革兰氏染色原理

革兰氏染色的原理和方法

革兰氏染色主要用来区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。先来介绍一下这个实验原理：因为革兰氏阳性菌的细胞壁较厚，肽聚糖网层较厚且交联致密，没有类脂存在，而革兰氏阴性菌的细胞壁薄，肽聚糖网层薄且交联较差，外膜上存在较多的类脂。两者的这些区别造成了在进行革兰氏染色后出现不同染色结果。革兰氏阳性菌：当结晶紫染液和碘液相遇后，形成不溶性的有色复合物，当用乙醇脱色时，因为胞体的失水，而使得肽聚糖交联更加紧密，网孔缩小，把紫色复合物截留在细胞内，从而使细胞呈现紫色；而革兰氏阴性菌与乙醇脱色时，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能截留形成的紫色复合物，所以呈现无色，再经沙黄复染后呈现红色。

方法：1、涂片：利用移液枪吸取10ul的菌液滴在载玻片，用烧红的涂菌棒涂抹均匀，面积适中。2、干燥与固定：将载玻片放置在酒精灯火焰上方一定距离处，涂菌面向上，将菌液烤干，温度不宜过高，炙烤不宜时间太长，固定就是将涂菌面向上，载玻片快速在火焰中过2-3次。3、初染：在菌液面上滴加1-2滴草酸铵结晶紫，染色1min&oq=革兰氏染色的原理和方法革兰氏染色主要用来区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。先来介绍一下这个实验原理：因为革兰氏阳性菌的细胞壁较厚，肽聚糖网层较厚且交联致密，没有类脂存在，而革兰氏阴性菌的细胞壁薄，肽聚糖网层薄且交联较差，外膜上存在较多的类脂。两者的这些区别造成了在进行革兰氏染色后出现不同染色结果。

革兰氏阳性菌：当结晶紫染液和碘液相遇后，形成不溶性的有色复合物，当用乙醇脱色时，因为胞体的失水，而使得肽聚糖交联更加紧密，网孔缩小，把紫色复合物截留在细胞内，从而使细胞呈现紫色；而革兰氏阴性菌与乙醇脱色时，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能截留形成的紫色复合物，所以呈现无色，再经沙黄复染后呈现红色。

方法：1、涂片：利用移液枪吸取10ul的菌液滴在载玻片，用烧红的涂菌棒涂抹均匀，面积适中。2、干燥与固定：将载玻片放置在酒精灯火焰上方一定距离处，涂菌面向上，将菌液烤干，温度不宜过高，炙烤不宜时间太长，固定就是将涂菌面向上，载玻片快速在火焰中过2-3次。3、初染：在菌液面上滴加1-2滴草酸铵结晶紫，染色1min。

4、水洗：在小股水流下冲洗，直至无色为止。

5、媒染：吸取300ul 碘液滴在样本上，染色1min。

6、水洗：在小股水流下冲洗，直至无色为止。

7、脱色：倾斜玻片，滴加95%的乙醇，约30s，再水洗一次。

8、复染：在样本上滴加沙黄染液1-2滴，染色1min。9、水洗：在小股水流下冲洗，直至流过玻片的水无色为止。10、干燥与观察：用纸擦去水，干燥后在显微镜下观察，菌体呈现紫色的是革兰氏阳性菌，呈现红色的是革兰氏阴性菌。