未知肠道杆菌的分离鉴定程序
肠道杆菌的分离鉴定
300
≤13
14~16
≥17
≤28
－
≥29
≤12
13~14
≥15Байду номын сангаас
≤12
13~14
≥15
≤11
12~14
≥15
≤13
14~22
≥23
≤15
16~20
≥21
≤12
13~16
≥17
七、肠道杆菌血清学鉴定
原理：细菌作为颗粒性抗原在相应抗体作用下可形成肉 眼可见的凝集颗粒。
可疑菌落 -阴性
可疑菌落 +阳性
标本
SS培养基
②
①
P
N ③
Name time 小辫法
④ 分区划线法
注意：每划完一个区进行下一区之前取菌环要灭菌
粪便标本接种： 标本：1）病人粪便（阳性标本）； 2）正常人粪便（阴性） 培养基：SS平板 操作：将SS平板上分两个区，分别接种病人和正 常人标本。 要求：使用正确的画线方法，必须培养出单个菌落以备后续实
氨苄西林
AM
ATCC25922 金黄色葡萄球菌
10
ATCC25923
大肠埃希氏菌
庆大霉素
GM
ATCC25922 金黄色葡萄球菌
10
ATCC25923
链霉素
S
大肠埃希氏菌 ATCC25922
10
金黄色葡萄球菌
红霉素
E
ATCC25923 肺炎链球菌
15
ATCC49619
磺胺甲基异 噁唑
SMX
金黄色葡萄球菌 ATCC25923
葡磷胨水 （绿色盖） E.a
葡磷胨水 （绿色盖） E.coli
分离鉴定粪便中的大肠杆菌的实验流程
分离鉴定粪便中的大肠杆菌的实验流程鉴定粪便中的大肠杆菌是一项十分重要的实验，它可以帮助我们评估肠道健康状况，检测是否存在致病性大肠杆菌的感染，对于疾病的防控具有重要意义。
下面，我将详细介绍一下分离鉴定粪便中的大肠杆菌的实验流程。
我们需要准备实验所需的材料和试剂。
材料包括培养皿、接种环、培养基等，而试剂包括洗涤剂、生理盐水、大肠杆菌特异性培养基等。
在实验开始前，我们需要确保实验器具和培养基无菌，并且消毒实验台面和使用的工具，以避免外界微生物的干扰。
我们需要进行样品的处理和制备。
取一定量的粪便样品，并将其进行振荡或均匀搅拌，使其中的微生物均匀分布。
我们将取一小部分样品进行稀释，目的是为了在培养皿上获得适当的菌落数，方便观察和鉴定。
接着，我们把经稀释处理后的样品加入到培养基中，使细菌能够在适宜的温度下进行培养。
大肠杆菌通常在37摄氏度下培养，因此我们需要将培养皿放入恒温箱中，在一定的时间后进行观察。
在培养的过程中，我们需要定期检查培养皿的状态，观察是否有典型的大肠杆菌形态的菌落出现。
除了观察菌落形态之外，我们还可以利用生化试剂进行鉴定。
通过添加特定的生化试剂，如甲酚红葡萄糖琼脂培养基、大肠杆菌的IMViC生化试剂等，可以帮助我们鉴定大肠杆菌。
这些试剂可以根据大肠杆菌的代谢特点，进行色素反应或气体产生反应，从而帮助我们确认目标菌株的身份。
我们需要进行进一步确认。
在鉴定出大肠杆菌后，我们可以利用进化树分析等生物信息学方法，对其遗传特征进行分析，以确保其准确性。
我们还可以进行致病性检测，通过PCR等分子生物学技术检测目标菌株是否携带致病因子，从而评估其致病性。
通过以上的实验流程，我们可以较为准确地分离鉴定粪便中的大肠杆菌。
这项实验的结果将为我们提供重要的信息，有助于评估肠道健康状况，及时发现致病性大肠杆菌的感染，为疾病的预防和控制提供重要依据。
化脓性球菌、粪便标本肠道致病菌鉴定流程
化脓性球菌、粪便标本肠道致病菌鉴定流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor.I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!化脓性球菌与粪便标本肠道致病菌鉴定流程详解化脓性球菌和粪便标本中的肠道致病菌是临床医学中常见的病原微生物，对于它们的准确鉴定对于疾病的诊断和治疗至关重要。
分离大肠杆菌的方法
分离大肠杆菌的方法大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，也是微生物学研究中的重要模式生物。
分离大肠杆菌是许多实验室中常见的操作，这里将介绍几种常用的分离方法。
1.无菌技术准备在进行分离大肠杆菌之前，必须保证实验环境的无菌。
操作前要用75%乙醇对操作台面进行消毒，使用无菌培养皿和试管，并佩戴无菌手套。
2.样品采集从目标样品中采集含有大肠杆菌的样品。
常见的样品类型包括食品、水样、粪便等。
采集样品时要注意避免污染，使用无菌容器收集样品。
3.预处理样品将采集到的样品进行预处理，以提高大肠杆菌的分离效率。
常用的预处理方法包括：(1) 粪便样品：将粪便样品稀释于无菌生理盐水中，通过离心操作去除大部分固体颗粒。
(2) 食品样品：将食品样品加入适量的无菌生理盐水中，进行均匀搅拌。
(3) 水样：直接使用无菌容器收集水样，避免污染。
4.选择培养基根据实验需要选择适合分离大肠杆菌的培养基。
常用的培养基包括营养琼脂糖平板（Nutrient Agar Plate）、MacConkey琼脂糖平板（MacConkey Agar Plate）等。
这些培养基含有适合大肠杆菌生长的营养物质，并可以通过某些特殊成分选择性地抑制其他细菌的生长。
5.涂布法涂布法是最常用的分离大肠杆菌的方法之一。
具体操作步骤如下：(1) 取一支无菌的鉴别环，将其蘸取预处理后的样品。
(2) 将鉴别环均匀地涂布在培养基平板的表面上。
(3) 使用无菌铁环或无菌玻璃杆均匀涂布，以保证样品的均匀分布。
(4) 将涂布好的培养基平板放置在恒温培养箱中，以适当的温度（通常为37摄氏度）进行培养。
6.滤膜法滤膜法是一种通过滤膜来分离大肠杆菌的方法。
具体操作步骤如下：(1) 准备无菌滤膜和滤膜培养基。
(2) 将预处理后的样品滤过滤膜，将滤膜放置在滤膜培养基平板上。
(3) 将滤膜培养基平板放置在恒温培养箱中进行培养。
7.生物化学试验分离大肠杆菌后，需要进行进一步的鉴别和确认。
标本中未知细菌的分离和鉴定
结论：现象与论点、 结论：现象与论点、论据
浓汁标本可疑菌药敏实验结果
药品名称
抑菌圈直径
结论： 结论：
咽拭子
分离培养 血平板） （血平板）
革兰染色
革兰染色
胆汁溶菌试验 奥普托辛试验
荚膜染色 石炭酸复红单染） （石炭酸复红单染）
？
粪便标本
SS平板 SS平板
结果观察
1、菌落观察 2、形态学观察
（二）生化反应 触酶试验： 触酶试验： H2o2
氧化氢酶
H2o + o2
(-) (+)
菌种：可疑菌落 菌种： 试剂：3%过氧化氢 试剂：3%过氧化氢 方法： 方法：见右图 结果： 结果：见右图
甘露醇实验
甘露醇生化反应管
药敏实验
浓汁标本可疑菌生长现象及生化反应结果 观察
玻片凝集试验
粪便标本可疑菌生长现象及生化、 粪便标本可疑菌生长现象及生化、血清反 应结果观察
SS平板 SS平板 生长现象 形态学 特 征 单糖发酵试验 血清学试验
葡萄糖 乳糖
结论：现象与论点、 结论：现象与论点、论据
粪便标本可疑菌药敏实验结果
药品名称
抑菌圈直径
结论： 结论：
二、标本中未知肠道感染细菌 的分离鉴定程序
脓血便、 脓血便、肛拭子
标本 SS平板,EMB平板 SS平板,EMB平板 平板 选择/ 选择/鉴别培基
克氏双糖铁培养基, 克氏双糖铁培养基, 动力-靛基质动力-靛基质-尿素 半固体琼脂培养基
血清学鉴定 生化反应
玻片凝 集试验
设计性实验
临床标本中病原菌的分离与鉴定
3.尿 3.尿 标本： 标本：尿液 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 动力-靛基质动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 其他：革兰染液、靛基质试剂、玻片等 其他：革兰染液、靛基质试剂、 4.粪便 4.粪便 标本：肛门拭子 标本： 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 动力-靛基质动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、 其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、志贺 菌多价血清、玻片等 菌多价血清、
肠道杆菌
原理与结果判断
• 用已知抗原检测未知抗体的试管凝集 反应。 • 以出现 ++ 凝集的血清最高稀释倍数为 该血清抗体效价 • H≥1:160 、O ≥ 1: 80； H甲或H乙≥ 1: 80 有诊断意义
H抗体与O抗体的性质及意义
H抗体 — IgG 出现晚，维持时间较长；
O抗体 — IgM出现早，维持时间较短。
形 态 实 验 学
--肠道杆菌
实验内容
1. 录象：肠道杆菌 2. 肠道杆菌的鉴定程序及示教物 3. 操作：肥达反应
肠道杆菌（enteric bacilli）
是一大群寄居在人
和动物肠道中生物
学形状近似的G－杆
菌。如：
• 非肠道致病菌
（大肠杆菌）
• 肠道致病菌
（伤寒杆菌、痢疾杆菌、变形杆菌等）
肠道杆菌的鉴定程序
消毒灭菌——种类和方法
划线分离——目的和方法
细菌生化反应
一、糖发酵试验
由于细菌各自具有不同的酶系统，故对糖(醇)
类的分解能力不尽相同。
产酸产气 — 指示剂变色，小倒管内有气泡；
以㊉表示 产酸 — 指示剂变色；以＋表示 不能分解 — 指示剂不变色；以－表示
二、硫化氢试验 某些细菌能分解培养基中含硫氨基酸，产生
操作：肥达反应（试管凝集反应）
• 器材：试管6支/人，试管架1个/2人， 吸管1支/人，标签1个/人 • 伤寒杆菌H菌液 伤寒杆菌O菌液 甲型副伤寒杆菌H菌液 乙型副伤寒杆菌H菌液 • 待检病人血清 (1:10稀释)
倍比稀释法
生理盐水
待检血清(1:10)
0.5(弃) * 1 2 3 4 5 6 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 /
肠道病原菌的分离与鉴定
高压蒸汽灭菌器
(二)普通琼脂培养基
材料:肉水、蛋白胨、氯化钠、琼脂、无菌平皿、 灭菌试管、三角烧瓶等。
方法
1．按上记数量把肉水、蛋白胨、氯化钠和琼脂 放到三角烧瓶中,加热溶化。
2．用纸测酸碱度,用10％碳酸氢钠校正pH 为7.2左右。
3．15磅高压蒸气灭菌20～30min。
4．趁热将溶化的培养基倒入灭菌平皿内,每个平 皿倒入约15ml,凝固后即成普通琼脂平板培养基; 如趁热将培养基倒入灭菌试管内,再将试管斜放试 验台上,凝固后即成普通琼脂斜面培养基。
(三)血液琼脂培养基
有些细菌其营养要求较高,在普通琼脂培养基上生长 不良,可用血液琼脂培养基进行培养。 材料
① 普通琼脂培养基
② 血液(脱纤维羊血或兔血) 方法
1．加热溶化普通琼脂培养基。 2．待冷至50℃左右时,加入无菌的脱纤维血液,混匀(注 意勿使产生泡沫)。 3．分注于灭菌试管或平皿中制成血斜面和血平板培养 基。
方法
本实验四人一组,每人取6只小试管,排成一列,计四列为一 完整试验。分别标明每列管号和诊断菌液如“O”、 “OH”、“PA”、“PB”。按下表先向每管加生理盐水 0.5ml,再加10倍稀释病人血清0.5ml于第l管,做顺序的等 倍稀释,最后加入等量的诊断菌液,充分混匀,置37℃ 2~4h, 再放室温24小时后观察结果。
肠道病原菌的分离与鉴 定
培养基的制备及常用培养基 细菌的培养法
EMB培养基的制备 肠道病原菌的分离与鉴定(一) 血清学检测-肥达氏反应
培养基的制备
(一)肉汤培养基 材料:鲜牛肉、蛋白胨、氯化钠、pH试纸、10％碳酸氢钠、试
管、三角烧瓶、蒸馏水等。 方法
1．将新鲜牛肉500g切碎或搅碎,加水1000ml,放4℃冰箱或冷处 浸泡过夜,然后煮沸30min,放凉,使残余的脂肪凝固,再用绒布或 滤纸过滤,将滤液补足为原量。 2．1000ml肉水中加入蛋白胨 10g、氯化钠5g,加热溶解。 3．用精密pH试纸测酸碱度,用10％碳酸氢钠校正pH为7.2左右。 过碱时,可用10％醋酸校正之。 4．分装于试管中或三角烧瓶中,15磅(121℃)高压蒸气灭菌20～ 30min。
大肠杆菌的分离鉴定
大肠杆菌的分离鉴定
大肠杆菌是一种重要的肠道细菌，对于科学家和医生来说具有重要的研究和治疗价值。
分离和鉴定大肠杆菌的方法有许多种，本篇文章将介绍几种比较常见的方法。
1. 感染部位样本的获得
首先需要获得感染部位的样本，可分为分泌物、血液、尿液、粪便等。
获得样本的方
法可以根据不同部位进行取样，比如粪便可以通过肛门插入取样器进行获取。
2. 抗生素筛选
将样本接种于相应的富营养基质，对其中加入多种抗生素。
根据对应的扩散系数，只
有大肠杆菌具有生长优势，因此只有大肠杆菌能够在抗生素的存在下继续生长。
3. 纯化
从上面的富营养基质中挑选具有脐带颜色和形态特征的菌落，将其在富营养基质上进
行纯化。
纯化后的大肠杆菌能在多种富营养基质上进行生长即可分离。
4. 经典分离法
包括肉汤琼脂平板法、 MacConkey琼脂平板法、格拉莫琼脂平板法、 EMB琼脂平板法等一系列基本细菌检测方法。
1. 化学特性法
常用方法有氧化氨酸特性试验、熏蒸酸特性试验、脱氧氮碱试验、醛类试验等。
通过
观察变化与发色的差异，以及其化学反应程度来判断是否为大肠杆菌。
通过观察菌落形态、革兰染色阳性反应、运动情况、气体代谢情况等特性判断是否为
大肠杆菌。
可采用比色相比法、蛋白溶液胶片法、氧测定法、etc。
3. 抗原性鉴定
通过采用血相似抗原、鞭毛抗原、菌体抗原等抗原进行抗血清试验，来确定是否为大
肠杆菌。
微生物实验 肠道病原菌的分离与鉴定
【目的要求】
1.熟悉粪便中肠道杆菌的分离与鉴定程序。 2.了解肠道杆菌生化反应、免疫学检测原理、结果和意义。 3.掌握肠道杆菌的生物学性状。
粪便标本中致病性肠道杆菌的分离与鉴定程序
粪便标本
涂片，染色，镜检 （意义不大）
双糖铁培养基
SS培养基
生化反应： IMViC
药敏试 验
伤寒沙门菌
三、肠道杆菌的生物学性状--志贺菌
志贺菌
【实验报告】
记录粪便标本病原菌的分离与鉴定的步骤及结果。
大肠埃希菌
Rod-Shaped Bacterium, E. coli (division) (SEM x22,245) E. coli (0157:H7) a rod prokaryote. Hemorrhagic type
E. coli with fimbriae
三、肠道杆菌的生物学性状--伤寒沙门菌
血清学 试验
PCR试 验
一、上节课实验结果
1.SS琼脂平板结果及初步推断
结果： 平板上有几种菌？
ห้องสมุดไป่ตู้
二、本节课实验内容
1.双糖铁培养基结果观察 细菌动力，对葡萄糖和乳糖发酵的情况，是否产生硫化氢？
原始管
反应管
双糖铁培养基结果
菌名 大肠埃希菌
葡萄糖 （底层）
⊕
痢疾杆菌
+
伤寒沙门菌
+
肖氏沙门菌
⊕
乳糖 （斜面）
氨苄西林
氨苄西林
敏感 中介 耐药 10ug >=17 13--16 <=14
复方新诺明
>=16 9--15 <=10
复方新诺明
肠道杆菌实验
菌种：大肠杆菌 伤寒杆菌
E. Coli EMB
伤寒杆菌 大肠杆菌
EMB 平板
无色菌落 深紫色，带金属光泽
E. Coli SS
S.S 琼脂平板
无色菌落 红色菌落
4.肠道杆菌在鉴别培养基上的生化现象观察---双糖含铁培养基（Double Sugar Iron Agar）
上层 (固体)
观察内容
乳糖发酵 试验
H2S试验
大肠杆菌 痢疾杆菌 伤寒杆菌
+
-
-
-
-
-
乙型副伤 寒杆菌
-
+
下层
葡萄糖发
+
+
+
+
(半固体) 酵试验
动力实验
+
-
+
+
大肠杆菌
伤寒杆菌
痢疾杆菌 乙型副伤寒杆菌
5.药敏试验（纸片法）
▪ 原理：在有抗生素的培养基中，抗生素能够抑制细 菌生长或者杀灭细菌。
▪ 方法：纸片法——定性（了解对那种抗生素敏感） 试管法——定量
▪ 培养基成分：
▪ 上层：蛋白胨、氯化钠、
乳糖、硫酸亚铁、硫代硫
酸钠、琼脂和酚红指示剂.
固体斜面培养基划线接种
▪ 下层：蛋白胨、氯化钠、 葡萄糖、琼脂和酚红指示 剂. 半固体培养基，穿刺
接种。
观察内容： ➢ 上层颜色 ➢上下层交界颜色 ➢下层颜色 ➢下层气泡/气柱 ➢下层接种线
肠道杆菌的生化反应
培养基
液体培养基连续稀释法测定药物的MIC MIC:指能抑制微生物生长所需的最低浓度。
肠道杆菌检验(实验)
肠道杆菌检验(实验)一、实验目的本实验的主要目的在于检测食品和水中的肠道杆菌，以此评估其是否达到安全要求。
通过本实验，可以了解肠道杆菌的常见特点和检测方法，培养学生科学的实验技能能力。
二、实验原理肠道杆菌是一种典型的大肠杆菌，被广泛应用于食品和水质检测中。
它主要存在于动物肠道中，也能够存在于它们的排泄物中，因此如果食品和水受到动物排泄物的污染，就会存在肠道杆菌。
通过检测肠道杆菌的存在和检测数量，可以判断食品和水的卫生质量是否达到安全要求。
肠道杆菌在营养富含的培养基上易于生长，并可以通过简单的染色方法进行检测。
常用的检测方法包括在培养基上培养并计数，或者利用PCR技术进行定量和鉴定。
三、实验步骤1. 实验准备(1) 肠道杆菌检测脱氧胆酸琼脂培养基、营养琼脂培养基、氧气酒精灯、电热板、灭菌器、微孔过滤膜、灭菌钳等。
(2) 检测器具：恒温培养箱、显微镜等。
(3) 检测样品：需要检测的食品或水样品。
2. 实验操作(1) 样品处理：对待检测的食品或水样品进行处理，如筛选、稀释等等，以达到最佳的检测效果。
(2) 复制脱氧胆酸琼脂培养基和营养琼脂培养基，用微孔过滤膜将样品过滤到培养基上，放入恒温培养箱中进行培养。
(3) 测量生长：在一定时间后，观察脱氧胆酸琼脂培养基中的菌落数量，判断是否存在肠道杆菌，并计算出菌量。
(4) 进行染色：将培养细胞染色，观察细胞形态，以鉴定是否存在肠道杆菌。
四、实验注意事项(1) 实验过程中需要注意卫生，防止污染样品。
(2) 营养琼脂培养基和脱氧胆酸琼脂培养基必须进行灭菌处理。
(3) 实验过程需要严格按照实验操作步骤进行，以免影响结果。
五、实验结果及分析通过检测食品和水中的肠道杆菌，在不同的培养基上进行培养和计数，可以判断食品和水是否满足卫生要求。
如果检测出的肠道杆菌数量较高，则说明食品或水存在严重的卫生问题，需要及时采取措施加以解决。
通过本实验可以培养学生的科学思维能力，提高其对卫生的认识和保健意识。
肠道微生物的分离与鉴定方法
肠道微⽣物的分离与鉴定⽅法⼀、有益菌：乳酸杆菌，双歧杆菌，柔嫩梭菌，丁酸梭菌，芽孢杆菌（枯草、地⾐）。
5种有害菌：⼤肠杆菌，沙门⽒菌，产⽓荚膜梭菌，空肠弯曲杆菌。
4种⼆、厌氧菌：乳酸杆菌，双歧杆菌，产⽓荚膜梭菌，丁酸梭菌，柔嫩梭菌。
5种需氧菌：芽孢杆菌。
1种兼性厌氧菌：⼤肠杆菌，沙门⽒菌。
2种注：境中⽣长最好。
最适温度为37～42℃。
在正常⼤⽓或⽆氧环境中均不能⽣长。
肠道正常菌群中95%以上为专性厌氧菌，兼性厌氧菌和需氧菌在正常菌群中所占⽐例较少。
三、⼀般检测菌株包括厌氧菌中的双歧杆菌、拟杆菌、优杆菌、消化性球菌、乳杆菌及梭菌。
需氧菌中的肠杆菌、肠球菌、葡萄球菌，及酵母菌等。
四、⽆氧环境的简易操作：1、⽅法来⾃⽂献《健康⽺驼粪球中主要正常菌群的分离与初步鉴定》采⽤⼲燥器培养，1m3空间⽤焦性没⾷⼦酸10g、10%氢氧化钠溶液l00mL，按⽐例取10%的氢氧化钠液置于⼲燥器⽫底部，然后放置2到3个略⾼于液⾯的青霉素⼩瓶，再按⽐例称取焦性没⾷⼦酸⽤纸包好，放在圆柱上。
继⽽放上隔板,将接种完毕的培养基放于隔板上，同时放美蓝指⽰剂⼀管。
盖上缸盖并⽤⽯蜡封闭。
再轻轻摇动⼲燥器，使焦性没⾷⼦酸掉⼈氢氧化钠液中，反应后，⼲燥器内⽆氧，美蓝指⽰剂由蓝变⽩。
置于温箱37℃培养24⼀48h观察结果。
2、⽅法来⾃⽂献《健康猪肠道菌群的分离培养与耐药性分析》后者先拧紧瓶盖,放⼊密封性较好的玻璃罐(⽤凡⼠林封⼝)，通过蜡烛燃烧法制作简易厌氧装置。
五、CO2培养箱不可代替⽆氧培养箱厌氧箱⼀般是组合⽓体90%氮⽓+5%氢⽓+5%⼆氧化碳，厌氧箱⾥⾯培养的微⽣物都是厌氧微⽣物；⽽⼆氧化碳培养箱⾥⾯是5%⼆氧化碳+95%空⽓，⾥⾯是有⼀部分氧⽓的。
⼀般的研究认为严格厌氧菌的培养环境中O2的浓度必须⼩于1000ppm（千分之⼀），更严格的环境是⼩于300ppm（万分之三），本实验室CO2培养箱CO2浓度范围为280-2000ppm，所以CO2培养箱是不能⽤来培养严格厌氧菌。
项目10标本中未知细菌的分离和鉴定
项目10：标本中未知细菌的分离和鉴定【目的要求】熟悉临床标本中常见的病原性细菌的分离鉴定方法。
【实验内容】一、脓汁、咽拭子等标本中病原性细菌的分离与鉴定（一）标本采集1．脓拭子：用无菌棉签蘸取患处深部脓液或分泌物少许，置入无菌空试管内，送检。
2．痰拭子：用消毒容器收集病人痰液，用无菌棉签挑取脓稠痰块，置入无菌空试管内，送检。
3．咽拭子：嘱病人把口张大，用压舌板压住舌根，用无菌棉签迅速蘸取咽部分泌物，置入无菌空试管内，送检。
4．血标本：疑为败血症患者，在严格无菌操作下，静脉采血，床旁直接加入含50ml的肉汤瓶内，立即摇匀后送培养。
5．脑脊液：对疑似流脑患者，作腰椎穿刺取脑脊液，立即行直接床旁接种(送检过程中应注意保温)。
6．尿道、阴道分泌物：对可疑淋病患者，男性可从尿道取材，取材时导尿管应进入尿道1cm～2cm，如为刚排尿，应等待1h左右；女性则可以从宫颈口取分泌物，当内窥器插入宫颈口后应稍等片刻，再旋转取出，取材应立即送检，不可放置冰箱。
（二）分离鉴定程序待检标本可直接做涂片染色检查鉴定，必要时可做分离培养、生化反应及致病性鉴定。
常见的致病性球菌检查程序如下。
直接涂片、革兰染色、镜检（形态、排列、染色性）脓、痰、咽拭子分泌物、脑脊液观察菌落性状、溶血性、色素血琼脂平板→↑挑取可疑菌落生化反应血液、穿刺液→肉汤培养基纯分离致病性测定↓药敏试验如培养液混浊时可涂片、染色、镜检（三）常见临床标本的检查方法1．脓拭子在脓汁中除了球菌外，也有杆菌存在，例如革兰阳性的有炭疽杆菌、白喉杆菌、结核杆菌、枯草杆菌等，革兰阴性的有大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌等，此外尚可有真菌、放线菌、螺旋体等。
【材料】（1）标本：脓拭子（2）培养基：血琼脂平板（3）兔血浆、白色滤纸片、无菌生理盐水、载玻片【方法】脓汁→革兰染色→镜检↓↑血琼脂平板→观察菌落形态及溶血情况↓致病力试验(1)将脓拭子作革兰染色，镜检(先作培养再涂片以免污染)。
7未知病原菌的分离鉴定
Widal test (5人/组)
材料： 病人未知血清：1#，2#，3# 菌液：O、H、PAH、PBH（已知Ag） 方法：每组1块多孔板/24支试管； 每人2支吸管；
方法
1
NS 菌液(摇匀)
(4种,1种/人)
弃0.5ml于消毒缸
2
0.5
3
0.5
4
0.5
5
未知病原菌的分离鉴定
病原菌检测程序
初步诊断
形态结构 直接涂片、染色、镜检 分离、鉴定 观察培养特征、形态特征
生化试验(书p17-18) 血清学试验(玻片凝集法) 动物试验(产毒性、分离) 药物敏感试验 病原菌抗原检测 分子生物学技术(核酸杂交、PCR、基因芯片
核酸 )
其他检测技术
临床标本中未知病原性球菌的分离鉴定程序
– 其他：革兰染液、靛基质试剂、玻片等
实验方案
尿液
离心沉淀 1500转，10分钟
第1次
分离培养 （EMB平板）
革兰染色
第2次
革兰染色
克氏双糖铁斜 面培养基
动力-靛基质-尿素半 固体琼脂培养基
第3次
观察结果
观察结果
完成靛基质试验
实验材料
粪便
– 标本：肛拭子（1#、2#）
– 培养基：
• EMB平板 • 克氏双糖铁斜面培养基 • 动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基
进程安排
– 实验分3次进行
实验材料
脓汁 – 标本：脓拭子 – 培养基：血琼脂平板 – 其他：3%H2O2、兔血浆、生理盐水、革兰染液、 玻片等
实验方案
脓拭子
第1次课
分离培养 （血平板）
革兰染色
第2次课
革兰染色
粪便标本中肠道致病菌的分离与鉴定程序
粪便标本中肠道致病菌的分离与鉴定程序哎呀，今天我们来聊聊一个有点“特别”的话题，关于粪便标本中那些神秘的小家伙，肠道致病菌的分离与鉴定。
乍一听，大家可能会觉得有点不太美好，毕竟谁愿意和粪便扯上关系呢？但了解这些菌菌的背后故事可有趣多了，绝对让你大开眼界！咱们得知道，肠道里的细菌就像是一个大家庭，里面有些是好朋友，像肠道益生菌，帮我们消化，维护健康；但有些就不那么友好了，它们就是那些臭名昭著的致病菌。
一旦这些坏家伙在我们的肚子里扎下根，嘿，后果可就不堪设想了。
肚子疼、拉肚子、发烧，这些都可能是它们在搞鬼。
为了搞清楚这些“坏蛋”到底是谁，我们就得用到粪便标本，别担心，这个过程其实比想象中简单有趣得多。
说到采样，首先要准备一个干净的小容器，最好是一次性那种，听说卫生很重要。
采样的时候要记得，尽量避免尿液或其他杂质的混入，毕竟咱们要的是纯正的“货”。
然后，就把这些标本送到实验室，等着实验室的小伙伴们来“审问”这些细菌。
在实验室里，首先会用培养基来培育这些粪便里的细菌。
培养基就像是细菌的“自助餐”，只要你给它们提供了舒适的环境，它们就会茁壮成长。
像是加上一些营养成分，调节一下温度，再给点时间，这些小家伙就会在培养皿里成群结队地出现，真是热闹非凡。
就是细菌的分离与鉴定。
这一步就像在“找朋友”，实验室的小伙伴们会用一些小工具，把那些长得像“群星闪耀”的细菌分别挑出来。
用专业的技术手段，比如涂布法、分离培养法，慢慢地将它们一个个找出来。
这可不是简单的事情哦，得眼明手快，毕竟有时候它们还真是狡猾。
一旦分离成功，接下来就是鉴定了。
这里会用到一些生化试验，像是培养、染色，甚至是基因测序。
这些方法就像是给细菌做“身份证”，一一验证它们的身份。
有的细菌可能会告诉你，它们叫“大肠杆菌”，有的则可能是“沙门氏菌”，每个名字背后都藏着不同的故事和特性。
当所有的结果都出来后，咱们就能知道肠道里到底发生了什么。
可能会有个别的致病菌跳出来，让人吓一跳，但有时候也可能只是普通的肠道菌群，没什么大问题。
肠道病原菌的分离与鉴定实验报告
肠道病原菌的分离与鉴定实验报告摘要本实验旨在分离、鉴定肠道病原菌，并深入了解肠道病原菌对人们健康的影响。
本实验采用选择性培养基和生化试剂对样品进行处理和鉴定，最终成功分离出大肠杆菌、沙门菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌等肠道病原菌。
引言肠道病原菌是导致肠胃疾病的主要病因之一。
一些细菌和病毒都可引起肠道感染，导致腹泻、呕吐、腹痛等不适症状。
有些肠道病原菌很难通过常规的培养方法进行分离和鉴定，因此对于其鉴定至关重要。
在临床和实验室中，肠道病原菌的鉴定是非常重要的。
在本实验中，我们将通过选择性培养基和生化试剂来分离和鉴定肠道病原菌。
材料与方法实验所需材料：-食品样品（牛肉、猪肉、家禽产品等）-选择性培养基（MacConkey agar, SS agar, XLD agar）-氯霉素（50μg/ml）-β-半乳糖苷酶-生化试剂（甲基红、青田霉素、麦芽糖、尿素、甲酸氢钠、甲酸亚铁、碳酸氢铵、硫代硫酸钠、氧化亚铁、硫酸铜、氯化铵、硝酸钴、聚苯乙烯乳胶、过氧化氢）实验步骤：1. 食品样品的处理：将样品切成小块，加入100 ml的含氯霉素（50μg/ml)的生理盐水中，放在室温下搅动10分钟，再将悬浮液离心10分钟，取沉淀制备10倍连续稀释液备用。
2. 分离培养：取三个不同的选择性培养基MacConkey agar、SS agar和XLD agar，分别接种均匀悬浮液并用无菌环展开，然后使其在37℃恒温箱中孵化24小时。
3. 生化识别：观察菌落的形态、颜色和表面涂膜，并用生化试剂行革兰染色、甲基红反应、青田霉素试验、尿素酶试验、甲酸氢钠氧化试验、甲酸亚铁还原试验、碳酸氢铵水解试验、硫代硫酸钠还原试验、氧化亚铁试验、硫酸铜凝集试验、氯化铵水解试验、硝酸钴试验、聚苯乙烯乳胶凝聚试验和过氧化氢试验，根据结果进行分类鉴定。
结果经过实验分离和鉴定，本实验成功分离出大肠杆菌和沙门菌等常见的肠道病原菌，并且还分离出一株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。
粪便标本中肠道致病菌的的分离鉴定
实验十粪便标本中肠道致病菌的的分离鉴定实验目的和要求1、掌握脓汁标本中常见病原菌分离和鉴定方法2、掌握药物敏感试验3、掌握肠道杆菌分离和鉴定的一般步骤4、熟悉肠道杆菌鉴定生化反应和血清学反应实验内容一、脓汁标本中未知病原菌的分离和鉴定二、粪便标本中肠道致病菌的分离和鉴定一、标本中未知病原性球菌的分离鉴定程序直接涂片染色镜检：观察细菌形态、排列、染色性观察菌落性状、溶血性、色素血琼脂平板涂片、染色、镜检挑取可疑菌落生化反应测定纯培养致病性测定（甘露醇、凝固酶等）标本血液脑脊液肉汤增菌培养涂片染色镜检二、标本中未知肠道感染细菌的分离鉴定程序标本脓血便、肛拭子选择/鉴别培基生化反应血清学鉴定克氏双糖铁培养基,动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基玻片凝集试验SS平板,EMB平板设计性实验临床标本中病原菌的分离与鉴定设计性实验1.脓汁标本：脓拭子培养基：血琼脂平板其他：3%H2O2、（兔血浆）、生理盐水、革兰染液、玻片等2.痰标本：咽拭子培养基：血琼脂平板其他：生理盐水、10%胆盐、革兰染液、玻片等3.尿标本：尿液培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基其他：革兰染液、靛基质试剂、玻片等4.粪便标本：肛门拭子培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、志贺菌多价血清、玻片等脓拭子分离培养革兰染色（血平板）革兰染色触酶实验甘露醇实验方法：•1、分离培养、观察菌落特征：浓汁标本，用分离划线方法接种血平板，37℃培养18-24h以后观察结果。
重点：色素和溶血现象•2、革兰染色、观察形态学特征：取可疑菌落少许涂片，革兰染色、镜检。
结果观察•1、菌落观察•2、形态学观察（二）生化反应•触酶试验：(-) (+)H 2o 2H 2o o 2氧化氢酶+菌种：可疑菌落试剂：3%过氧化氢方法：见右图结果：见右图甘露醇实验•甘露醇生化反应管药敏实验浓汁标本可疑菌生长现象及生化反应结果观察形态学特征血平板生长现象触酶试验甘露醇试验结论：现象与论点、论据浓汁标本可疑菌药敏实验结果药品名称抑菌圈直径结论：咽拭子革兰染色革兰染色胆汁溶菌试验奥普托辛试验荚膜染色（石炭酸复红单染）分离培养（血平板）？粪便标本SS平板克氏双糖铁斜面培养基动力-半固体培养基生化反应管观察结果糖发酵试验玻片凝集试验革兰染色H2S试验尿液离心沉淀1500转，10分钟分离培养（EMB平板）革兰染色革兰染色克氏双糖铁斜面培养基动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基观察结果观察结果观察结果完成靛基质试验方法：•1、分离培养、观察菌落特征：粪便标本，用分离划线方法接种SS平板培养基37℃培养18-24h以后观察结果。
肠道益生菌分离鉴定及应用研究
肠道益生菌分离鉴定及应用研究一、引言肠道微生物群落对人体健康的重要性日益受到关注，其中益生菌在维持肠道平衡、促进营养吸收和增强免疫功能等方面发挥着关键作用。
肠道益生菌的分离鉴定及应用研究成为了当前微生物学和医学领域的热门课题。
二、肠道益生菌的分离方法（一）样本采集要分离肠道益生菌，首先需要从健康个体的粪便样本中获取。
在采集过程中，需要确保样本的新鲜度和无污染，通常使用无菌容器进行收集。
（二）选择性培养利用特定的培养基来培养肠道微生物。
例如，一些益生菌如双歧杆菌和乳酸菌在特定的营养条件和环境下能够生长，而其他杂菌则受到抑制。
（三）稀释涂布法将样本进行一系列稀释，然后将稀释液均匀涂布在培养基上，以获得单个菌落。
（一）形态学鉴定观察菌落的形态、大小、颜色和边缘特征，以及菌体的形态、大小和排列方式等。
（二）生理生化鉴定检测微生物的代谢产物、酶活性、对不同物质的利用能力等生理生化特性。
（三）分子生物学鉴定通过 PCR 技术扩增特定的基因片段，如 16S rRNA 基因，然后进行测序和比对分析，以确定其种属。
四、常见的肠道益生菌及其功能（一）双歧杆菌能改善肠道微生态平衡，抑制有害菌生长，增强免疫力，还参与维生素的合成和营养物质的吸收。
（二）乳酸菌产生乳酸降低肠道 pH 值，抑制病原菌生长，促进钙、铁等矿物质的吸收。
（三）芽孢杆菌具有较强的抗逆性，能够调节肠道菌群结构，提高机体抗氧化能力。
（一）食品工业广泛应用于酸奶、奶酪、发酵乳等乳制品，以及饮料、保健品等产品中，为消费者提供营养和健康益处。
（二）医药领域用于治疗肠道疾病，如腹泻、便秘、炎症性肠病等。
还可作为辅助治疗手段，增强药物的疗效，减轻药物的副作用。
（三）畜牧业添加到动物饲料中，提高动物的生长性能、免疫力和饲料利用率，减少疾病的发生。
六、肠道益生菌应用的挑战与展望（一）挑战1、益生菌的存活和定植能力在经过胃肠道的复杂环境后，益生菌的存活数量和在肠道内的定植能力是影响其效果的关键因素。
未知肠道杆菌的分离鉴定程序
弃0.5ml于消毒缸
1 2 34 5 6
NS（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
未知血清 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
(1:10)
1:20 1:40 1:80 1:160 1:320
菌液(摇匀)
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
(4种，1种/人) 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 (阴性对照)
观察结果 观察结果 完成靛基质试验
肛门拭子1/2 EMB平板
克氏双糖铁斜 面培养基
观察结果
动力-靛基质-尿素半 固体琼脂培养基
观察结果
完成靛基质试验
玻片凝集试验
培养基原理
1. EMB平板（伊红美蓝琼脂培养基）
组成：无糖培养基＋乳糖＋伊红＋美蓝 底物 指示剂、抑菌剂
原理： 细菌 乳糖分解产酸：伊红＋美蓝 紫黑/紫红
底物 指示剂
原理：
有些细菌产生尿素酶 分解尿素
结果：
分解尿素
培基变红
不分解尿素 培基不变色
产氨
Urea slant
肥达试验(4人/组)
材料：病人未知血清：1#，2#，3# 菌液：O、H、PAH、PBH（已知Ag） 每组1块多孔板，标记 每人2支吸管
1
2
3
4
5
6
O Ag
H Ag
PAH
PBH
方法
结果： 分解乳糖细菌 菌落变黑，有金属光泽 不分解乳糖细菌 菌落无色、半透明（粉色）
EMB agar
2. 靛基质试验（吲哚试验）
组成：蛋白胨水＋色氨酸
原理：
分解
某些细菌有色氨酸酶 色氨酸
试剂 玫瑰吲哚（红色）
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
肠道杆菌的血清学试验（玻片凝集试验）
材料
1. 菌种：伤寒杆菌培养物、痢疾杆菌培养物 2. 伤寒杆菌的诊断血清，志贺菌诊断血清、载玻片、生理盐水 方法
生理盐水 血清
革兰染色
革兰染色
胆汁溶菌试验 奥普托辛试验
荚膜染色 （石炭酸复红单染）
尿液
离心沉淀 1500转，10分钟
分离培养 （EMB平板）
革兰染色
革兰染色
克氏双糖铁斜 面培养基
动力-靛基质-尿素半 固体琼脂培养基
观察结果
观察结果
观察结果
完成靛基质试验
肛门拭子1/2
EMB平板
克氏双糖铁斜 面培养基
动力-靛基质-尿素半 固体琼脂培养基
标本中未知肠道感染细菌
的分离鉴定程序
脓血便、肛拭子 标本 SS平板,中国兰,EMB平板 选择/鉴别培基
克氏双糖铁培养基, 动力-靛基质-尿素 半固体琼脂培养基
血清学鉴定
生化反应
玻片凝 集试验
标本中未知病原性球菌
的分离鉴定程序
直接涂片染色镜检：观察细菌形态、排列、染色性
标本 观察菌落性状、溶血性、色素 涂片、染色、镜检 挑取可疑菌落 生化反应测定 纯培养 致病性测定 涂片染色镜检
其他：革兰染液、靛基质试剂、玻片等
4.粪便 标本：肛门拭子 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、志贺 菌多价血清、玻片等
脓拭子
分离培养 （血平板）
革兰染色
革兰染色
触酶实验
血浆凝固酶实验
咽拭子
分离培养 （血平板）
底物
底物
底物 指示剂
分解葡萄糖＋乳糖 产生H2S＋铁盐
产酸（乳糖多，产酸多） FeS 培养基成黑色
上下层均为黄色
Double suger iron slant
4. 尿素培养基 组成：基础培基＋尿素＋酚红 底物 指示剂 原理： 有些细菌产生尿素酶 结
培基变红
培基不变色
（凝固酶、耐热核酸酶）
血琼脂平板
血液 脑脊液
肉汤增 菌培养
设计性实验
临床标本中病原菌的分离与鉴定
设计性实验
1.脓汁 标本：脓拭子 培养基：血琼脂平板 其他：3%H2O2、兔血浆、生理盐水、革兰染液、玻片等 2.痰 标本：咽拭子 培养基：血琼脂平板 其他：生理盐水、10%胆盐、革兰染液、玻片等
3.尿 标本：尿液 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基
Urea slant
肥达试验(4人/组)
材料：病人未知血清：1#，2#，3#
菌液：O、H、PAH、PBH（已知Ag）
每组1块多孔板，标记 每人2支吸管
1 O Ag
2
3
4
5
6
H Ag
PAH PBH
方法
1 NS（ml） 未知血清 (1:10) 菌液(摇匀) (4种，1种/人) 0.5 0.5
1:20
观察结果
观察结果
完成靛基质试验
玻片凝集试验
培养基原理
1. EMB平板（伊红美蓝琼脂培养基）
组成：无糖培养基＋乳糖＋伊红＋美蓝
底物 指示剂、抑菌剂 原理：
细菌 分解 乳糖
结果： 分解乳糖细菌
产酸：伊红＋美蓝
菌落变黑，有金属光泽
紫黑/紫红
不分解乳糖细菌
菌落无色、半透明（粉色）
EMB agar
2. 靛基质试验（吲哚试验）
弃0.5ml于消毒缸
2 0.5 0.5
1:40
3 0.5 0.5
1:80
4 0.5 0.5
1:160
5 0.5 0.5
1:320
6 0.5
0.5
1:40
0.5
1:80
0.5
1:160
0.5
1:320
0.5
0.5
1:640 (阴性对照)
37℃水浴过夜
肥达试验
H凝集：絮状，以疏松大团沉于管底 O凝集：颗粒状，以坚实凝片沉于管底 凝集程度的判定以“＋”、“－”号表示
组成：蛋白胨水＋色氨酸
原理： 某些细菌有色氨酸酶 试剂 玫瑰吲哚（红色） 分解 色氨酸 吲哚（无色）＋柯氏
结果：液面形成玫瑰红色
吲哚试验
3. 克氏双糖铁斜面培养基反应试验 组成：无糖培基＋1份葡萄糖＋10份乳糖＋铁盐＋酚红 营养 原理： 只分解葡萄糖 产酸（葡萄糖少，产酸量少）
上层氧化 呈红色 下层缺氧 不氧化 呈黄色
1:80 1:160 ++ +++ + ++ ++ -
肥达反应
1 2 3 4 5
O
H PAH PBH PCH
1:160
1:320 1:40 伤寒
1:320
1:80 1:80 伤寒早期
1:160
1:80 1:320 1:80 副甲
1:40
1:80 1:80 1:40 1:40 阴性
1:40
1:320 1:320 1:320 回忆反应／疫苗接种
＋＋＋＋
＋＋＋ ＋＋
上清完全透明，细菌全部形成凝集块
细菌绝大多数凝集，液体有轻度混浊 50％细菌形成凝集，液体半澄清
＋
－
仅少数细菌凝集，液体比较混浊
液体均匀混浊，无凝集（沉于管底，形成圆 形沉淀，边缘整齐）
肥达试验
以呈现＋＋凝集的血清最高稀释度作为该血清的凝集效价
1 1:40 O H PAH PBH ++++ ++++ ++ + 2 3 4 1:320 ++ 5 1:640 6 对照 -