未知肠道杆菌的分离鉴定程序

1:80 1:160 ++ +++ + ++ ++ -
肥达反应
1 2 3 4 5
O
H PAH PBH PCH
1:160
1:320 1:40 伤寒
1:320
1:80 1:80 伤寒早期
1:160
1:80 1:320 1:80 副甲
1:40
1:80 1:80 1:40 1:40 阴性
1:40
1:320 1:320 1:320 回忆反应／疫苗接种
Urea slant
肥达试验(4人/组)
材料：病人未知血清：1#，2#，3#
菌液：O、H、PAH、PBH（已知Ag）
每组1块多孔板，标记 每人2支吸管
1 O Ag
2
3
4
5
6
H Ag
PAH PBH
方法
1 NS（ml） 未知血清 (1:10) 菌液(摇匀) (4种，1种/人) 0.5 0.5
1:20
革兰染色
革兰染色
胆汁溶菌试验 奥普托辛试验
荚膜染色 （石炭酸复红单染）
尿液
离心沉淀 1500转，10分钟
分离ห้องสมุดไป่ตู้养 （EMB平板）
革兰染色
革兰染色
克氏双糖铁斜 面培养基
动力-靛基质-尿素半 固体琼脂培养基
观察结果
观察结果
观察结果
完成靛基质试验
肛门拭子1/2
EMB平板
克氏双糖铁斜 面培养基
动力-靛基质-尿素半 固体琼脂培养基
其他：革兰染液、靛基质试剂、玻片等
4.粪便 标本：肛门拭子 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、志贺 菌多价血清、玻片等
脓拭子
分离培养 （血平板）
革兰染色
革兰染色
触酶实验
血浆凝固酶实验
咽拭子
分离培养 （血平板）
底物
底物
底物 指示剂
分解葡萄糖＋乳糖 产生H2S＋铁盐
产酸（乳糖多，产酸多） FeS 培养基成黑色
上下层均为黄色
Double suger iron slant
4. 尿素培养基 组成：基础培基＋尿素＋酚红 底物 指示剂 原理： 有些细菌产生尿素酶 结果： 分解尿素 产氨
分解尿素
不分解尿素
培基变红
培基不变色
观察结果
观察结果
完成靛基质试验
玻片凝集试验
培养基原理
1. EMB平板（伊红美蓝琼脂培养基）
组成：无糖培养基＋乳糖＋伊红＋美蓝
底物 指示剂、抑菌剂 原理：
细菌 分解 乳糖
结果： 分解乳糖细菌
产酸：伊红＋美蓝
菌落变黑，有金属光泽
紫黑/紫红
不分解乳糖细菌
菌落无色、半透明（粉色）
EMB agar
2. 靛基质试验（吲哚试验）
（凝固酶、耐热核酸酶）
血琼脂平板
血液 脑脊液
肉汤增 菌培养
设计性实验
临床标本中病原菌的分离与鉴定
设计性实验
1.脓汁 标本：脓拭子 培养基：血琼脂平板 其他：3%H2O2、兔血浆、生理盐水、革兰染液、玻片等 2.痰 标本：咽拭子 培养基：血琼脂平板 其他：生理盐水、10%胆盐、革兰染液、玻片等
3.尿 标本：尿液 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基
标本中未知肠道感染细菌
的分离鉴定程序
脓血便、肛拭子 标本 SS平板,中国兰,EMB平板 选择/鉴别培基
克氏双糖铁培养基, 动力-靛基质-尿素 半固体琼脂培养基
血清学鉴定
生化反应
玻片凝 集试验
标本中未知病原性球菌
的分离鉴定程序
直接涂片染色镜检：观察细菌形态、排列、染色性
标本 观察菌落性状、溶血性、色素 涂片、染色、镜检 挑取可疑菌落 生化反应测定 纯培养 致病性测定 涂片染色镜检
肠道杆菌的血清学试验（玻片凝集试验）
材料
1. 菌种：伤寒杆菌培养物、痢疾杆菌培养物 2. 伤寒杆菌的诊断血清，志贺菌诊断血清、载玻片、生理盐水 方法
生理盐水 血清
弃0.5ml于消毒缸
2 0.5 0.5
1:40
3 0.5 0.5
1:80
4 0.5 0.5
1:160
5 0.5 0.5
1:320
6 0.5
0.5
1:40
0.5
1:80
0.5
1:160
0.5
1:320
0.5
0.5
1:640 (阴性对照)
37℃水浴过夜
肥达试验
H凝集：絮状，以疏松大团沉于管底 O凝集：颗粒状，以坚实凝片沉于管底 凝集程度的判定以“＋”、“－”号表示
组成：蛋白胨水＋色氨酸
原理： 某些细菌有色氨酸酶 试剂 玫瑰吲哚（红色） 分解 色氨酸 吲哚（无色）＋柯氏
结果：液面形成玫瑰红色
吲哚试验
3. 克氏双糖铁斜面培养基反应试验 组成：无糖培基＋1份葡萄糖＋10份乳糖＋铁盐＋酚红 营养 原理： 只分解葡萄糖 产酸（葡萄糖少，产酸量少）
上层氧化 呈红色 下层缺氧 不氧化 呈黄色
＋＋＋＋
＋＋＋ ＋＋
上清完全透明，细菌全部形成凝集块
细菌绝大多数凝集，液体有轻度混浊 50％细菌形成凝集，液体半澄清
＋
－
仅少数细菌凝集，液体比较混浊
液体均匀混浊，无凝集（沉于管底，形成圆 形沉淀，边缘整齐）
肥达试验
以呈现＋＋凝集的血清最高稀释度作为该血清的凝集效价
1 1:40 O H PAH PBH ++++ ++++ ++ + 2 3 4 1:320 ++ 5 1:640 6 对照 -