道杆菌的鉴定程序
消毒灭菌——种类和方法
划线分离——目的和方法
细菌生化反应
一、糖发酵试验
由于细菌各自具有不同的酶系统，故对糖(醇)
类的分解能力不尽相同。
产酸产气 — 指示剂变色，小倒管内有气泡；
以㊉表示 产酸 — 指示剂变色；以＋表示 不能分解 — 指示剂不变色；以－表示
二、硫化氢试验 某些细菌能分解培养基中含硫氨基酸，产生
操作：肥达反应（试管凝集反应）
• 器材：试管6支/人，试管架1个/2人， 吸管1支/人，标签1个/人 • 伤寒杆菌H菌液 伤寒杆菌O菌液 甲型副伤寒杆菌H菌液 乙型副伤寒杆菌H菌液 • 待检病人血清 (1:10稀释)
倍比稀释法
生理盐水
待检血清(1:10)
0.5(弃) * 1 2 3 4 5 6 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 /
肠道杆菌实验
菌种：大肠杆菌 伤寒杆菌
E. Coli EMB
伤寒杆菌 大肠杆菌
EMB 平板
无色菌落 深紫色，带金属光泽
E. Coli SS
S.S 琼脂平板
无色菌落 红色菌落
4.肠道杆菌在鉴别培养基上的生化现象观察---双糖含铁培养基（Double Sugar Iron Agar）
上层 (固体)
观察内容
乳糖发酵 试验
H2S试验
大肠杆菌 痢疾杆菌 伤寒杆菌
+
-
-
-
-
-
乙型副伤 寒杆菌
-
+
下层
葡萄糖发
+
+
+
+
(半固体) 酵试验
动力实验
+
-
+
+
大肠杆菌
伤寒杆菌
痢疾杆菌 乙型副伤寒杆菌
5.药敏试验（纸片法）
▪ 原理：在有抗生素的培养基中，抗生素能够抑制细 菌生长或者杀灭细菌。
▪ 方法：纸片法——定性（了解对那种抗生素敏感） 试管法——定量
▪ 培养基成分：
▪ 上层：蛋白胨、氯化钠、
乳糖、硫酸亚铁、硫代硫
酸钠、琼脂和酚红指示剂.
固体斜面培养基划线接种
▪ 下层：蛋白胨、氯化钠、 葡萄糖、琼脂和酚红指示 剂. 半固体培养基，穿刺
接种。
观察内容： ➢ 上层颜色 ➢上下层交界颜色 ➢下层颜色 ➢下层气泡/气柱 ➢下层接种线
肠道杆菌的生化反应
培养基
液体培养基连续稀释法测定药物的MIC MIC:指能抑制微生物生长所需的最低浓度。
临床医学检验考试辅导《微生物检验》肠杆菌科及检验讲义
肠杆菌科及检验● 考点概述概念；命名与分类原则；共同特点；自然与人体内的分布；微生物学检查方法；临床意义。
埃希菌属、沙门菌属、志贺菌属、变形杆菌属、耶尔森菌属及其他肠杆菌科细菌。
生物学性状；微生物学检验；临床意义。
【内容讲解】一、概述（共性）肠杆菌科是由多个菌属组成，G-杆菌，生物学性状相似。
大多数肠道杆菌属于正常菌群。
当机体免疫力降低或侵入肠道外组织时成为条件致病菌而引起疾病。
部分为致病性细菌。
（一）分类肠杆菌科细菌的种类繁多。
主要根据细菌的形态、生化反应、抗原性质以及核酸相关性进行分类。
根据《伯杰系统细菌学手册》（1984年）将肠杆菌科的细菌分为20个属即埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属、哈夫尼亚菌属、爱德华菌属、普罗威登斯菌属、变形杆菌属、摩根菌属、耶尔森菌属等。
（二）生物学特性1.形态与染色G-，杆菌，大小为（1.0～6.0）μm×（0.3～1.0）μm。
多数有周鞭毛（除志贺菌属、克雷伯菌属、鼠疫耶尔森菌和EIEC），无芽胞，少数菌属细菌可形成荚膜。
2.培养需氧或兼性厌氧；营养要求不高；普皿和麦康凯培养基：中等大小、表面光滑的菌落；液体培养基：混浊生长。
3.生化反应发酵葡萄糖产酸、或产酸产气；乳糖发酵试验：非致病菌 +，致病菌 -（除外变形杆菌）。
触酶阳性；氧化酶阴性；硝酸盐还原为亚硝酸盐。
4.抗原构造表面抗原（如Vi抗原、K抗原）：包绕在O抗原外的不耐热的多糖抗原，可阻断O抗原与相应抗体之间的反应，加热处理能破坏其阻断作用。
5.变异菌落S～R变异鞭毛H～O变异耐药性变异生化反应性质的改变6.抵抗力不强。
加热60℃，30分钟即被杀死。
不耐干燥，对一般化学消毒剂敏感。
对低温有耐受力，能耐胆盐。
7.肠杆菌科的初步分类（三）致病性1.致病性肠道杆菌：以肠内感染为主，腹泻为共显症状，引起急慢性肠道感染、食物中毒、旅游者腹泻及肠热症等。
2.条件致病菌：为医院感染主要病原菌，出现移位感染。
肠道杆菌检验(实验)
肠道杆菌检验(实验)一、实验目的本实验的主要目的在于检测食品和水中的肠道杆菌，以此评估其是否达到安全要求。
通过本实验，可以了解肠道杆菌的常见特点和检测方法，培养学生科学的实验技能能力。
二、实验原理肠道杆菌是一种典型的大肠杆菌，被广泛应用于食品和水质检测中。
它主要存在于动物肠道中，也能够存在于它们的排泄物中，因此如果食品和水受到动物排泄物的污染，就会存在肠道杆菌。
通过检测肠道杆菌的存在和检测数量，可以判断食品和水的卫生质量是否达到安全要求。
肠道杆菌在营养富含的培养基上易于生长，并可以通过简单的染色方法进行检测。
常用的检测方法包括在培养基上培养并计数，或者利用PCR技术进行定量和鉴定。
三、实验步骤1. 实验准备(1) 肠道杆菌检测脱氧胆酸琼脂培养基、营养琼脂培养基、氧气酒精灯、电热板、灭菌器、微孔过滤膜、灭菌钳等。
(2) 检测器具：恒温培养箱、显微镜等。
(3) 检测样品：需要检测的食品或水样品。
2. 实验操作(1) 样品处理：对待检测的食品或水样品进行处理，如筛选、稀释等等，以达到最佳的检测效果。
(2) 复制脱氧胆酸琼脂培养基和营养琼脂培养基，用微孔过滤膜将样品过滤到培养基上，放入恒温培养箱中进行培养。
(3) 测量生长：在一定时间后，观察脱氧胆酸琼脂培养基中的菌落数量，判断是否存在肠道杆菌，并计算出菌量。
(4) 进行染色：将培养细胞染色，观察细胞形态，以鉴定是否存在肠道杆菌。
四、实验注意事项(1) 实验过程中需要注意卫生，防止污染样品。
(2) 营养琼脂培养基和脱氧胆酸琼脂培养基必须进行灭菌处理。
(3) 实验过程需要严格按照实验操作步骤进行，以免影响结果。
五、实验结果及分析通过检测食品和水中的肠道杆菌，在不同的培养基上进行培养和计数，可以判断食品和水是否满足卫生要求。
如果检测出的肠道杆菌数量较高，则说明食品或水存在严重的卫生问题，需要及时采取措施加以解决。
通过本实验可以培养学生的科学思维能力，提高其对卫生的认识和保健意识。
医学检验-微生物-肠道杆菌测试题
第9章 肠道杆菌测试题一、名词解释1.Vi 抗原：又称毒力抗原，在新分离的伤寒杆菌和丙型副伤寒杆菌具有此抗原。
2.肥达反应：系由已知的伤寒沙门菌O 、H 抗原和甲、乙、丙副伤寒菌的H 抗原与不同稀释度的病人血清做定量凝集试验。
根据抗体滴度高低和早期与恢复期抗体增长情况以辅助诊断伤寒和副伤寒。
3.S-R 变异:是指细菌菌落有光滑型到粗糙型的变异，它是由细菌在人工培养基中多次传代，其脂多糖失去O 特异性侧链或O 侧链与核心多糖粘附，仍保有非特异性核心多糖结构造成。
此变异出现时，表示细菌毒力、抗原性等也同时发生变异。
4.不耐热肠毒素（LT ）:是由肠产毒性大肠杆菌（ETEC ）产生的致病物质。
对热不稳定，65℃、30分钟可灭活。
由A,B 两个亚基组成。
二.填空题1.肠道杆菌是一群生物学形状相似的有动力或无动力的革兰染色 无芽胞杆菌, 随 排出体外。
2.大多数肠道杆菌是 菌群的成员, 在特定条件下也可引起疾病, 故称为 .3.肠道杆菌中的多数非致病菌能迅速分解 ,而大多数致病菌与之相反 ,故此项生化反应可作为肠道致病菌与非致病菌的 试验 .4.肠道杆菌的抗原构造主要是 抗原、 抗原和荚膜(K)抗原 .5.肠道杆菌H 抗原为鞭毛蛋白 ,不耐热， ℃24h 才被破坏 , min 即被破坏 ,细菌失去鞭毛后 ,H 抗原消失 ,菌体抗原为露 ,称细菌的H-O 变异 .6.伤寒杆菌死亡后释放的内毒素可使宿主体温 ,血循环中白细胞数 .7.Vi 抗原与 有关 ,含Vi 抗原的菌株比Vi 抗原 的菌株对小鼠毒力强 .8.大多数志贺菌不分解乳糖 ,只有 志贺菌呈 乳糖 .9. 试验在初步鉴别肠道致病菌和非致病菌时有重要意义 . 1.阴性，粪便 2.肠道正常，条件致病菌 3.乳糖，初步鉴定4.菌体(O),鞭毛（H ）5.60，306.升高，下降7.毒力，丢失8.宋内，缓慢发酵9.乳糖发酵10.IMViC试验是指、、、 .11．肠道杆菌抗原主要有、和 .12.大肠杆菌为正常菌群成员 ,但当侵犯组织时可引起化脓性感染 .引起肠内感染的大肠杆菌主要有、、、 .13.产毒性大肠杆菌产生的肠毒素有、 .14.伤寒杆菌免疫以为主 .肠热症后可获得 .15.疑似肠热症病人做病原体分离培养采取标本时 ,发病1～2周取 ,2～3周可采取、或 .16.志贺菌属的细菌通常称为 ,是引起的病原菌 .按生化反应不同分为、、、四群 .其致病因素主要有、 ,某些菌株还可产生毒性很强的 . 17.分离肠道杆菌一般选用、培养基 . 10.吲哚生成试验、甲基红试验、VP 试验、枸橼酸利用试验。
大肠杆菌检测实验报告
大肠杆菌检测实验报告一、实验目的掌握大肠杆菌的检测方法，了解其在水质检验中的重要性。
二、实验原理1. 大肠杆菌大肠杆菌是一种常见的肠道杆菌，是一类嗜热性、厌氧性以及革兰阴性杆菌。
该菌种常常是肠道菌群的组成部分，同时也是水污染的重要指示菌之一。
（1）标准培养基法经过富营养培养基的生长，大肠杆菌会形成显性和隐性的群体。
这种检测方法适用于水质样本、地球样品以及饮用水。
（2）膜过滤法样品通过过滤器滤过后，将过滤后的膜放入培养基上培养。
这种方法既适合于生物质量较小的样品，也适用于分析浓度高的样品。
（3）MPN法通过使用3组不同浓度的小管，并观察哪个浓度的小管有生长曲线的所有格子都被满足，来计算菌落形成单位的浓度。
可以适用于样品浓度较低的环境。
三、实验操作1. 实验材料大肠杆菌标准菌株、优化阳性对照菌株、培养基、蒸馏水、实验器材、滤纸、吸管、离心机、洗涤液和细胞硬度试剂。
2. 实验步骤（1）制备纯菌液：将大肠杆菌基配合缓冲液跳接种到营养琼脂平板上，并在37℃的恒温培养箱中培养过夜。
将菌落划入脱色水中，通过洗涤和离心的方式，获得纯化的细胞菌悬液。
（2）制备样品：将需要检测的水样分别过滤，过滤膜使用巨孔滤纸。
滤膜被慢慢放在脱色水上U型板中间的孔里，然后浸泡（3）培养过程: 将U型板接入温度为37℃的有氧培养箱内，在24 - 48小时内观察细菌进行生长，并做出相应的计数和检测。
四、实验结果与分析按照实验操作规程进行样品处理和培养后，确认样品中是否存在大肠杆菌。
如果在实验中产生的试样中出现了大肠杆菌生长，且其生长优于阳性对照；或者在某些水样中不能检测出大肠杆菌，说明该水质品质不满足相关规范的要求。
五、实验结论本实验通过不同的大肠杆菌检测方法，较为全面地了解了大肠杆菌的检测方法及其在水质检验中的重要性。
在实验的基础上，我们有理由相信，通过科学准确的操作，人们可以更好地保证饮用水的健全和安全。
肠道杆菌
(二)致病机理和所致疾病：
1.急性菌痢: 发病急，症状典型，高热、腹泻、里急后重、脓血便 2.中毒性菌痢: 好发于儿童，全身中毒，死亡率高
3.慢性菌痢: 病程大于2月，反复发作；见于治疗不彻底、营养不良、
伴寄生虫感染或抵抗力低下者。
志贺菌属细菌 污染饮食物 消化道 1~3天 菌毛粘附于回肠末端 和结肠粘膜 粘膜固有层炎症
2.食物中毒：肠炎沙门菌、鼠伤寒大量感染时。 3.败血症：多由猪霍乱沙门菌引起，见于抵抗力低下者和儿童。
4.婴幼儿腹泻：多由鼠伤寒沙门菌引起，见于2岁以下儿童。
三、微生物学检验
（一）细菌的分离培养：
1.标本的采集：根据疾病的类别、病情、病程采集不同的标本。 伤寒病人在发病1周内采血液，2-3周采粪便、尿、骨髓。
致病性
肠道外感染、肠道感染 细菌性痢疾 伤寒、副伤寒、败血症 肺炎、泌尿系、创伤感染 食物中毒、泌尿系感染 鼠疫 小肠结肠炎
耶尔森菌属
Yersinia
小肠结肠炎耶尔森菌
大肠埃希菌
埃希菌属代表菌（E.coli），是人类肠道正常菌群，婴儿出生后几个小时 就进入肠道，并伴随一生。大多数不致病，甚至对人有益，机体抵抗力下降时 可导致肠道外感染；少数血清型可直接引起肠道感染。
2.分离培养：增菌→接种S.S.培养基→N单个菌落→生化、血清学鉴定
（二）血清学检查——肥达反应 原理：用已知伤寒沙门菌的H、O抗原和甲、乙、型副伤寒沙门菌的H、O抗原与患
者血清作定量凝集试验，以测定患者体内有无相应抗体，辅助诊断。
结果判断：伤寒沙门菌的H凝集价≥1:160;O凝集价≥1:80
甲、乙、型副伤寒沙门菌的H凝集价 ≥1:80 临床意义:O抗体(IgM)出现早,时间短;H抗体(IgG)出现晚,维持时间长 O抗体 H抗体 临床意义
肠道细菌的实验报告
肠道细菌的实验报告引言肠道细菌是人体消化道中存在的微生物，对人体健康和免疫功能具有重要作用。
本实验旨在通过培养和研究肠道细菌，了解其特性和影响因素，为进一步研究肠道健康提供科学依据。
实验方法实验材料1. 肠道细菌样本（人体粪便样本）2. 营养琼脂培养基3. 石蜡瓶4. 培养皿5. 无菌试管、噻唑蓝试剂6. 实验室标准设备和仪器实验步骤1. 用无菌试管采集肠道细菌样本，并在无菌条件下将其转移到石蜡瓶中。
2. 在培养皿中加入营养琼脂培养基，石蜡瓶中的肠道细菌样本均匀涂抹在培养皿上。
3. 将培养皿置于恒温培养箱中，以37摄氏度培养24小时。
4. 观察培养皿中的细菌生长情况，并记录结果。
实验结果经过24小时培养，我们观察到培养皿中出现了多种不同形态和颜色的细菌。
其中，主要观察到以下几种常见肠道细菌：1. 大肠杆菌（Escherichia coli）：呈现圆形、鲜亮的橙红色菌落。
2. 肠球菌（Enterococcus faecalis）：呈现小形或中形、呈黄色或乳白色菌落。
3. 梭状芽胞杆菌（Clostridium difficile）：呈现长条形的白色菌落。
4. 腺病毒（Adenovirus）：呈现透明的圆形菌落。
讨论与分析肠道细菌是人体肠道内的共生微生物，在人体的消化和免疫功能中起着重要作用。
此次实验观察到的肠道细菌具有多样性，这与人体消化道中存在的多种微生物种类相符。
其中，大肠杆菌和肠球菌是人体肠道中最常见的细菌，其在人体内的生存和繁殖与人体健康密切相关。
肠道细菌的种类和数量对人体健康有重要影响。
正常肠道菌群的稳定和平衡与人体的免疫功能、营养代谢和防病能力密切相关。
一些研究发现，肠道细菌的失调可能与多种疾病的发生和发展有关，如肠道炎症、肠道肿瘤和肠易激综合征等。
结论通过这次实验，我们成功培养出了肠道细菌样本，并观察到了不同菌种的生长情况。
肠道细菌的多样性和数量对人体健康具有重要影响，进一步研究肠道菌群的组成和功能，有助于理解人体免疫和消化系统的运作机制，为肠道健康的保护和促进提供科学依据。
大肠杆菌及其检验
3、EMB平板 EMB平板 EMB
取其产气管的培养物划线接种于伊红美蓝(EMB)平 板,36±1℃培养24±2h。 检查平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的典型 菌落。 如有典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个典型菌 落；如无典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个可 疑菌落。用接种针接触菌落中心部位,移种到营养琼 脂斜面上,36±1℃培养18～24h。
三、大肠杆菌的检验方法
1、样品制备 以无菌操作取25 g样品,放入装有225 mL稀释 剂的灭菌均质杯内,于8000 r/min均质1～ 2min,制成1:10样品匀液(也可用灭菌乳钵研 磨的方法代替)。从制备样品匀液至稀释完毕, 全过程不得超过15min。
2、LST和EC初步筛选 LST和EC初步筛选
对每个样品,选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释 液。每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白(月 示)(LST)肉汤,每管接种1mL。将接种管置于36±1℃培 养48±2h。 观察试管的产气情况：检查倒管内是否有气泡产生, 用直径为3mm的接种环将所有48±2h内产气的LST肉汤 管培养物移种于EC肉汤管中。将所有接种的EC肉汤管 在30min内放入带盖44.5±0.5℃水浴箱内,培养48±2h。
大肠杆菌及其检 验
一、大肠杆菌的生物学特性
1、简介 大肠埃希氏菌习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科， 归属于埃希氏菌属，大肠杆菌为人和动物肠道中的 常居菌，一般多不致病，在一定条件下可引起肠道 外感染。 2、形态与染色 大小0.4～0.7×1～3um,无芽胞,大多数菌株有动力。 有普通菌毛与性菌毛，有些菌株有多糖类包膜，革 兰氏阴性杆菌
3、培养特性 由于此菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺 盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。 最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能 生长，生长温度范围为15-46℃。
肠道杆菌检验(实验)
第三次
1. 观察生化试验结果 （1）KIA、MIU （2）微量生化，查编码手册 2. 沙门菌及志贺生化编码鉴定试验结果观察
组别 生化项目 代号 观察方法
1
葡萄糖
赖氨酸 鸟氨酸 硫化氢 靛基质 乳糖 卫矛醇 苯丙氨酸 尿素 枸橼酸盐
产酸
产气
A
G 4 2 1 4 2 1 4 2 1
直接观察：培养基变黄为A
直接观察：有气泡为G 直接观察：对照组为黄色，试 验组不变色＋ 直接观察：培养基变黑＋ 滴加柯氏试剂，交界面变红＋ 直接观察：培养基变黄＋ 直接观察：培养基变黄＋ 滴加10％FeCl3 ，变绿＋ 直接观察：培养基变红＋ 直接观察：培养基变蓝＋
2
3
4
第一次实验：
1.练习分区划线接种 2.分离培养 （每4人一组,每人接种一个平板，一个细菌） MAC：1大肠埃希菌、4变形杆菌 SS： 2乙型副伤寒沙门菌、3福氏志贺菌
第二次实验：
1. 观察菌落形态 2. 革兰染色 3. 生化试验： （1）氧化酶试验（滤纸法） （2）接种KIA、MIU（1套／人） （3）接种微量生化管（1套/2人）
沙门菌及志贺菌的血清学鉴定玻片法组别生化项目代号观察方法1葡萄糖产酸产气ag直接观察
肠杆菌科细菌检验
王 跃
临床微生物学教研室
实验目的
1．掌握肠杆菌科细菌的形态、染色特性、培养 特性、生化反应及鉴定依据。 2. 掌握肠杆菌科细菌鉴定的重要生化试验。 3. 熟悉肠杆菌科细菌血清学鉴定的操作方法。 4. 了解肠道杆菌选择鉴别培养基的制作程序。
器材和试剂
1．菌种：大肠埃希菌、变形杆菌、乙型副伤寒 沙门菌、福氏志贺菌。
2．培养基：MAC、SS、KIA、MIU商品培养基、 无菌尿素液、 3．试剂： 氧化酶试剂、肠杆菌科微量生化鉴 定试剂盒、革兰染色液 4. 其他：白色滤纸片、无菌平板、试管、接种 环、酒精灯、高压灭菌器、显微镜、玻片等。
肠道微生物的分离与鉴定方法
一、有益菌：乳酸杆菌，双歧杆菌，柔嫩梭菌，丁酸梭菌，芽抱杆菌（枯草、地衣）。
5种有害菌：大肠杆菌，沙门氏菌，产气荚膜梭菌，空肠弯曲杆菌。
4种二、厌氧菌：乳酸杆菌，双歧杆菌，产气荚膜梭菌，丁酸梭菌，柔嫩梭菌。
5种需氧菌：芽抱杆菌。
1种兼性厌氧菌：大肠杆菌，沙门氏菌。
2种注：空肠弯曲杆菌：微需氧菌,在含2.5-5%氧和10%C02的环境中生长最好。
最适温度为37〜42C。
在正常大气或无氧环境中均不能生长。
肠道正常菌群中95%以上为专性厌氧菌，兼性厌氧菌和需氧菌在正常菌群中所占比例较少。
三、一般检测菌株包括厌氧菌中的双歧杆菌、拟杆菌、优杆菌、消化性球菌、乳杆菌及梭菌。
需氧菌中的肠杆菌、肠球菌、葡萄球菌，及酵母菌等。
四、无氧环境的简易操作：1、方法来自文献《健康羊驼粪球中主要正常菌群的分离与初步鉴定》采用干燥器培养空间用焦性没食子酸Wg、10%氢氧化钠溶液100mL,按比例取10%的氢氧化钠液置于干燥器皿底部，然后放置2到3个略高于液面的青霉素小瓶，再按比例称取焦性没食子酸用纸美蓝指示剂一管。
盖上缸盖并用石蜡封闭。
再轻轻摇动干燥器，使焦性没食子酸掉人氢氧化钠液中，反应后，干燥器内无氧，美蓝指示剂由蓝变白。
置于温箱37c培养24 — 48h观察结果。
2、方法来自文献《健康猪肠道菌群的分离培养与耐药性分析》后者先拧紧瓶盖，放入密封性较好的玻璃罐（用凡士林封口），通过蜡烛燃烧法制作简易厌氧装置。
五、CO 2培养箱不可代替无氧培养箱厌氧箱一般是组合气体90%氮气+5%氢气+5%二氧化碳，厌氧箱里面培养的微生物都是厌氧微生物；而二氧化碳培养箱里面是5%二氧化碳+95%空气，里面是有一部分氧气的。
一般的研究认为严格厌氧菌的培养环境中02的浓度必须小于WOOPpm （千分之一），更严格的环境是小于300Ppm （万分之三），本实验室C02培养箱C02浓度范围为280-2000ppm,所以CO2培养箱是不能用来培养严格厌氧菌。
大肠杆菌群检验的实验原理
大肠杆菌群检验的实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，广泛存在于人类和动物的肠道中。
大肠杆菌群检验是一种用于研究肠道菌群组成和功能的实验方法。
本文将从实验原理、样本采集、实验步骤、结果解读和临床应用等方面进行详细介绍。
实验原理：大肠杆菌群检验主要通过对肠道中细菌的DNA进行测序和分析来研究菌群组成和功能。
尤其是通过对16S rRNA基因序列进行分析，可以确定细菌的分类学信息，从而了解菌群的组成。
在这个实验中，主要使用PCR扩增和高通量测序技术。
1. 样本采集：在进行大肠杆菌群检验之前，需要采集肠道样本。
常见的采集方法包括粪便、肠黏膜组织和大肠黏膜刷取等。
样本采集要注意无菌操作，避免外源性细菌的污染。
2. 实验步骤：（1）DNA提取：首先需要提取样本中的DNA，这可以通过商业DNA提取试剂盒来完成。
提取的DNA浓度和质量要满足后续PCR扩增和测序的要求。
（2）PCR扩增：通过设计引物，选择16S rRNA基因的特异性区域进行扩增。
PCR反应体系中加入模板DNA、引物、dNTPs和DNA聚合酶。
PCR反应的温度和循环次数通过程序设定。
（3）PCR产物纯化：将PCR扩增产物纯化，去除引物和杂质。
可以使用DNA 凝胶电泳和商业纯化试剂盒来进行纯化操作。
（4）高通量测序：纯化后的PCR产物进行高通量测序，可以采用Illumina MiSeq 或Ion Torrent等测序平台。
测序后得到的数据包括原始测序片段和测序质量值。
3. 结果解读：经过测序平台生成的数据可以通过特定的分析流程进行处理和解读。
首先将原始测序片段进行质控和过滤，去除接头序列和低质量序列。
然后对质控后的测序片段进行聚类和分类，可以使用聚类算法（如CD-HIT和UPARSE）和数据库（如Greengenes和SILVA）来进行分类鉴定。
最后，通过比较分析菌群间的差异，在样本之间实施群落结构和功能的比较。
4. 临床应用：大肠杆菌群检验可以用于研究肠道菌群与人类健康和疾病之间的关系。
想了解肠道菌检测的不同方法优劣点及价格三甲医院可以提供什么样的检测
想了解肠道菌检测的不同方法优劣点及价格三甲医院可以提供什么样的检测正好控叔写过科普什么是肠道菌检测顾名思义，就是采集样本对肠道中微生物（包括细菌，真菌和病毒）进行一次非常深度、系统和全面的检测。
假设我们每天排出一公斤的粑粑，有二两的“干货”都是肠道菌，所以粑粑中包含了肠道细菌全部的资料。
只要收集很少一点粑粑样本，经过分离提取DNA，上机测序和生物信息学分析后，就可以了解你肠子里到底住了哪些菌和他们的“菌口数量”大概是怎样。
与肠镜等体内检查完全不同的是，肠道菌检测没有任何痛感，不需要专程到医院，只需要在家中使用专业的采样管，1分钟内即可轻松完成对粑粑的取样，so easy。
为什么要测肠道菌？认识你的肠道君，为不盲目服用益生菌很多妈妈喜欢给孩子补充益生菌和益生元，认为益生菌就是对人体有益无害的好东西，惭愧的说几年前甚至我和丁妈也是这么认为的。
近一两年，国际上肠道菌研究突飞猛进，在跟进了一系列最前沿的科学文献后，我们认为很有必要提醒大家：不要盲目服用益生菌。
每个人的身体的情况差别很大，可能对大多数人有益处的菌，对少数人来说反而是致病菌。
比如下面两个最常见的菌，你一定不陌生，大家感受一下它的差别。
01乳酸杆菌就是能够发酵糖类并且产生乳酸的细菌，是典型的益生菌，最常见的就是存在于各类酸奶中。
如果体内乳酸杆菌数量大幅减少，就可能导致很多疾病的发生，此时补充一定量的乳酸菌，肠道生态又能很快恢复平衡。
但乳酸杆菌也不是一直扮演“好人”的角色，因为就在这个月发表的重磅研究表明，乳酸杆菌过量很可能是疾病的罪魁祸首【1】。
过量繁殖的乳酸杆菌会分泌大量乳酸，从而激活肠道NADPH氧化酶No某，生成巨量的活性氧（ROS）【2】。
活性氧的富集会加速肠道老化，在一些人体内引发剧烈的肠道黏膜损伤及肠干细胞的发育紊乱，从而导致结肠炎和肠道衰老【3，4】。
所以，即使如乳酸杆菌这样的良好市民，也并不是量越大越好。
02屎肠球菌这个听上去就“味儿很正”的细菌，其实就是“妈某爱”中的活性菌之一、而严格来说，肠球菌尚不能算在益生菌之列，应该是人体的共生菌。
微生物学检验肠道杆菌概述
特性
不耐热肠毒素
耐热肠毒素
分子量 较大，73000
较小，1500～5000
耐热性 不耐热
耐热
免疫原 有
无
性
B亚单位 肠黏膜GM1神经 肠黏膜GM1神经节苷
受体 节苷酯
酯
致病机 理
活化细胞腺苷酸环化 酶，细胞内cAMP含 量升高，分泌功能亢 进，引起腹泻
活化细胞鸟苷酸环化酶， 细胞内cGMP含量升高， 分泌功能亢进，引起腹泻
致病大肠埃希菌种类
菌株 ETEC EPEC EIEC EHEC EAggec
侵袭部位 小肠
小肠 结肠 结肠 小肠
疾病与症状
致病机制
旅行者腹泻、婴幼 儿腹泻、水样便、 腹痛等
LT、ST
婴幼儿腹泻、水样 病菌黏附、破坏
便发热、呕吐
细胞
志贺样腹泻，脓血 黏附、内毒素破
便
坏细胞
出血性结肠炎等
志贺样毒素 （VERO毒素）
婴儿腹泻、水样便、 黏附、毒素 脱水
大肠埃希菌生化反应结果
KIA
MIU
IMViC
氧
斜底 面层
气 体
H2 S
动力
吲 哚
尿 酶
I
M Vi
C
化 酶
A A ＋/- － ＋/- ＋ － ＋ ＋ － － －
K A － － ＋ ＋－ ＋ ＋ － － －
K A － － － ＋－ ＋ ＋ － － －
K A ＋ － ＋/- ＋ － ＋ ＋ － － －
检验程序
肠内感染
粪便 肠道弱选择培养基
分解乳糖菌落
ETEC
生
毒
化
素
反
测
应
定
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肠热症
食物中毒 败血症
耶尔森菌属
食物中毒
鼠疫
共性：
1.形态染色：均为革兰阴性杆菌，无芽孢、有菌毛，部 分有荚膜或包膜，大多有周鞭毛（除志贺菌、克雷伯、鼠疫 耶尔森菌之外）。 2.营养要求：需氧或兼性厌氧。 3.生化反应：具丰富的酶，生化反应活跃,并各不相同， 为鉴定的主要依据。 致病性越强，生化反应能力越弱。
肠道杆菌及 检验
肠道杆菌（enteric bacilli）的概念: 肠杆菌科（Enterobacteriaceae）
第一节
概
述
共30个属，120个种，大多为肠道正常 菌群，少数为致病菌，一部分在发生移 位，或宿主免疫力低下时，可成为条件 致病菌。
埃稀菌属 变形杆菌属 克雷伯菌属
大肠杆菌
肠外感染
普通变形杆菌：肠外感染、食物中毒
表面抗原：包绕于O抗原的外面的多糖（不耐热），不同 细菌有不同的名称（如大肠杆菌及志贺菌的K抗原，沙门菌 的Vi抗原）
抗原是肠道杆菌血清学分群和分型的依据。 5、遗传变异 S-R变异
H-O变异
耐药性变异 6、传播途径 经消化道—以饮食、饮水为媒介 体内感染（免疫力下降、移位），为医院感染主要病原 菌群。
（一） 致病物质：
K抗原 菌毛 ETEC的菌毛称定植因子(CFA)
毒素：括内毒素和外毒素（肠毒素） 肠毒素不耐热肠毒素（heat labile toxin, LT）,65℃30min可破坏
耐热肠毒素（heat stable toxin, ST）
（二）所致疾病
1、机会感染：移位到肠外组织、器官，引起化脓性
FAggEC 小肠
聚集性黏附上皮细胞， 阻断液体吸收
三、微生物学检验
（一）标本采集
（二）检验程序及方法
麦康凯琼脂
蛋白胨 20g 氯化钠 5g 琼脂 20-25g 蒸馏水 1000ml 乳糖 10g 1%中性红水溶液 5ml 胆盐 5g （或牛 胆酸钠 4g与去氧胆酸钠1g）
出现了产超广谱β-内酰胺酶（Extended-Spectrum β-lactamase ： ESBLs）菌株，则对第三代头孢菌素 （头孢噻肟、头孢他定、头孢哌酮、头孢曲松等）耐药。 产ESBLs的革兰阴性菌除了大肠埃希菌之外，常见 的还有阴沟肠杆菌、粘质沙雷氏菌、弗劳地枸橼酸菌、铜 绿假单孢菌
二、致病性
7.致病物质：菌毛、内毒素、肠毒素 8.检验方法 标本：肠内标本：新鲜粪便 肠外标本：血液、体液、尿液等
分离培养
血液 肉汤增菌 血平板分离 MAC分离
尿液、伤口分泌物 粪便： SS 、EMB分离
鉴定依据：
革兰染色
触媒、氧化酶、硝酸盐还原
KIA、 MIU、IMViC ,其他生化反应
血清玻片凝集（鉴定到种、型或血清型）
第二节
分布及种类：
埃希菌属
大肠埃希菌（E.coli）
蟑螂埃希菌（E.blattae）
（Escherichia）
埃希菌属
ห้องสมุดไป่ตู้
格森埃希菌（E.fergusonii）
赫尔曼埃希菌（E.hermannii）
伤口埃希菌（E.vulneris）
一、生物学性状
（一）形态染色：革兰阴性短杆菌、大多有周鞭毛， 菌毛，少数有微荚膜。
（二）培养特性 普通平板：中等大小，圆形凸起，光滑灰白色。 血平板：某些菌株呈β溶血 S S、MAC平板：分解乳糖产酸呈粉红色菌落 EBM：兰紫色菌落，有金属光泽 液体培养基：混浊生长
S S 大肠埃希菌
中国蓝 产气肠杆菌
（三）生化反应 分解葡、乳、麦、甘，产酸产气，蔗糖因株而易
I M Vi C：+ + — — ，
感染，如泌尿系统感染、胆囊炎、腹膜炎等。 2、肠内感染： 腹泻（轻微腹泻—霍乱样腹泻）
致病性大肠杆菌：
肠产毒型大肠埃希菌（entertoxigenic E coli, ETEC） 肠致病型大肠埃希菌 (enteropathogenic E. coli, EPEC) 肠侵袭型大肠埃希菌（enteroinvasive E. coli, EIEC）
医院感染 EPEC.ETEC EIEC.EHEC EAggEC
正常菌群
肠杆菌属 沙雷菌属 枸橼酸菌属
肠 道 杆 菌
致病性大肠埃稀菌
肠内感染 食物中毒
急性菌痢
A群痢疾志贺菌
B群福氏志贺菌
慢性菌痢
中毒性菌痢
志贺菌属
C群鲍氏志贺菌 D群宋内氏志贺菌
致病菌
沙门菌属
伤寒沙门菌 甲、乙、丙 鼠伤寒沙门菌 猪霍乱沙门菌 肠炎沙门菌 小肠结肠炎耶尔森菌
肠出血型大肠埃希菌 (enterohemorrhagic E.coli EHEC) 肠聚集型大肠埃希菌 (enteroaggrehative E coli EAggEC)
引起腹泻的大肠杆菌种类及主要特征
菌株
ETEC
侵袭部位
小肠
疾病与症状
旅行者腹泻，婴幼儿腹泻，水样， 伴恶心呕吐、腹痛、脱水、低热 婴幼儿腹泻，水样或粘液便，发 热，恶心呕吐
脲酶：—
肠内感染菌株：不发酵 / 迟缓发酵乳糖，KIA,
MAC中可产碱。 （四）抗原构造： 有O、H和 K三种 O 抗原是血清学分型的基础，约170种。 H 抗原大于56种 血清型的表示式：O：K：H ， 如： O111：K58：H2； O157：H7
（五）抵抗力： 自然界水中存活数周或数月。 胆盐、煌绿可抑制其生长， 对氯霉素、链、庆大酶素敏感。 易产生耐药性：
非致病菌（除变形杆菌外）均分解乳糖产酸，致病菌不 发酵乳糖。
常用选择培养基：S S (Salmonella-shigella)。
EMB (Eosin-methylene-blue)
MAC (Mac Conkey) MIU
常用生化反应培养基：KIA
定科试验：革兰阴性杆菌、触酶阳性、氧化酶阴 性、硝酸盐还原试验阳性 4、抗原构造：有多种抗原 菌体抗原（O抗原） ：脂多糖，耐热（100℃不 被破坏），有属、种特异性，又有类属抗原和特异性 抗原之分，类属抗原可引起交叉反应，凝集为颗粒状。 H抗原 鞭毛蛋白，不耐热（60 ℃30min即可破 坏），特异性强，凝集为絮状。
志贺样腹泻，水样致脓血便，含红、 白细胞、黏液，发热腹痛
致冰机制
肠毒素致大量分泌 液体、电解质 粘附、破坏上皮细胞 侵袭和破坏肠粘膜 上皮细胞 溶原性噬菌体编码SLTI或II中断肠黏膜上皮细 胞蛋白质合成
EPEC
小肠 结肠
EIEC
EHEC
结肠
出血性结肠炎，水样便以血便， 剧烈腹痛，低热，HUS等 婴儿腹泻，持续水样便，呕吐， 低热，脱水