肠道微生物的分离与鉴定方法
肠道菌群研究的主要方法
肠道菌群研究的主要方法长期以来，为了研究肠道菌群的成员及其功能，科学家们建立和发展了众多技术手段。
经典的微生物学研究方法主要通过对细菌进行纯培养，然后在不同的培养条件下对细菌的生理活性进行研究。
而随着分子生物学技术的飞速发展，在对环境中的复杂微生物群落进行研究时，科学家们越来越多地运用不依赖于培养的方法，全面分析各种微生物在环境中的活动和对环境的影响。
基于分离培养的方法在肠道微生物学研究中，科学家们通常使用一定的选择性液体或固体培养基，对粪便或肠道粘膜、肠道内容物等样本进行培养和富集，并对培养得到的细菌种类进行分析。
根据肠道细菌的特性，对肠道菌进行培养通常需要在厌氧的条件下进行，严格的厌氧和培养基的选择对于肠道菌的分离和生长非常重要。
但是，局限于纯培养的方法具有很多不足之处。
首先，体外培养体系难以模拟微生物在肠道中自然生长繁殖的条件，因此绝大多数的肠道微生物都还不能通过纯培养的方法得到分离；其次，仅仅依靠形态学和生理生化检测也不能对菌株进行准确的鉴定。
因此，在研究肠道菌群结构和功能的研究中，研究者们通常结合分离培养方法和分子生物学方法，对感兴趣的细菌种类进行研究。
二．分子生态学研究方法分子生态学方法通常以环境中各种微生物的基因组核酸（DNA 或RNA）为研究对象。
在以肠道菌群为对象的分子生态学研究中，研究者们最常使用核糖体小亚基RNA 基因（细菌中的16S r RNA 基因）的全部或部分序列作为分子标签来代表物种，以基因序列的多样性代表物种的多样性，从而对菌群的组成结构进行分析。
细菌16S r RNA 基因具有广泛性、进化变异小、具备高保守区和高变区（V 区）等特点，同时序列还具有信息量巨大且更新迅速的公开数据库，如Database Project（RDP）、SILVA 、Greengenes 等等，研究者们可以方便地将自己研究中的16S r RNA基因序列与数据库进行比对，确定细菌的分类地位。
猪肠道微生物研究方法
猪肠道微生物研究方法
猪肠道微生物研究方法主要包括以下步骤：
1. 样本采集：采集猪肠道内容物样本，可以用于后续的微生物培养、基因测序等分析。
2. 微生物培养：将采集的样本进行微生物培养，以分离和鉴定不同类型的肠道微生物。
3. 基因测序：采用基因测序技术，对肠道微生物的基因组进行测序，以获取微生物的基因信息。
4. 生物信息学分析：对测序得到的基因数据进行生物信息学分析，包括菌种鉴定、基因功能预测等。
5. 统计分析：对实验数据进行统计分析，包括比较不同处理组之间肠道微生物组成和丰度的差异、分析微生物与猪生长性能之间的相关性等。
6. 结果呈现：将分析结果以图表或文字的形式呈现，并撰写研究报告或论文。
在进行猪肠道微生物研究时，需要注意以下几点：
1. 样本采集要具有代表性，尽可能采集不同生长阶段的猪肠道内容物样本。
2. 微生物培养和基因测序要遵循相关的实验操作规范和标准，以保证结果的准确性和可靠性。
3. 数据分析要结合猪的生长环境和生长性能等因素，进行综合考虑和解释。
4. 结果呈现要清晰明了，并按照论文或研究报告的规范进行撰写和整理。
微生物大肠杆菌实验报告
一、实验目的1. 了解大肠杆菌的生物学特性。
2. 掌握大肠杆菌的分离、纯化和鉴定方法。
3. 掌握大肠杆菌的培养和计数方法。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是肠杆菌科的一种细菌，广泛存在于人体肠道中。
本实验通过分离、纯化和鉴定大肠杆菌，了解其生物学特性，并掌握其培养和计数方法。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜粪便、营养琼脂平板、营养肉汤、无菌生理盐水、无菌棉签、无菌试管、无菌培养皿、无菌移液器、酒精灯、显微镜等。
2. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、无菌操作台等。
四、实验方法1. 大肠杆菌的分离（1）取新鲜粪便样品，用无菌生理盐水进行稀释。
（2）取适量稀释液，用无菌棉签涂布于营养琼脂平板上。
（3）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
2. 大肠杆菌的纯化（1）观察平板上的菌落，挑选单菌落，用无菌移液器移至新的营养琼脂平板上。
（2）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
3. 大肠杆菌的鉴定（1）观察纯化后的菌落，记录菌落特征，如大小、形状、颜色等。
（2）将纯化后的菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。
（3）取培养液，用显微镜观察细菌形态，并进行革兰氏染色。
（4）对培养液进行生化试验，如乳糖发酵试验、吲哚试验等。
4. 大肠杆菌的培养与计数（1）将纯化后的菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。
（2）用无菌移液器取适量培养液，进行系列稀释。
（3）取稀释液，涂布于营养琼脂平板上。
（4）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
（5）观察平板上的菌落，记录菌落数，并计算大肠杆菌的浓度。
五、实验结果与分析1. 大肠杆菌的分离：在平板上观察到圆形、光滑、白色、半透明的菌落，说明已分离出大肠杆菌。
2. 大肠杆菌的纯化：经过纯化后，菌落特征与分离菌落相同，证明已得到纯化的大肠杆菌。
3. 大肠杆菌的鉴定：通过显微镜观察，发现细菌为革兰氏阴性短杆菌，生化试验结果显示该菌株能发酵乳糖，产生吲哚，表明已鉴定为大肠杆菌。
分离鉴定粪便中的大肠杆菌的实验流程
分离鉴定粪便中的大肠杆菌的实验流程鉴定粪便中的大肠杆菌是一项十分重要的实验，它可以帮助我们评估肠道健康状况，检测是否存在致病性大肠杆菌的感染，对于疾病的防控具有重要意义。
下面，我将详细介绍一下分离鉴定粪便中的大肠杆菌的实验流程。
我们需要准备实验所需的材料和试剂。
材料包括培养皿、接种环、培养基等，而试剂包括洗涤剂、生理盐水、大肠杆菌特异性培养基等。
在实验开始前，我们需要确保实验器具和培养基无菌，并且消毒实验台面和使用的工具，以避免外界微生物的干扰。
我们需要进行样品的处理和制备。
取一定量的粪便样品，并将其进行振荡或均匀搅拌，使其中的微生物均匀分布。
我们将取一小部分样品进行稀释，目的是为了在培养皿上获得适当的菌落数，方便观察和鉴定。
接着，我们把经稀释处理后的样品加入到培养基中，使细菌能够在适宜的温度下进行培养。
大肠杆菌通常在37摄氏度下培养，因此我们需要将培养皿放入恒温箱中，在一定的时间后进行观察。
在培养的过程中，我们需要定期检查培养皿的状态，观察是否有典型的大肠杆菌形态的菌落出现。
除了观察菌落形态之外，我们还可以利用生化试剂进行鉴定。
通过添加特定的生化试剂，如甲酚红葡萄糖琼脂培养基、大肠杆菌的IMViC生化试剂等，可以帮助我们鉴定大肠杆菌。
这些试剂可以根据大肠杆菌的代谢特点，进行色素反应或气体产生反应，从而帮助我们确认目标菌株的身份。
我们需要进行进一步确认。
在鉴定出大肠杆菌后，我们可以利用进化树分析等生物信息学方法，对其遗传特征进行分析，以确保其准确性。
我们还可以进行致病性检测，通过PCR等分子生物学技术检测目标菌株是否携带致病因子，从而评估其致病性。
通过以上的实验流程，我们可以较为准确地分离鉴定粪便中的大肠杆菌。
这项实验的结果将为我们提供重要的信息，有助于评估肠道健康状况，及时发现致病性大肠杆菌的感染，为疾病的预防和控制提供重要依据。
肠道菌的分离与鉴定
肠道菌的分离与鉴定一、背景介绍肠道菌是指生活在人类肠道内的微生物群落，其中包括细菌、真菌、病毒等多种微生物。
这些微生物与人体之间存在着密切的相互作用关系，对于人体的健康和疾病发展都有重要影响。
二、肠道菌的分离方法1. 粪便样品采集：粪便是肠道菌分离的主要来源，采集前应注意卫生和消毒。
2. 菌落计数：将粪便样品经过稀释后接种在含有富营养成分的琼脂平板上，培养一段时间后进行菌落计数。
3. 纯化：从培养出来的单个菌落中挑选纯化出目标细菌。
4. 鉴定：通过形态学特征、生理生化特性和分子生物学方法等手段对目标细菌进行鉴定。
三、肠道菌的鉴定方法1. 形态学特征鉴定：通过观察目标细菌在琼脂平板上形成的形态和颜色等特征来进行初步鉴定。
2. 生理生化特性鉴定：通过对目标细菌的代谢特征、生长条件和对不同物质的反应等进行测试来进一步鉴定。
3. 分子生物学方法鉴定：通过PCR扩增目标细菌的特异性基因序列，或者进行全基因组测序等方法来进行高精度的鉴定。
四、肠道菌分离与鉴定的意义1. 研究肠道微生物群落结构和功能，探究其与人体健康和疾病发展之间的关系。
2. 为临床诊断提供参考依据，如对于某些疾病的诊断和治疗方案制定等。
3. 为微生物资源库建设提供重要数据，有助于保护和利用微生物资源。
4. 对于工业发展也有一定作用，如利用某些肠道菌进行发酵制品生产等。
五、肠道菌分离与鉴定存在的问题1. 样品来源不确定：粪便样品来源受到个体差异、食品摄入和环境污染等多种因素影响，可能导致结果不稳定。
2. 培养条件不确定：培养条件也会影响菌落的形成和生理生化特性表现，可能导致鉴定结果有误。
3. 鉴定方法存在局限性：不同的鉴定方法对于不同细菌有不同的适用范围，可能会漏检或误判。
六、肠道菌分离与鉴定的发展趋势1. 高通量测序技术的应用：利用高通量测序技术可以对肠道微生物群落进行全面深入地研究，揭示其更多的结构和功能信息。
2. 人工智能技术的应用：通过人工智能技术可以对大量数据进行处理和分析，提高分离和鉴定效率和准确性。
微生物实验 肠道病原菌的分离与鉴定
【目的要求】
1.熟悉粪便中肠道杆菌的分离与鉴定程序。 2.了解肠道杆菌生化反应、免疫学检测原理、结果和意义。 3.掌握肠道杆菌的生物学性状。
粪便标本中致病性肠道杆菌的分离与鉴定程序
粪便标本
涂片，染色，镜检 （意义不大）
双糖铁培养基
SS培养基
生化反应： IMViC
药敏试 验
伤寒沙门菌
三、肠道杆菌的生物学性状--志贺菌
志贺菌
【实验报告】
记录粪便标本病原菌的分离与鉴定的步骤及结果。
大肠埃希菌
Rod-Shaped Bacterium, E. coli (division) (SEM x22,245) E. coli (0157:H7) a rod prokaryote. Hemorrhagic type
E. coli with fimbriae
三、肠道杆菌的生物学性状--伤寒沙门菌
血清学 试验
PCR试 验
一、上节课实验结果
1.SS琼脂平板结果及初步推断
结果： 平板上有几种菌？
ห้องสมุดไป่ตู้
二、本节课实验内容
1.双糖铁培养基结果观察 细菌动力，对葡萄糖和乳糖发酵的情况，是否产生硫化氢？
原始管
反应管
双糖铁培养基结果
菌名 大肠埃希菌
葡萄糖 （底层）
⊕
痢疾杆菌
+
伤寒沙门菌
+
肖氏沙门菌
⊕
乳糖 （斜面）
氨苄西林
氨苄西林
敏感 中介 耐药 10ug >=17 13--16 <=14
复方新诺明
>=16 9--15 <=10
复方新诺明
小鼠肠道菌群的检测方法
小鼠肠道菌群的检测方法小鼠肠道菌群的检测方法主要分为传统培养法和分子生物学方法两种。
传统培养法是利用胃荧光标记法、溶菌酶切法、超声法等手段分离和培养小鼠肠道中的细菌，然后通过形态、生理、生化等特性进行鉴定和分类。
这种方法简单易行，但由于绝大多数小鼠肠道菌群难以培养，所以对菌群的种类和数量了解有限。
相对来说，分子生物学方法更为常用和准确。
这些方法利用PCR、DNA测序和高通量测序等技术，对小鼠肠道中的微生物DNA进行直接分析，可以直观地获得菌群的组成、变动和功能信息。
下面将对分子生物学方法中常用的几种检测技术进行介绍。
1.16SrRNA基因测序法：16SrRNA基因是细菌特有的序列，其特点是保守区域与变异区域交替出现，可以用于细菌分类和种属鉴定。
通过提取小鼠肠道细菌的总DNA，利用特异引物扩增16SrRNA基因片段，然后进行测序和分析，可以获得菌群的组成和结构信息。
2.宏基因组测序法：该方法是指对微生物DNA中的所有基因进行测序和分析。
它可以提供更详细的菌群组成信息，并揭示菌群的功能潜力。
通过高通量测序技术，可以快速获取大量的测序数据，进而进行菌群多样性分析、物种丰度分析和功能注释等研究。
3.元转录组测序法：元转录组测序是一种综合了转录组学和宏基因组学的方法，它能够检测出微生物菌群在不同环境下的基因表达情况。
通过对小鼠肠道中的总RNA进行测序和分析，可以获得菌群的功能表达信息，如基因表达水平和调控机制等。
4.定量PCR法：这是一种相对简单和快速的方法，通过特异引物和荧光探针对感兴趣的细菌基因进行定量PCR分析，可以估计菌群中特定菌种的数量变化。
该方法可以用于研究菌群的动态变化和菌种的优势度等问题。
综上所述，小鼠肠道菌群的检测方法主要依赖于分子生物学技术，如基因测序、宏基因组测序和元转录组测序等方法。
这些方法具有高度准确性和广泛适应性，可以揭示小鼠肠道微生物群落的组成、结构和功能。
同时，这些方法的不断发展和创新也为小鼠肠道菌群的研究提供了更多的可能性。
家蚕肠道微生物的检测
家蚕肠道微生物的分离实验方法1、目的：对4-5龄的家蚕肠道进行解剖，分离出其中的微生物，进行培养纯化，最后得到单一的菌种，进行菌种鉴定分类。
2、材料及试剂2.1 供试材料供试家蚕品种为苏秀×春丰，桑叶品种为育711。
2.2 培养基肉汤蛋白胨培养基：蛋白胨10 g、牛肉膏3 g、氯化钠5 g、蒸馏水1000 ml煮沸后调节ph 7.2-7.4分装到三角瓶中，121 ℃高压灭菌15 min。
富集培养基:称取胰化蛋白胨1 g,酵母提取物0.5 g ,Na Cl g,溶解并定容于100 ml容量瓶中,转入锥形瓶中,高于灭菌,接种,摇床培养6 h。
2.3 主要试剂乙醇、蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、稀释液为生理盐水3、试验方法3.1 菌种纯化与分离（1）将4-5龄蚕的头尾夹住，在70 %的酒精中浸泡几秒钟后，在酒精灯上燃烧，进行体表消毒，然后用灭菌剪刀剪开体表，取出中肠，将肠液小心挤入盛有9 ml稀释液的试管中，取肠液1 g。
（2）为了达到对蚕肠道微生物良好的分离效果，有必要对提取的肠液进行较好的稀释。
将4-5龄蚕肠液用灭菌生理食盐水按10-1、10-2、10-3、10-4浓度进行梯度稀释,各浓度稀释液取0.2 ml接种于12 cm 培养皿的肉汤蛋白胨培养基上,均匀涂布,37 ℃下培养2天，挑取单菌落，编号，观察菌生长情况。
根据的生长情况和菌落数，选取最佳稀释均匀浓度。
（3）将得到的菌落进一步纯化，直到镜检为单一菌为止。
将纯化好的菌接种到斜面培养基上进行保存。
3.2 菌种鉴定（1）菌落形态观察将纯化好的菌在相应的琼脂平板上划线，30℃培养箱中培养2天，待长出单菌落后，根据颜色、形状、大小、边缘、透明度、突起等。
（2）菌体特征的显微观察取一个干净的载玻片,在无菌操作条件下,用接种环挑取少许已活化的优势菌菌落均匀地涂布在载玻片上,室温条件下自然干燥。
接着,手执载玻片并使标本面朝上,在酒精灯外焰上快速通过3-4次,使标本固定在载玻片上。
肠道微生物的分离与鉴定方法
肠道微⽣物的分离与鉴定⽅法⼀、有益菌：乳酸杆菌，双歧杆菌，柔嫩梭菌，丁酸梭菌，芽孢杆菌（枯草、地⾐）。
5种有害菌：⼤肠杆菌，沙门⽒菌，产⽓荚膜梭菌，空肠弯曲杆菌。
4种⼆、厌氧菌：乳酸杆菌，双歧杆菌，产⽓荚膜梭菌，丁酸梭菌，柔嫩梭菌。
5种需氧菌：芽孢杆菌。
1种兼性厌氧菌：⼤肠杆菌，沙门⽒菌。
2种注：境中⽣长最好。
最适温度为37～42℃。
在正常⼤⽓或⽆氧环境中均不能⽣长。
肠道正常菌群中95%以上为专性厌氧菌，兼性厌氧菌和需氧菌在正常菌群中所占⽐例较少。
三、⼀般检测菌株包括厌氧菌中的双歧杆菌、拟杆菌、优杆菌、消化性球菌、乳杆菌及梭菌。
需氧菌中的肠杆菌、肠球菌、葡萄球菌，及酵母菌等。
四、⽆氧环境的简易操作：1、⽅法来⾃⽂献《健康⽺驼粪球中主要正常菌群的分离与初步鉴定》采⽤⼲燥器培养，1m3空间⽤焦性没⾷⼦酸10g、10%氢氧化钠溶液l00mL，按⽐例取10%的氢氧化钠液置于⼲燥器⽫底部，然后放置2到3个略⾼于液⾯的青霉素⼩瓶，再按⽐例称取焦性没⾷⼦酸⽤纸包好，放在圆柱上。
继⽽放上隔板,将接种完毕的培养基放于隔板上，同时放美蓝指⽰剂⼀管。
盖上缸盖并⽤⽯蜡封闭。
再轻轻摇动⼲燥器，使焦性没⾷⼦酸掉⼈氢氧化钠液中，反应后，⼲燥器内⽆氧，美蓝指⽰剂由蓝变⽩。
置于温箱37℃培养24⼀48h观察结果。
2、⽅法来⾃⽂献《健康猪肠道菌群的分离培养与耐药性分析》后者先拧紧瓶盖,放⼊密封性较好的玻璃罐(⽤凡⼠林封⼝)，通过蜡烛燃烧法制作简易厌氧装置。
五、CO2培养箱不可代替⽆氧培养箱厌氧箱⼀般是组合⽓体90%氮⽓+5%氢⽓+5%⼆氧化碳，厌氧箱⾥⾯培养的微⽣物都是厌氧微⽣物；⽽⼆氧化碳培养箱⾥⾯是5%⼆氧化碳+95%空⽓，⾥⾯是有⼀部分氧⽓的。
⼀般的研究认为严格厌氧菌的培养环境中O2的浓度必须⼩于1000ppm（千分之⼀），更严格的环境是⼩于300ppm（万分之三），本实验室CO2培养箱CO2浓度范围为280-2000ppm，所以CO2培养箱是不能⽤来培养严格厌氧菌。
肠道杆菌的实验报告
一、实验目的1. 熟悉肠道杆菌的基本生物学特性。
2. 掌握肠道杆菌的分离与鉴定方法。
3. 学会使用生化反应和显微镜观察等方法对肠道杆菌进行鉴定。
二、实验原理肠道杆菌是一类革兰氏阴性细菌，广泛存在于人体肠道中。
它们分为条件致病菌和致病菌两大类。
本实验通过观察肠道杆菌的形态特征、生化反应和血清学试验等方法，对分离到的肠道杆菌进行鉴定。
三、实验材料1. 实验菌株：大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌等。
2. 培养基：普通琼脂培养基、双糖铁培养基、血清学反应用培养基等。
3. 试剂：革兰氏染色液、生化试剂、血清等。
4. 仪器：显微镜、接种环、酒精灯、培养箱等。
四、实验方法1. 菌株分离（1）将实验菌株接种于普通琼脂培养基上，在37℃培养箱中培养18-24小时。
（2）用接种环挑取单菌落，接种于双糖铁培养基上，观察菌落生长情况。
2. 形态观察（1）将分离得到的菌株涂片，进行革兰氏染色。
（2）在显微镜下观察菌体的形态、大小、染色特性等。
3. 生化反应（1）将分离得到的菌株接种于双糖铁培养基上，观察菌落生长情况和颜色变化。
（2）根据菌落生长情况和颜色变化，判断菌株的生化反应类型。
4. 血清学试验（1）将分离得到的菌株与相应的血清进行玻片凝集试验。
（2）观察凝集反应，判断菌株的血清学类型。
五、实验结果1. 菌株分离实验菌株在普通琼脂培养基上生长良好，菌落呈圆形、光滑、湿润，颜色为白色。
2. 形态观察革兰氏染色结果显示，实验菌株为革兰氏阴性菌，菌体呈短杆状，大小约为0.5×1.5μm。
3. 生化反应双糖铁培养基结果显示，实验菌株能够发酵葡萄糖，产生酸和气体，不发酵乳糖，不还原硝酸盐。
4. 血清学试验玻片凝集试验结果显示，实验菌株与相应的血清发生凝集反应，判断为该血清学类型。
六、实验讨论本实验通过对肠道杆菌的分离与鉴定，掌握了肠道杆菌的基本生物学特性和鉴定方法。
实验结果表明，分离得到的菌株为革兰氏阴性菌，能够发酵葡萄糖，不发酵乳糖，不还原硝酸盐，且与相应的血清发生凝集反应，符合肠道杆菌的生物学特性。
肠道细菌测定实验报告
一、实验目的1. 了解肠道细菌的基本特征及其在人体健康中的作用。
2. 掌握肠道细菌分离、培养和鉴定的基本方法。
3. 学会使用微生物学实验技能，提高实验操作能力。
二、实验原理肠道细菌是一类广泛存在于人体肠道内的微生物，它们在维持人体健康、促进营养吸收、抑制有害菌生长等方面具有重要作用。
本实验通过分离、培养和鉴定肠道细菌，了解其种类和数量，为后续研究肠道细菌与人体健康的关系提供基础数据。
三、实验材料1. 实验仪器：恒温培养箱、高压灭菌锅、无菌操作台、接种环、移液枪、试管、试管架、培养皿、酒精灯等。
2. 实验试剂：肠道细菌分离培养基、营养肉汤、生理盐水、乳酸菌鉴定试剂、革兰氏染色试剂等。
3. 实验样品：人体粪便样本。
四、实验方法1. 样本处理：将粪便样本用生理盐水稀释，制成10^-1、10^-2、10^-3、10^-4四个浓度的稀释液。
2. 分离培养：将稀释液分别接种于肠道细菌分离培养基，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
3. 菌落计数：选取生长良好的菌落，进行革兰氏染色，观察细菌形态，并用计数板计数。
4. 鉴定：根据革兰氏染色结果和菌落形态特征，对分离得到的细菌进行初步鉴定。
五、实验结果1. 菌落计数：在10^-2、10^-3、10^-4浓度稀释液中发现菌落生长，菌落数量分别为3.2×10^8、2.5×10^7、1.8×10^6。
2. 革兰氏染色结果：革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。
3. 鉴定结果：根据菌落形态特征和革兰氏染色结果，初步鉴定分离得到的细菌为乳酸菌、大肠杆菌和双歧杆菌。
六、实验讨论1. 肠道细菌在人体健康中具有重要作用，如维持肠道菌群平衡、促进营养吸收、抑制有害菌生长等。
2. 本实验通过分离、培养和鉴定肠道细菌，初步了解了肠道细菌的种类和数量。
3. 在实验过程中，应注意无菌操作，避免污染。
4. 本实验结果可作为后续研究肠道细菌与人体健康关系的参考数据。
大肠杆菌的微生物学检查
从饮水中分离大肠杆菌①制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。
②用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1：10稀释。
③取0.1毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上。
用平板划线分离法进行分离。
④将划线后的培养皿倒置37℃温箱中培养18～24小时。
培养基中会出现大肠杆菌菌落，菌落中心呈暗蓝黑色，发金属光泽。
⑤将菌落接种于斜面培养基上（由营养琼脂培养基制成）。
大肠杆菌的微生物学检查细菌的分离鉴定肠道外感染取中段尿、血液、脓液、脑脊液等，腹泻者取粪便。
粪便标本直接接种肠道杆菌选择性培养基。
血液需先经肉汤增菌，再转种血琼脂平板。
其他标本可同时接种血琼脂平板和肠道杆菌选择性培养基。
37℃孵育18～24小时后，观察菌落并涂片染色镜检。
采用一系列生化反应进行鉴定。
肠致病性大肠杆菌须先作血清学定型试验。
必要时检定肠霉毒素。
泌尿系统除确定大肠杆菌外，还应计数，每毫升尿含菌量≥100，000时，才有诊断价值。
卫生细菌学检查大肠杆菌不断随粪便排出体外，污染周围环境和水源、食品等。
取样检查时，样品中大肠杆菌越多，表示样品被粪便污染越严重，也表明样品中存在肠道致病菌的可能性越大。
故应对饮水、食品、饮料进行卫生细菌学检查。
细菌总数：检测每毫升或每克样品中所含细菌数，采用倾注培养计算。
我国规定的卫生标准是每毫升饮水中细菌总数不得超过100个。
大肠菌数指数：指每立升中大肠菌群数，采用乳糖发酵法检测。
我国的卫生标准是每1000ml饮水中不得超过3个大肠菌群；瓶装汽水、果汁等每100ml大肠菌群不得超过5个。
实验二大肠菌群（M.R.N.）检验1 目的了解大肠菌群在食品卫生检验中的意义学习并掌握大肠菌群的检验方法2 原理大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
肠道微生物菌群的筛选与培养简单步骤
肠道微生物菌群的筛选与培养简单步骤下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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粪便标本中肠道致病菌的的分离鉴定
实验十粪便标本中肠道致病菌的的分离鉴定实验目的和要求1、掌握脓汁标本中常见病原菌分离和鉴定方法2、掌握药物敏感试验3、掌握肠道杆菌分离和鉴定的一般步骤4、熟悉肠道杆菌鉴定生化反应和血清学反应实验内容一、脓汁标本中未知病原菌的分离和鉴定二、粪便标本中肠道致病菌的分离和鉴定一、标本中未知病原性球菌的分离鉴定程序直接涂片染色镜检：观察细菌形态、排列、染色性观察菌落性状、溶血性、色素血琼脂平板涂片、染色、镜检挑取可疑菌落生化反应测定纯培养致病性测定（甘露醇、凝固酶等）标本血液脑脊液肉汤增菌培养涂片染色镜检二、标本中未知肠道感染细菌的分离鉴定程序标本脓血便、肛拭子选择/鉴别培基生化反应血清学鉴定克氏双糖铁培养基,动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基玻片凝集试验SS平板,EMB平板设计性实验临床标本中病原菌的分离与鉴定设计性实验1.脓汁标本：脓拭子培养基：血琼脂平板其他：3%H2O2、（兔血浆）、生理盐水、革兰染液、玻片等2.痰标本：咽拭子培养基：血琼脂平板其他：生理盐水、10%胆盐、革兰染液、玻片等3.尿标本：尿液培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基其他：革兰染液、靛基质试剂、玻片等4.粪便标本：肛门拭子培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、志贺菌多价血清、玻片等脓拭子分离培养革兰染色（血平板）革兰染色触酶实验甘露醇实验方法：•1、分离培养、观察菌落特征：浓汁标本，用分离划线方法接种血平板，37℃培养18-24h以后观察结果。
重点：色素和溶血现象•2、革兰染色、观察形态学特征：取可疑菌落少许涂片，革兰染色、镜检。
结果观察•1、菌落观察•2、形态学观察（二）生化反应•触酶试验：(-) (+)H 2o 2H 2o o 2氧化氢酶+菌种：可疑菌落试剂：3%过氧化氢方法：见右图结果：见右图甘露醇实验•甘露醇生化反应管药敏实验浓汁标本可疑菌生长现象及生化反应结果观察形态学特征血平板生长现象触酶试验甘露醇试验结论：现象与论点、论据浓汁标本可疑菌药敏实验结果药品名称抑菌圈直径结论：咽拭子革兰染色革兰染色胆汁溶菌试验奥普托辛试验荚膜染色（石炭酸复红单染）分离培养（血平板）？粪便标本SS平板克氏双糖铁斜面培养基动力-半固体培养基生化反应管观察结果糖发酵试验玻片凝集试验革兰染色H2S试验尿液离心沉淀1500转，10分钟分离培养（EMB平板）革兰染色革兰染色克氏双糖铁斜面培养基动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基观察结果观察结果观察结果完成靛基质试验方法：•1、分离培养、观察菌落特征：粪便标本，用分离划线方法接种SS平板培养基37℃培养18-24h以后观察结果。
椰心叶甲肠道微生物的分离鉴定及功能分析
热带作物学报2021, 42(4): 1066 1070Chinese Journal of Tropical Crops椰心叶甲肠道微生物的分离鉴定及功能分析章雨璐1,2，吕宝乾2*，杨帆1，涂艳1,2，蒋方一丁1,2，齐可欣1,2，李紫城31. 海南大学林学院，海南海口 570228；2. 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/海南省南繁生物安全与分子育种重点实验室，海南海口 571101；3. 浙江大学农业与生物技术学院昆虫科学研究所，浙江杭州 310058摘要：椰心叶甲（Brontispa longissima Gestro）是近年来危害棕榈科植物的主要入侵害虫之一，能够对多种棕榈科植物造成严重危害。
本研究通过对椰心叶甲肠道共生菌进行分离培养，并鉴定其相关功能，以探究肠道共生菌对椰心叶甲环境适应性的作用。
对椰心叶甲幼虫肠道共生菌进行分离培养，提取DNA以通用引物扩增鉴定后，以透明圈染色实验对纤维素、木聚糖和果胶功能进行分析。
椰心叶甲幼虫肠道中分离得到22株细菌和2株真菌，其中可培养细菌的优势菌群为变形菌门（Proteobacteria）。
芽孢杆菌属细菌具有降解纤维素和木聚糖的能力，而带化红球菌具有降解木聚糖的能力。
椰心叶甲肠道中具有能够降解纤维素与木聚糖的微生物，并占据一定优势地位，因此椰心叶甲能够取食危害多种纤维素含量较高的棕榈科植物，而这一类肠道共生菌对于椰心叶甲入侵过程中的适应性也提供了一定的帮助。
关键词：椰心叶甲；肠道微生物；多样性；功能分析中图分类号：S433.5 文献标识码：AIsolation, Identification and Functional Analysis of Intestinal Micro-organisms of Brontispa longissimi GestroZHANG Yulu1,2, LYU Baoqian2*, YANG Fan1, TU Yan1,2, JIANG Fangyiding1,2, QI Kexin1,2, LI Zicheng31. School of Forestry, Hainan University, Haikou, Hainan 570228, China;2. Institute of Environment and Plant Protection, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences / Hainan Key Laboratory for Biosafety Monitoring and Molecular Breeding in Off-Season Reproduction Regions, Haikou, Hainan 571101, China;3. Institute of Entomology, College of Agriculture and Biotech-nology, Zhejiang University, Hangzhou, Zhejiang 310058, ChinaAbstract: Brontispa longissima Gestro is one of the major invasive pests of Palmae in recent years, which has great damage to many Palmae plants. In this paper, we isolated and cultured the intestinal symbiotic bacteria of B. longis-simi Gestro, and identified its related functions, in order to explore the role of intestinal symbiotic bacteria on the environmental adaptability of B. longissimi Gestro. The intestinal symbiotic bacteria of B. longissimi Gestro were isolated and cultured, DNA was extracted, amplified and identified with universal primers, and analyzed its function by transparent circle staining experiment. 22 culturable bacteria and 2 fungi were isolated and sequenced from the larval intestines. The gut bacteria were dominated by Proteobacteria. Preliminary functional analysis proved biode-gradable activity on cellulose of the strains of Bacillus and xylan of the strains of Rhodococcus fascians. There were microorganisms that could degrade cellulose and xylan in the intestines of B. longissimi Gestro, and they occuped a certain dominant position. Therefore, B. longissimi can damage a variety of Palmae plants with high cellulose content, and this kind of intestinal symbiotic bacteria also provide some help for the adaptability of B. longissimi Gestro to the new environment.Keywords: Brontispa longissimi Gestro; gutmicrobiota; diversity; functional analysisDOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2021.04.023收稿日期 2020-02-28；修回日期 2020-04-03基金项目 海南省自然科学基金创新研究团队项目（No. 2019CXTD409）；农业农村部国际交流与合作项目（No. BARTP-08- 2020）；中国热带农业科学院基本科研业务费专项（No. 1630042017011）。
肠道微生物群落的研究进展及其应用
肠道微生物群落的研究进展及其应用肠道微生物群落是指人类肠道内的微生物生态系统，包括细菌、真菌、病毒等多种微生物。
近年来，随着对肠道微生物群落的研究不断深入，人们对其在人体健康中的重要作用越来越重视。
本文将对肠道微生物群落的研究进展及其应用进行介绍。
肠道微生物群落的研究进展越来越多的研究表明，肠道微生物群落是与人体健康密切相关的。
肠道微生物群落可以参与人体多种生理过程，包括营养代谢、免疫系统调节、神经系统调节等。
目前，研究者们主要通过以下三种方法对肠道微生物群落进行研究。
1. 16S rRNA测序16S rRNA测序是目前最常用的鉴定细菌物种的方法之一。
该方法通过对细菌特定基因的测序，可以快速鉴定样本中细菌的种类和数量，并进一步分析它们在微生物群落中的相对比例和作用。
通过16S rRNA测序的研究，已经发现了很多与人体健康相关的肠道微生物群落的特征，对人体健康的保护和治疗都有重要意义。
2. 宏基因组测序宏基因组测序是将样本中所有微生物的基因组DNA同时测序的方法。
它可以获得更全面、更详细的微生物群落信息，包括某些难以被16S rRNA测序鉴定的微生物。
通过宏基因组测序，研究者发现某些微生物的代谢功能对人体健康至关重要，例如，部分微生物可以利用人体无法消化的食物物质，而且这些代谢产物对人体的健康有积极的影响。
3. 基于代谢物组学的研究代谢物组学研究是一种系统地研究生物体内代谢产物变化的方法。
通过研究肠道微生物群落代谢产物的类型、数量和变化规律，可以更全面地了解微生物群落的代谢功能及其对人体健康的影响。
研究表明，某些代谢物可以参与到人体维持健康的过程中，例如，具有抗氧化、抗炎和免疫调节作用的代谢物，可以通过对肠道微生物群落的调节而获得。
肠道微生物群落的应用肠道微生物群落的研究已经有了一定的应用前景。
以下是一些被广泛关注的应用领域。
1. 诊断疾病肠道微生物群落与不少疾病存在重要的关联。
例如，肠道微生物群落的异常可以导致炎症性肠病、自身免疫疾病、代谢性疾病等。
肠道益生菌分离鉴定及应用研究
肠道益生菌分离鉴定及应用研究一、引言肠道微生物群落对人体健康的重要性日益受到关注，其中益生菌在维持肠道平衡、促进营养吸收和增强免疫功能等方面发挥着关键作用。
肠道益生菌的分离鉴定及应用研究成为了当前微生物学和医学领域的热门课题。
二、肠道益生菌的分离方法（一）样本采集要分离肠道益生菌，首先需要从健康个体的粪便样本中获取。
在采集过程中，需要确保样本的新鲜度和无污染，通常使用无菌容器进行收集。
（二）选择性培养利用特定的培养基来培养肠道微生物。
例如，一些益生菌如双歧杆菌和乳酸菌在特定的营养条件和环境下能够生长，而其他杂菌则受到抑制。
（三）稀释涂布法将样本进行一系列稀释，然后将稀释液均匀涂布在培养基上，以获得单个菌落。
（一）形态学鉴定观察菌落的形态、大小、颜色和边缘特征，以及菌体的形态、大小和排列方式等。
（二）生理生化鉴定检测微生物的代谢产物、酶活性、对不同物质的利用能力等生理生化特性。
（三）分子生物学鉴定通过 PCR 技术扩增特定的基因片段，如 16S rRNA 基因，然后进行测序和比对分析，以确定其种属。
四、常见的肠道益生菌及其功能（一）双歧杆菌能改善肠道微生态平衡，抑制有害菌生长，增强免疫力，还参与维生素的合成和营养物质的吸收。
（二）乳酸菌产生乳酸降低肠道 pH 值，抑制病原菌生长，促进钙、铁等矿物质的吸收。
（三）芽孢杆菌具有较强的抗逆性，能够调节肠道菌群结构，提高机体抗氧化能力。
（一）食品工业广泛应用于酸奶、奶酪、发酵乳等乳制品，以及饮料、保健品等产品中，为消费者提供营养和健康益处。
（二）医药领域用于治疗肠道疾病，如腹泻、便秘、炎症性肠病等。
还可作为辅助治疗手段，增强药物的疗效，减轻药物的副作用。
（三）畜牧业添加到动物饲料中，提高动物的生长性能、免疫力和饲料利用率，减少疾病的发生。
六、肠道益生菌应用的挑战与展望（一）挑战1、益生菌的存活和定植能力在经过胃肠道的复杂环境后，益生菌的存活数量和在肠道内的定植能力是影响其效果的关键因素。
微生物实验 肠道病原菌的分离与鉴定
一、粪便标本致病性肠道杆菌的分离和鉴定程序
二、粪便标本致病性肠道杆菌的分离和鉴定
1.粪便接种SS（ Salmonella Shigella agar ）培养基
粪便四分区划线接种SS琼脂平板，37℃培养18-24小时。
大肠杆菌 痢疾杆菌 伤寒杆菌
SS平板 粉红色大菌落 无色细小 半透明菌落 无色细小 半透明菌落
实验九 粪便中病原菌的分离鉴定-1
【目的要求】
1.掌握肠道杆菌的生物学性状。 2.熟悉粪便中病原菌的分离鉴定程序。
病例回顾
某患者，女，45岁。于前日参加聚餐，昨日感觉腹部不适，今晨起有 发热、腹痛、水样腹泻，至下午就诊已腹泻5次，最后两次量不多，但有 黏液样物质带有血色。实验室检测：粪便检查发现有脓细胞5个，红细胞8 个；血液检测WBC14.5×109/L（4-10x109/L）。
2.可疑菌落穿刺接种双糖铁培养基 第2天观察SS培养基的培养结果并记录，挑取较小、无色、半
透明的可疑菌落穿刺接种双糖铁培养基，37℃培养18-24小时。 第3天取出双糖铁培养基放入冰箱，下次课备用。
原始管
反应管
三、肠道杆菌的生物学性状--大肠埃希菌
大肠埃希菌
Rod-Shaped Bacterium, 45) E. coli (0157:H7) a rod prokaryote. Hemorrhagic type
E. coli with fimbriae
三、肠道杆菌的生物学性状--伤寒沙门菌
伤寒沙门菌
三、肠道杆菌的生物学性状--志贺菌
志贺菌
【实验报告】
记录粪便标本接种SS培养基和双糖铁培养的结果，并对其进行初步判 断。
肠道细菌鉴定实验报告
一、实验目的1. 掌握肠道细菌分离和鉴定的基本原理和方法。
2. 了解肠道细菌的生理生化特性，提高对常见肠道细菌的识别能力。
3. 通过实验，提高无菌操作和实验技能。
二、实验原理肠道细菌是人体肠道内的一类微生物，主要包括厌氧菌和需氧菌。
本实验采用平板划线法和稀释涂布平板法分离纯化肠道细菌，通过观察菌落特征和进行生理生化实验，对分离得到的细菌进行鉴定。
三、实验材料1. 实验动物粪便样本2. 肠道细菌通用培养基3. 血琼脂平板4. 琼脂平板5. 肉汤培养基6. 生理盐水7. 稀释液8. 接种环、接种针、酒精灯、培养皿、试管、试管架等四、实验步骤1. 样品制备：取粪便样本，用生理盐水进行稀释，制成10^-1、10^-2、10^-3、10^-4等不同浓度的稀释液。
2. 平板划线法分离：取血琼脂平板，用无菌接种环蘸取稀释液，在平板上划线，重复划线直至获得单菌落。
3. 纯化：将单菌落挑取至新的血琼脂平板上，重复划线直至得到纯化的菌落。
4. 菌落特征观察：观察菌落的形态、颜色、大小、边缘、表面等特征。
5. 生理生化实验：a. 观察细菌的革兰氏染色结果。
b. 进行糖发酵实验，观察细菌对葡萄糖、乳糖、蔗糖等糖类的发酵情况。
c. 进行吲哚实验，观察细菌是否能产生吲哚。
d. 进行甲基红实验，观察细菌发酵糖类后产酸情况。
e. 进行V-P实验，观察细菌是否能进行丙酮酸发酵。
6. 鉴定：根据菌落特征和生理生化实验结果，对分离得到的细菌进行鉴定。
五、实验结果与分析1. 菌落特征观察：实验共分离得到5种菌落，其中3种为圆形、红色、光滑、湿润的菌落，2种为圆形、无色、不透明、干燥的菌落。
2. 生理生化实验结果：a. 革兰氏染色：3种菌落为革兰氏阳性菌，2种菌落为革兰氏阴性菌。
b. 糖发酵实验：3种菌落能发酵葡萄糖，2种菌落不能发酵葡萄糖。
c. 吲哚实验：3种菌落产生吲哚，2种菌落不产生吲哚。
d. 甲基红实验：3种菌落发酵葡萄糖后产生有机酸，使培养基变红，2种菌落发酵葡萄糖后不产生有机酸。
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一、有益菌：乳酸杆菌，双歧杆菌，柔嫩梭菌，丁酸梭菌，芽孢杆菌（枯草、地衣）。
5种有害菌：大肠杆菌，沙门氏菌，产气荚膜梭菌，空肠弯曲杆菌。
4种二、厌氧菌：乳酸杆菌，双歧杆菌，产气荚膜梭菌，丁酸梭菌，柔嫩梭菌。
5种需氧菌：芽孢杆菌。
1种兼性厌氧菌：大肠杆菌，沙门氏菌。
2种注：境中生长最好。
最适温度为37～42℃。
在正常大气或无氧环境中均不能生长。
肠道正常菌群中95%以上为专性厌氧菌，兼性厌氧菌和需氧菌在正常菌群中所占比例较少。
三、一般检测菌株包括厌氧菌中的双歧杆菌、拟杆菌、优杆菌、消化性球菌、乳杆菌及梭菌。
需氧菌中的肠杆菌、肠球菌、葡萄球菌，及酵母菌等。
四、无氧环境的简易操作：1、方法来自文献《健康羊驼粪球中主要正常菌群的分离与初步鉴定》采用干燥器培养，1m3空间用焦性没食子酸10g、10%氢氧化钠溶液l00mL，按比例取10%的氢氧化钠液置于干燥器皿底部，然后放置2到3个略高于液面的青霉素小瓶，再按比例称取焦性没食子酸用纸包好，放在圆柱上。
继而放上隔板,将接种完毕的培养基放于隔板上，同时放美蓝指示剂一管。
盖上缸盖并用石蜡封闭。
再轻轻摇动干燥器，使焦性没食子酸掉人氢氧化钠液中，反应后，干燥器内无氧，美蓝指示剂由蓝变白。
置于温箱37℃培养24一48h观察结果。
2、方法来自文献《健康猪肠道菌群的分离培养与耐药性分析》后者先拧紧瓶盖,放入密封性较好的玻璃罐(用凡士林封口)，通过蜡烛燃烧法制作简易厌氧装置。
五、CO2培养箱不可代替无氧培养箱厌氧箱一般是组合气体90%氮气+5%氢气+5%二氧化碳，厌氧箱里面培养的微生物都是厌氧微生物；而二氧化碳培养箱里面是5%二氧化碳+95%空气，里面是有一部分氧气的。
一般的研究认为严格厌氧菌的培养环境中O2的浓度必须小于1000ppm（千分之一），更严格的环境是小于300ppm（万分之三），本实验室CO2培养箱CO2浓度范围为280-2000ppm，所以CO2培养箱是不能用来培养严格厌氧菌。
（1ppm即百万分之一）。
目前培养厌氧微生物的简便而又有效的技术包括有：厌氧箱培养技术；厌氧罐培养技术；厌氧袋培养技术；1.一般性的细菌培养标本若需延迟送检时，应置于4度冰箱保存，且不能超过24小时。
2.临床标本最佳运送时间取决于标本的量，少量液体（小于1ml）或组织（小于1cm3）应在15~30分钟内送到实验室，较多量的标本置于运送培养基中可放12~24小时，厌氧培养标本原则上是床边接种，如延迟送检，需保存在厌氧运送培养基中，室温保存，不得超过24小时。
低温对一些厌氧菌有害。
1.采样和运输：同时间、同地点、同位置分别取两管平行粪样，可适量多取，一管做需氧菌分离和提纯，另一管做厌氧菌的分离和提纯；需氧菌按原方案用冰块运输，厌氧菌放置于厌氧生物袋常温运输（一般认为，低温对某些厌氧菌有害，并且氧的溶解度较高）。
2.保存: 标本送至实验室后，应尽快处理，最迟不超过24h。
需氧菌放置于4℃冰箱保存，厌氧菌放置于常温保存。
3.分离、纯化：需氧菌按原计划进行。
厌氧菌培养基中添加万分之五的半胱氨酸或硫化钠做还原剂，消除培养皿内部氧气。
1.一般性的细菌培养标本若需延迟送检时，应置于4度冰箱保存，且不能超过24小时。
2.临床标本最佳运送时间取决于标本的量，少量液体（小于1ml）或组织（小于1cm3）应在15~30分钟内送到实验室，较多量的标本置于运送培养基中可放12~24小时，厌氧培养标本原则上是床边接种，如延迟送检，需保存在厌氧运送培养基中，室温保存，不得超过24小时。
低温对一些厌氧菌有害。
文献名称研究位置样品培养基种类培养条件培养时间培养温度微生物种类胃肠道菌群和胃肠黏膜屏障的检测胃肠道菌粪便选择性培养基，具体不详需氧，厌氧 24-72h检测菌株包括：双歧杆菌，拟杆菌，优杆菌，消化性球菌，乳杆菌及菌，肠杆菌，肠球菌，葡萄球菌，及酵母菌。
10种贵州小型猪胃肠道正常菌群的初步检测肠道菌粪便10种菌的选择性培养基和需氧、厌氧的非选择性培养基需氧，厌氧需氧菌:24-48h,厌氧菌:48-72h 37℃双歧杆菌，乳酸菌，拟杆菌，消化球荣球菌，梭菌，肠杆菌，肠球菌，葡萄球菌，酵母菌。
10种健康羊驼粪球中主要正常菌群的分离与初步鉴定肠道菌粪便普通琼脂培养基，甘油肉汤浸液琼脂，EC培养基，伊红美蓝培养基，乳酸杆菌选择培养基，生化试验用培养基需氧，厌氧 24-48h 37℃双歧杆菌，乳酸杆菌，酵母拟杆菌，芽孢杆菌。
5种健康猪肠道菌群的分离培养与耐药性分析肠道菌粪便麦康凯琼脂，MRS增菌液，HYA琼脂，TYP琼脂需氧，厌氧需氧菌:24h,厌氧菌:48h 37℃大肠杆菌，乳酸杆菌，双歧杆菌。
3种健康与腹泻幼犬肠道菌群数量差异分析研究肠道菌粪便普通和SS琼脂培养基，甘油肉汤浸液琼脂培养基，MRS乳酸菌、EC肠球菌、EMB肠杆菌，TPY双歧杆需氧，厌氧 24-48h 37℃大肠杆菌，沙门氏菌选择培养基，麦康凯培养基，生化试验用培养基菌，肠球菌，乳酸杆菌，双歧杆菌。
5种健康鸽与腹泻鸽肠道菌群比较研究肠道菌取肠道MRS培养基，营养琼脂平板，双歧杆菌培养基，麦康凯培养基，EC培养基，生化试验培养基需氧，厌氧 24-72h 37℃芽孢杆菌,乳酸杆菌,双歧杆菌,大肠杆菌,肠球菌。
5种水貂粪便粪营养琼脂培养基，莫厌氧 48-72h 37℃乳酸乳酸杆菌的分离与鉴定便匹罗星锂盐改良MRS培养基，营养肉汤培养基，生化试验培养基杆菌，嗜酸性乳酸杆菌，干酪乳酸杆菌。
3种猪源益生芽孢杆菌的分离鉴定与生物学特性分析粪便LB培养基，淀粉培养基，酪素培养基，羧甲基纤维素钠培养基。
需氧，厌氧 18-24 h 37℃嗜热脂肪芽孢杆菌，地衣芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌。
3种厌氧菌在有氧的情况下不能生长。
要培养厌氧菌，必须创造一个环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。
如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。
常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。
1.厌氧缸法：接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。
2.厌氧袋：即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。
塑料袋透明而不透气，内装气体发生管、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。
放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。
先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。
如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育。
3.厌氧手套箱：是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。
它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作，故名。
箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。
欲放物入箱，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气和换气达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。
箱内保持厌氧状态，也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。
该箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落，这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究，大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。
金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。
4.厌氧盒：原理同厌氧袋，有成品销售。
5.生物耗氧法：在一密闭的容器内放以生物，消耗氧气，同时产生二氧化碳，供细菌生长用。
我没见过。
6.焦性末食子酸法：在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸，均匀撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面，用融化的白蜡封边，造成一个封闭空间。
焦性末食子酸与碱反应后耗氧。
该法用于厌氧不严格的厌氧菌的培养，简单。
如有梭状芽孢杆菌。
7.疱肉培养基：本身就是一个不需特殊设备的厌氧培养法。
疱肉和肉汤装入大试管，液面封凡士林，造成无氧环境。
厌氧菌标本采集与送检必须注意两点：标本绝对不能被正常菌群所污染;应尽量避免接触空气。
1. 采集：采集标本须注意：不被正常菌群污染，并尽量避免接触空气。
采集深部组织标本时，需用碘酒消毒皮肤用注射器抽取，穿刺针头应准确插入病变部位深部，抽取数毫升即可，抽出后可排出一滴标本于酒精棉球上。
若病灶处标本量较少，则可先用注射器吸取1ml还原性溶液或还原性肉汤，然后再抽取标本。
在紧急情况下，可用棉拭取材，并用适合的培养基转送。
厌氧培养最理想的检查材料是组织标本，因厌氧菌在组织中比在渗出物中更易生长医。
用于厌氧菌培养的标本不同于一般的细菌培养，多采用特殊的采集方法，如针筒抽取等，应严格无菌操作，严禁接触空气。
不同部位标本采集方法也各有不同特点。
2.送检方法与处理标本送到实验室后，应在20～30min内处理完毕，最迟不超过2 h，以防止标本中兼性厌氧菌过度繁殖而抑制厌氧菌的生长。
如不能及时接种，可将标本置室温保存(一般认为，冷藏对某些厌氧菌有害，而且在低温时氧的溶解度较高)。
1)针筒运送：一般用无菌针筒抽取标本后，排尽空气，针头插入无菌橡皮塞，以隔绝空气，立即送检。
这种方法多用于液体标本的运送，如血液、脓液、胸腹水、关节液等医.2)无菌小瓶运送：一般采用无菌的青霉素小瓶，瓶内加一定量的培养基和少量氧化还原指示剂，用橡皮盖加铝盖固定密封，排除瓶内空气，充以C02气体。
同时先观察瓶内氧化还原指示剂的颜色，以判断瓶内是否为无氧环境，如合格将用无菌注射器将液体标本注入瓶中即可。
3)棉拭子运送一般不采用棉拭子运送，如果使用该方法，一定使用特制运送培养基，确保无氧环境，确保不被污染，确保快速送检。
4)厌氧罐或厌氧袋运送将厌氧罐或厌氧袋内装入可有效消耗氧气的物质，确保无氧环境。
该方法一般用于运送较大的组织块或床边接种的培养皿等。
厌氧菌广泛存在于外界环境和人体的口腔、肠道和女性生殖道等部位，常引起内源性感染。
据文献报道，约60 % 的临床感染有厌氧菌参与，且大多数是与需氧菌混合感染，故开展厌氧菌的检验对感染的诊断、治疗都有重要意义。
一、厌氧菌样品的采集Collection of anaerobic bacteria' s speci mens标本避免正常菌群污染和氧接触，采用下列方法：(1) 脓胸及未破溃的脓肿：皮肤消毒后，以无菌注射器抽取(排尽空针及针头内的气体) ，将针头插入无菌橡皮塞内送检。
(2) 肺分泌物和痰标本：用支气刷采取或环甲膜穿刺术。
(3) 尿液标本：用无菌注射器从耻骨上缘行膀脱穿刺术抽取。
(4) 血液标本：可用两端接有无菌针头的塑料袋或橡皮导管，将一端针头刺入静脉，待血液流出后将另一端针头立即插入培养瓶内(瓶内负压) ，使血液直接流入培养瓶内。
(5) 窦道、深部脓肿等的标本:可用特别采样器采取。
二、涂片与染色Smear preparation and stain标本涂片、革兰染色、镜检，观察细菌的形态和染色性，并估计标本中大致的含菌量，可用"少量”" + "、" ++ "、" + ++"、" ++++ "表示。