拮抗菌生物防治果蔬采后病害的研究进展
水果采后致病菌及拮抗酵母防治机制研究进展
果树资源学报 2023,4(4):73-79水果采后致病菌及拮抗酵母防治机制研究进展蔺 楠,杜静婷,施俊凤*,张立新*(山西农业大学食品科学与工程学院,山西太原030031)收稿日期:2023-04-20基金项目:山西省自然科学基金项目(面上)(20210302123422);山西省重点研发计划项(202102140601017);山西省现代农业产业技术体系(果树)建设专项资金(S X F R S -2022)㊂第一作者简介:蔺 楠(1998-),女,硕士在读,主要从事果蔬采后病害和生物防治研究㊂*通信作者:施俊凤(1977-),研究员,主要从事果蔬采后病害和生物防治研究㊂E -m a i l :s j f t y @126.c o m 张立新(1966-),研究员,主要从事果蔬贮藏保鲜技术研究㊂E -m a i l :139********@139.c o m摘 要:水果由于其含有丰富的营养物质,成为人类饮食中不可或缺的重要资源㊂但是水果在采收后处理不当会造成腐烂,带来严重亏损㊂这些腐烂主要是由真菌导致,其包括扩展青霉㊁灰葡萄孢霉㊁链格孢菌㊁曲霉和毛霉等㊂真菌不仅侵染果实导致腐烂,而且可分泌毒素,引发食品安全问题㊂酵母菌防治由于不产生有害代谢物,对环境友好,成为水果采后病害防治及真菌毒素降解的新策略㊂综述了采后常见病原真菌及其对水果的侵染特性,果实采后致病菌的侵染机理,以及酵母菌的生防机制㊂关键词:水果;采后病害;真菌毒素;拮抗酵母;生物防治文章编号:2096-8108(2023)04-0073-07 中图分类号:S 436.611.1+6 文献标识码:AR e s e a r c h P r o g r e s s i n C o n t r o l M e c h a n i s m o f P o s t h a r v e s t F r u i t P a t h o g e n i c B a c t e r i a a n d A n t a go n i s t i c Y e a s t L I N N a n ,D U J i n g t i n g ,S H I J u n f e n g *,Z H A N G L i x i n *(C o l l e g e o f F o o d S c i e n c e a n d E n g i n e e r i n g ,S h a n x i A g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t y ,T a i yu a n S h a n x i 030031,C h i n a ) A b s t r a c t :F r u i t h a s b e c o m e a n i n d i s p e n s a b l e a n d i m p o r t a n t r e s o u r c e i n h u m a n d i e t b e c a u s e o f i t s r i c h n u t r i e n t s .H o w e v e r ,f r u i t i s p r o n e t o d i s e a s e a f t e r h a r v e s t ,r e s u l t i n g i n d e c a y a n d s e r i o u s l o s s e s .F u n g i a r e t h e m a i n p a t h o g e n s c a u s i n g f r u i t d e c a y.T h e s e f u n g i m a i n l y i n c l u d e P e n i c i l l i u m e x p a n s u m ,B o t r y t i s c i n e r e a ,A l t e r n a r i a ,A s p e r g i l l u s a n d M u c o r .F u n g i n o t o n l yi n f e c t f r u i t a n d c a u s e r o t ,b u t a l s o s e c r e t e t o x i n s ,c a u s i n g f o o d s a f e t y p r o b l e m s .Y e a s t c o n t r o l h a s b e c o m e a n e w s t r a t e g yf o r f r u i t p o s t -h a r v e s t d i s e a s e c o n t r o l a n d m y c o t o x i n d eg r a d a t i o n b e c a u s e i t d o e s n o t p r o d u c eh a r m f u l m e t a b o li t e s a n d i s e n v i r o n m e n t a l l yf r i e n d l y .T h i s p a p e r s u m m a r i z e d t h e c o m m o n p a t h og e n i c f u n gi a f t e r h a r v e s t a n d t h e i r i n f e c t i o n c h a r a c t e r i s t i c s t o f r u i t s ,t h e i n -f e c t i o n m e c h a n i s m o f p a t h o g e n i c b a c t e r i a a f t e r h a r v e s t ,a n d t h e b i o l o g i c a l c o n t r o l m e c h a n i s m o f ye a s t .K e yw o r d s :f r u i t ;p o s t h a r v e s t d i s e a s e ;m y c o t o x i n ;a n t a g o n i s t i c y e a s t ;b i o l o g i c a l c o n t r o l 水果中含有丰富的营养成分,定期摄入水果可以预防肥胖㊁心血管㊁眼睛和骨骼等疾病[1]㊂我国是水果消费大国,消费量达到全球总量的60%以上㊂然而,水果在采后容易受到各种致病菌的入侵而引起变质,导致严重亏损[2]㊂其中采后发生病害引起的腐烂损失最严重,据统计,我国每年水果蔬菜因腐烂造成的经济损失占其总产值的30%以上,可达750亿元[3-4]㊂水果采后生理性衰老㊁病害的侵染以及外界环境因素的共同作用,引起了水果的腐烂变质㊂引起水果采后病害的病原菌主要为真菌[4]㊂这些真菌包括青霉属(P e n i c i i i i u m s p p .)㊁灰葡萄属(B o t r yt i s c i n e r e a )㊁交链孢霉属(A l t e r n a r i a s p p .)㊁曲霉属曲霉(A s p e r g i l l u s s p p .)和毛霉属(M u c o r s p p .)等㊂这些病原真菌能够在较低的温度条件下正常生长并产孢,它们繁殖速度快,对环境的适应能力强,因而可迅速侵染果实㊂这些病原真菌主要从果实的伤口部位或皮孔处入侵,引起伤口周围软化和水溃化,并长出菌丝形成霉斑,霉斑往往会分泌大量分生孢子,引起果实溃烂并发出腐败气味[5]㊂这些致病菌不仅导致果实腐烂,而且常常会分泌一些次生代谢产物如展青霉素,黄曲霉素,赭曲霉毒素等,对于人体产生较大的危害作用[6]㊂试验表明,这些毒素有些具有致癌㊁致突变和免疫等负面作用,有些是神经毒素可引起恶心㊁呕吐㊁便血㊁惊厥等㊂目前用于防治水果采后病害的方法主要包括化学防治㊁物理防治和生物防治㊂物理方法包括低温贮藏㊁热处理㊁辐照处理等㊂物理方法成本较高,实施难度较大,受设备条件限制较多㊂化37Copyright ©博看网. All Rights Reserved.学防治法是使用化学杀菌剂来进行防治[7],常见的化学杀虫剂有双胍盐㊁抑霉唑㊁苯菌灵等㊂这些化学杀菌剂不易分解,其在果实表面残留问题会带来食品安全隐患[8],同时,化学药剂常常会导致病原菌产生抗性,降低防治效果[9]㊂生物防治的方法是通过生防菌㊁病原菌以及环境之间相互影响,改善微环境,达到防病的目的㊂生物防治的方法也被认为是最有可能替代化学杀菌剂的方法之一[10]㊂迄今为止,人们已经筛选鉴定出许多有效的拮抗菌株[11],其中包括细菌(P s e u d o m o n a s s p p, B u r k h o l d e r i a s p p.等)㊁小型丝状真菌(T r i c h o d e r-m a s p p.,A s P e r g i l l u s s p p.等)和酵母菌(A u r e o-b a s i c h i u m s p p.,K l o e c k e r a s p p.,M e t s c h n i k o w i a s p p.,R h o d o t o r u l a s p p.)等㊂H a s s a n等[12]发现生防菌沙福芽孢杆菌(B a c i l l u s s a f e n s i s)B3可以通过水解病原菌的细胞壁,来抑制草莓采后灰霉病的发生㊂L u[13]从土壤中分离到洋葱伯克霍尔德氏菌(B u r k h o l d e r i a c o n t a m i n a n s)M S14,该菌对多种植物病原真菌表现了广泛的杀灭作用,可以抑制黑曲霉(A s p e r g i l l u s n i g e r)㊁青霉菌(P e n i c i l l i u m s p.)㊁互隔交链孢菌(A l t e r n a r i a a l t e r n a t a)㊁立枯丝核菌(R h i z o c t o n i a s o l a n i)等多种病原菌的生长,而且可使真菌的细胞内部和细胞形态发生畸变㊂在拮抗菌中,拮抗酵母由于对环境和人体健康友好,一般不产生抗菌素,成为了采后生物防治领域的一大亮点[14]㊂关于拮抗酵母应用于果蔬釆后保鲜的报道也较多㊂张奇儒等[15]从土壤中发现1株对梨果青霉病有防治效果的异常威克汉姆酵母(W i c k e r h a m o m y c e s a n o m a l u s),经检测证实该菌株无毒性,在浓度为1ˑ108个/m L时生防效果显著;王淑培[16]发现桔梅奇酵母(M e t s c h n i k o w i a c i t r i e n-s i s)能在果实伤口处快速定殖,形成生物膜,不仅能有效控制橘采后酸腐病,还能显著抑制柑橘白地霉(G e o t r i c h u m c i t r i-a u r a n t i i)孢子萌发及菌丝生长㊂1水果采后主要致病菌及其毒素1.1扩展青霉扩展青霉(P e n i c i l l i u m e x p a n s u m)可引起苹果㊁梨㊁葡萄等果实采后青霉病[8]㊂该菌属子囊菌门(a s c o m y c o t a)散囊菌纲(E u r o t i o m y c e t e s)青霉属(P e n i c i l l i u m)[17]㊂果实主要在成熟时期容易受到其侵染,发病后病斑呈褐色圆形状,会使果实变软烂并逐渐从发病处扩散[4],在适宜环境下,8d左右便会完全腐烂㊂在温度和湿度较高的情况下,病斑处会出现霉块,初期为白色,后面逐渐变为青绿色,并伴有浓烈的腐烂味㊂菌落草绿色,小斑点状,中央一般呈凸起状,背面黄褐或肉桂色,菌丝无色透明,聚集时常呈白色,分子孢子梗呈不对称帚状分枝,且表面光滑,呈淡青绿色,一般近圆形或圆形,孢子大小为(1.8~2.2)μmˑ(1.8~2.2)μm[18]㊂扩展青霉分泌的毒素为展青霉素(P A T),又名棒曲霉素㊁珊瑚青霉素㊂该毒素还可由棒形青霉(P.c l a v i-f o r m e)㊁粒状青霉(P.g r a n u l a t u m)㊁产黄青霉(P.c h r y s o g e n u m)和曲霉属的棒曲霉(A.c l a v a l u s)等分泌[19]㊂展青霉素对胃具有刺激作用,可从口腔进入消化系统并入侵至肠道,还可引起肠炎㊁胃溃疡和上皮细胞恶化等疾病,当胃肠道黏膜受损,毒素可随着血液在人体内循环,引起免疫系统受损[20]㊂展青霉素分子的内酯结构和半缩醛结构是引起其毒性的主要机制,因此这些结构的消失被认为是解毒的标志[21]㊂展青霉素具有强的亲水性和稳定性,容易通过食物和饮用水积累在人体内[22]㊂1.2灰葡萄孢霉灰葡萄孢霉(B o t r y t i s c i n e r e a)属子囊菌门(a s-c o m y c o t a)锤舌菌纲(L e o t i o m y c e t e s)核盘菌科(S c l e r o t i n i a c e a e),可侵染葡萄㊁番茄㊁梨㊁桃㊁草莓等多种果蔬,引发灰霉腐烂病[23],该菌对低温有很好的适应性㊂果实发病初期病斑为水浸状,淡褐色,后病斑颜色逐渐加深,环境湿度大时可产生深灰色霉状菌丝㊂灰葡萄孢霉不仅可侵染果实,还可侵染植株,慈志娟等[24]研究表明灰葡萄孢霉可以在草莓生长期间侵染其叶片,叶柄,花瓣等部位,首先会从衰老受损部分开始入侵,感染后果实的颜色变为浅褐色或果肉坏死腐烂,病斑处出现灰色霉菌㊂灰葡萄孢霉不同的菌株常常致病性差异较大,K e r s s i e s 等[25]对30株具有不同致病性的灰葡萄孢霉进行随机扩增多态性D N A分析,发现菌株的侵染能力㊁采样时间㊁地点和R A P D模式之间并无关联㊂二环倍半萜烯(B o t r y d i a l)是灰葡萄孢霉产生的最主要的毒性,其毒性也最强,其他毒素大部分为其前体或衍生物㊂研究发现B o t r y d i a l并不会由植物本身分泌,而是植物组织被感染后产生,且宿主越衰败,B o t r y d i a l含量越高,因此灰葡萄孢霉主要通过该毒素致病[26]㊂1.3链格孢霉链格孢霉菌(A l t e r n a r i a s p p.)又称脉孢霉,属于半知菌亚门(D e u t e r o m y c o t i n a)丝孢纲(H y p h o-m y c e t e s)暗色孢科(D e m a t i a c e a e),易在低温环境下47果树资源学报2023,4(4)Copyright©博看网. All Rights Reserved.生存[27]㊂其菌丝体呈黑色,分生孢子呈倒棒状㊁顶部延长成喙状,有纵横格,多个为链状[28]㊂营养菌丝匍匐生长,菌落整体呈现黑色绒状[29],背部呈深褐色有同心螺纹[30]㊂链格菌不仅能够侵染农作物还能侵染多种果蔬,包括寄生㊁腐生和兼性寄生或腐生[31]㊂在低温避光潮湿的环境下,链格孢霉会产生毒素,这些毒素包括链格孢酚(a l t e r n a r i o l,A O H)㊁细链格孢菌酮酸(t e n u a z o n i c a c i d,T e A)㊁链格孢甲基醚(a l t e r n a r i o l m o n o m e t h y l e t h e r,A M E)㊁细格菌毒素Ⅰ㊁Ⅱ㊁Ⅲ㊁链格孢霉烯(a l t e n u e n e,A L T)[32]㊂它们具有基因毒性㊁细胞毒性㊁和致突变性[33]㊂根据其结构可分为5大类:二萘嵌苯及其衍生物㊁二苯并吡喃酮类及其衍生物㊁细交链格孢菌酮酸及其衍生物㊁丙三羧酸酯类化合物和混杂结构[34]㊂1.4黑曲霉菌黑曲霉菌(A s p e r g i l l u s n i g e r)属于半知菌类亚门(D e u t e r o m y c o t i n a)丝孢纲(H y p h o m y c e t e s)曲霉属(A s p e r g i l l u s)㊂分生孢子梗为球形顶囊,分生孢子直径约2.5~4.0μm㊂菌落由白色经黄色后变为黑色,厚绒状[35]㊂黑曲霉侵染果实后,会使果实腐烂皱缩,糖和酚类等营养物质流失,最终严重影响果实口感[36]㊂黑曲霉菌会产生赭曲霉毒素㊁黄曲霉毒素㊁奥卡那胺和阿库雷星等类似物,能损伤人体器官,同时还具有致癌等不良影响㊂且毒素不会高温灭活,稳定性较高[36]㊂1.5毛霉菌毛霉(m u c o r)又名白霉,属于接合菌亚门(Z y-g o m y c o t i n a)接合菌纲(Z y g o m y c o t i n a)毛霉属(M u-c o r a l e s)[37]㊂是多种果蔬采后病害的病原菌,其无法通过果皮侵染,只能感染果实伤口㊂霉菌菌丝为白色,菌丝体十分发达,有分枝,一般无假根及匍匐菌丝,个别菌种罕见假根㊂在室温下几天就会完全侵染果实,并在较短时间内侵染健康果实,侵染后果实腐烂软塌,内部汁液化较重㊂毛霉在6ħ以后生长繁殖会受到抑制[38]㊂毛霉菌会引发毛霉病,是一种深部真菌病,其广泛存在于自然界中,为土壤㊁植物㊁面包㊁水果㊁粮食等的常见腐生菌和空气中的气生菌㊂主要通过空气孢子吸入感染㊂2果实采后致病菌的侵染机理2.1分泌细胞壁降解酶细胞壁是致病菌入侵的首道防线㊂致病菌侵入植物时通过释放各种酶来降解蛋白质㊁多糖以及芳香族聚合物,使植物的细胞壁产生破裂,以此来降低植物的防御功能[39]㊂卢晶晶等[40]研究发现,病原菌释放各种酶类来使病原菌成功入侵宿主,同时酶降解产物可以促进致病菌生长,这一结论也在基因方面得到验证,如切除果胶裂解酶基因C c p e l A可以使炭疽病菌侵染绿色番茄果实的能力下降[41]㊂2.2分泌毒素致病菌分泌的毒素也能使果实发病㊂毒素会影响原有胞内构造,破坏膜通透性和果实防御系统,以此来降低果实抗性,干扰果实生理代谢,使宿主病变或衰亡[42]㊂比如,烟曲霉分泌的二羟基萘(D i-h y d r o x y n a p h t a l e n e,D H N)-黑色素能通过破坏宿主防御系统来增强其致病能力[43]㊂灰葡萄孢霉主要通过B o t r y d i a l毒素致病,使宿主细胞结构发生变化,引发宿主软腐,组织坏死[26]㊂马铃薯立枯丝核菌产生的毒素可使马铃薯幼苗细胞膜透性增加,电解质外渗[44]㊂莲子草假隔链格胞毒素可作用于空心莲子草细胞叶绿体基粒片层,使叶绿体基粒片层肿胀甚至发生紊乱[45]㊂2.3分泌辅助因子致病菌入侵果实时,果实通过激发自身的先天免疫系统来进行防御㊂一方面,果实可以识别致病菌的一些分子,然后通过信号传导来激活相关的分子模式(P A M P)触发免疫反应(P T I)[46]㊂另一方面,当致病菌入侵时会分泌一些效应因子来抑制宿主的防御[46]㊂比如,核盘菌可以分泌草酸降低宿主的p H,以确保其细胞壁降解酶P G等的活性表达,同时宿主抗病相关酶活性降低,加速入侵㊂此外,草酸还可与植物细胞壁的C a2+螯合,而C a2+可以参与信号传导和防御反应,从而阻碍宿主正常代谢㊂而螯合的产物草酸钙,可形成堵塞导管和维管束的晶体,宿主的水分代谢也受影响,从而加速发病[47]㊂2.4p H调节致病菌在入侵宿主过程中,会分泌一些酸碱物质来调整p H,以此来增强致病菌入侵能力,确保完成入侵[48]㊂比如,扩展青霉和指状青霉等产酸菌在入侵苹果时分泌葡萄糖酸和柠檬酸等有机酸改变环境p H,在适宜p H条件下会促进霉菌毒素和果胶酶的产生和表达[49-50]㊂互隔交链孢(A l t e n a r i a a l t e r-n a t a)通过分泌氨类物质将p H值由酸性转变为碱性,会使纤维素酶关键基因A a K l激活,加速了A.57蔺楠,等:水果采后致病菌及拮抗酵母防治机制研究进展Copyright©博看网. All Rights Reserved.a l t e r n a t a对在柿子体内的入侵[51]㊂3拮抗酵母的生防机制3.1营养和空间竞争拮抗酵母常以二糖和单糖的碳水化合物和氮源为养料[52],大量繁殖后在伤口处聚集形成生物膜,空间上阻断了致病菌的侵染[7,53]㊂K l e i n等[54]发现在培养基中加入0.5%蔗糖和1%硫酸铵有利于酵母菌生长,可刺激生物膜产生,提高对柑桔酸腐病的抑制效力㊂此外,酵母中抑制性化合物的合成通过原位或非原位吸收营养物质而增加,提高了它们对植物病害的生物防治能力㊂如李侨飞[55]等发现拟粉红锁掷孢酵母Y16(S p o r i d i o b o l u s p a r a r o s e u s)能在短时间内快速生长繁殖,以此来构成一个完整的菌膜,阻隔致病菌入侵,抑制葡萄黑曲霉(A s p e r-g i l l u s n i g e r)的生长㊂田亚琴[56]发现将葡萄糖作为外源营养物质加到伤口处时,与单独加美极梅奇酵母相比抑制率更高,且越早接种效果越好㊂3.2杀手毒素杀手毒素通常是由不同品种的酵母产生的糖基化蛋白质,可以破坏特定的细胞壁成分,包括β-1, 3-d-葡聚糖,β-1,6-d-葡聚糖,甘露蛋白和几丁质等,从而导致病原真菌细胞死亡[57]㊂所有毒素都是在酸性条件下产生的,它们的活性在一定范围内随着培养基的p H和温度的增加而降低[58]㊂杀手毒素附着在细胞膜上,在细胞膜上它们与导致细胞变化的次级受体相互作用㊁D N A合成抑制㊁细胞周期破坏和R N A片段化[59]㊂如膜醭毕赤酵母(P i c h i a m e m b r a n i f a c i e n s)可以产生两种杀手毒素P M K T1和P M K T2,这两种毒素对腐败酵母和病原菌均有杀伤作用㊂3.3溶解酶酵母可以通过产生葡聚糖酶㊁几丁质酶和蛋白酶等溶解酶对病原菌产生拮抗作用,其能够将致病菌细胞壁分解,破坏其结构,导致细胞溶解和死亡[60]㊂田亚琴[56]发现在特殊培养基上接种美极梅奇酵母(M e t s c h n i k o w i a p u l c h e r r i m a)后,该酵母能够分泌胞外几丁质酶和胞外葡聚糖酶㊂李侨飞[55]试验表明拟粉红锁掷孢酵母Y16(S.p a r a r o s e u s)能降解青霉菌的几丁质成分,会使霉菌菌丝发生坏死并抑制霉菌生长繁殖㊂杨其亚[61]发现胶红酵母(R h o d o t o r u l a m u c i l a g i n o s a)能提高β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶活性,从而延缓苹果青霉病㊂3.4诱导宿主抗性酵母细胞壁的一些物质可以诱导宿主产生抗性,加速果实伤口愈合过程,从而达到生防作用[62]㊂美极梅奇酵母(M.p u l c h e r r i m a)可以诱导苹果果实中的细胞壁相关酶类,并能够提高芒果P P O㊁P O D活性,降低了芒果炭疽病的发病率[63]㊂试验表明,将膜醭毕赤酵母(P.m e m b r a n i f a c i e n s)接种于桃果实时,可以使果实产生多种抗性蛋白酶,这些酶可以使果实由于氧化造成的伤害得到缓解,延缓果实腐烂[64]㊂诱导寄主抗性的两种基本形式包括系统获得性抗性(S A R)和系统诱导抗性(I S R)[65]㊂S A R是多种病程相关蛋白(P R)共同作用的结果,拮抗酵母作为一种生物刺激因子,可以激发果实中多种病程相关蛋白的表达,从而增强果实对病害的抗性㊂如梅奇酵母属(M e t s c h n i k o w i a s p.)可以有效控制采后柠檬的蓝色和绿色青霉病,而且酵母菌的浓度越高,柠檬的腐烂率和病斑直径就越低,同时能够显著提高柠檬果实中抗病相关酶几丁质酶(C H T)㊁苯丙氨酸解氨酶(P A L)和过氧化氢酶(C A T)的活性[66]㊂红东孢酵母(R h o d o s p o r i d i u m k r a t o c h v i l o v a e)可以增强果实病程中蛋白基因的表达,提高梨果体内多种防御酶活性,同时果实发病率也降低[67]㊂3.5挥发性代谢物质近年来,国内外许多研究表明,拮抗菌产生的挥发性物质可以用于防治果实病害[68]㊂由于挥发性物质分子小㊁易挥发扩散,杀菌范围广等优点得到广泛应用[69]㊂如郭虹娜等[70]发现有孢汉逊酵母(H a n s e n i a s p o r a u v a r u m)挥发代谢物的主要抑菌成分是桂皮醛,并通过研究发现使用62.5μL/L的桂皮醛对草莓进行熏蒸处理能有效保持草莓品质,延缓品质下降,对草莓采后灰霉病抑制效果明显,能抑制贮藏期间草莓M D A含量的升高,有效诱导草莓C A T㊁P P O㊁A P X相关抗性酶活,延缓S O D酶活的下降,对草莓相关抗性基因表达的影响与上述酶活类似㊂陈莹莹等[71]研究发现膜醭毕赤酵母(P. m e m b r a n i f a c i e n s)产生的挥发性物质可以有效抑制灰葡萄孢菌,且熏蒸第2天就抑菌率超过70%,同时验证了挥发性物质可破坏菌丝细胞膜使细胞内容物大量外泄,同时分生孢子数量也大大减少㊂3.6活性氧作用植物遭受致病菌胁迫时,首先会诱导产生活性氧(R O S),包括超氧阴离子(S u p e r o x i d e a n i o n,O2-)67果树资源学报2023,4(4)Copyright©博看网. All Rights Reserved.和过氧化氢(C h y d r o g e n p e r o x i d e,H2O2)㊂超氧化物歧化酶(S O D)可以催化超氧阴离子自由基歧化为H2O2和O2,并且在F e2+或C u2+离子存在下, H2O2通过F e n t o n反应进一步转化为㊃O H自由基[72],从而达到清除O2-的目的㊂活性氧的清除包括酶促反应和非酶促反应,其中酶促反应包括过氧化物酶(P O D)和抗坏血酸过氧化物酶(A P X)等,而非酶途经包括植物自身含有的的抗氧化物质如谷胱甘肽(G S H)和谷胱甘肽还原酶(G R)等㊂C a s t o r i a 等[73]发现罗伦隐球酵母(C.l a u r e n t i i)对果实病害的抑制能力与其对R O S的耐受能力呈正相关,也说明了氧化应激反应在生防机制中的作用㊂M a c a r i-s i n D[74]研究发现将两种拮抗酵母(梅奇酵母和丝酵母)接种于不含营养的培养基或苹果表面(置于无营养空间),会产生大量超氧阴离子,而接种于果实伤口处则导致果实组织中产生大量H2O2,在伤口处收集的酵母中也会含有许多H2O2,说明R O S是酵母提高其拮抗能力的其中一个原因㊂4结论这些病原菌入侵果实后会分泌细胞壁降解酶,毒素,辅助因子以及改变p H来使水果腐烂变质㊂同时拮抗酵母可以通过竞争空间和营养,分泌溶解酶,杀手毒素,诱导宿主抗性等方式来抵御致病菌,以维持果实正常品质并保障食品安全㊂拮抗酵母具有来源广泛㊁适应性强㊁繁殖能力强㊁代谢产物无毒且无致敏性的特点,逐步应用于有害微生物的防控领域㊂未来可继续从体内外两个方向筛选种类更多,效果更强的拮抗酵母菌株,并进行食品安全验证㊂同时对酵母菌在分子水平上的代谢机制进行深入的研究分析,系统性地总结和归纳拮抗酵母在分子水平上的最新研究进展,进一步研究拮抗酵母的拮抗机制并为基因工程改性高活性拮抗酵母提供科学参考㊂参考文献[1] V A L C K E M,B O U R G A U L T M H,R O C H E T T E L,e ta l.H u m a n h e a l t h r i s k a s s e s s m e n t o n t h e c o n s u m p t i o no f f r u i t s a n d v e g e t a b l e s c o n t a i n i n g r e s i d u a l p e s t i c i d e s:A c a n c e r a n d n o n-c a n c e r r i s k/b e n e f i t p e r s p e c t i v e[J].E n v i r o n m e n t i n t e r n a t i o n a l,2017,108:63-74.[2] G R A M I S C I B R,L U T Z M C,L O P E S C A,e t a l.E n-h a n c i n g t h e e f f i c a c y o f y e a s t b i o c o n t r o l a g e n t s a g a i n s tp o s t h a r v e s t p a t h o g e n s t h r o u g h n u t r i e n t p r o f i l i n g a n dt h e u s e o f o t h e r a d d i t i v e s[J].B i o l o g i c a l C o n t r o l,2018,121:151-158.[3]张红印,蒋益虹,郑晓冬,等.酵母菌对果蔬采后病害防治的研究进展[J].农业工程学报,2003,19(4):23-27.[4]罗杨.膜醭毕赤酵母对柑橘采后青绿霉病害的生物防治及机理研究[D].西南大学,2011.[5]卞文怡.微胶囊化水杨酸对苹果采后青霉病的诱导抗病研究[D].上海应用技术大学,2019.[6]王利平,王丽霞,刘保友,等.苹果及其制品中展青霉素研究进展[J].落叶果树,2022(54):39-43. 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植物根际拮抗菌对微生物的杀菌机制研究与应用
植物根际拮抗菌对微生物的杀菌机制研究与应用植物根际拮抗菌是指一类能够在植物的根际环境中与其他微生物竞争资源并抑制其生长繁殖的菌株。
它们通过各种方式对微生物进行杀菌，有重要的研究和应用价值。
本文将重点介绍植物根际拮抗菌对微生物的杀菌机制以及在农业生产中的应用。
植物根际拮抗菌通过多种方式对微生物进行杀菌。
首先，它们可以通过竞争资源的方式抑制其他微生物的生长。
拮抗菌利用植物根系分泌的有机物和周围环境中的养分进行生长，减少了可供其他微生物生长的资源，从而抑制了它们的生理活动。
此外，拮抗菌还能产生一些抑菌物质，如抗生素、酶类和毒素等，通过直接杀死微生物，抑制其生长繁殖。
此外，拮抗菌还能产生一些细胞外物质，如鞭毛、黏附因子和降解酶等，通过黏附和溶解微生物细胞壁，进一步杀死它们。
植物根际拮抗菌在农业生产中的应用十分广泛。
首先，通过利用植物根际拮抗菌对病原微生物的抑制作用，可以有效地防治作物病害。
例如，拮抗菌可以抑制一些常见的植物病原真菌，如青枯病菌、炭疽菌和锈菌等，从而减少病害的发生和传播。
其次，植物根际拮抗菌还可以提高农产品的质量和产量。
拮抗菌通过抑制病原微生物的生长，减少作物的感染率和病害程度，从而增加作物的产量并提高农产品的品质。
此外，拮抗菌还可以提高土壤的生物多样性和生物活性，促进土壤的富营养化和有机质的积累，为农作物的生长提供良好的土壤环境。
综上所述，植物根际拮抗菌对微生物具有重要的杀菌作用，其机制主要包括竞争资源、产生抑菌物质和黏附降解微生物细胞壁等。
植物根际拮抗菌在农业生产中具有广泛的应用价值，可以用于防治作物病害、提高农产品的质量和产量，促进土壤的富营养化和有机质的积累，为农作物的生长提供良好的土壤环境。
随着对植物根际拮抗菌机制的进一步研究和应用实践的深入，相信植物根际拮抗菌在农业生产中的作用会越来越重要。
植物根际拮抗菌具有广泛的应用潜力，不仅在农业生产中有重要作用，还可以用于其他领域。
首先，植物根际拮抗菌可以应用于环境治理。
果蔬拮抗内生菌的筛选鉴定及拮抗能力的研究
(T201534)。 作者简介：石慧，女，硕士，教授，研究方向为应用微生物的研究与教学。
1.2 实验 1.2.1 果蔬内生菌的分离
从购买回的蔬菜、水果中选取健壮的、无损伤的 完整植株或个体备用。将不同蔬菜茎、叶，水果分别 用自来水冲洗晾干，各称取 10g 置于超净工作台中， 以 70% 酒精浸泡清洗 5min，而后用 0.1% 升汞浸泡 3min，再将植物组织置于磁力搅拌器中，用无菌水搅 拌冲洗 3 次，每次 5min。清洗完后分别将植物组织 置于牛肉膏蛋白胨固体培养基培养，37℃培养 48h， 观察有无菌落产生，以此检验表面消毒是否彻底。 样品晾干后转入无菌研钵中研磨匀浆，加 10mL 无菌 水碾碎，转移至 50mL 离心管中，静置 15min 后，各取 100μL 涂平板，28℃培养 48～72h。根据菌落形态、 颜色等挑取单菌落，划线分离纯化后保存。 1.2.2 拮抗性果蔬内生菌的筛选
VOL.44,No.11 November.2019
Grain science and technology and economy 粮食科技与经济
95
5-CTACGGCTACCTTGTTACGA-3 为引物，扩增得到 各菌株的 16 SrDNA，测序、并在 NCBI 中做序列比对， 鉴定各菌株的种属关系。 1.2.4 拮抗性果蔬内生菌对食源性致病菌的拮抗特性
94
技术与装备 Technology and Equipment
VOL.44,No.11 November.20赛格，林幸明
（武汉设计工程学院 食品与生物科技学院，湖北 武汉 430205）
[ 摘要 ] 本文从果蔬中分离到 18 株植物内生细菌。通过拮抗试验，得到 3 株具有明显抑菌性能的植物内生菌 S6， W3，W6。经形态学、重要生理生化特征及分子生物学鉴定，初步判断 S6 和 W3 可能为枯草芽孢杆菌或其亚种， W6 可能为蜡样芽孢杆菌或其亚种。选用 6 种致病菌为敏感菌测试这 3 株拮抗菌株发酵液的抑菌能力，实验结果 显示：这 3 株菌对大肠杆菌 O157：H7、金黄色葡萄球菌、雷根斯堡约克菌、沙门氏菌、阴沟肠杆菌和嗜水气单胞菌 等病原菌均具有拮抗作用，具有一定的研究及应用价值。 [ 关键词 ] 内生菌；筛选鉴定；拮抗 中图分类号：S436.418 文献标识码：A DOI：10.16465/431252ts.20191124
拮抗菌技术在果蔬采后病害控制中的应用
病原真 菌的生长， 以达到抑制果蔬采后 腐烂的一 门技 术 ， 果蔬 采后病 害控 制方面具有 良好 的前景。本 文对拮抗 菌 在 的利 用途径 、 用机制 以及提 高拮抗 菌作 用效果的方法进行 了综述， 作 并对其发展趋 势进行 了展望。
关键词 ： 抗 菌； 拮 采后 病 害 ； 生物 防 治
柑 橘果 实上 的酵母 菌 和细 菌 自发地抑 制 了病原 菌 的 生长， 清洗水果 就是洗掉 了附生在 上面的拮抗 菌而使 水果易 于腐烂［ ５ １ 。 １ 人为引入拮抗 菌 ． ２ 第一 篇拮 抗菌 的文 章是利 用 木霉 菌来 防止 草莓
ｆｕ ｔ ｎ ｅ ｅａ ｌ ｒ ｄ ｃｓｔ ｕ ｐ ｅ ｓｔ ｅｇ ｏ ｈ ｏ ａｈ ｇ ｎ ｃｆ ｎ ｉｄ ｒｎ ｏ ｔ ｈａｖ ｓ． ｈ ｅ ｈ ｏｏ ｙｃ ｎ ｒ ｉ ａ ｄ ｖ ｇ ｔｂ ｅｐ ｏ ｕ ｔ ｏ ｓ ｐ ｒ ｓ ｈ ｒ ｗｔ ｆｐ ｔ ｏ ｅ ｉ ｕ ｇ ｕ ｇｐ ｓ－ ｒ ｅ ｔ Ｔ ｅ ｔｃ ｎ ｌｇ ａ ｉ
Ｂｉ ｌｇ ｃ ｌＣｏ ｔ ｏ ｆＰｏ ｔ ａ ｖ ｓ ｓ ａ ｅ ｆＦｒ ｉｓ ａ ｇ ｔ ｂｌｓｂ ｔ ｇ ｎ ｓｉ ｉ ｒ ｏ ｇ ｎ ｓ ｏｏ ｉ ａ ｎ ｒ ｌｏ ｓ ｈ ｒ ｅ ｔＤｉｅ ｓ ｓｏ ｕ ｔ ｎｄ Ｖｅ ｅ ａ ｅ ｙ Ａｎ ｏ ｉｔｃ Ｍ ｃ ｏ ｒ ａ ｍ ａ ｉ
取 代农 药对果蔬 进行采后 处理 ， 已显示 出巨大 的应 用 前景问 。本文重点介绍拮抗 菌防治果蔬采后病 害的一些
研究进展 。
仅出现酵母和细菌 ； 将洗果液稀释后培养 ， 出现柑橘 则
的病原性霉菌 。因此推测是这些天然存在的一定数量
的细菌与酵母 菌抑制了病原性 真菌的生长。这表明了
为采后病 害导致腐烂 ［ １ ］ 。在发展 中国家 ， 由于不 合适 的 储 藏和运输 条件 ， 由果蔬病 害导致 的腐 败现 象更加严
拮抗菌防治葡萄采后病害研究进展
张苗苗，张雨晨，杨怡中，等. 拮抗菌防治葡萄采后病害研究进展[J]. 食品工业科技，2024，45（9）：410−418. doi:10.13386/j.issn1002-0306.2023060270ZHANG Miaomiao, ZHANG Yuchen, YANG Yizhong, et al. Research Progress on Antagonistic Antimicrobial Prevention and Control of Grape Postharvest Diseases[J]. Science and Technology of Food Industry, 2024, 45(9): 410−418. (in Chinese with English abstract).doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023060270· 专题综述 ·拮抗菌防治葡萄采后病害研究进展张苗苗1,2，张雨晨1,2，杨怡中1,2，范盈盈1，何伟忠1，王 成1，黄 伟3, *，刘峰娟1,*（1.新疆农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，农业农村部荒漠绿洲生态区特色农产品功能营养与健康重点实验室（部省共建），农业农村部农产品质量安全风险评估实验室（乌鲁木齐），新疆农产品质量安全实验室，新疆乌鲁木齐 830091；2.新疆农业大学食品科学与药学学院，新疆乌鲁木齐 830052；3.新疆农业科学院微生物应用研究所，新疆乌鲁木齐 830000）摘 要：在葡萄采摘后的贮存和运输过程中，病害普遍发生，主要包括灰霉病、葡萄曲霉腐烂病、根霉腐烂病、青霉病等，严重影响其生产和商品价值。
目前葡萄采后病害控制仍依靠化学防治，化学杀菌剂的长期施用可导致农药残留、环境污染、损害人体健康，并增强病原菌的抗药性。
采用拮抗菌控制葡萄采后病害是替代化学杀菌剂的一种绿色、环保且安全的防治方法，本文主要介绍了葡萄采后侵染性病害及症状、拮抗菌的来源及应用现状、作用机制及联合其他方法结合使用增强生防效果等内容，并对拮抗菌防治葡萄采后病害进行了展望。
果蔬采后生理学结课论文
果蔬采后生理学结课论文拮抗酵母菌对苹果采后病害防治的研究进展学生：符利华(2021112870) 指导老师：魏长庆摘要: 果蔬采后病害在世界范围内一直造成较重大的经济损失,使用化学杀菌剂是控制其发生的主要手段。
但化学杀菌剂的大规模使用不仅会导致病原菌产生抗药性,而且造成食品中的农药残留问题，因此急需寻找新的方法用于果蔬采后病害防治。
近年来,生物防治已逐渐成为一种可替代化学杀菌剂的防治方法,其中拮抗微生物的应用,尤其是来自果蔬表面的拮抗酵母菌对控制采后病害已经取得了巨大作用关键词：苹果；采后病害；生物防治；拮抗酵母菌;防治机理Resistance is the virus to pick apples after the diseaseprevention and control researchStudent：Fu lihua(2021112870) Instructer: Wei ChangqingAbstract: Fruits from the disease in the world has caused a major economic losses, the use of chemical antiseptic is the main means of control. but the chemical fungicides of the large-scale use not only lead to a pathogen , and the cause of the pesticide residue problems of food, so urgently required for the new method is used to adopt disease prevention. In recent years,biological control has gradually become a substitute for chemical fungicides of control methods which is against the application, especially from thefruits of the surface of the population is to gather to control the disease has already made great use. Keywords:apple; Postharvest diseases; biological control; Antagonism yeast ;Control mechanism1果蔬采后生理学结课论文0 前言果蔬因采后腐烂而造成的严重损失早已经成为全球性的问题。
拮抗作用食品安全风险分析
拮抗作用食品安全风险分析果蔬对促进人类营养均衡起着至关重要的作用。
随着我国人民生活水平的提高及营养知识的普及，果蔬消费量大幅增加。
果蔬在采后贮运阶段易因病原菌侵染而产生病害，造成腐烂变质。
传统上通过使用化学杀菌剂防治果蔬采后病害，但杀菌剂的残留易对消费者健康造成危害。
为了保障果蔬的食用安全性，利用拮抗微生物对果蔬采后病害进行生物防治的方法成为研究的热点。
中食智库专家、江苏大学食品与生物工程学院副院长张红印表示，目前，我国在拮抗微生物的筛选、生物防治的机制、提高生物防治效力以及拮抗微生物制剂化方面均取得了较大进展，加快果蔬采后病害生物防治的商业化进程，对于助力我国果蔬产业的快速、健康发展和乡村振兴具有重要意义。
果蔬采后病害及其危害作为人们日常饮食中必不可少的一类食物，果蔬可以提供其他类食物所缺乏或含量较少的维生素、矿物质和生物活性成分等营养健康成分。
大多数果蔬的种植具有地域性和季节性的特点。
随着国民经济的发展，人们对果蔬的需求量越来越大，对果蔬品种的需求也不再局限于当地特产，果蔬的供应期也从当季供应变成全年供应。
目前，我国果蔬种植面积和产量位居世界首位。
果蔬具有脆嫩多汁等特性，在采后贮运和销售过程中极易遭受病原菌侵染而产生病害，导致果实腐烂变质，给产业带来巨大经济损失，比如苹果和梨的青霉病和灰霉病，桃、杏、李、樱桃的灰霉病和软腐病，柑橘类的绿霉病和青霉病，葡萄的灰霉病和黑斑病，番茄的灰霉病和黑斑病等。
病原真菌侵染不仅会导致果蔬腐烂变质，更重要的是很多病原真菌会产生有毒的次生代谢产物——真菌毒素，从而污染果蔬及其加工品（果汁、果酒等），对消费者健康造成危害，比如扩展青霉侵染苹果产生展青霉素（又称棒曲霉素）、炭黑曲霉侵染葡萄产生赭曲霉毒素A（OTA）等。
因此，必须采取有效、安全的措施防治果蔬采后病害。
果蔬采后病害的传统防治方法传统的防治果蔬采后病害的方法包括物理法和化学法。
物理方法主要是通过低温贮藏、热处理、气调贮藏、臭氧处理等方式，抑制病原微生物的活性或直接杀死病原微生物。
拮抗菌控制果蔬采后病害的研究进展
研究背景
热处理的种类
依加热介质的不同，采后热处理一般分为 热水： 热蒸汽：是用40一50 ℃的饱和水蒸气进行 处理。 热空气等
研究热点
拮抗菌的分离及筛选
• 分离 从自然生态环境中寻找拮抗菌，如土壤、 空气、大海等自然环境中。 从果蔬表面、裂口、伤口上筛选以及果 蔬叶茎上筛选。 • 筛选 拮抗菌的筛选方法有in vitro和in vivo两种。 对细菌一般是先在in vitro上试验，再在in vivo验证。对酵母菌则主要在in vivo上进行。
优点：
高效、无环境污染、无药物残留、 不产生抗药性、贮藏环境小、处理费用低廉
研究背景
目前，已研究可作为果蔬采后病害生防 拮抗菌的微生物有细菌、酵母菌和霉菌等。 拮抗细菌：以芽孢杆菌属的细菌和假单 胞菌 属细菌最多 拮抗酵母：有汉逊德巴利酵母，罗伦隐球酵母， 季也蒙假丝酵母，柠檬形克勒克酵母等20多 种 拮抗霉菌：哈茨木霉等
果蔬采后主要致病微生物
• • • • • • • 灰葡萄孢(Botrytis cinerea) 葡枝根霉(Rhizopus stolonifer) 青霉属(Penicillium spp.) 软腐细菌(Erwinia spp.) 链格孢(Alternaria spp.) 知识小卡片 镰刀菌(Fusarium spp.) 入侵方式： 发芽开花期潜伏侵染 褐腐菌(Molinilia fructicola)等。
研究热点
增强拮抗菌抑菌能力的措施
1、结合物理防治方法，如结合钙处理，热处 理等。 2、结合化学防治方法，如加入水杨酸，碳酸 氢钠等化学试剂。 3、几种拮抗菌共同使用。 4、利用分子生物学技术对拮抗菌进行进化改 造。
存在问题
• 拮抗菌对果蔬采后病害有防治作用，但其 防治效果无法达到化学杀菌剂的效果，无 法完全取代化学杀菌剂。 • 在商业化和半商业化生境条件下的试验， 其防效不明显或不稳定，使其商业化困难。 • 发酵生产工艺和剂型化工艺的研究投入不 足，研究滞后，也为商业化带来苦难。 • 人们对拮抗菌的安全性存在疑问，对用拮 抗菌防治采后果蔬病害的安全性还缺乏明 文规定。
果蔬采后病害生物防治的研究进展_韦莹莹
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南
［7 ］
京
农
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大
学
学
报
第 35 卷
从而控制病害的发生
。现代意义上的生物防治不仅利用微生物之间的拮抗作用 ， 还包括病原菌、 生防
［8 ］ 菌和它们所处的微环境之间的相互作用 ， 改变微环境的平衡， 以达到防治病害的目的 。 果蔬采后病害 的生物防治， 是指在贮藏过程中， 通过引入生防菌， 使果实上的微生物达到平衡， 从而抑制病原菌在此微生
果蔬采后病害生物防治的研究进展
韦莹莹， 毛淑波， 屠康
*
Hale Waihona Puke （ 南京农业大学食品科技学院 ， 江苏 南京 210095 ） 摘要：采用生防菌进行果蔬采后病害的生物防治是一种安全有效的方法 。过去 20 年内， 国内外研究者在生防菌的筛选 、 作 提高生防效果的途径等方面做了大量的研究 ， 而且目前国际市场上已有几种商业化生防产品 。 尽管如此， 未来仍 用机制、 需要筛选效力高的生防菌 ， 深入研究其生防机制以及生防菌 、 病原菌、 寄主之间的互作模式， 使生物防治成为能真正替代化 学杀菌剂的方法。本文综述了近年来果蔬采后病害生物防治的研究成果 ， 探讨了未来提高生防效果的研究方向 。 关键词：果蔬； 采后病害； 生物防治； 生防菌 中图分类号：TS255． 3 文献标志码：A 文章编号：1000－2030 （ 2012 ） 05－0183－07
1
生物防治的定义
传统意义上的生物防治主要是指利用微生物之间的拮抗作用 ， 选择无害的微生物抑制病原菌的生长 ，
收稿日期：2012－07－05 基金项目：国家自然科学基金项目 （ 31101282 ） ； 江苏省高校优势学科建设工程项目； 江苏省现代农业技术创新项目（ CX（ 11 ） 2063 ）
拮抗菌在果蔬采后病害生物防治中的应用_王静
生物技术进展2013年第3卷第6期393 398Current Biotechnology ISSN 2095-櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅殯殯殯殯2341贮藏与保鲜Storage and Preservation收稿日期：2013-10-11；接受日期：2013-11-06基金项目：国家自然科学基金项目（31172003）资助。
作者简介：王静，博士研究生，主要从事农产品贮藏与加工研究。
E-mail ：2011208027@njau．edu．cn 。
*通信作者：郑永华，教授，博士生导师，主要从事农产品贮藏与加工研究。
E-mail ：zhengyh@njau．edu．cn 拮抗菌在果蔬采后病害生物防治中的应用王静，郑永华*南京农业大学食品科技学院，南京210095摘要：果蔬在运输和贮藏过程中，采后病害造成了巨大的经济损失，如何有效控制果蔬采后病害，延长货架期成为日益关注的焦点。
随着人们对健康和环保的重视，化学防腐剂等传统保鲜技术已经不能满足人们的需要，通过生物防治技术来控制采后病害已成为研究热点，其中，拮抗菌的使用越来越受到人们的关注，有望成为取代传统保鲜技术的有效途径。
目前，人们已经从自然界中分离得到多种拮抗菌，并将其应用到果蔬采后病害防治中，取得了显著效果。
本文综述了拮抗菌在果蔬采后病害生物防治中的应用现状，对其可能的作用机理进行了探讨，并提出了未来可能的研究方向，为拮抗菌在果蔬采后病害防治中的研究和商业化应用提供参考。
关键词：果蔬；采后病害；生物防治；拮抗菌DOI ：10．3969/j．issn．2095-2341．2013．06．03Application of Microbial Antagonists as Biocontrol Agents Against Postharvest Diseases of Fruits and VegetablesWANG Jing ，ZHENG Yong-hua *College of Food Science and Technology ，Nanjing Agricultural University ，Nanjing 210095，ChinaAbstract ：Postharvest diseases cause considerable losses to harvested fruits and vegetables during transportation and storage．How to control postharvest decay loss and prolong shelf-life has become the focus．Concerned with healthy and environment-friendly products ，traditional approaches such as chemical fungicides cannot meet our need．More and more attention is paid on biocontrol agents against postharvest diseases of fruits and vegetables．Of them ，the use of antagonistic microorganisms becomes popular which is regarded as promising alternatives to control postharvest pathogens．Nowadays ，quite number of microbial antagonists has been isolated and defined as effective in postharvest disease control．This paper focuses on microbial antagonists in postharvest biological control．Possible principle of microbial antagonists was also discussed and explored new possibilities in biology control to provide reference in postharvest decay control research and commercial use．Key words ：fruits and vegetables ；postharvest disease ；biocontrol ；microbial antagonists水果蔬菜富含大量的维生素、氨基酸、微量元素和抗氧化物质等营养成分，在人类膳食结构中占有重要地位，深受人们的青睐。
果蔬采后病害拮抗菌的研究应用现状
果蔬采后病害拮抗菌的研究应用现状摘要:对果蔬采后病害拮抗菌的概念、原理及其主要类型作了介绍，对果蔬采后病害拮抗菌的主要特点作了概述，详述了拮抗菌在果蔬采后病害防治和果蔬采后贮藏方面的应用现状及发展前景。
关键词:果蔬采后病害;拮抗菌;生物防治;微生物水果和蔬菜采后病害，是一个全球性的问题。
中国每年果蔬腐烂超过约8000万t，造成的经济损失可达750亿元，占整个产值的30％以上[1]。
采后腐烂主要归因于病原微生物的致病作用，导致腐烂的病原菌可来自大田或加工过程。
所以，果蔬组织的生理失调和衰老、病原微生物侵染、采收过程及采后环节中的机械损伤是导致果蔬腐烂的本质。
目前，防治采后病害的处理方法仍是化学防治为主，化学杀菌剂处理和简易贮藏仍是我国控制水果采后损失的主要方法．但长期使用杀菌剂，容易导致病原菌抗药性的产生，用药量不断加大，造成果实上农药残留量增加，直接威胁人类健康，这已成为当今公众最关注的食品安全问题之一。
因而，寻求一种能代替化学农药的安全、无毒、经济、有效的保鲜新技术、新方法已成为当务之急。
由于生物防治方法控制采后病害与田问进行生物防治相比具有以下特点和优点：(1)贮运条件容易控制；(2)处理目标明确，外界微生物干扰少；(3)无紫外线等破坏作用；(4)产品集中，处理费用低廉[2]等，采后病害的生物防治的研究和应用比较普遍。
果实采后生物防治技术是利用微生物之间的拮抗作用，选择对农产品不造成危害的微生物或产物来抑制引起采后腐烂的病原微生物的生长，从而减少采后损失，近年来被证明是最有效、最具发展潜力的一种保鲜方法。
果蔬采后生物防治技术作为一种控制采后病害的新途径，逐渐为人们所重视，并已成为一大研究热点。
要利用生物防治技术进行果蔬保鲜保质，关键的是能获得具有重要拮抗效果的微生物或其产物。
为此，开展果蔬采后病害拮抗菌的抗病机理、菌株筛选、新菌种的研究开发，以期为果蔬生物保鲜剂的研制和应用奠定基础。
1.概述1.1 拮抗菌指能通过产生抗菌素、重寄生或竞争营养与空间抑制别种微生物的生长发育，甚至杀死别种微生物的一些微生物。
酵母菌对果蔬采后病害的生物防治
酵母菌对果蔬采后病害的生物防治摘要：采用生防菌进行果蔬采后病害的生物防治是一种安全有效的方法，酵母菌因其拮抗效果好、不产生毒素、可以和化学杀菌剂共同使用等优点，备受人们关注。
该文对酵母菌对果蔬采后病害防治的研究现状进行了综述, 其中包括防治效果、防治机理、防治的优势。
许多酵母菌对果蔬采后病害具有明显的抑制作用, 酵母菌抑制霉菌的机理主要在于营养与空间的竞争、对病原菌的直接寄生作用及诱导寄主产生抗病性。
该文还分析了酵母菌在果蔬采后病害生物防治中存在的问题，拮抗酵母菌商业化应用的局限性，并对其发展前景进行了展望。
关键词：生物防治；酵母菌；采后病害前言果蔬采后病害导致的巨大损耗己成为全球性的问题，造成采后果蔬腐烂变质的原因有自身的生理失调和衰老，病原菌侵染以及采收贮运过程中的机械损伤等，其中以病原微生物侵染为主。
在发达国家约有10%～30%的新鲜果品由于采后病害导致腐烂损失，而在发展中国家，由于缺乏贮运冷链设备，腐烂损失率则更高，达40%～50%[1]。
据报道，中国每年因采后腐烂导致的果蔬损失约8000万t，造成经济损失约750亿元，占全国果蔬产业总值的30%以上[2]。
长期以来，防治果蔬采后病害的方法主要是采用化学杀菌剂，然而，化学杀菌剂毒性较大，易污染环境。
目前越来越多原先用于果蔬采后处理的化学杀菌剂己被禁止使用，如苯来特、多菌灵、双胍盐等[1]。
此外，频繁使用化学杀菌剂会使病原菌产生抗药性而逐渐降低其防治效果，为达到灭菌效果不得不增加剂量，从而造成果蔬农药残留超标，危害人类的健康。
因此，迫切需要寻求一些新的、无毒高效的防腐技术，以逐步取代化学杀菌剂在采后果蔬上的使用。
用微生物进行采后病害的生物防治是近年来发展起来的一个新的研究领域。
自从20世纪50年代Guter等首次报道枯草杆菌（Bacillus Subtilis）对水果病原菌有拮抗作用以来，国外学者对用微生物拮抗菌对果蔬采后病害的防治进行了广泛的研究。
植物根际拮抗菌对微生物的杀菌机制研究与应用
植物根际拮抗菌对微生物的杀菌机制研究与应用植物根际拮抗菌是指在植物的根际环境中生长的一类微生物，它们具有抑制、杀灭其他微生物的能力。
根际拮抗菌的研究对于控制植物病害、提高农作物产量具有重要意义。
近年来，针对根际拮抗菌对微生物的杀菌机制进行的研究取得了一系列重要的进展。
一、根际拮抗菌的杀菌机制研究1. 要素竞争：根际拮抗菌利用物质竞争、空间竞争等方式，争夺微生物所需的资源，从而影响微生物的生长。
比如，一些拮抗菌能够分泌酸性代谢产物，降低根际土壤的pH值，使得其他微生物不能在酸性环境下生长。
2. 分泌抗菌物质：根际拮抗菌能够分泌具有抗菌活性的物质，抑制其他微生物的生长。
这些物质包括抗生素、挥发性有机化合物、酶等。
例如，一些根际拮抗菌能够产生抗生素，抑制植物病原菌的生长。
3. 激活植物防御系统：根际拮抗菌能够通过与植物根系互作，激活植物的防御系统，增强植物对病原菌的抵抗能力。
研究发现，一些根际拮抗菌能够诱导植物产生抗菌物质，如抗菌酶、抗菌蛋白等，从而加强植物根际的杀菌效果。
二、根际拮抗菌的应用1. 生物防治：根际拮抗菌可以作为一种生物防治剂，应用于农业生产中，用于防治植物病害。
在农田中施用根际拮抗菌，能够有效降低植物病害的发生率，减少农药的使用，达到绿色环保的目的。
2. 促进植物生长：根际拮抗菌与植物根系之间的互作，能够促进植物的生长发育、提高植物的抵抗能力。
根际拮抗菌能够产生植物生长激素，促使植物生长更加健壮。
同时，它们还能够提供植物所需的营养元素，增加植物对养分的吸收能力。
3. 改良土壤：根际拮抗菌具有氮固定、磷溶解、有机物分解等功能，能够改良土壤环境，提高土壤的肥力。
同时，根际拮抗菌能够抑制土传病原菌的生长，减少土壤传播的植物病害。
三、根际拮抗菌的局限性和发展方向1. 菌株选择：根际拮抗菌的杀菌机制受到其生物学特性的影响，因此选择适合的菌株对目标微生物具有高效的杀菌效果至关重要。
2. 环境适应性：根际拮抗菌往往在特定的环境条件下才能发挥杀菌效果，因此需要进行更多的研究，以优化菌株在不同环境中的生长和杀菌能力。
食品保鲜技术第三章(5)
第五节
食品生物保鲜
3、多聚半乳糖醛酸酶 把PG酶反义基因的部分片段转入番茄，所得的 转基因果实，在整个完熟阶段，PG酶的mRNA累积 以及PG酶的生物活性都降低。转基因果的自交后代 中，含有2个拷贝PG反义基因的果实，它的PG酶活 性降至正常果的1％，即转基因果PG酶合成的99％ 被抑制，果实细胞壁的降解被阻止，但令人遗憾的 是转基因果实的完熟过程，如乙烯的合成、番茄红 素的累积以及软化过程并无改变，由此说明，尽管 PG酶是导致果胶物质降解的关键酶，但它不是引起 番茄果实软化的主要因素，在果实软化过程中，细 胞壁降解酶，或其他一些生化过程如Ca2+的重新分 布等可能起着更为重要作用。
1、DNA克隆
2、宿主和
第五节
食品生物保鲜
（四）反义（RNA转入）基因技术
1、反义基因技术的基因概念和原理
2、反义基因技术的特点
第五节
食品生物保鲜
（五）基因工程技术在果蔬采后保鲜
中的应用
乙烯是诱导果蔬采后成熟衰老的关键
因素，通过转基因技术抑制果蔬采后乙烯
第五节
食品生物保鲜
Hale Waihona Puke 酶工程是指利用生物有机体内酶所 具有的某些特异催化功能，借助固定化 技术、生物反应器和生物传感器等新技 术、新装置，高效优质地生产特定产品 的一种技术。
发酵工程，也有人称为微生物工程， 是指给微生物提供最适宜的发酵条件生 产特定产品的一种技术。
第五节
食品生物保鲜
基因工程和细胞工程可被看作是生物 技术的核心基础。因为通过基因工程和细 胞工程可以创造出许多具有特殊功能或多 种功能的“工程菌株”或“工程细胞系”。 这些“工程菌株”或“工程细胞系”往往 可以使酶工程或发酵工程生产出更多、更 好的产品，发挥出更大的经济效益。但是， 酶工程和发酵工程有时往往又是生物技术 产业化，特别是发展大规模生产的最关键 环节。
植物源拮抗菌对微生物的杀菌机制研究与应用
植物源拮抗菌对微生物的杀菌机制研究与应用植物源拮抗菌是指从植物中提取的对微生物具有抑制或杀死作用的活性物质。
研究拮抗菌对微生物的杀菌机制，可以深入理解拮抗菌的抗菌作用，为植物源拮抗菌的应用提供理论指导。
拮抗菌对微生物的杀菌机制主要包括直接杀菌和间接杀菌两种方式。
直接杀菌是指拮抗菌通过直接作用于微生物的细胞结构或代谢活性，导致微生物死亡。
拮抗菌可以直接破坏微生物的细胞膜，干扰其离子和物质的转运，导致细胞质内外环境失衡，最终导致微生物死亡。
拮抗菌还可以干扰微生物的DNA合成和蛋白质合成，抑制微生物的生长和繁殖。
此外，拮抗菌还能产生一些具有抑制微生物生长和破坏微生物代谢的物质，如酸性物质、抗生素等，通过这些物质的作用，直接杀死微生物。
间接杀菌是指拮抗菌通过影响微生物的生长环境或与微生物的竞争关系，导致微生物不能正常生长和繁殖，最终导致微生物死亡。
拮抗菌可以通过产生一些对微生物有毒性的物质，抑制微生物的生长。
拮抗菌还可以产生一些酶，分解微生物的细胞膜和细胞壁，导致微生物死亡。
此外，拮抗菌还能通过占据微生物所需的营养物，阻碍微生物的生长和繁殖。
拮抗菌还可以与微生物竞争生存空间，减少微生物的生长和繁殖。
植物源拮抗菌研究的应用主要集中在农业领域。
拮抗菌可以用于作物的病害防治。
通过研究植物源拮抗菌对微生物的杀菌机制，可以筛选出对目标病原微生物有高效抑制作用的拮抗菌，并进一步研究其驱动机制。
对研究拮抗菌的应用价值，可以提供更有效的农药替代品，减少化学农药的使用，降低农产品的农药残留风险，提高农业生产的安全性和可持续性。
此外，植物源拮抗菌还可以用于饲料添加剂。
通过研究拮抗菌的抗菌作用机制，可以筛选出对畜禽肠道有良好拮抗作用的菌种，提供一种天然有机的替代物，可以有效预防和控制畜禽的肠道微生物感染，改善畜禽的生产效益和健康水平。
总而言之，研究植物源拮抗菌对微生物的杀菌机制，可以深入理解拮抗菌的抗菌作用，为拮抗菌的应用提供理论支持。
拮抗菌生物防治果蔬病害的研究进展
果蔬 营养丰 富、 含水率 高 ， 在采摘贮运过 程 中， 一 旦受到机械损伤 ， 病 原菌就很 容易侵染 伤 口并大量 繁 殖， 最终导致果蔬迅速腐烂。在 发达国家 ， 由于采后病 害每年有 １ ０ ％ ～ ３ ０ ％ 的新鲜果蔬腐烂 变质 … ， 在我国 每年超过 ８ ０ ０ ０万 ｔ 的果蔬损失于采后的腐烂 ， 造成 ７ ０ ０
江西农业学报
２ ０ １ ３ ， ２ ５ （ １ ０ ） ： ７ １— ７ ４
Ａｃ ｔ ａ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｈ ｕ ｒ ａ ｅ Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ｘ ｉ
拮 抗 菌 生 物 防治 果 蔬 病 害 的研 究 进 展
华娟 ， 李淋玲 ， 程华 ， 程水源
（ １ ．武汉工程大学 化工与制药学 院 ， 湖北 武汉 ４ ３ ０ ０ ７ ４ ； ２ ．经济林木种质改 良与资源综合利 用湖北 省重点 实验室 ， 湖北 黄冈 ４ ３ ８ ０ ０ ０ ）
包 括 细菌 、 小 型丝 状 真 菌 、 酵 母 三 大 类 。 目前 拮 抗 细 菌
主要有 土壤放射菌 、 芽孢杆菌 、 假单胞杆菌 、 链霉菌等 ， 其 中最著名 的要 属土壤放射杆 菌 Ｋ一 ８ ４ ， 它能抑制 引
起桃 根 癌 病 的根 癌 土壤 杆 菌 （ Ａ ｇ ｒ ｏ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｕ ｍ ｔ ￣ ｍ Ｃ ａ —
ｃ ｉ ａ ｌ Ｋｅ ｙ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ ｏ ｆ Ｅｃ ｏ ｎ ｏ ｍｉ ｃ Ｆ ｏ ｒ ｅ ｓ ｔ Ｇｅ ｒ ｍｐ ｌ ａ ｓ ｍ Ｉ ｍｐ ｒ ｏ ｖ ｅ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｎ ｄ Ｒｅ ｓ ｏ ｕ ｒ ｃ ｅ ｓ Ｃ ｏ ｍｐ ｒ ｅ ｈ ｅ ｎ ｓ ｉ ｖ ｅ Ｕ ｔ ｉ ｌ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ
生物防治在果蔬采后病害上的应用_张忠
张 忠， 涂 勇， 姚 昕， 余前媛， 张明强
（ 西昌学院， 四川 西昌 ６１５０１３）
摘要： 概述了利用拮抗菌、诱导抗病性、天然抗病物质以及抗病基因工程等生物防治途径在果蔬采后病害控制上的
应用现状及进展， 为研究无公害的果蔬采后保鲜技术提供新思路。
关键词： 果蔬； 采后病害； 生物防治
中图分类号： Ｓ４７６
Ａ ｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｃｕｒｒｅｎｔ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ａｂｏｕｔ ｔｈｅｓｅ ｗ ａｙｓ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｎ ｐｏｓｔ－ｈａｒｖｅｓｔ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ ａｎｄ ｆｒｕｉｔｓ ｓｕｃｈ ａｓ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｍ ｉｃｒｏｂｅ， ｉｎｄｕｃｅｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ， ｎａｔｕｒａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ， ａｎｄ ｇｅｎｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｂｏｕｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｒｅ ｓｕｍ ｍ ａｒｉｚｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ， ａｎｄ ｉｔ ｐｒｏｖｉｄｅｓ ｕｓ ｗ ｉｔｈ ａ ｎｅｗ ｔｈｏｕｇｈｔ ａｂｏｕｔ ｇｒｅｅｎ ｓｔｏｒａｇｅ ａｎｄ ｐｒｏｃｅｓｓ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｏｆ ｐｏｓｔ－ｈａｒｖｅｓｔ ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ ａｎｄ ｆｒｕｉｔｓ． Ｋ ｅｙ ｗ ｏｒｄｓ： ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ ａｎｄ ｆｒｕｉｔｓ； ｐｏｓｔ－ｈａｒｖｅｓｔｄｉｓｅａｓｅｓ； ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｏｎｔｒｏｌ
·９３·
成保鲜剂和保鲜纸等， 对多种水果均具有较好的保鲜 效果。可见， 天然植物产物在控制果蔬病害上是很有 潜力的。此外， 果实产生的一些挥发性代谢产物也具 有控制采后病害的作用。植物产生的一些饱和挥发性 物质对产品的采后病害也有明显的抑菌功效。 Ｅ Ｉ－Ｇ ｈｏａｕｔｈ 和 Ｗ ｉｌｓｏｎ 报 道 ， 一 些 植 物 油 对 Ｂ ．ｃｉｎｅｒｅａ 和 Ｐ．ｅｘｐａｎｓｕｍ 病 菌 的 生 长 有 抑 制 作 用 。 他 们 还 发 现 红棕榈、红百里香、樟树叶和三叶草都能明显地抑制 Ｂ ．ｃｉｎｅｒｅａ 和 Ｐ．ｅｘｐａｎｓｕｍ 病 菌 孢 子 的 萌 发 和 菌 丝 的 生 长， 以这些植物为原料制作的烟熏剂可有效减少果实 和蔬菜的采后病害［１７， １８］。
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拮抗菌生物防治果蔬采后病害的研究进展摘要：拮抗菌是一种安全、无毒、有效的生物保鲜剂，在控制果蔬采后病害方面应用前景广阔。
本文综述了利用拮抗菌生物防治果蔬采后病害的研究进展，阐述了拮抗菌的种类、分离筛选方法、作用机理、提高生防效果措施，并对其发展趋势进行了展望。
关键词：生物防治；拮抗菌；果蔬；采后病害Research Advances on the Biological Control of Postharvest Diseases of Fruits and Vegetables by AntagonisticMicroorganismAbstract: Antagonist microorganism is a safe, non-toxic and effective biological preservative, which has broad prospects in controlling postharvest diseases.This review describes recent advances on the biological control of postharvest diseases of fruits and vegetables by antagonist microorganism, including antagonistic microorganism’s kinds, isolation and screening technique, mechanism of action and measures to improve the biological control effect. Its development trend is also predicted.Key words:Biological control; Antagonistic microorganism; Fruit and vegetable; Postharvest diseases前言果蔬在采后处理及贮运、保鲜等过程中，常因受到病原菌的侵染或机械损伤而腐烂变质。
在发达国家约有10%-30%的新鲜果蔬损失于采后的腐烂，而在缺乏贮运冷链设备的发展中国家，腐烂损失率则高达40%-50%[1,2]。
因此，在对果蔬进行加工及贮藏的过程中，必须采取措施延缓果蔬自身组织细胞的新陈代谢，或加入杀菌剂、拮抗菌等抑制病原菌的生长繁殖。
采用化学杀菌剂控制果蔬的腐败是目前最常用的杀菌方法，但易造成果蔬农药残留超标，危害人类健康[1,3]。
因此，迫切需要寻求一些新的、无毒高效的病害防治技术，以逐步取代化学杀菌剂在采后果蔬上的应用[1]。
自从20世纪50年代Gutter等首次报道枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）对水果病原菌具有生防作用以来，国内外学者对果蔬采后病害的生物防治进行了广泛的研究。
在生物防治中，通过对病原菌的拮抗作用来防治果蔬采后病害的微生物称为拮抗菌。
研究人员已从苹果、柑橘、桃、猕猴桃等中筛选出几十种拮抗菌，其中可进行商品化应用的主要有枯草芽孢杆菌、季也蒙毕赤酵母（Pichiaguilliermondii）、哈茨木霉（Trichodermaharzianum）等[3]。
本文从拮抗菌的种类、分离筛选方法、生防机理、提高拮抗菌生防效果措施等方面，综述目前拮抗微生物防治果蔬采后病害的研究进展，并对未来研究进行展望。
1 拮抗菌的种类自然界中存在着大量对果蔬采后病原菌生长具有抑制作用的拮抗菌，其中细菌、小型丝状真菌和酵母菌较为常见。
其中，细菌中应用较多的是芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、假单胞杆菌（Pseudomonas spp.）、土壤放射菌（Agrobacterium radiobacter）；真菌主要是木霉菌和酵母菌；放线菌中最有生防价值的则是链霉菌及其变种。
不同种类的拮抗菌可用于防治同一种果蔬病害，而一种拮抗菌也可用于防治不同种类果蔬的病害[3]。
2 拮抗菌的分离、筛选分离和筛选拮抗菌是开展生物防治研究的第一步，对于生防菌成功应用到商业化生产起着关键作[3]。
Wilson等[4]在1989年制订了一个用于果蔬采后病害生物防治的理想拮抗菌选择标准：1）对人体健康和寄主无害；2）遗传稳定，具有广谱抗菌性；3）不苛求营养条件，可在逆境下生存；4）生产成本低，保质期长，使用时易分散；5）可以适应采后商业处理条件，能够耐受采后贮藏环境中的化学药剂。
拮抗菌的获得主要从现有已知拮抗菌中筛选，果蔬表面、伤口和土壤等处分离得到。
如范青[3]从桃果实表面分离得到的浅白色隐球酵母（Cryptococcus albidus（Saito）Skinner）和丝孢酵母（Trichosporon sp.）可显著地抑制苹果灰霉病和青霉病的发生。
Pusey等[4]从桃树根部土壤中分离到的枯草芽孢杆菌能够有效地防治桃果实采后褐腐病，是第1株大规模用于采后病害生物防治研究的菌株。
拮抗菌的筛选通常分为离体（in vitro）和活体（in vivo）两种。
离体筛选是将病原菌和可能的拮抗菌共同培养于适宜培养基上，以确定所选菌株的抑菌能力；活体筛选是将病原菌和拮抗菌同时接种到果蔬伤口上，通过病害发生情况来确定所选菌株的抑菌能力。
直接在体外进行筛选的方法操作比较简单，但有时筛选出的拮抗菌株接种至果蔬伤口上后拮抗效果并不明显，因此目前多将2种方法结合起来筛选适宜的拮抗菌株[3]。
3 拮抗菌对果蔬采后病害防治的机理许多研究表明，拮抗菌的生防机制主要包括以下四个方面：抗生作用、重寄生作用、竞争作用、诱导抗性作用。
3.1 抗生作用抗生作用是利用拮抗菌的代谢产物来抑制或杀死病原菌[5]。
这是最早被确定的抗菌机理，在离体筛选时可观察到抑菌圈的形成。
这些代谢产物可通过影响病原菌的生长或生存来达到防治果蔬采后病害的目的[5]。
大多数生防细菌和真菌都能产生抗菌物质，主要包括抗生素、多肽、脂肽、水解酶类和含氮氧化物等[3]。
从枯草芽孢杆菌的不同菌株中分离出几十种抗菌物质，这些抗菌物质是一类从简单分子到复杂化合物，即从杆菌肽（Baeitracin）、大环脂（Cvcleopetite）到类似噬菌体颗粒等不同成分组成的物质，也有一些低分子量抗菌素、蛋白性抗菌素物质[7]。
3.2 重寄生作用重寄生作用是利用寄生菌作为生防菌株，通过吸附、缠绕、侵入、消解等形式抑制病原菌的生长[5]。
部分生防菌在病原菌菌丝上附着定殖，形成对病原菌的直接寄生作用，并能分泌胞外水解酶（β-1,3-葡聚糖酶、几丁质酶等），分解病原菌的细胞壁或菌丝体，从而抑制病原菌的生长[4]。
重寄生菌作为生防因子的前提是靶标病原菌的存在，因此用其控制靶标病菌引起的植物病害，会有一个滞后的作用过程，且往往落后于病原菌对果蔬的侵染速度，不利于控制突发性或流行速率高的植物病害[7]。
引起果蔬采后病害的病原菌，有些来自大田，附着于果蔬上带入储藏环境，在一定的条件下侵染并表现症状。
因此采用重寄生菌进行贮运前的处理对于采后潜伏病害具有一定的预防作用。
3.3 竞争作用竞争作用指物理位点、生态位点的抢占以及营养物质和氧气的竞争。
由于引起果蔬采后病害的病原菌都是非专化性的死体营养菌，其孢子萌发及致病活动需要大量的外源养分。
因此在短时间内，通过与病原真菌竞争果蔬表面的营养物质及侵染位点，使病原菌得不到合适的营养和生存空间进行孢子的萌发，从而降低果蔬表面病原真菌数量，起到病害防治的效果[8]。
与抗生作用的区别是与病原菌共同培养时没有明显的抑菌带，且高温高压灭活或经过过滤去除菌体后即无抑菌能力。
此类拮抗菌大多是酵母菌和类酵母菌。
可避免病原菌对抗菌素产生抗性而降低生物防治的抑病效果，从20世纪90年代初人们开始将拮抗菌的筛选从细菌转向酵母菌，迄今已经发现多种具有此种拮抗机理的有效拮抗菌。
近年来的大量研究证实了拮抗菌主要是通过在果蔬伤口处快速繁殖和营养竞争来抑制病原菌的生长[4]。
范青等[5]研究了季也蒙假丝酵母对采后桃果实软腐病的抑制效果，发现该菌不产生抗菌素，其抑菌机理可能与营养竞争等有关。
3.4 诱导抗性作用诱导抗性作用是指利用物理、化学以及生物的方法预先处理植物，诱导植物自身产生抗病性，启动本身的防御机制，增强对后续病原物的抵抗力来防治果蔬采后病害。
拮抗菌之所以能够诱导果蔬产生抗病性，主要是因为其存在激活果蔬的防御酶体系，促使果蔬自身产生抗菌物质，使果蔬的次生代谢产物含量增加，细胞结构发生变化，从而产生抗病性。
许多非生物和生物因子可以诱导采后果蔬的抗病反应[6]。
植物在遭到病原物或非病原物诱导时，常常通过木质素、胼胝体和羟脯氨酸糖的沉积、植物抗菌素的积累、蛋白质酶抑制剂和溶菌酶（几丁质酶和脱乙酰几丁质酶等）的合成来增强细胞壁的抗性，这些过程涉及苯丙氨酸解氨酶（PAL）、过氧化酶（POD）、多酚氧化酶（PPO）与超氧化物歧化酶（SOD）等酶的活性。
4提高拮抗菌生防效果措施虽然生物防治可有效控制果蔬采后病害，但其具有抗菌谱窄、易受环境因素的影响等局限性，而且单独使用拮抗菌时其防效还难以达到化学杀菌剂的水平。
因此，近年来国内外的学者将目光更多地投向如何提高拮抗菌对病害防治的效果，并取得了许多突破性进展。
4.1 多菌种联用果蔬采后的腐烂一般是多种病原菌侵染的结果，而单一的拮抗菌抗菌谱较窄，不可能有效地防治果实上所有的病原菌，所以混合使用不同的拮抗菌可拓宽使用范围，防治多种病原菌；增强有效性，降低使用剂量与使用频率；整合不同微生物的防治优势，提高生防效果。
在进行多菌种联用时，必须保证所使用菌种之间的相容性，不会产生相互竞争。
确定不同拮抗菌间能够在宿主表面环境下友好共生，是利用该方法实现有效防治的关键。
Calvo等[6]将黏红酵母和罗伦隐球酵母结合使用，增强了苹果灰霉病的防治效果，证实了拮抗菌混合使用能提高生防效果。
4.2 与化学杀菌剂联用使用化学杀菌剂可以有效地杀死附生在植物叶面及果实表面的病害微生物，但同时也会对非病源微生物产生毒害。
与化学杀菌剂不同，生物防治只是使病原菌处于一种低活性和高抑制的状态，达到一种稳定而持久的对病害的相对控制[7]。
在目前的情况下，单独采用生防菌的抑菌效果往往比不上化学杀菌剂，这限制了生防菌的应用前景[8,9]，将拮抗菌与化学杀菌剂联用，可提高拮抗菌的抑菌能力，降低化学药剂的使用剂量，减少果蔬的农药残留，减少病害的耐药性基因生成以及维持果园的生态平衡。
Errampalli等[10]将P. syringae和一种低毒杀菌剂Cyprodinil以一定的浓度比例混合用以防治苹果上抗TBZ的扩展青霉菌株，效果明显好于单独使用菌株或药剂。