肠道微生物的分离与鉴定方法

一、有益菌：乳酸杆菌，双歧杆菌，柔嫩梭菌，丁酸梭菌，芽孢杆菌（枯草、地衣）。5种

有害菌：大肠杆菌，沙门氏菌，产气荚膜梭菌，空肠弯曲杆菌。4种

二、厌氧菌：乳酸杆菌，双歧杆菌，产气荚膜梭菌，丁酸梭菌，柔嫩梭菌。5种

需氧菌：芽孢杆菌。1种

兼性厌氧菌：大肠杆菌，沙门氏菌。2种

注：

境中生长最好。最适温度为37～42℃。在正常大气或无氧环境中均不能生长。

肠道正常菌群中95%以上为专性厌氧菌，兼性厌氧菌和需氧菌在正常菌群中所占比例较少。

三、一般检测菌株包括厌氧菌中的双歧杆菌、拟杆菌、优杆菌、消化性球菌、乳杆菌及梭菌。

需氧菌中的肠杆菌、肠球菌、葡萄球菌，及酵母菌等。

四、无氧环境的简易操作：

1、方法来自文献《健康羊驼粪球中主要正常菌群的分离与初步鉴定》

采用干燥器培养，1m3空间用焦性没食子酸10g、10%氢氧化钠溶液l00mL，按比例取10%的氢氧化钠液置于干燥器皿底部，然后放置2到3个略高于液面的青霉素小瓶，再按比例称取焦性没食子酸用纸

包好，放在圆柱上。继而放上隔板,将接种完毕的培养基放于隔板上，同时放美蓝指示剂一管。盖上缸盖并用石蜡封闭。再轻轻摇动干燥器，使焦性没食子酸掉人氢氧化钠液中，反应后，干燥器内无氧，美蓝指示剂由蓝变白。置于温箱37℃培养24一48h观察结果。

2、方法来自文献《健康猪肠道菌群的分离培养与耐药性分析》

后者先拧紧瓶盖,放入密封性较好的玻璃罐(用凡士林封口)，通过蜡烛燃烧法制作简易厌氧装置。

五、CO2培养箱不可代替无氧培养箱

厌氧箱一般是组合气体90%氮气+5%氢气+5%二氧化碳，厌氧箱里面培养的微生物都是厌氧微生物；而二氧化碳培养箱里面是5%二氧化碳+95%空气，里面是有一部分氧气的。一般的研究认为严格厌氧菌的培养环境中O2的浓度必须小于1000ppm（千分之一），更严格的环境是小于300ppm（万分之三），本实验室CO2培养箱CO2浓度范围为280-2000ppm，所以CO2培养箱是不能用来培养严格厌氧菌。（1ppm即百万分之一）。

目前培养厌氧微生物的简便而又有效的技术包括有：厌氧箱培养技术；厌氧罐培养技术；厌氧袋培养技术；

1.一般性的细菌培养标本若需延迟送检时，应置于4度冰箱保存，且不能超过24小时。

2.临床标本最佳运送时间取决于标本的量，少量液体（小于1ml）

或组织（小于1cm3）应在15~30分钟内送到实验室，较多量的标本置于运送培养基中可放12~24小时，厌氧培养标本原则上是床边接种，如延迟送检，需保存在厌氧运送培养基中，室温保存，不得超过24小时。低温对一些厌氧菌有害。

1.采样和运输：同时间、同地点、同位置分别取两管平行粪样，可适量

多取，一管做需氧菌分离和提纯，另一管做厌氧菌的分离和提纯；需氧菌按原方案用冰块运输，厌氧菌放置于厌氧生物袋常温运输（一般认为，低温对某些厌氧菌有害，并且氧的溶解度较高）。

2.保存: 标本送至实验室后，应尽快处理，最迟不超过24h。需氧菌放

置于4℃冰箱保存，厌氧菌放置于常温保存。

3.分离、纯化：需氧菌按原计划进行。厌氧菌培养基中添加万分之五的

半胱氨酸或硫化钠做还原剂，消除培养皿内部氧气。

1.一般性的细菌培养标本若需延迟送检时，应置于4度冰箱保存，且

不能超过24小时。

2.临床标本最佳运送时间取决于标本的量，少量液体（小于1ml）

或组织（小于1cm3）应在15~30分钟内送到实验室，较多量的标本置于运送培养基中可放12~24小时，厌氧培养标本原则上是床边接种，如延迟送检，需保存在厌氧运送培养基中，室温保存，不得超过24小时。低温对一些厌氧菌有害。

文献名称研

究

位

置

样

品培养基种类

培养

条件培养时间

培

养

温

度

微生

物种

类

胃肠道菌群和胃肠黏膜屏障的检测胃

肠

道

菌

粪

便

选择性培养基，具体

不详

需

氧，

厌氧 24-72h

检测

菌株

包

括：

双歧

杆

菌，

拟杆

菌，

优杆

菌，

消化

性球

菌，

乳杆

菌及

菌，

肠杆

菌，

肠球

菌，

葡萄

球

菌，

及酵

母

菌。

10种

贵州小型

猪胃肠道

正常菌群的初步检测肠

道

菌

粪

便

10种菌的选择性培养

基和需氧、厌氧的非

选择性培养基

需

氧，

厌氧

需氧

菌:24-48h,厌

氧菌:48-72h 37℃

双歧

杆

菌，

乳酸

菌，

拟杆

菌，

消化

球

荣球

菌，

梭

菌，

肠杆

菌，

肠球

菌，

葡萄

球

菌，

酵母

菌。

10种

健康羊驼

粪球中主

要正常菌

群的分离与初步鉴定肠

道

菌

粪

便

普通琼脂培养基，甘

油肉汤浸液琼脂，EC

培养基，伊红美蓝培

养基，乳酸杆菌选择

培养基，生化试验用

培养基

需

氧，

厌氧 24-48h 37℃

双歧

杆

菌，

乳酸

杆

菌，

酵母